CN104885773A - 一种快速培育蓝莓早期定型组培商品苗的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种快速培育蓝莓早期定型组培商品苗的方法，属于组培快繁及栽培技术领域。该方法包括组培材料田间预处理，分离腋芽的两步消毒，分离腋芽的诱导培养，继代增殖培养，瓶苗第一次移栽，生根苗第二次移栽，组培苗早期定型。本发明方法解决了蓝莓常规组培中进种污染率高、外植体死亡严重、有效进种率低、生产成本高、下地种植后还需重新整形和定型，育苗和投产周期长等技术问题，获得具有3～5个分枝的开心树型的定型优质种苗的时间缩短了16.7～31.7天，组培有效进种率提高85.39％，生产成本降低，育苗效率高。

Description

一种快速培育蓝莓早期定型组培商品苗的方法
技术领域
本发明属于组培快繁及栽培技术领域，具体涉及蓝莓组培快繁和组培苗的早期定型方法。
背景技术
蓝莓(VacciniumSpp)是杜鹃花科(Ericaceae)、越橘属(Vaccinium)多年生灌木小浆果，具有防止脑神经老化、强心、抗癌、软化血管、增强免疫力和缓解视疲劳等功效，被誉为‘超级水果’。
我国对蓝莓的研究始于上世纪80年代，主要以我国野生蓝莓资源开发利用为重点，开展资源调查、繁殖、加工及功效等的研究。90年代后，辽宁、山东等地开始引进国外商业品种进行示范种植，并进行组培和扦插繁殖技术研究与应用。近几年蓝莓规模化种植迅速发展，全国从北到南的种植区域和数量快速增加，对种苗的需求量也迅猛增加。但采用扦插繁殖中需要大量插条，对母株及产量影响大，而且繁殖效率低、根系发育不良、植株退化快，在规模化生产中应用越来越少。
目前主要采用组织培养方法进行蓝莓种苗的标准化和规模化生产，但仍存在因组培材料污染和腋芽死亡严重而导致的进种效率低、无菌体系难建立，瓶内生根和育苗周期长，生产成本高，从苗期到结果期较长等缺陷。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有组培技术存在的进种时因组培材料污染和腋芽死亡严重导致的进种效率低，瓶内诱导生根时间长，生根率低，育苗周期长，以及组培苗出圃后还需进行整形和定型、出圃种苗质量不均匀，种苗生产成本高等缺陷。
本发明的技术方案如下：
一种快速培育蓝莓早期定型组培商品苗的方法，其特征在于：
(1)组培材料田间预处理
母株新梢长到10～15cm时，抹去顶芽,待顶芽下部1～2个腋芽膨大，形成纺锤形的饱满腋芽时，切取带有该纺锤形饱满腋芽的节段为组培材料；
(2)分离腋芽的两步消毒
第一步消毒：将(1)所切取的组培材料清洗后，在质量分数为0.2％的氯化汞溶液中消毒20～25分钟；
第二步消毒：将经第一步消毒的组培材料上的纺锤形腋芽切下作为分离腋芽，并在质量分数为0.1％的氯化汞溶液消毒5～8分钟,再用无菌水漂洗后用于接种；
(3)分离腋芽的诱导培养
将步骤(2)经消毒的分离腋芽接种在装有诱导培养基的培养瓶中诱导培养，培养条件为：温度23～26℃,光照强度2000～3000LX,光照时间8小时；所述诱导培养基为改良WPM+TDZ 2.0～2.5mg/L+IBA 0.3～0.5mg/L+琼脂7g/L+白糖20g/L，pH值为5.0；
(4)继代增殖培养
将经步骤(3)诱导培养获得的不定芽切成1.5～2.0cm节段或切成具1～3个不定芽的小块，接种在继代增殖培养基中继代增殖培养，继代增殖培养条件为：温度23～26℃,光照强度2000～3000LX,光照时间8小时，继代周期为35～45天/次，所述继代增殖培养基配方为：改良WPM+TDZ 1.0～2.0mg/L+KT0.2～0.5mg/L+IAA 0.2～0.3mg/L+琼脂7g/L+白糖20g/L，pH值为5.0；
(5)瓶苗第一次移栽
