CN104719157A - 一种南高丛越组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种南高丛越组培快繁方法,南高丛越橘(Vaccinium australe)具有抗逆性强、生长速度快、产量高等优点。因此,很有必要建立南高丛越橘离体再生体系,为高品质、高产量、适应性强的南高丛越橘的培育奠定基础。本发明以南高丛越橘带芽茎段为外植体,通过诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤获得了南高丛越橘离体再生植株,从而实现了南高丛越橘组培快繁,以期为越橘大量繁殖提供新的快速有效途径。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法,具体地说,涉及一种南高丛越组培快繁方法。
背景技术
越橘属于杜鹃花科越橘属多年生落叶或常绿灌木,果实为蓝色或红色,原产北美。果实为蓝色或红色,果实大小因种类不同而异,果肉柔软多汁,风味醇美,含有丰富的维生素和及其他果品中少有的特殊营养成分,具有较高的保健药用价值,因此国际粮农组织将其列为人类五大健康食品之一。我国的越橘属植物资源非常丰富,但集中栽培面积还较少,主要集中分布于大、小兴安岭和长白山等地。越橘苗木繁殖方法因品种而异,高丛越橘主要釆用硬枝扦插,兔眼越橘采用绿枝扦插,矮丛越橘硬枝扦插和绿枝扦插均可,其他方法如种子育苗、根状茎扦插、分株等也有应用,但这些繁殖方式均存在周期长、繁殖系数低、成本高等质点,限制了快速繁殖及新品种选育等工作。而离体培养可弥补传统繁殖方法的不足,在较短时期内扩大繁殖优良品种,并能利用遗传转化技术在短期内培育新品种。
越橘是一种新兴栽培果树,蕴藏着巨大的发展潜力,由于越橘鲜果的总量很少,所以在国际市场上售价昂贵。而南高丛越橘(Vaccinium australe)具有抗逆性强、生长速度快、产量高等优点,具有巨大的市场潜力。因此,加速南高丛越橘的发展有着广阔的前景。但南高丛越橘作为一种木本观赏果树的植物,在传统的种子繁殖受到产量低、难度高、所需时间长、生长环境受限等条件的限制下,因此,急需建立了系统的南高丛越橘组织培养植株再生体系,以提高其繁殖速度和规模,从而实现南高丛越橘种苗的工厂化生产。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种南高丛越组培快繁方法,本发明以南高丛越橘带芽茎段为外植体,通过诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤获得了南高丛越橘离体再生植株,从而实现了南高丛越橘组培快繁,从而实现了本发明的目的。
本发明的一种南高丛越组培快繁方法,包括以下的步骤:
(1)外植体消毒:采集南高丛越健康植株带芽茎段,用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗,自来水冲洗1~3h后置于超净工作台中,先用75%乙醇消毒5~30s后用无菌水洗3~5次,再用0.1%升汞溶液消毒3~8min,用无菌水冲洗4~6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
(2)诱导培养:将经步骤(1)处理后的带芽茎段接种于诱导培养基中进行丛生芽诱导。接种后先在25~28℃条件下全暗培养10~20天,然后置于每天光照10~16小时,光照强度为2000~4000lx,置于培养温度为25~28℃的条件下培养直至形成丛生芽。培养2周后统计污染率、启动率和死亡率。
(3)增殖培养:将步骤(2)生长健壮的南高丛越橘丛生芽转接至继代培养基中进行增殖培养。接种后先在25~28℃条件下全暗培养5~7天,然后置于每天光照14~16小时,光照强度为3000~5000lx,培养温度为25~28℃的条件下培养,每20天继代一次,以获得更多的丛生芽。
(4)生根培养:将步骤(3)获得的生长至1.5~2.5cm丛生芽从基部剪切并接种至生根培养中诱导生根。接种后置于每天光照14~16小时,光照强度为3000~5000lx,培养温度为25~28℃的条件下培养直至生根。
(5)炼苗移栽:根长至1~2cm试管苗的培养瓶瓶盖打开在室外于自然光照下炼苗2~4天后将试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,尽量不伤害根部,栽入微酸性的由腐殖土:椰糠:稻谷=3:1:1组成基质中并定植于大田中,移栽1个月内保持空气湿度80%以上。
