CN105900842B - 一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法 - Google Patents
一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105900842B CN105900842B CN201610299886.3A CN201610299886A CN105900842B CN 105900842 B CN105900842 B CN 105900842B CN 201610299886 A CN201610299886 A CN 201610299886A CN 105900842 B CN105900842 B CN 105900842B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- rooting
- huolinan
- medium
- seedlings
- seedling
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 241000007396 Magnolia macclurei Species 0.000 title description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 45
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 36
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims abstract description 13
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 claims description 21
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 17
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 17
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 17
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000012882 rooting medium Substances 0.000 claims description 8
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 6
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 6
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 4
- TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N Carbendazim Natural products C1=CC=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N carbendazim Chemical compound C1=C[CH]C2=NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000006013 carbendazim Substances 0.000 claims description 3
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 claims description 3
- -1 one month later Substances 0.000 claims description 3
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 claims description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 3
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 3
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 claims description 3
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims 1
- 238000012549 training Methods 0.000 abstract description 18
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 abstract description 3
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 3
- 238000004017 vitrification Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 abstract description 2
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000020197 coconut milk Nutrition 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 244000166124 Eucalyptus globulus Species 0.000 description 1
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 241000218378 Magnolia Species 0.000 description 1
- 241001454768 Mentzelia nuda Species 0.000 description 1
- 241000604739 Phoebe Species 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000004566 building material Substances 0.000 description 1
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 description 1
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000037039 plant physiology Effects 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，包括如下步骤：种子消毒、丛芽诱导、继代培养、生根培养、练苗培养、生根苗移植，其中，丛芽诱导培养基、继代基本培养基、生根基本培养基均经过改良，本发明通过调整五个大量元素配比、微量元素浓度、添加抗氧化剂等技术方法，解决了部分胚系苗木在0.7MS上，由于营养元素不平衡，苗木生长不良，甚至玻璃化、褐化死亡的问题，生产出1.5‑4.0cm高度的健壮苗木，实现高质量继代苗木生产，适应于多数种胚使用，减少壮苗培养环节，节约成本、同时实现了高效产业化生产，降低培养成本，减少管理难度及培养时间过长，苗木出现褐化死亡。移植成活率达90%以上。
Description
技术领域
本发明涉及热带林木的良种选育及苗木繁殖技术领域，尤其是涉及火力楠组织培养快速繁殖育苗方法。
背景技术
火力楠（Micheliamacclurei Dandy）为木兰科（Dagnoliaceae）含笑属常绿阔叶乔木，分布于我国广东、海南和广西北部以及越南北部，生长速度快，适应性强，是世界珍稀优良树种，也是我国南方主要用材造林树种和优良的改土树种。其树干通直，木材切面装饰光滑美观，硬度较高且耐腐，易干燥，有香气，少开裂，不反翘，是优良的家具和建筑用材。其花朵艳丽、树型美观、林分燃烧性差，是优良的木本花卉、园林风景树和行道树，同时也是防火林带的莺要树种，火力楠为乡土珍稀多用途造林树种。
近年来，随着桉树造林面积的不断扩大，保护生态平衡、生物多样性、发展乡土珍稀造林树种的呼声越来越高，加上市场对高档珍贵用材的需求日益增长和对天然林的禁伐。火力楠作为速生珍贵乡土阔叶用材树种受到广泛的关注。很多省份及研究部门开展了火力楠种源区域化筛选、优良种源筛选、优树筛选等研究，因此，开展火力楠组培快繁技术研究，对加快火力楠生产的良种化进程，提高火力楠林的单位面积产量具有重要的意义。由于火力楠的选优研究才开始，没有确定的优良母株，而林木间的个体差异性大，外采不经确定的母株，组培成功后，苗木不能有效的发挥无性系苗的作用，潜在存在着病害、生长不良等风险，同时潜在存在着方法、配方落点不落面的风险。
申请号为201410297285X，专利名称为“一种火力楠的组织培养快繁方法”的申请文件公开了的方法为：该方法选取火力楠的嫩茎或顶芽作为外植体, 经消毒后接种到诱导培养基上，诱导培养基以1/2MS 为基本培养基，配加2.0% ～ 3.5% 蔗糖、0.35% ～ 0.5%琼脂、0.05% ～0.1% 活性炭、0.03% ～ 0.1% 蛋白胨、50 ～ 100ml/L 椰子汁以及0.8 ～1.2mg/L 6-BA 和0.3 ～0.5mg/L NAA，pH 值为5.4 ～ 5.8；将不定芽转入继代培养基上进行增殖培养，继代培养基以MS 为基本培养基，配加1.5% ～ 2.5% 蔗糖、0.35% ～ 0.5% 琼脂、0.05% ～ 0.1% 活性炭以及0.4 ～ 0.8mg/L 6-BA、0.1 ～ 0.3mg/L IBA 和0.1 ～0.4mg/L NAA，pH 值为5.4 ～ 5.8 ；将高度约为3 ～ 5cm 的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，生根培养基以SH为基本培养基，配加1.0% ～ 1.5% 蔗糖、0.35% ～0.45% 琼脂、0.05% ～ 0.1% 活性炭、30 ～50ml/L 椰子汁以及0.3 ～ 0.6mg/L IBA 和0.1 ～ 0.3mg/L NAA，pH 值为5.4 ～ 5.8 ；然后进行炼苗移栽试。