步骤(4)所述继代增殖培养30～35天后，将瓶盖密封的培养瓶搬到用遮光率为60％的遮阳网覆盖的育苗大棚内驯化10～15天后，取出培养瓶内的苗并剪成2.5～3.5cm的小段，所述小段基部蘸生根液后，扦插到装有混合基质的穴盘孔内进行生根培养，生根培养条件为：扦插后的前10天，在穴盘上方搭盖两层遮光率为50％的遮阳网，并保持空气相对湿度在85～95％，10天后，穴盘上方改为一层遮光率为50％的遮阳网，并保持空气相对湿度在70～80％，扦插苗发根后去除遮阳网、空气相对湿度保持在50～60％，整个生根培养期间，育苗大棚内的温度控制在20～30℃；所述生根液配方为：IAA 0.4g/L+NAA0.2g/L；所述混合基质由草炭与珍珠岩按9:1的体积比混合而成，且混合基质的pH为5.0～5.5；
(6)生根苗第二次移栽
当穴盘内扦插根系长满穴盘孔后，在大棚内进行第二次移栽，移栽时将穴盘内的生根苗带基质移栽到装有育苗基质的育苗杯，一育苗杯移栽一苗，第二次移栽苗的管理为：10天后去除遮阳网，移栽后浇透水，之后每天浇水1～2次，每10～15天喷施一次营养液；移栽后的前7～10天，在育苗杯上方搭盖一层遮光率为50％的遮阳网，10天后去除遮阳网；整个培养期白天控制大棚内温度在20～30℃，夜间温度不能低于12℃；所述育苗杯内的育苗基质按如下方法配制而成：将河沙、锯末、草炭、红土和有机肥按河沙:锯末：草炭：红土：有机肥的体积比为1：2：4：2：1的比例混合而成基础基质，并在基础基质内按每立方米基础基质加入2000克硫磺粉的比例加入硫磺粉混合而成育苗基质。所述有机肥为市售商品有机肥，其中有机质≥45％质量分数；所述营养液为：在每100公斤水中加入尿素30克,KN0350克，KH2PO440克,Ca(NO3)220克,MgSO45克和硼砂2克混配而成；
(7)组培苗早期定型
待步骤(6)所述育苗杯内的小苗萌发新叶并且苗的高度达到5～6cm时进行早期定型修剪，所述早期定型修剪为：只保留植株基部的2.0～2.5cm，将植株其余部分全部剪除，修剪后，每天浇水1～2次，每10～15天喷施一次营养液，所述营养液与步骤(6)所述营养液相同，早期定型组培苗培育期间，白天控制大棚内温度在20～30℃，夜间温度不能低于12℃。通过50天培养后，组培苗形成具有3～5个分枝、且苗高达到15cm以上时即为早期定型组培商品苗；
步骤(3)所述诱导培养基和步骤(4)所述继代增殖培养基中的改良WPM的成分及其含量为：K2SO41980mg/L，NH4N03400mg/L，MgSO4·7H2O 370mg/L，CaCl2·2H2O 96mg/L，KH2PO4170mg/L，Na2-EDTA 37.3mg/L，FeSO4·7H2O 27.8mg/L，CuSO4·5H2O 0.25mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，MnSO4·H2O 22.4mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 278mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B60.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B10.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
与现有技术相比，本发明的创新点及其有益效果是：
1、组培材料的田间抹顶芽处理，培育壮芽，减少了外植体消毒时腋芽死亡率，提高了进种后萌芽率和有效进种率。
本发明针对蓝莓腋芽多为隐芽，不易萌发的生物学特性，在田间采取外植体前进行了组培材料田间预处理措施，使组培材料上的腋芽肥壮，从而腋芽对消毒药剂的耐受力增强、死亡率低、且能快速萌芽，进而为进行外植体消毒时腋芽死亡率降低，提高进种后萌芽率和有效进种率奠定了生物基础，与直接采取组培材料而不进行田间预处理相比，外植体材料的有效进种率提高了68.4％。