上述诱导培养基为:WPM+0.1~2.0mg/L ZT+1.0~4.0mg/L 6-BA+0.1~1.0mg/L NAA+15~30g/L蔗糖+3.5~6.0g/L琼脂,pH为5.4~5.8。
上述步骤(3)所述的增殖培养基为::WPM+0.1~2.0mg/L ZT+15~30g/L蔗糖+3.5~6.0g/L琼脂,pH为5.4~5.8。
上步骤(4)所述的生根培养基为:1/2MS+1.0~3.0mg/L NAA+1.0~2.0mg/L ABT1+15~30g/L蔗糖+3.5~6.0g/L琼脂,pH为5.4~5.8。
与现有技术相比本发明的优点是:南高丛越橘(Vaccinium australe)具有抗逆性强、生长速度快、产量高等优点。越橘在自然状态下以二倍体、四倍体或六倍体形式存在,但由于越橘的杂种杂合性,使得采用传统育种手段进行越橘育种既费吋又费力。因此,很有必要建立南高丛越橘离体再生体系,为高品质、高产量、适应性强的南高丛越橘的培育奠定基础。本发明以南高丛越橘带芽茎段为外植体,通过诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗移栽等步骤获得了南高丛越橘离体再生植株,从而实现了南高丛越橘组培快繁,以期为越橘大量繁殖提供新的快速有效途径。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明,不是对本发明的限制。
实施例1
(1)外植体消毒:采集南高丛越健康植株带芽茎段,用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗,自来水冲洗3h后置于超净工作台中,先用75%乙醇消毒20s后用无菌水洗4次,再用0.1%升汞溶液消毒9min,用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
(2)诱导培养:将经步骤(1)处理后的带芽茎段接种于诱导培养基中进行丛生芽诱导。接种后先在27℃条件下全暗培养12天,然后置于每天光照14小时,光照强度为3000lx,置于培养温度为27℃的条件下培养,诱导率为78.56%。所述的诱导培养基为:WPM+1.5mg/L ZT+3.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+18g/L蔗糖+3.6g/L琼脂,pH为5.4。
(3)增殖培养:将步骤(2)生长健壮的南高丛越橘丛生芽转接至继代培养基中进行增殖培养。接种后先在27℃条件下全暗培养7天,然后置于每天光照14小时,光照强度为4000lx,培养温度为27℃的条件下培养,每20天继代一次,增殖系数为4.6。所述的增殖培养基为::WPM+2.0mg/L ZT+20g/L蔗糖+3.8g/L琼脂,pH为5.4。
(4)生根培养:将步骤(3)获得的生长至1.5~2.5cm丛生芽从基部剪切并接种至生根培养中诱导生根。接种后置于每天光照14小时,光照强度为4000lx,培养温度为27℃的条件下培养直至生根,生根率为76.93%。所述的生根培养基为:1/2MS+2.8mg/L NAA+1.0mg/L ABT1+2.8g/L蔗糖+4.9g/L琼脂,pH为5.8。
(5)炼苗移栽:根长至1~2cm试管苗的培养瓶瓶盖打开在室外于自然光照下炼苗2天后将试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,尽量不伤害根部,栽入微酸性的由腐殖土:椰糠:稻谷=3:1:1组成基质中并定植于大田中,移栽1个月内保持空气湿度80%以上,移栽成活率为90.37%。
实施例2
(1)外植体消毒:采集南高丛越健康植株带芽茎段,用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗,自来水冲洗2h后置于超净工作台中,先用75%乙醇消毒15s后用无菌水洗4次,再用0.1%升汞溶液消毒5min,用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用。
