CN109618925A

CN109618925A - 一种适于多种灌木和草本花卉植物快速繁殖的方法

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Publication number: CN109618925A
Application number: CN201811318212.9A
Authority: CN
Inventors: 韩文军; 黄丽芳
Original assignee: Central South University of Forestry and Technology
Current assignee: Central South University of Forestry and Technology
Priority date: 2018-11-07
Filing date: 2018-11-07
Publication date: 2019-04-16
Anticipated expiration: 2038-11-07
Also published as: CN109618925B

Abstract

本发明公开了一种适于多种灌木和草本花卉植物快速繁殖的方法，该方法包括外植体的选择、初代培养、增殖继代、生根培养和移栽管理的步骤。为规模化发展及时提供多种植物大批量优质种苗。

Description

一种适于多种灌木和草本花卉植物快速繁殖的方法

技术领域

本发明属于植物组培技术领域，涉及一种适于多种灌木和草本花卉植物快速繁殖的方法。

背景技术

绣球(Hydrangea macrophylla Seringe)为虎耳草科(Saxifragaceae)八仙花属落叶小灌木，别名八仙花、紫阳花、粉团花、雪球花、草绣球等,是园林上著名的观赏植物。大绣球花序硕大洁白，且花期长。花期过后，花朵由白变红，至冬不落，有很高的观赏价值。但其花为不孕，常规繁殖系数低，在一定程度上限制了优良新品种的快速繁殖以及工厂化生产。

一品红（Euphorbia pulcherrima Willd.ex Klotzsch）又称象牙红、圣诞红等，为大戟科多年生常绿灌木，原产墨西哥和中美洲，在我国云南、广东、广西等地可露地栽培。一品红花色艳丽，花期很长，开放季节正值圣诞、元旦、春节，深受国内外消费者欢迎。

玫瑰海棠（Begornia mannii）属秋海棠科的多年生常绿草本花卉，其花形变化多，花朵硕大，花形多样，多为重瓣，优美如玫瑰；11月现蕾，它的花期很长，可长达4--6个月，是元旦、春节市场较受欢迎的小型盆花之一，目前已经成为国际上十分流行的盆花品种。

四季海棠(Begonia Semperflorens)，为秋海棠科多年生常绿肉质草本花卉。四季海棠花色艳丽、花型多姿，株型圆整，花多而密集，抗逆性强，花期很长，四季陆续开放。若加工成立体花柱、花伞及吊盆悬挂，七彩斑斓，异常新奇，备受人们的喜爱，具有较大的市场潜力。

目前生产上绣球、一品红、玫瑰海棠、四季海棠的无性繁殖大多采用扦插，但繁殖系数低，繁殖速度慢。它们的茎虽能作扦插繁殖材料，但是对扦插繁殖的条件要求较严，尤其是草本花卉玫瑰海棠和四季海棠为肉质茎，含水量大，扦插时又必须保证较高的空气湿度，所以扦插繁殖时很容易腐烂；扦插也要受时间的限制；长期的扦插繁殖还容易造成真菌和病毒的累积，导致品种退化。这些都大大限制其的繁殖，无法满足市场的需求。那么，开展绣球、一品红、玫瑰海棠、四季海棠组织培养的系统研究，不仅能保持母株的优良品质，而且对促进其产业的快速发展及遗传改良等方面的深入研究具有非常重大的意义。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种适于多种灌木和草本花卉植物快速繁殖的方法，种类包括灌木花卉绣球和一品红，草本花卉玫瑰海棠和四季海棠等，以达到室内大规模繁殖种苗，为规模化发展及时提供多种植物大批量优质种苗。

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

所述适于多种灌木和草本花卉植物快速繁殖的方法包括如下步骤：

（1）外植体的选择：选择绣球和一品红一年生枝条，玫瑰海棠和四季海棠的肉质茎为外植体，消毒后进行培养，控制污染率低于20%；

（2）初代培养：将步骤（1）消毒培养后的外植体接种在MS+6-BA 0.1～1.0mg/L+IBA0.05～0.5mg/L+GA₃0.05～0.5mg/L且添加有蔗糖和琼脂的固体培养基上培养20～30 d，诱导出芽，得到初代培养后的无菌苗叶片或茎段；出苗率达100％，尤其是玫瑰海棠和四季海棠培养10 d左右，萌发新芽，30 d左右逐步分化出丛生芽；