2、采用离体腋芽两步消毒的方法，提高了组培无菌体系建立效率。本发明在药剂消毒时浓度采用先高后低、时间先长后短的方法：第一步先将节段在质量分数为0.2％的氯化汞溶液中消毒20～25分钟，第二步只对切下的腋芽用质量分数为0.1％的氯化汞溶液中消毒5～8分钟,通过实施例4的对比试验表明，采用本发明的两步消毒方法，有效进种率达到61.29％，与一次消毒和不分离腋芽的二次消毒方法平均有效进种率33.06％相比，有效进种率提高了85.39％，产生了预料不到的技术效果。
3、本发明中使用的诱导和继代增殖激素降低了生产成本
本发明采用TDZ替代ZT作为诱导和继代增殖激素，达到与ZT相当的诱导和增殖效果，但降低了生产成本。现有蓝莓组培技术的诱导及增殖中，以采用ZT为诱导和殖激素为主，且用量多在1.5～3.0mg/L，ZT高昂的价格(单价为1500～1800元/g)增加了组培生产成本，而TDZ的价格仅为30～50元/g。本发明采用TDZ替代诱导和继代增殖中的ZT，诱导率和增殖率分别为72.4％和5.45倍，与采用ZT的73.4％和5.41倍无明显差异，达到与玉米素一样的诱导和增殖效果。
4、本发明采用二次移栽及早期整形修剪方式，快速获得了蓝莓早期定型商品组培苗
本发明通过第一次移栽，诱导增殖苗瓶外扦插生根后，再采用第二次移栽方式及其适宜的育苗基质和参数，培育可达到早期整形修剪要求的健壮小苗，通过早期定型，促进基部芽萌发。通过实施例4的对比试验表明：在一次移栽后进行早期定型修剪，平均死亡率为8.06％，分枝达到三个以上的比例为6.94％，而采用本发明二次移栽后进行早期定型修剪，平均死亡率为1.39％、分枝达到三个以上的比例为84.44％，由此可见，只有对完成二次移栽的苗进行定型修剪才能达到既提高成活率又可获得更多的具有3～5个分枝的早期定型苗组培苗的技术效果。本发明所述的早期定型技术克服了现有技术在组培苗在下地种植后还需重新定型、产果期延长、产量低等缺陷，获得低主干、多分枝的开心树型优质种苗，更能满足蓝莓生产中的矮化密植、高产和便于人工采摘的树型要求，具有良好的推广前景。
综上所述，本发明新的技术方案通过组培材料田间预处理、分离腋芽的两步消毒、分离腋芽的诱导培养、继代增殖培养、增殖苗的瓶外二次移栽、组培苗的早期定型、各阶段相应培养条件和各步骤的协同作用，解决了蓝莓常规组培中进种污染率高、外植体死亡严重、有效进种率低、生产成本高、下地种植后还需重新整形和定型，育苗和投产周期长等技术问题。本发明方法比原来不进行田间预处理、在瓶内生根和不进行早期定型的技术相比，获得具有3～5个分枝的开心树型的定型优质种苗的时间缩短了16.7～31.7天，组培有效进种率提高85.39％，早期定型修剪的成活率高又可较快获得更多的具有3～5个分枝的早期定型苗组培商品苗直接投入生产，生产成本降低，育苗效率高，技术效果显著。
具体实施方式
下面通过对兔眼系蓝莓品种‘灿烂’、北高丛系蓝莓品种‘都克’和南高丛系蓝莓品种‘莱格西’组培定型苗生产的实施例对本发明做进一步描述。所述品种均为市场流行品种，可从商业渠道购买。
实施例1(本发明方法)
(1)组培材料田间预处理
于6月份选择蓝莓品种‘灿烂’的无病，长势好，产量高单株为采种母株，待母株新梢长度在10～15cm时，将顶芽抹去,待顶芽下1～2个腋芽膨大，形成纺锤形的饱满腋芽时，切取带有该纺锤形饱满腋芽的节段为组培材料。
(2)分离腋芽的两步消毒
第一步消毒：将(1)所切取的组培材料清洗后，在质量分数为0.2％的氯化汞溶液中消毒20分钟。
第二步消毒：将经第一步消毒的组培材料上的纺锤形饱满芽从节段上切下作为分离腋芽，在质量分数为0.1％的氯化汞溶液消毒8分钟,无菌水漂洗后用于接种。
(3)分离腋芽的诱导培养
将步骤(2)经消毒的分离腋芽接种在装有诱导培养基的培养瓶中诱导培养，培养条件为：温度25℃,光照强度2000～3000LX,光照时间8小时；所述诱导培养基为改良WPM+TDZ 2.0mg/L+IBA 0.3mg/L+琼脂7g/L+白糖20g/L，pH值为5.0；
