CN104719156A

CN104719156A - 一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法

Info

Publication number: CN104719156A
Application number: CN201510099586.6A
Authority: CN
Inventors: 朱远星
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-03-06
Filing date: 2015-03-06
Publication date: 2015-06-24

Abstract

本发明公开了一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法，南高丛越橘（Vaccinium australe）具有抗逆性强、生长速度快、产量高等优点。多倍体作为植物进化的途径之一,一般具有巨大性、低孕性、生长旺盛、大果、茎杆粗壮、抗逆性强等特点,且相对常规杂交育种而言,多倍体育种周期较短，能较快的得到一个植物的新品种。本发明以组培苗生根苗为材料，采用活体诱导法对南高丛越橘组培苗进行四倍体诱导，获得了抗逆性强、优质、高产、单果大的南高丛越橘植株，为培育适应热带及亚热带的大果型越橘新品种奠定基础。

Description

一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法

技术领域

本发明涉及农业生物技术中植物多倍体培育的方法，具体地说，涉及一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法。

背景技术

越橘属于杜鹃花科越橘属多年生落叶或常绿灌木，果实为蓝色或红色，果实大小因种类不同而异，果肉柔软多汁，风味醇美，含有丰富的维生素和及其他果品中少有的特殊营养成分,具有较高的保健药用价值。由于其独特的风味及营养保健价值,其果实及加工品供不应求。现有的越橘栽培品种中,南高丛越橘原产美国东南部亚热带,分布在沿海及内陆沼泽地，耐湿热、耐寒冷、喜湿润、温暖的气候条件,适宜亚热带地区气候条件,主要在我国黄河以南地区,如华东、华南地区发展,其栽培品种较少。

南高丛越橘（Vaccinium australe）具有抗逆性强、生长速度快、产量高等优点，但因果实较小而制约了其推广种植。多倍体作为植物进化的途径之一,一般具有巨大性、低孕性、生长旺盛、大果、茎杆粗壮、抗逆性强等特点,且相对常规杂交育种而言,多倍体育种周期较短，能较快的得到一个植物的新品种。因此,进行越橘多倍体育种研究,可以提高果实产量,增强其生长势,提高越橘品质,是选育优质越橘新品种的重要途径。因此，本发明以组培苗生根苗为材料，采用活体诱导法对南高丛越橘组培苗进行四倍体诱导，获得了抗逆性强、优质、高产、单果大的南高丛越橘植株，对培育适应热带及亚热带的大果型越橘新品种具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供出一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法，本发明以组培苗生根苗为材料，采用活体诱导法对南高丛越橘组培苗进行四倍体诱导，获得了抗逆性强、优质、高产、单果大的南高丛越橘植株，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法，包括以下的步骤：

（1）组培苗的生根：取高3～5cm高，生长健壮的南高丛越橘组培苗接种到生根培养基中进行诱导生根。接种后先在25～28℃条件下全暗培养10～20天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。

（2）炼苗移栽：根长至1～2cm试管苗的培养瓶瓶盖打开在室外于自然光照下炼苗2～4天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入微酸性基质中并定植于大田中，移栽1个月内保持空气湿度80%以上。

（3）多倍体诱导：将步骤（2）精心管理待其正常生长45～60天后，选择茎尖生长旺盛的幼苗作为活体诱导材料。在幼苗生长旺盛的时段，用脱脂棉包裹其新芽,然后用不同浓度的诱变剂对其进行滴定处理12～48h。为防止其蒸发,用透明小拱棚遮盖幼苗,正常光照,并每隔3～6h滴定一次,保持脱脂棉湿润。处理后除去脱脂棉,揭开小拱棚,用清水冲洗幼苗5～10次,洗掉残余药液,在正常条件下进行田间管理。

（4）芽体生根：将步骤（3）处理的芽长到3～5cm的枝条进行形态鉴定，并取茎尖旁幼叶用去壁低渗-火焰干燥法对其进行染色体计数。同时剪取其枝条,扦插于微酸性基质中，扦插1个月内保持空气湿度90%以上，芽体开始生根，生出新芽后，取新芽旁边的幼叶进行染色体计数,统计变异率及多倍体比例。

上述步骤（1）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～3.0mg/L NAA+1.0～2.0mg/L ABT₁+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

上述步骤（1）、（4）所述的微酸性基质指的是由腐殖土:椰糠:稻谷＝3：1:1组成的、pH为5.4～5.8的基质。

上述步骤（4）所述的诱变剂是指浓度为0.1%～0.4%的秋水仙素溶液。

与现有技术相比本发明的优点是：越橘属于杜鹃花科越橘属多年生落叶或常绿灌木，果实为蓝色或红色，果实大小因种类不同而异，果肉柔软多汁，风味醇美，具有较高的保健药用价值。南高丛越橘（Vaccinium australe）具有抗逆性强、生长速度快、产量高等优点，但因果实较小而制约了其推广种植。多倍体作为植物进化的途径之一,一般具有巨大性、低孕性、生长旺盛、大果、茎杆粗壮、抗逆性强等特点,且相对常规杂交育种而言,多倍体育种周期较短，能较快的得到一个植物的新品种。本发明以组培苗生根苗为材料，采用活体诱导法对南高丛越橘组培苗进行四倍体诱导，获得了抗逆性强、优质、高产、单果大的南高丛越橘植株，为培育适应热带及亚热带的大果型越橘新品种奠定基础。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1