该培养方法均能取得较高的成活率，但是也有不足的地方，其不定芽诱导、丛芽诱导、生根培养、均需要经过暗培养，且用到蛋白胨、椰子汁、其生根培养时间为30-45天内生根，练苗时间30天，存在着以下几方面的不足：1、操作环节多而复杂且蛋白胨、椰子汁培养成本高。2、生根培养及练苗时间过长，长达60-75天的生根练苗培养，不仅大大提高培养成本，而且会增加污染率，降低生产效益；长时间的生根练苗培养，增加管理难道，对容易褐化的火力楠芽苗，不仅容易出现褐化死亡，同时也容易出现营养耗尽而死。
另有中国文献（李雪，王淑芬，蒋雄辉.醉香含笑的组织培养与植株再生[J]. 植物生理学通讯.2005(06)）公开了醉香含笑，即火力楠的组培，诱导培养基为1/3MS+6BA0.2mg.L（单位下同）+NAA0.02；增殖培养基：1/3MS+活性炭0.3%；生根培养基：1/4MS+IBA2.0+NAA3.0，以上培养基均加2.0g.L~Gelrite，除生根培养基加1.5%蔗糖外，其余加2.5%蔗糖，pH5.8，培养温度为26±1℃，光照12h/d，诱导培养时光强为6μmol.m-2.s-1左右，其他为50μmol.m-2.s-1左右。该培养方法:最佳增殖培养基40 d继代转接一次，长新芽的方式是“芽生芽”，芽的高度在0.5~2.0cm，新芽未抽出，基部呈现出黑色，偶尔也有白色呈晶体状的愈伤组织产生。继代单芽太小时，易褐化死亡。存在着以下不足：增殖培养基存在缺陷，造成芽苗转接周期长，高度生长不高，繁殖倍数低，有效苗低，需通过壮苗才能生根培养的问题，不利于效益化产业生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种操作简单，生产成本低、繁殖高、成苗高，繁殖育苗时间短、移植成活率高的火力楠组织培养快速繁殖育苗方法。
为了实现上述目的，本发明采用了如下的技术方案：
一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，包括如下步骤：
S1、种子消毒
人工去除种壳，并尽可能保持胚的完整，在超净工作台上对种子进行消毒得到去壳种胚；
S2、丛芽诱导
将消毒好的种胚，接入丛芽诱导培养基中进行诱导丛芽，丛芽诱导培养基的pH值为5.8-6.2，包括0.7倍MS的大量元素、MS的微量元素、MS的有机质、6BA 0.35-0.75mg/L、NAA0.2-0.4mg/L、30-40mg/L蔗糖；
S3、继代培养
丛芽诱导出来后，转入火力楠基本培养基，培养条件同S2，培养周期为30-35天，得到继代芽苗，火力楠继代基本培养基：大量元素NH4NO3 150-500mg/l、KH2PO4 340-680mg/l、MgSO4 555-800mg/l、KNO3 1900mg/l、CaCl2 332mg/l、Ca (NO3)2 85mg/L，微量元素2 倍MS、有机质MS、激素6BA 0.15-0.3mg/L、NAA 0.1-0.2mg/L、30-40mg/L蔗糖、PVP 4-7g/L；
S4、生根培养
继代芽苗长到3.0cm以上，选取高度在3.0cm以上最少带3片充分展开叶，节间长度短的上代芽苗接入生根培养基，培养45天，芽苗开始生根；
S5、练苗培养
芽苗生根培养30天后，在光照强度为5000-10000LX的练苗棚中练苗，练苗时间为7-15天，及时移植，练苗时间不适过长，过长容易造成生根苗褐化，影响苗木质量；
S6、生根苗移植
移植前用0.5%高锰酸钾消毒介基，移植后一个星期内全盖薄膜，并适当遮阴，一个星期后打开薄膜一日6次清水喷雾，每次10秒，两个星期后一日5次喷雾，每次10秒，3个星期后一日5次喷雾，每次10秒，移植后第7天、第14天，第21天轮流喷托不津或多菌灵，一个月后，一日4次喷雾，每次10秒，移植成活率在90%以上。
进一步地，S1中，对种子进行消毒的方法为用0.01%升汞消毒5-9分钟后，无菌水清洗后浸泡5分钟，在用无菌水清洗，重复清洗浸泡4-5次后，可以接入丛芽诱导培养基中，消毒成功率62%以上。
进一步地，生根基本培养基为：五个大量元素0.4MS、Ca(NO3)2 380mg/L，微量MS、有机质MS，3.5-11.5mg/L NAA、0.2mg/L IBA、0.2mg/L ABT生根二号。
作为另一种技术方案，生根基本培养基为：五个大量元素0.4MS、Ca(NO3)2 380mg/L，微量MS、有机质MS， 0.2mg/L IBA、0.2mg/L NAA、5.0-11.5mg/L ABT生根二号。
进一步地，S2中丛芽诱导的条件为：光照强度为2000-3000LX、温度22-28OC、8h.d-1的条件下诱导丛芽；去壳种胚7天后开始出芽。
进一步地，S3中的继代培养条件为光照强度为2000-3000LX、温度22-28OC、8h.d-1。
进一步地，S4中的生根培养条件为光照强度为2000-3000LX、温度22-28OC、8h.d-1。
本发明有如下的优点：