(4)继代增殖培养
将经步骤(3)诱导培养获得的不定芽成1.5～2.0cm的节段，接种在继代增殖培养基中，继代周期40天/次，增殖率达到5.72倍。经过多次继代增殖培养，达到生产所需增殖苗基数。继代增殖培养的培养条件为：温度26℃,光照强度2000LX,光照时间8小时。所述继代增殖培养基配方为：改良WPM+TDZ1.0mg/L+KT 0.5mg/L+IAA 0.2mg/L+琼脂7g/L+白糖20g/L，pH值为5.0。
(5)瓶苗第一次移栽
步骤(4)所述继代增殖苗培养35天后，将瓶盖密封的培养瓶搬到用遮光率为60％的遮阳网覆盖的育苗大棚内驯化12天后，取出培养瓶内的苗并剪成2.5～3.5cm的小段，所述小段基部蘸配方为IAA 0.4g/L+NAA 0.2g/L的生根液后，扦插到装有混合基质的穴盘孔内进行生根培养。生根培养条件为：扦插后的前10天，在穴盘上方搭盖两层遮光率为50％的遮阳网，并通过喷雾保持空气相对湿度在85～95％，10天后，穴盘上方改为一层遮光率为50％的遮阳网，并通过喷雾保持空气相对湿度在70～80％，20～25天，扦插苗发根后去除遮阳网、注意通风、空气相对湿度保持在50～60％，整个生根培养期间，育苗大棚内的温度控制在20～30℃；所述混合基质由草炭与珍珠岩按9:1的体积比混合而成，且混合基质的pH为5.0；
(6)生根苗第二次移栽
步骤(5)所述穴盘孔内小苗20天后开始生根，40天后根系长满穴盘孔后在大棚内进行第二次移栽，将穴盘内的生根苗带基质移栽到装有育苗基质的育苗杯内，每一育苗杯内一株生根苗，第二次移栽苗的管理为：移栽后的前10天，在育苗杯上方搭盖遮光率为50％的遮阳网，10天后去除遮阳网，移栽后浇透水，之后每天浇水1次，每10天喷施一次营养液，白天控制大棚内温度在20～30℃，夜间温度不能低于12℃；所述育苗杯内的育苗基质按如下方法配制而成：将河沙、锯末、草炭、红土和有机肥按河沙:锯末：草炭：红土：有机肥的体积比为1：2：4：2：1的比例混合而成基础基质，并在所述基础基质内按每立方米基础基质加入2000克硫磺粉的比例加入硫磺粉混合而成育苗基质。所述有机肥为市售商品有机肥，其有机肥中有机质含量≥45％质量分数，所述营养液为：每100公斤水中加入尿素30克,KN0350克,KH2PO440克,Ca(NO3)220克,MgSO45克和硼砂2克混配而成。
(7)组培苗早期定型
待步骤(6)所述育苗杯内的小苗萌发新叶并且苗的高度达到5-6cm时进行早期定型修剪。所述早期定型修剪为：只保留植株基部的2.0～2.5cm，将植株其余部分全部剪除，修剪后，每天浇水1次，每10天喷施一次营养液，所述营养液与步骤(6)所述营养液相同，早期定型组培苗培育期间，白天控制大棚内温度在20～30℃，夜间温度不低于12℃，50天后，育苗杯内的苗形成具有3～5个分枝、且苗高达到15cm以上时即为早期定型组培商品苗；
步骤(3)所述诱导培养和步骤(4)所述继代增殖培养基中的改良WPM培养基为WPM培养基配方中K2SO4的用量增加1倍，Ca(NO3)2用量减为1/2。
所述改良WPM培养基具体的成分及其含量组成：K2SO41980mg/L，NH4N03400mg/L，MgSO4·7H2O 370mg/L，CaCl2·2H2O 96mg/L，KH2PO4170mg/L，Na2-EDTA 37.3mg/L，FeSO4·7H2O 27.8mg/L，CuSO4·5H2O 0.25mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，MnSO4·H2O 22.4mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 278mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B60.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B10.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