（1）组培苗的生根：取高3～5cm高，生长健壮的南高丛越橘组培苗接种到生根培养基中进行诱导生根。接种后先在25℃条件下全暗培养12天，然后置于每天光照14小时，光照强度为3500lx，培养温度为25℃的条件下培养30天即可生根，生根率为87.4%。所述的的生根培养基为1/2MS+1.8mg/L NAA+1.0mg/L ABT₁+25g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.5。

（2）炼苗移栽：根长至1～2cm试管苗的培养瓶瓶盖打开在室外于自然光照下炼苗3天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入微酸性的由腐殖土:椰糠:稻谷＝3：1:1组成的基质中并定植于大田中，移栽1个月内保持空气湿度80%以上，移栽成活率为95.7%。

（3）多倍体诱导：将步骤（2）精心管理待其正常生长48天后，选择茎尖生长旺盛的幼苗作为活体诱导材料。在幼苗生长旺盛的时段，用脱脂棉包裹其新芽,然后用0.2%秋水仙素进行滴定处理18h。为防止其蒸发,用透明小拱棚遮盖幼苗,正常光照,并每隔3h滴定一次,保持脱脂棉湿润。处理后除去脱脂棉,揭开小拱棚,用清水冲洗幼苗5次,洗掉残余药液,在正常条件下进行田间管理，幼苗成活率为78.9%。

（4）芽体生根：将步骤（3）处理的芽长到3～5cm的枝条进行形态鉴定，并取茎尖旁幼叶用去壁低渗-火焰干燥法对其进行染色体计数。同时剪取其枝条,扦插于微酸性基质中，扦插1个月内保持空气湿度90%以上，芽体开始生根，生出新芽后，取新芽旁边的幼叶进行染色体计数,统计变异率及多倍体比例，芽体变异率为18.34%，四倍体植株率为9.75%。

实施例2

（1）组培苗的生根：取高3～5cm高，生长健壮的南高丛越橘组培苗接种到生根培养基中进行诱导生根。接种后先在27℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照15小时，光照强度为4500lx，培养温度为27℃的条件下培养28天即可生根，生根率为90.46%。所述的的生根培养基为1/2MS+2.5mg/L NAA+1.2mg/L ABT₁+28g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.8。

（2）炼苗移栽：根长至1～2cm试管苗的培养瓶瓶盖打开在室外于自然光照下炼苗2天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入微酸性的由腐殖土:椰糠:稻谷＝3：1:1组成的基质中并定植于大田中，移栽1个月内保持空气湿度80%以上，移栽成活率为98.5%。

（3）多倍体诱导：将步骤（2）精心管理待其正常生长50天后，选择茎尖生长旺盛的幼苗作为活体诱导材料。在幼苗生长旺盛的时段，用脱脂棉包裹其新芽,然后用0.1%秋水仙素进行滴定处理48h。为防止其蒸发,用透明小拱棚遮盖幼苗,正常光照,并每隔3h滴定一次,保持脱脂棉湿润。处理后除去脱脂棉,揭开小拱棚,用清水冲洗幼苗10次,洗掉残余药液,在正常条件下进行田间管理，幼苗成活率为83.61%。

（4）芽体生根：将步骤（3）处理的芽长到3～5cm的枝条进行形态鉴定，并取茎尖旁幼叶用去壁低渗-火焰干燥法对其进行染色体计数。同时剪取其枝条,扦插于微酸性基质中，扦插1个月内保持空气湿度90%以上，芽体开始生根，生出新芽后，取新芽旁边的幼叶进行染色体计数,统计变异率及多倍体比例，芽体变异率为26.49%，四倍体植株率为12.67%。

Claims

1.一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）组培苗的生根：取高3～5cm高，生长健壮的南高丛越橘组培苗接种到生根培养基中进行诱导生根,接种后先在25～28℃条件下全暗培养10～20天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；

（2）炼苗移栽：根长至1～2cm试管苗的培养瓶瓶盖打开在室外于自然光照下炼苗2～4天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入微酸性基质中并定植于大田中，移栽1个月内保持空气湿度80%以上；

（3）多倍体诱导：将步骤（2）精心管理待其正常生长45～60天后，选择茎尖生长旺盛的幼苗作为活体诱导材料,在幼苗生长旺盛的时段，用脱脂棉包裹其新芽,然后用不同浓度的诱变剂对其进行滴定处理12～48h,为防止其蒸发,用透明小拱棚遮盖幼苗,正常光照,并每隔3～6h滴定一次,保持脱脂棉湿润,处理后除去脱脂棉,揭开小拱棚,用清水冲洗幼苗5～10次,洗掉残余药液,在正常条件下进行田间管理；

（4）芽体生根：将步骤（3）处理的芽长到3～5cm的枝条进行形态鉴定，并取茎尖旁幼叶用去壁低渗-火焰干燥法对其进行染色体计数,同时剪取其枝条,扦插于微酸性基质中，扦插1个月内保持空气湿度90%以上，芽体开始生根，生出新芽后，取新芽旁边的幼叶进行染色体计数,统计变异率及多倍体比例。

2. 根据权利要求1所述的一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于步骤（1）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～3.0mg/L NAA+1.0～2.0mg/L ABT₁+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

3. 根据权利要求1所述的一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于步骤（1）、（4）所述的微酸性基质指的是由腐殖土:椰糠:稻谷＝3：1:1组成的、pH为5.4～5.8的基质。

4.根据权利要求1所述的一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于步骤（4）所述的诱变剂是指浓度为0.1%～0.4%的秋水仙素溶液。