（3）增殖继代：将初代培养后的无菌苗叶片或茎段接种在MS+0.5～1.5mg/L 6-BA+KT0.05～0.5mg/L +NAA0.05～0.5mg/L+IAA0.05～0.5mg/L且添加有蔗糖和琼脂的固体培养基中培养30 d，得到继代培养后的无菌苗叶片或茎段；增殖系数均达到10以上，100％外植体获得大量丛生芽；

（4）生根培养：将继代培养后的无菌苗叶片或茎段接种在MS+0.05～1.0mg/LNAA+0.02～1.0mg/LIAA+0.02～1.0mg/LIBA且添加有蔗糖和琼脂的固体培养基中培养30 d，得健壮生根苗；生根率为100％；

（5）移栽管理：将健壮生根苗炼苗3～5 d，取出清洗根部培养基，随后将幼苗直接移栽至温室，成活达到90%以上。

其中，所述初代培养、增殖继代、生根培养条件为：接种后移到培养室培养，培养室温度为24～26℃，培养室相对湿度为30～50％，每天光照10～12h，光照强度为1000～2000lx。所述初代培养和增殖继代培养所用的培养基中蔗糖的质量百分比含量为3～5%，琼脂的质量百分比含量为0.75％。

步骤（1）切取绣球和一品红一年生枝条，玫瑰海棠和四季海棠肉质茎为外植体进行培养，茎段切成1.0～2.0 cm备用；将准备好的外植体在含有两滴抗菌洗手液的自来水中洗涤60 min，然后在无菌水中漂洗4-5次。然后依次在70％乙醇中浸泡30秒左右，在含有1-2滴Tween-20表面活性剂的0.1％升汞溶液中灭菌10分钟，并在无菌蒸馏水中漂洗5次；重新在含有1-2滴Tween-20表面活性剂的0.1％升汞溶液中灭菌5分钟，又在无菌蒸馏水中漂洗5次备用。

步骤（2）中每瓶培养基接种1～3个外植体进行培养。

步骤（3）中每瓶培养基接种3～8个外植体进行培养。

步骤（4）中每瓶培养基接种5～8个外植体进行培养。

步骤（5）将步骤（4）获得的4～5cm高，且健壮有根的试管苗，打开瓶盖炼苗3～5 d，瓶内的幼苗先用1000倍的多菌灵或代森锰锌喷雾3～5次，取出清洗根部培养基，随后将幼苗移栽至有透明的塑料盖的移栽容器中，在温度为20～30℃，湿度70～80%的温室条件下生长。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、本发明的方法不仅适用于灌木花卉植物绣球和一品红进行快速繁殖，还适于草本花卉植物玫瑰海棠和四季海棠进行快速繁殖。

2、本发明的方法，不同灌木和草本花卉植物在初步试验中，一年生枝条和肉质茎在初代培养基上启动时，腋芽生长点均被证明容易再生新芽，并且使用所描述的灭菌方案具有相对低的污染率（20％以下）。

3、本发明的方法选择不同植物，相同组培繁殖方法，4种植物都能获得高效稳定的培养体系，从外植体上直接诱导丛生芽，其增殖系数大、速度快、不需经愈伤组织阶段变异小，小芽丛可持续分化，能在短期内实现工厂化生产。

附图说明

图1 为绣球、一品红、玫瑰海棠、四季海棠（从左至右）初代培养基上丛生芽生长情况；

图2 为绣球、一品红、玫瑰海棠、四季海棠（从左至右）温室移栽苗生长情况。

具体实施方式

实施例 1 组织培养快速繁殖绣球、一品红、玫瑰海棠、四季海棠

一、培养基配制和灭菌

初代培养基：MS+6-BA0.5mg/L +IBA0.2mg/ L+0.3mg/ LGA₃+3%蔗糖+0.75％琼脂。

增殖培养基：MS+ 6-BA1.4mg/L+KT0.5mg/ L+NAA0.6mg/L+IAA0.2mg/L+3%蔗糖+0.75％琼脂。

生根培养基：MS+NAA0.65mg/L+ IAA0.45mg/L+IBA0.2mg/L+3%蔗糖+0.75％琼脂。

以上培养基 121℃下，灭菌 20分钟。

二、初代培养

绣球、一品红、玫瑰海棠、四季海棠整盆放置炼苗室培养30d左右，1周内喷1-2次无菌水，切取其一年生枝条和肉质茎为外植体进行培养，茎段切成 1.0～2.0 cm ，然后在无菌水中漂洗4-5次。然后依次在70％乙醇中浸泡30秒，在含有1-2滴Tween-20表面活性剂的0.1％升汞溶液中灭菌10分钟，并在无菌蒸馏水中漂洗5次；重新在含有1-2滴Tween-20表面活性剂的0.1％升汞溶液中灭菌5分钟，并在无菌蒸馏水中漂洗5次备用。每瓶培养基接种 3个外植体进行培养；培养室温度为 24～26℃，培养室相对湿度为 30～50％，每天光照 10～12 小时，光照强度为 1000～2000 lx。培养 20～30 天，100%外植体分化芽；尤其是玫瑰海棠和四季海棠培养 10 d 左右，萌发新芽，30 d 左右逐步分化出丛生芽；一共获得59个株系，这些初级芽培养物作为外植体的来源，用于随后的芽增殖和壮苗生根培养。