实施例2(本发明方法)
实施例2除以下步骤不同外，其余步骤与实施例1相同。
(1)组培材料田间预处理
于4月份，选择蓝莓品种‘都克’的优良单株为采种母株。
(4)继代增殖培养
将经步骤(3)诱导培养获得的不定芽切成1.5～2.0cm节段或切成具1～3个不定芽的小块，接种在改良WPM+TDZ 1.5mg/L+KT 0.2mg/L+IAA 0.2mg/L+琼脂7g/L+白糖20g/L，pH值为5.0的继代增殖培养基中，继代增殖培养条件为：温度23℃,光照强度2500LX,光照时间8小时。继代周期为35天/次，增殖率可达到5.33倍。
(5)瓶苗第一次移栽
步骤(4)所述继代增殖培养30天后，将瓶盖密封的培养瓶搬到用遮光率为60％的遮阳网覆盖的育苗大棚内驯化15天后,从瓶中取出剪成3cm左右的小段，并采用与实施例1相同的方法和条件进行生根培养。
实施例3(本发明方法)
实施例3除以下步骤不同外，其余步骤与实施例1相同。
(1)组培材料田间预处理
于10月份选择蓝莓品种‘莱格西’的无病，长势好，产量高单株为采种母株。
(2)分离腋芽的两步消毒
第一步消毒：将(1)所切取的组培材料清洗后，在质量分数为0.2％的氯化汞溶液中消毒25分钟；
第二步消毒：将经第一步消毒的组培材料上的纺锤形饱满芽从节段上切下作为分离腋芽，在质量分数为0.1％的氯化汞溶液消毒5分钟,无菌水漂洗后用于接种；
(3)分离腋芽的诱导培养
步骤(2)经消毒的分离腋芽接种在装有诱导培养基的培养瓶中诱导培养，培养条件为：温度25℃,光照强度3000LX,光照时间8小时；诱导培养基为改良WPM+TDZ 2.5mg/L+IBA 0.5mg/L+琼脂7g/L+白糖20g/L，pH值为5.0；
(6)生根苗第二次移栽
5月份将步骤(5)所述穴盘孔内小苗20天后开始生根，40天后根系长满穴盘孔后进行二次移栽，将穴盘内的生根苗带基质移栽到装有与实施例1相同的育苗基质的育苗杯内。二次移栽苗的管理：移栽后的前7天用遮光率为50％的遮阳网覆盖，移栽后浇透水，之后每天浇水1～2次，每15天喷施一次与实施例1相同的营养液，白天控制大棚内温度在20～30℃，夜间温度保持在12℃以上。
(7)组培苗早期定型修剪
待步骤(6)所述育苗杯内的小苗萌发新叶并且苗的高度达到5cm时进行早期定型修剪。早期定型修剪时保留育苗杯内二次移栽苗基部约2.0cm，将基部约2.0cm之上的植株剪去。50天后育苗杯内的苗的平均分枝有3.92个、且苗高达到15cm以上苗数量达到86.0％。
实施例4对比试验
通过对‘灿烂’、‘都克’和‘莱格西’三个品种开展:(1)组培材料田间预处理对提高有效进种率影响、(2)消毒方法对组培无菌体系建立的影响、(3)早期定型修剪时间对植株死亡和分枝影响的试验研究、(4)本发明方法与现有技术对育苗时间的影响的研究，进一步验证本发明中通过组培材料田间预处理、离体腋芽二次消毒、二次移栽后的早期定型修剪的技术和方法可以提高有效进种率、加快无菌快繁体系建立、达到快速培育蓝莓早期定型组培商品苗的目的。
(1)组培材料田间预处理对提高有效进种率的影响
选取‘灿烂’、‘都克’和‘莱格西’三个品种无病虫、生长旺盛的母株上约10cm的枝条，抹去顶芽，待顶芽下部的腋芽膨大和萌动后取材料进行清洗和消毒处理，消毒时先在质量分数为0.2％的氯化汞溶液中消毒25分钟，再在质量分数为0.1％的氯化汞溶液消毒5分钟,无菌水漂洗后接种，接种后30天进行统计，通过下表1的试验结果表明：采用本发明进行组培材料的田间预处理后，平均有效进种率为63.61％，较未处理的37.78％提高了68.4％。(有效进种率＝有效萌发腋芽数/进种腋芽总数，有效萌发腋芽数＝进种腋芽总数－污染腋芽数－死亡腋芽数－未萌发腋芽数)。
表1 本发明组培材料田间预处理对提高有效进种率的影响