1、本发明采用多胚系外植体为切入点，通过调整五个大量元素配比、微量元素浓度、添加抗氧化剂等技术方法，发明了适应80%胚系以上的继代生产配方，解决了部分胚系苗木在0.7MS上，由于营养元素不平衡，苗木生长不良，甚至玻璃化、褐化死亡的问题，生产出1.5-4.0cm高度的健壮苗木，实现高质量继代苗木生产。
2、本发明适应于多数种胚使用，种子消毒成率达60%以上、丛芽诱导率100%、继代培养实现50%的胚系增殖倍数3倍以上，30%的胚系增殖倍数2.5-3倍，20%的胚系增殖倍数1.8-2.5倍，继代生产周期（30-35天），高质量的继代苗木与适量的增殖倍数，不仅减少壮苗培养环节，节约成本、同时实现了高效产业化生产。
3、本发明生根培养适应60%胚系培养，芽苗生根率50-90%、生根培养时间短，始根期22-26天，45天达到生根高峰，练苗时间7-15天，节省培养时间，降低培养成本，减少管理难度及培养时间过长，苗木出现褐化死亡。移植成活率达90%以上。
4、本发明由于采用多胚系外植体为切入点，因培养材料多样性，迫使培养基大调整，调整后的培养基及方法适应了复杂的胚系生长，能更广更有效的克服个体差异，对今后林地选出的优树具有很高的应用价值。
5、本发明操作简单、成本低，生产周期短。
附图说明
图1为实施例1中丛芽诱导后的火力楠的形态图；
图2为实施例1中继代培养后的火力楠的形态图；
图3为实施例1中生根培养的火力楠的形态图；
图4为实施例2中丛芽诱导后的火力楠的形态图；
图5为实施例2中继代培养后的火力楠的形态图；
图6为实施例2中生根培养的火力楠的形态图；
图7为实施例3中丛芽诱导后的火力楠的形态图；
图8为实施例3中继代培养后的火力楠的形态图；
图9为实施例3中生根培养的火力楠的形态图。
具体实施方式
以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，包括如下步骤：
S1、种子消毒
人工去除种壳，尽可能保持胚的完整，在超净工作台上，对种子进行消毒，方法为用0.1%升汞消毒5-9分钟后，无菌水清洗后浸泡5分钟，在用无菌水清洗，重复清洗浸泡4-5次后，可以接入丛芽诱导培养基中，消毒成功率62%以上。
具体操作为：采用保种近２个月的HLN127、HLIY100、PX04３个优良家系种子作为试验材料。取0.01%升汞分1min、3min、5min、7min、9min五个处理水平，对３个优良家系种胚进行消毒试验，培养90天后，1min、3min、5min、7min、9min的消毒成功率分别为47.5%、45.0%、65.0%、62.5%、62.5%。5-9 min的处理比1-3min的处理高近20%。结果分析：1min的消毒，时间过短，培养10d时，污染率高达47.5%，5-9min消毒，能杀死种胚表面及种胚内部分内生污染，消毒成功率达60%以上，以5min的消毒效果最佳，在充分杀菌的同时，减少对种胚的杀伤，利于种胚更快的健壮萌发.
S2、丛芽诱导
将消毒5min的种胚，接入丛芽诱导培养基中进行诱导丛芽，丛芽诱导培养基的pH值为5.8-6.2，包括0.7倍MS的大量元素、MS的微量元素、MS的有机质、6BA 0.56mg/L、NAA0.3mg/L、35mg/L蔗糖；丛芽诱导的条件为：光照强度为2500LX、温度25OC、8h.d-1的条件下诱导丛芽；去壳种胚7天后开始出芽，具体参照图1，部分直接诱出丛芽，部分经过多次转接后诱出丛芽，这种差异主要来自种胚的遗传因子差异。
S3、继代培养
丛芽诱导出来后，继续在丛芽诱导培养基上培养，会出现苗木玻璃化、褐化严重、生长不良死亡等现象，应及时转入研制的火力楠基本培养基，在常规组培条件下培养，培养周期为30-35天，实现50%的无性系增殖3倍以上，30%的无性系增殖2.5倍以上, 20%的无性系低于2.5倍。继代芽苗生长正常，为有效苗木，可进一步生根培养。火力楠继代基本培养基：大量元素NH4NO3 330mg/l、KH2PO4 510mg/l、MgSO4 555mg/l、KNO3 1900mg/l、CaCl2 332mg/l、Ca (NO3)2 85mg/L。微量元素2 倍MS、有基质MS、激素6BA 0.24mg/L、NAA 0.15mg/L、35mg/L蔗糖、PVP 5.5g/L。继代培养条件为光照强度为2500LX、温度25OC、8h.d-1，参照图2，火力楠苗为出现苗木玻璃化、生长不良死亡等现象。
S4、生根培养
继代芽苗长到3.0cm以上，选取高度在3.0cm以上最少带3片充分展开叶，节间长度短的上代芽苗接入生根培养基，培养45天，芽苗开始生根，生根基本培养基为：五个大量元素0.4MS、Ca(NO3)2 380mg/L, 微量MS、有机质MS，7.2mg/L NAA、0.2mg/L IBA、0.2mg/L ABT生根二号及0.2mg/L IBA、0.2mg/L NAA、8mg/L ABT；生根培养条件为光照强度为2500LX、温度25OC、8h.d-1，具体形态可参照附图3，火力楠苗发根良好。
S5、练苗培养
芽苗生根培养30天后，在光照强度为5000-10000LX的练苗棚中练苗，练苗时间为7-15天，及时移植，练苗时间不适过长，过长容易造成生根苗褐化，影响苗木质量；
S6、生根苗移植