三、增殖继代培养

取上述59 个株系进行继代繁殖，具体方法如下：将初级培养的绣球、一品红、玫瑰海棠、四季海棠无菌苗带芽茎段切成 1.0～2.0 cm，叶片切成0.5cm×0.5cm大小方块，转入增殖培养基上，培养 30 天左右，100％获得丛生芽；每隔 30 d 左右继代一次，每瓶培养基接种 3～8个外植体进行培养。丛生芽生长情况如图1 所示；培养条件同步骤二。

四、生根培养

选择3-5片叶的无菌苗接种在生根培养基上培养，20d左右，从基部形成3-7条根系，生根率高达100%；培养条件同步骤二。

五、移栽管理

选择4-5cm高，且健壮有根的试管苗，打开瓶盖炼苗3-5 d，瓶内的幼苗先用500倍的多菌灵或代森锰锌喷雾2～5次，取出清洗根部培养基，随后将幼苗移栽至有透明的塑料盖的移栽容器中，在温度为20～30℃，湿度70～80%的温室条件下生长。当新叶长出，新根形成即已成活，成活达到 90%以上。移栽苗生长情况如图2 所示。

本发明所提供的绣球、一品红、玫瑰海棠、四季海棠组织培养繁殖方法，选择一年生枝条和肉质茎为外植体，取材容易，数量大，遗传稳定性高。在初代与继代培养过程中，灌木与草本植物在相同培养基上均能诱导出丛生芽，而且增殖系数大、速度快、不需经愈伤组织阶段变异小，小芽丛可持续分化，能在短期内实现工厂化生产。

实施例 2 组织培养快速繁殖绣球、一品红、玫瑰海棠、四季

一、培养基配制和灭菌

初代培养基：MS+6-BA0.8mg/L +IBA0.5mg/ L+0.3mg/ LGA₃+3%蔗糖+0.75％琼脂。

增殖培养基：MS+ 6-BA1.2mg/L+KT0.5mg/ L+NAA0.3mg/L+IAA0.2mg/L+3%蔗糖+0.75％琼脂。

生根培养基：MS+NAA0.45mg/L+ IAA0.65mg/L+IBA0.2mg/L+3%蔗糖+0.75％琼脂。

以上培养基 121℃下，灭菌 20分钟。

二、取组织培养快速繁殖绣球、一品红、玫瑰海棠、四季海棠的不同外植体，基本操作方法同实施例 1一致；效果与实施例 1 相差不大。

Claims

1.一种适于多种灌木和草本花卉植物快速繁殖的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（2）初代培养：将步骤（1）消毒培养后的外植体接种在MS+6-BA 0.1～1.0mg/L+IBA0.05～0.5mg/L+GA₃0.05～0.5mg/L且添加有蔗糖和琼脂的固体培养基上培养20～30 d，诱导出芽，得到初代培养后的无菌苗叶片或茎段；

（3）增殖继代：将初代培养后的无菌苗叶片或茎段接种在MS+0.5～1.5mg/L 6-BA+KT0.05～0.5mg/L +NAA0.05～0.5mg/L+IAA0.05～0.5mg/L且添加有蔗糖和琼脂的固体培养基中培养30 d，得到继代培养后的无菌苗；

（4）生根培养：将继代培养后的无菌苗接种在MS+0.05～1.0mg/LNAA+0.02～1.0mg/LIAA+0.02～1.0mg/LIBA且添加有蔗糖和琼脂的固体培养基中培养30 d，得健壮生根苗；

（5）移栽管理：将健壮生根苗炼苗3～5 d，取出清洗根部培养基，随后将幼苗直接移栽至温室。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述初代培养、增殖继代、生根培养条件为：接种后移到培养室培养，培养室温度为24～26℃，培养室相对湿度为30～50％，每天光照10～12h，光照强度为1000～2000 lx。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述初代培养和增殖继代培养所用的培养基中蔗糖的质量百分比含量为3～5%，琼脂的质量百分比含量为0.75％。