表1中未预处理是指直接切取带有腋芽的节段为组培材料；预处理是指本发明方法步骤(1)所述的组培材料田间预处理。
(2)不同的消毒方法对组培无菌体系建立的影响
切取蓝莓品种‘灿烂’带有纺锤形饱满腋芽的节段为材料，进行不同的消毒处理。一步消毒处理是：将节段在质量分数为0.2％的氯化汞溶液中消毒25分钟；不分离腋芽节段二步消毒是：将一次消毒后的节段再在质量分数为0.1％的氯化汞溶液中消毒5分钟；分离腋芽二步消毒(本发明方法)是：将经过一步消毒节段上的腋芽分离下来，再在质量分数为0.1％的氯化汞溶液中消毒5分钟。接种30天后进行统计，通过下表2的试验结果表明：采用本发明分离腋芽两步消毒方法时，有效进种率达到61.29％，较一步消毒和不分离腋芽的二步消毒方法平均有效进种率33.07％提高了85.33％，技术效果显著。
表2 采用不同消毒方法对进种效率的影响
(3)早期定型修剪时间对植株死亡和分枝影响
选取‘灿烂’、‘都克’和‘莱格西’三个品种分别对一次移栽后40天和二次移栽后20天的移栽苗进行早期定型，只保留植株基部的2.0～2.5cm，将植株其余部分全部剪除，修剪后40天进行死亡数和分枝数的统计。通过下表3的试验结果表明：在一次移栽后40天进行早期定型修剪和二次移栽后20天进行修剪，平均死亡率分别为8.06％和1.39％、分枝达到三个以上的比例分别为6.94％和84.44％，即采用本发明的二次移栽后，修剪苗的成活率比一次移栽后进行修剪的成活率提高7.3％，分枝达到三个以上的苗比一次移栽后分枝达到三个以上的苗多77.5％，因此，只有对完成二次移栽的壮苗进行定型修剪才能达到既保证成活率高又可获得更多的具有3～5个分枝的早期定型苗组培商品苗的技术效果。
表3 不同移栽阶段定型修剪对死亡及分枝的影响
(4)采用本发明方法较现有技术对育苗时间的影响
本发明方法中的关键技术是对组培材料进行田间预处理、生根阶段采用繁殖苗直接瓶外扦插移栽和对二次移栽苗的早期定型修剪。实施例采用‘灿烂’、‘都克’、‘莱格西’三个品种进行预处理、生根、及早期定型试验。相关时间的统计根据下述标准进行：预处理中萌芽时间是指60％以上腋芽萌发,且芽长达到0.5cm以上的时间；生根时间是指70％以上的苗形成根系的时间；达到商品苗时间是指90％以上的组培苗形成具有3～5个分枝，且苗高达到15cm以上的时间。下表四中所述的不定型处理达到商品苗时间，是指在二次移栽后不进行定型修剪处理自然生长达到商品苗时间；定型处理达到商品苗时间是指按照本发明步骤(7)的方法进行早期定型后达到商品苗时间。通过下表4的试验结果表明：本发明较传统的组培技术可以缩短育苗周期16.7～31.7天，平均可缩短23.5天。
通过以上实施例可以看出，无论是兔眼系蓝莓品种、北高丛系蓝莓品种还是南高丛系蓝莓品种，采用本发明方法，均可以减少进种污染率、提高有效进种率、快速建立无菌体系、在组培苗出圃前完成植株的定型、缩短育苗周期，从而达到快速培育早期定型组培商品苗的技术效果，本发明方法适用于不同类型蓝莓品种的种苗规模化生产。
表四 本发明方法对育苗周期的影响

Claims (1)

1.一种快速培育蓝莓早期定型组培商品苗的方法，其特征在于：
(1)组培材料田间预处理
母株新梢长到10～15cm时，抹去顶芽,待顶芽下部1～2个腋芽膨大，形成纺锤形的饱满腋芽时，切取带有该纺锤形饱满腋芽的节段为组培材料；
(2)分离腋芽的两步消毒
第一步消毒：将(1)所切取的组培材料清洗后，在质量分数为0.2％的氯化汞溶液中消毒20～25分钟；
第二步消毒：将经第一步消毒的组培材料上的纺锤形腋芽切下作为分离腋芽，并在质量分数为0.1％的氯化汞溶液消毒5～8分钟,再用无菌水漂洗后用于接种；
(3)分离腋芽的诱导培养
将步骤(2)经消毒的分离腋芽接种在装有诱导培养基的培养瓶中诱导培养，培养条件为：温度23～26℃,光照强度2000～3000LX,光照时间8小时；所述诱导培养基为改良WPM+TDZ 2.0～2.5mg/L+IBA 0.3～0.5mg/L+琼脂7g/L+白糖20g/L，pH值为5.0；
