CN102119663A - 一项铁线莲茱莉亚组织培养快繁技术 - Google Patents

Abstract

“一项铁线莲‘茱莉亚’组织培养快繁技术”属于铁线莲‘茱莉亚’组织培养快繁技术领域。该技术以当年新生枝条带芽茎段为外植体，建立了铁线莲‘茱莉亚’的再生体系。研究结果表明，腋芽诱导的最佳培养基是MS+2，4-二氯苯氧乙酸1.0毫克/升+吲哚丁酸0.1毫克/升+蔗糖30克/升，分化率达93.3％；不定芽增殖的最佳培养基为MS+6-苄基嘌呤1.0毫克/升+吲哚丁酸0.15毫克/升+蔗糖30克/升，增殖系数为4.03；适宜的生根培养基是1/2MS+萘乙酸0.05毫克/升，生根率达91.2％。经过5～7天的开瓶炼苗，以珍珠岩∶泥炭＝1∶3为基质，20天后调查，其移栽成活率达87％。上述发明技术可应用于铁线莲‘茱莉亚’的高效快速繁殖，并可达到工厂化育苗的目标。

Description

一项铁线莲茱莉亚组织培养快繁技术

一、技术领域

本发明涉及铁线莲‘茱莉亚’组织培养快繁技术。

二、背景技术

铁线莲‘茱莉亚’(Clematis‘Madame Julia Correvon’)隶属于毛茛科(Ranunculaceae)铁线莲属(Clematis L.)，是铁线莲Clematis‘Rubra Grandiflora’与Clemati‘Ville de Lyon’的杂交品种，原产自法国。该品种具有叶柄攀援的特点，而且花色鲜艳，花型美丽；用其布置墙垣、棚架、阳台、门廊，显得优雅别致，因而有“攀援植物皇后”的美誉。‘茱莉亚’作为垂直绿化材料，不仅应用于园林领域，而且广泛用于盆栽，切花等。

虽然我国的铁线莲种质资源相当丰富，有近世界三分之一的种系，但却因其种子繁殖困难，推广速度慢，而没有选育出观赏价值高的品种。对于观赏价值较高，应用前景广的‘茱莉亚’，目前我国还没有研究出它的快繁技术，仍需从国外大量进口。所以，研究‘茱莉亚’快繁技术不仅可以进一步推广铁线莲的园林应用，同时也可以节省大量外汇。

至今对于铁线莲的研究主要有，泽仁旺姆利用甘青铁线莲的种子长出的幼苗进行了不定芽和不定根的生成；张启香找出了‘Multi-Blue’的最佳外植体为茎尖；而张涛诱导出重瓣铁线莲的愈伤，但没有诱导不定芽。本技术利用铁线莲‘茱莉亚’当年新生枝条带芽茎段，进行组织培养，诱导腋芽的发生，促进不定芽的生成，再诱导其生根。通过人工配制不同营养成分和激素调控，使其形成成千上万小植株，并且保持了母体内全部优良遗传性状，此方法可在短时间内获得大量试管苗，获得的幼苗存放在人工控制的培养室内，可实施一年四季工厂化生产。因此利用组织培养技术繁殖铁线莲‘茱莉亚’，不仅为推广铁线莲‘茱莉亚’提供了一个快速的途径，也为其工厂化生产提供帮助，意义重大。

三、发明内容

本发明的目的是提供一种可以快速，大量繁殖铁线莲‘茱莉亚’的组织培养技术。

本发明提供的铁线莲‘茱莉亚’组织培养快繁技术，包括以下几个步骤：

1、腋芽诱导：

将当年新生枝条带芽茎段，接种到诱导培养基，该培养基含有1/4MS、1/2MS、MS常规基本培养基、2，4-二氯苯氧乙酸1.0毫克/升、吲哚丁酸0.1毫克/升、蔗糖30克/升。培养1 周后，待培养物诱导出芽原基后，进入以下第2步；

2、不定芽增殖：

将第1步所得的培养物转移到增殖培养基上，增殖培养基含有MS常规基本培养基、6-苄基嘌呤0.5-1.5毫克/升、吲哚丁酸0.05-0.15毫克/升、蔗糖20-40克/升。培养天20左右，待小苗长到常规生根程序所需高度时，进入以下第3步；

3、生根：

将第2步所得的无根小苗齐根取下，转至常规生根培养基中，生根基本培养基含有1/4MS，1/2MS，MS常规基本培养基、萘乙酸0.05毫克/升，培养20天左右，待小苗根部长出短根，即可进行根的伸长，根伸长培养基为：1/2MS常规基本培养基、萘乙酸0-2.0毫克/升或吲哚丁酸0.3-2.0毫克/升、蔗糖30克/升。之后数天，小苗长出4-5根主根时，进入以下第4步；

4、移栽与炼苗：

先把封口膜打开，在培养室内炼苗1周左右，取出小苗，洗净小苗根部的琼脂，移栽到珍珠岩与泥炭以1∶3混合的基质内，放入温室大棚进一步炼苗15-20天。其间需要喷洒1/10MS大量元素营养液以利于缓解蒸腾失水，并补充植物营养。

本发明利用带腋芽的茎段做外植体进行直接器官的发生，大大提高了快繁速率，同时用基本培养基添加微量激素进行腋芽的诱导，能够快速诱导腋芽，并促使其伸长。腋芽诱导后，不宜在原培养基上长期培养，否则诱导出的芽容易伸长生长，因此要转接到MS+6-苄基嘌呤1.0毫克/升+吲哚丁酸0.15毫克/升+蔗糖30克/升的培养基上，以利于不定芽的分化和伸长。生根阶段，本发明采用了先诱导再促进伸长的方法，首先，把伸长到适合常规生根高度的小苗，先转移到添加了0.05毫克/升萘乙酸的1/2MS基本培养基中，诱导不定根的生成，再转移到1/2MS+萘乙酸0.05毫克/升培养基中促进根的伸长，此方法大大提高了根诱导和伸长的速率。