移植前用0.5%高锰酸钾消毒介基，移植后一个星期内全盖薄膜，并适当遮阴，一个星期后打开薄膜一日6次清水喷雾，每次10秒，两个星期后一日5次喷雾，每次10秒，3个星期后一日5次喷雾，每次10秒，移植后第7天、第14天，第21天轮流喷托不津或多菌灵，一个月后，一日4次喷雾，每次10秒，移植成活率在90%以上。
实施例2
一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，除以下不同外，其他步骤与实施例1一致：
丛芽诱导培养基包括0.7倍MS的大量元素、MS的微量元素、MS的有机质、6BA0.35mg/L、NAA 0.2mg/L、30mg/L蔗糖。
火力楠继代基本培养基：大量元素NH4NO3 150mg/l、KH2PO4 680mg/l、MgSO4 555mg/l、KNO3 1900mg/l、CaCl2 332mg/l、Ca (NO3)2 85mg/L，微量元素2 倍MS、有机质MS、激素6BA0.15mg/L、NAA0.2mg/L、30mg/L蔗糖、PVP 7g/L。
生根基本培养基为：五个大量元素0.4MS、Ca(NO3)2 380mg/L, 微量MS、有机质MS，3.5mg/L NAA、0.2mg/L IBA、0.2mg/L ABT生根二号及0.2mg/L IBA、0.2mg/L NAA、11.5mg/LABT。
丛芽诱导条件、继代培养条件、生根培养条件均为光照强度为2000LX、温度28OC、8h.d-1。
S5中练苗光照强度为5000LX，练苗时间为15天。
丛芽诱导、继代培养以及生根培养的火力楠的形态图见图4~6。
实施例3
一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，除以下不同外，其他步骤与实施例1一致：
丛芽诱导培养基包括0.7倍MS的大量元素、MS的微量元素、MS的有机质、6BA0.75mg/L、NAA 0.4mg/L、40mg/L蔗糖。
火力楠继代基本培养基：大量元素NH4NO3500mg/l、KH2PO4 340mg/l、MgSO4 800mg/l、KNO3 1900mg/l、CaCl2 332mg/l、Ca (NO3)2 85mg/L，微量元素2 倍MS、有机质MS、激素6BA0.3mg/L、NAA 0.1mg/L、40mg/L蔗糖、PVP 4g/L。
生根基本培养基为：五个大量元素0.4MS、Ca(NO3)2 380mg/L, 微量MS、有机质MS，11.5mg/L NAA、0.2mg/L IBA、0.2mg/L ABT生根二号及0.2mg/L IBA、0.2mg/L NAA、5.0mg/LABT。
丛芽诱导条件、继代培养条件、生根培养条件均为光照强度3000LX、温度22OC、8h.d-1。
丛芽诱导、继代培养以及生根培养的火力楠的形态图见图7~9。
S5中练苗光照强度为10000LX，练苗时间为7天。
实施例4
一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，除以下不同外，其他步骤与实施例1一致：
丛芽诱导培养基包括0.7倍MS的大量元素、MS的微量元素、MS的有机质、6BA0.5mg/L、NAA 0.32mg/L、36mg/L蔗糖。
火力楠继代基本培养基：大量元素NH4NO3 200mg/l、KH2PO4 400mg/l、MgSO4 700mg/l、KNO3 1900mg/l、CaCl2 332mg/l、Ca (NO3)2 85mg/L，微量元素2 倍MS、有机质MS、激素6BA0.2mg/L、NAA 0.13mg/L、36mg/L蔗糖、PVP 6g/L。
生根基本培养基为：五个大量元素0.4MS、Ca(NO3)2 380mg/L, 微量MS、有机质MS，9mg/L NAA、0.2mg/L IBA、0.2mg/L ABT生根二号及0.2mg/L IBA、0.2mg/L NAA、7mg/L ABT。
丛芽诱导条件、继代培养条件、生根培养条件均为光照强度2700LX、温度23OC、8h.d-1的条件下诱导丛芽；去壳种胚7天后开始出芽。
S5中练苗光照强度为8000LX，练苗时间为11天。
实施例5
一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，除以下不同外，其他步骤与实施例1一致：
不同的地方为生根基本培养基为：五个大量元素0.4MS、Ca(NO3)2 380mg/L，微量MS、有机质MS， 0.2mg/L IBA、0.2mg/L NAA、5.0mg/L ABT生根二号。
实施例6
一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，除以下不同外，其他步骤与实施例1一致：
不同的地方为生根基本培养基为：五个大量元素0.4MS、Ca(NO3)2 380mg/L，微量MS、有机质MS， 0.2mg/L IBA、0.2mg/L NAA、11.5mg/L ABT生根二号。
实施例7
一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，除以下不同外，其他步骤与实施例1一致：