(2)诱导培养:将经步骤(1)处理后的带芽茎段接种于诱导培养基中进行丛生芽诱导。接种后先在25℃条件下全暗培养10天,然后置于每天光照13小时,光照强度为2000lx,置于培养温度为25℃的条件下培养,诱导率为83.47%。所述的诱导培养基为:WPM+1.2mg/L ZT+2.4mg/L 6-BA+0.4mg/L NAA+18g/L蔗糖+3.6g/L琼脂,pH为5.8。
(3)增殖培养:将步骤(2)生长健壮的南高丛越橘丛生芽转接至继代培养基中进行增殖培养。接种后先在25℃条件下全暗培养5天,然后置于每天光照13小时,光照强度为3000lx,培养温度为25℃的条件下培养,每20天继代一次,增殖系数为4.3。所述的增殖培养基为::WPM+1.8mg/L ZT+25g/L蔗糖+4.5g/L琼脂,pH为5.8。
(4)生根培养:将步骤(3)获得的生长至1.5~2.5cm丛生芽从基部剪切并接种至生根培养中诱导生根。接种后置于每天光照13小时,光照强度为5000lx,培养温度为25℃的条件下培养直至生根,生根率为79.27%。所述的生根培养基为:1/2MS+3.0mg/L NAA+1.5mg/L ABT1+30g/L蔗糖+5.0g/L琼脂,pH为5.8。
(5)炼苗移栽:根长至1~2cm试管苗的培养瓶瓶盖打开在室外于自然光照下炼苗4天后将试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,尽量不伤害根部,栽入微酸性的由腐殖土:椰糠:稻谷=3:1:1组成基质中并定植于大田中,移栽1个月内保持空气湿度80%以上,移栽成活率为88.49%。
Claims (4)
1.一种南高丛越组培快繁方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)外植体消毒:采集南高丛越健康植株带芽茎段,用软毛刷蘸洗衣粉水轻轻刷洗,自来水冲洗1~3h后置于超净工作台中,先用75%乙醇消毒5~30s后用无菌水洗3~5次,再用0.1%升汞溶液消毒3~8min,用无菌水冲洗4~6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用;
(2)诱导培养:将经步骤(1)处理后的带芽茎段接种于诱导培养基中进行丛生芽诱导,接种后先在25~28℃条件下全暗培养10~20天,然后置于每天光照10~16小时,光照强度为2000~4000lx,置于培养温度为25~28℃的条件下培养直至形成丛生芽,培养2周后统计污染率、启动率和死亡率;
(3)增殖培养:将步骤(2)生长健壮的南高丛越橘丛生芽转接至继代培养基中进行增殖培养,接种后先在25~28℃条件下全暗培养5~7天,然后置于每天光照14~16小时,光照强度为3000~5000lx,培养温度为25~28℃的条件下培养,每20天继代一次,以获得更多的丛生芽;
(4)生根培养:将步骤(3)获得的生长至1.5~2.5cm丛生芽从基部剪切并接种至生根培养中诱导生根,接种后置于每天光照14~16小时,光照强度为3000~5000lx,培养温度为25~28℃的条件下培养直至生根;
(5)炼苗移栽:根长至1~2cm试管苗的培养瓶瓶盖打开在室外于自然光照下炼苗2~4天后将试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,尽量不伤害根部,栽入微酸性的由腐殖土:椰糠:稻谷=3:1:1组成基质中并定植于大田中,移栽1个月内保持空气湿度80%以上。
2. 根据权利要求1所述的一种南高丛越组培快繁方法,其特征在于步骤(2)所述的诱导培养基为:WPM+0.1~2.0mg/L ZT+1.0~4.0mg/L 6-BA+0.1~1.0mg/L NAA+15~30g/L蔗糖+3.5~6.0g/L琼脂,pH为5.4~5.8。
3.根据权利要求1所述的一种南高丛越组培快繁方法,其特征在于步骤(3)所述的增殖培养基为:WPM+0.1~2.0mg/L ZT+15~30g/L蔗糖+3.5~6.0g/L琼脂,pH为5.4~5.8。
4. 根据权利要求1所述的一种南高丛越组培快繁方法,其特征在于步骤(4)所述的生根培养基为:1/2MS+1.0~3.0mg/L NAA+1.0~2.0mg/L ABT1+15~30g/L蔗糖+3.5~6.0g/L琼脂,pH为5.4~5.8。
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