因此采用此发明的培养基有如下优点：腋芽诱导启动快，芽分化系数高，苗伸长快、生长一致且健壮，生根率高、根长且壮，生长周期短，基本无畸形苗。

四、附图说明

图12，4-D和IBA诱导产生的腋芽

图26-BA和IBA处理后的增殖芽

图3NAA诱导产生的根

五、具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

实施例

1、取材：以铁线莲‘茱莉亚’当年生嫩枝作为外植体进行培养，要求新生枝生长健壮，叶片具有母本的优良性状，而且有饱满而未萌发的腋芽。

2、材料消毒方法：除掉多余的叶片，只保留茎段，用酒精脱脂棉轻轻擦洗去除外植体上的绒毛，流水冲洗1小时。在无菌条件下，用75％酒精浸泡30秒，0.1％升汞处理3-5分钟，无菌水冲洗5～6次。

3、接种：在超净工作台内，无菌滤纸吸取残余水分后，将茎段两头切去一小段，以减少升汞的毒害。然后将其切成1～1.5cm长的茎段，然后接种到外植体诱导培养基。诱导培养基组成为：MS+2，4-二氯苯氧乙酸1.0毫克/升+吲哚丁酸0.1毫克/升+蔗糖30克/升。

4、不定芽增殖：将带腋芽茎段接种到诱导培养基上20天后就可看到腋芽萌发长高(图1)，然后将其转移到增殖培养基上。增殖培养基组成为：MS+6-苄基嘌呤1.0毫克/升+吲哚丁酸0.15毫克/升+蔗糖30克/升。

5、生根：当分化出的丛生芽(图2)长到常规生根所需高度时，用剪刀单个剪下，接种到生根培养基中。生根培养基的组成为：1/2MS+萘乙酸0.05毫克/升。

为使诱导出的根能更好的伸长生长，将生根小苗转移到根伸长培养基中，根伸长培养基的组成为：1/2MS+萘乙酸0.05毫克/升(图3)。

培养温度及光照条件：温度为25±1℃；光照为2000勒克斯，16小时/天。

6、移栽与炼苗：在生根培养基中小苗生长35天左右后，根系比较发达，一般会长出4-5条主根时，即可进行移栽。

先把封口膜打开，在培养室内炼苗1周左右，取出小苗，洗净小苗根部的琼脂，移栽到珍珠岩与泥炭以1∶3混合的基质里，放入温室大棚进一步炼苗10-15天。其间需要喷洒1/10MS大量元素营养液以利于缓解蒸腾失水，并补充植物营养，以防止叶片发黄。

Claims (5)

1.一项铁线莲‘茱莉亚’组织培养快繁技术，其特征在于以下四个部分组成：

(1)腋芽诱导：将当年新生枝条带芽茎段，接种到诱导培养基，该培养基含有1/4MS、1/2MS、MS常规基本培养基、2，4-二氯苯氧乙酸1.0毫克/升、吲哚丁酸0.1毫克/升、蔗糖30克/升，培养1周后，培养物诱导出芽原基，再经1周时间，即可开始下一阶段培养；

(2)不定芽增殖：将第1步所得的培养物转移到增殖培养基上，增殖培养基含有MS常规基本培养基、6-苄基嘌呤0.5-1.5毫克/升、吲哚丁酸0.05-0.15毫克/升、蔗糖20-40克/升，培养20天左右，进入以下第3步；

(3)生根：将第2步所得的无根小苗齐根取下，转至常规生根培养基中，生根基本培养基含有1/4MS，1/2MS，MS常规基本培养基、萘乙酸0.05毫克/升，培养20天左右，待小苗根部长出短根，即可进行根的伸长，根伸长培养基含有1/2MS常规基本培养基、萘乙酸0-2.0毫克/升或吲哚丁酸0.3-2.0毫克/升、蔗糖30克/升，35天左右，即可移栽长成正常的铁线莲植株；

(4)移栽与炼苗：待第3步小苗长出4-5根主根时，先把封口膜打开，在培养室内炼苗1周左右，取出小苗，洗净小苗根部的琼脂，移栽到珍珠岩与泥炭以1∶3混合的基质里，放入温室大棚进一步炼苗15-20天，其间需要喷洒1/10MS大量元素营养液以利于缓解蒸腾失水，并补充植物营养。

2.按权利要求1所述的铁线莲‘茱莉亚’组织培养快繁过程中的腋芽诱导，其特征在于所述的诱导培养基为：1/4MS、1/2MS、MS常规基本培养基、2，4-二氯苯氧乙酸1.0毫克/升、吲哚丁酸0.1毫克/升、蔗糖30克/升。

3.按权利要求1所述的铁线莲‘茱莉亚’组织培养快繁过程中的不定芽增殖，其特征在于所述的增殖培养基为：MS常规基本培养基、6-苄基嘌呤0.5-1.5毫克/升、吲哚丁酸0.05-0.15毫克/升、蔗糖20-40克/升。

4.按权利要求1所述的铁线莲‘茱莉亚’组织培养快繁过程中的生根，其特征在于所述的生根培养基为：1/2MS常规基本培养基、萘乙酸0-2.0毫克/升或吲哚丁酸0.3-2.0毫克/升、蔗糖30克/升。

5.按权利要求1所述的铁线莲‘茱莉亚’组织培养快繁过程中的移栽与炼苗，其特征在于所述的移植基质为：珍珠岩∶泥炭＝1∶3。

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