不同的地方为生根基本培养基为：五个大量元素0.4MS、Ca(NO3)2 380mg/L，微量MS、有机质MS， 0.2mg/L IBA、0.2mg/L NAA、8mg/L ABT生根二号。
实施例4~7培养的芽苗转接周期短，高度生长高，繁殖倍数高，有效苗多。
以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通工程技术人员对本发明的技术方案所作的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、种子消毒
人工去除种壳，并尽可能保持胚的完整，在超净工作台上对种子进行消毒得到去壳种胚；
S2、丛芽诱导
将消毒好的种胚，接入丛芽诱导培养基中进行诱导丛芽，丛芽诱导培养基的pH值为5.8-6.2，包括0.7倍MS的大量元素、MS的微量元素、MS的有机质、6BA 0.35-0.75mg/L、NAA0.2-0.4mg/L、30-40mg/L蔗糖；
S3、继代培养
丛芽诱导出来后，转入火力楠基本培养基，培养条件同S2，培养周期为30-35天，得到继代芽苗，火力楠继代基本培养基：大量元素NH4NO3 150-500mg/l、KH2PO4 340-680mg/l、MgSO4555-800mg/l、KNO3 1900mg/l、CaCl2 332mg/l、Ca (NO3)2 85mg/L，微量元素2 倍MS、有机质MS、激素6BA 0.15-0.3mg/L、NAA 0.1-0.2mg/L、30-40mg/L蔗糖、PVP 4-7g/L；
S4、生根培养
继代芽苗长到3.0cm以上，选取高度在3.0cm以上最少带3片充分展开叶，节间长度短的上代芽苗接入生根培养基，培养20-25天，芽苗开始生根；
S5、炼 苗培养
芽苗生根培养30天后，在光照强度为5000-10000LX的炼 苗棚中炼 苗，炼 苗时间为7-15天，及时移植，炼 苗时间不适过长，过长容易造成生根苗褐化，影响苗木质量；
S6、生根苗移植
移植前用0.5%高锰酸钾消毒介基，移植后一个星期内全盖薄膜，并适当遮阴，一个星期后打开薄膜一日6次清水喷雾，每次10秒，两个星期后一日5次喷雾，每次10秒，3个星期后一日5次喷雾，每次10秒，移植后第7天、第14天，第21天轮流喷托不津或多菌灵，一个月后，一日4次喷雾，每次10秒，移植成活率在90%以上，
S1中，对种子进行消毒的方法为用0.01%升汞消毒5-9分钟后，无菌水清洗后浸泡5分钟，在用无菌水清洗，重复清洗浸泡4-5次后，可以接入丛芽诱导培养基中，消毒成功率62%以上。
2.根据权利要求1所述的一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，其特征在于，生根基本培养基为：五个大量元素0.4MS、Ca(NO3)2 380mg/L，微量MS、有机质MS，3.5-11.5mg/LNAA、0.2mg/L IBA、0.2mg/L ABT生根二号。
3.根据权利要求1所述的一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，其特征在于，生根基本培养基为：五个大量元素0.4MS、Ca(NO3)2 380mg/L，微量MS、有机质MS， 0.2mg/L IBA、0.2mg/L NAA、5.0-11.5mg/L ABT生根二号。
4.根据权利要求2或3所述的一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，其特征在于，S2中的丛芽诱导培养基为基础，丛芽诱导条件为：光照强度为2000-3000LX、温度22-28℃ 、8h· d-1的条件下诱导丛芽；去壳种胚7天后开始出芽。
5.根据权利要求4所述的一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，其特征在于，S3中的火力楠继代培养基为基础，继代培养条件为光照强度为2000-3000LX、温度22-28℃ 、8h·d-1。
6.根据权利要求5所述的一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，其特征在于，S4中的生根培养基为基础，生根培养条件为光照强度为2000-3000LX、温度22-28℃ 、8h· d-1。
7.根据权利要求6所述的一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法，其特征在于，S5中炼苗光照强度为5000-10000LX，炼 苗时间为7-15天。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610299886.3A CN105900842B (zh) | 2016-05-09 | 2016-05-09 | 一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610299886.3A CN105900842B (zh) | 2016-05-09 | 2016-05-09 | 一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105900842A CN105900842A (zh) | 2016-08-31 |