(4)继代增殖培养
将经步骤(3)诱导培养获得的不定芽切成1.5～2.0cm节段或切成具1～3个不定芽的小块，接种在继代增殖培养基中继代增殖培养，继代增殖培养条件为：温度23～26℃,光照强度2000～3000LX,光照时间8小时，继代周期为35～45天/次，所述继代增殖培养基配方为：改良WPM+TDZ 1.0～2.0mg/L+KT0.2～0.5mg/L+IAA 0.2～0.3mg/L+琼脂7g/L+白糖20g/L，pH值为5.0；
(5)瓶苗第一次移栽
步骤(4)所述继代增殖培养30～35天后，将瓶盖密封的培养瓶搬到用遮光率为60％的遮阳网覆盖的育苗大棚内驯化10～15天后，取出培养瓶内的苗并剪成2.5～3.5cm的小段，所述小段基部蘸生根液后，扦插到装有混合基质的穴盘孔内进行生根培养，生根培养条件为：扦插后的前10天，在穴盘上方搭盖两层遮光率为50％的遮阳网，并保持空气相对湿度在85～95％，10天后，穴盘上方改为一层遮光率为50％的遮阳网，并保持空气相对湿度在70～80％，扦插苗发根后去除遮阳网、空气相对湿度保持在50～60％，整个生根培养期间，育苗大棚内的温度控制在20～30℃；所述生根液配方为：IAA 0.4g/L+NAA0.2g/L；所述混合基质由草炭与珍珠岩按9:1的体积比混合而成，且混合基质的pH为5.0～5.5；
(6)生根苗第二次移栽
当穴盘内扦插根系长满穴盘孔后，在大棚内进行第二次移栽，移栽时将穴盘内的生根苗带基质移栽到装有育苗基质的育苗杯，每一育苗杯内移入一株生根苗，第二次移栽苗的管理为：移栽后浇透水，之后每天浇水1～2次，每10～15天喷施一次营养液；移栽后的前7～10天，在育苗杯上方搭盖一层遮光率为50％的遮阳网，10天后去除遮阳网；整个培养期白天控制大棚内温度在20～30℃，夜间温度不低于12℃；所述育苗杯内的育苗基质按如下方法配制而成：将河沙、锯末、草炭、红土和有机肥按河沙:锯末：草炭：红土：有机肥的体积比为1：2：4：2：1的比例混合而成基础基质，并在基础基质内按每立方米基础基质加入2000克硫磺粉的比例加入硫磺粉混合而成育苗基质，所述有机肥中有机质≥45％质量分数；所述营养液为：在每100公斤水中加入尿素30克，KN03 50克，KH2PO4 40克,Ca(NO3)2 20克,MgSO4 5克和硼砂2克混配而成；
(7)组培苗早期定型
待步骤(6)所述育苗杯内的小苗萌发新叶并且苗的高度达到5～6cm时进行早期定型修剪，所述早期定型修剪为：只保留植株基部的2.0～2.5cm，将植株其余部分全部剪除，修剪后，每天浇水1～2次，每10～15天喷施一次营养液，所述营养液与步骤(6)所述营养液相同，早期定型组培苗培育期间，白天控制大棚内温度在20～30℃，夜间温度不低于12℃，通过50天培养后，组培苗形成具有3～5个分枝、且苗高达到15cm以上时即为早期定型组培商品苗；
步骤(3)所述诱导培养基和步骤(4)所述继代增殖培养基中的改良WPM的成分及其含量为：K2SO4 1980mg/L，NH4N03 400mg/L，MgSO4·7H2O 370mg/L，CaCl2·2H2O 96mg/L，KH2PO4 170mg/L，Na2-EDTA 37.3mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，CuSO4·5H2O 0.25mg/L，ZnSO4·7H2O 8.6mg/L，MnSO4·H2O 22.4mg/L，Ca(NO3)2·4H2O 278mg/L，Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B1 0.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
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