| CN105900842B true CN105900842B (zh) | 2017-12-08 |
Family
ID=56748628
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610299886.3A Expired - Fee Related CN105900842B (zh) | 2016-05-09 | 2016-05-09 | 一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105900842B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108605633A (zh) * | 2018-05-04 | 2018-10-02 | 永嘉县原野园林工程有限公司 | 一种楠木组培快繁方法 |
| CN119655171A (zh) * | 2025-01-21 | 2025-03-21 | 四川省林业科学研究院（四川省林产工业研究设计所） | 一种细叶楠种子萌发及组培快繁方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103392601B (zh) * | 2013-08-09 | 2014-10-22 | 南京金埔园林股份有限公司 | 一种台湾含笑组织培养繁殖方法 |
| CN103718969B (zh) * | 2014-01-28 | 2015-11-18 | 华南农业大学 | 一种诗琳通含笑离体培养再生植株方法 |
| CN104082139A (zh) * | 2014-06-28 | 2014-10-08 | 玉林师范学院 | 一种火力楠的组织培养快繁方法 |
-
2016
- 2016-05-09 CN CN201610299886.3A patent/CN105900842B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105900842A (zh) | 2016-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102187810B (zh) | 一种所罗门姜黄的组织培养繁殖方法 | |
| CN103380730B (zh) | 一种杜梨组培快繁方法 | |
| CN101720670B (zh) | 旱半夏组织培养快速繁殖方法 | |
| CN102870680A (zh) | 一种适宜脱毒兔眼蓝莓的高效快繁技术 | |
| CN104509439B (zh) | 一种适于美国红枫组织快繁方法 | |
| CN103688855B (zh) | 一种小叶红豆离体胚培养及植株再生方法 | |
| CN103460971B (zh) | 一种提高栝楼组培苗移栽成活率的方法 | |
| CN103348920A (zh) | 一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法 | |
| CN103430845A (zh) | 一种草莓组织培养方法 | |
| CN103461143A (zh) | 一种油茶组织培养快速繁殖方法 | |
| CN108293878A (zh) | 一种栝楼嫩叶的组培育苗方法 | |
| CN101637123B (zh) | 南岭莪术的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN111264383B (zh) | 一种同步选育和保存姜花属杂交新品系及种质的方法 | |
| CN106069748B (zh) | 美国红枫十月辉煌的商用组织培养种苗繁育方法 | |
| CN105010142B (zh) | 越南奇楠沉香组织培养的方法 | |
| CN101112175B (zh) | 一种龙爪兰的组培快繁方法 | |
| CN107197746A (zh) | 一种杉木野外优异资源的繁育方法 | |
| CN107896990B (zh) | 一种旱地木槿种子无菌萌发与快速繁殖方法 | |
| CN105900842B (zh) | 一种火力楠组织培养快速繁殖育苗方法 | |
| CN108739408A (zh) | 一种提高大叶金丝楸有效新梢分化数量的组织培养方法 | |
| CN105123512B (zh) | 一种金线莲的培育方法 | |
| CN114600772B (zh) | 一种深山含笑的组培方法和快速繁殖方法 | |
| CN101112174B (zh) | 一种袋鼠花组培快繁的方法 | |
| CN110583481A (zh) | 一种诱导辽东楤木体细胞胚发生及植株再生的方法 | |
| CN105660398B (zh) | 一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20171208 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |