CN104067943A - 蝴蝶兰无菌根扩繁的方法 - Google Patents

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本发明为一种蝴蝶兰无菌根扩繁的方法，属于植物栽培领域种苗技术，具体的讲是一种红色花蝴蝶兰无菌根诱导丛生芽增殖培养成苗方法。本发明选取优良无病虫害蝴蝶兰品种的植株，从健壮母株上切取长度为2cm的花梗腋芽茎段为外植体材料，经过一个月的初代诱导培养，待腋芽生长切下腋芽进行40天的生根培养，将根从腋芽处切下，接种至诱导丛生芽培养基中，20天后从切口处长出许多芽点，继续培养长出大量的芽丛，待芽丛长大后即可切下芽丛进行生根培养，则无菌根继续培养可再次得到大量丛生芽。本发明的优点是，所述的无菌根诱导丛生芽增殖获得大量丛生芽进而对蝴蝶兰进行扩繁，实现蝴蝶兰的工业化生产，通过该本发明方法极大提高繁育系数，缩短了繁育的周期，成活率可达90%以上。

Description

蝴蝶兰无菌根扩繁的方法
技术领域
   本发明属于植物栽培领域种苗技术，具体的讲是一种红色花蝴蝶兰无菌根诱导丛生芽增殖培养成苗方法。
背景技术
红花蝴蝶兰又称蝶兰，属热带气生兰，兰科蝴蝶兰属多年生草本植物。原产地在阿萨姆、缅甸、菲律宾、台湾等亚洲热带地区，其繁殖慢，生长周期长，株型美观、花大色艳、花形别致、花期持久,深受各国人民的喜爱，是具有商业价值的四大观赏热带兰之一。全世界原生种约有70多种，经杂交选育的品种有530多个，但原生种的观赏性较差，商业上用于大规模生产的品种多为杂交种。蝴蝶兰的学名按希腊文的原意为“好像蝴蝶般的兰花”。它能吸收空气中的养分而生存，归入气生兰范畴，每棵只长出数张活象汤匙般肥厚的阔叶，交互叠列在基部之上。白色粗大的气根则露在叶片周围，有的攀附在花盆的外壁，极富天然野趣。到了新春时节，一枝长达盈尺的花梗就从叶腋抽出，然后一朵接一朵地开放。每花均有5瓣，中间嵌镶唇瓣。其性喜高温、高湿、半阴环境，生长适温为20 ℃，冬季10℃以下就会停止生长，低于5℃容易死亡。在岭南各地如要进行批量生产，必须要有防寒设施，实行保护性栽培。如果家庭小量种植，在遇冷时立即移入室内便可以安全过冬。对它的繁殖大多采用细胞组织培养，经试管育成幼苗移栽，大约经过两年左右便可开花。有些母株当花期结束后，有时花梗上的腋芽也会生长发育成为子株，当它长出根时可从花梗上切下进行分株繁殖。其盆栽的植料不一宜用泥土，而要采用水苔、浮石、秒锣屑、木炭碎等，或者直接把幼苗固定在渺楞板上，让它自行附着生长。这种栽培方法乃系仿照它在原始时的生态环境。
发明内容
    本发明目的在于提供一种蝴蝶兰无菌根扩繁的方法，采用无菌根诱导丛生芽增殖获得大量丛生芽进而对蝴蝶兰进行扩繁。
本发明目的实现由以下技术方案实现：
本发明包括以下技术步骤：
（1）选取无病虫害的蝴蝶兰植株，切取带腋芽的2-3cm的花梗茎段为外植体材料；将芽点外层的苞叶用镊子剔除，加入2滴吐温20在自来水下冲洗半个小时，转移至超净工作台内用75%的酒精消毒30s，用无菌水处理2次，加入2%NaClO溶液处理5～6min后用无菌水冲洗4～5遍，用消毒滤纸吸干表面水分；切去花梗上下两端与消毒液接触的表面，接种至初梗代培养基中培养，花梗初代培养为:1/2MS +5mg/L6-BA +0.5mg/L NAA +30g/L 蔗糖 +6g/L琼脂 +400mg/L柠檬酸 +40g/L香蕉泥，pH值为5.4； 
（2）待花梗腋芽叶片伸展至2cm，在无菌操作台上切下腋芽接种到生根培养基上进行生根培养，生根培养基为：1/2MS +0.5mg/L +NAA +30g/L蔗糖 +6g/L 琼脂 +1g/L 活性炭+40g/L香蕉泥，pH值为5.4；
（3）当有2～3条根，长到2～3cm时，切下腋芽的根接种到诱导丛生芽培养基上培养，20天后从切口处长出芽点，继续进行继代培养得到大量的丛生芽，无菌根诱导丛生芽培养基为：1/2MS +10mg/L、 6-BA +0.5mg/L、NAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L 琼脂 +400mg/L 柠檬酸 +40g/L香蕉泥，pH值为5.4，培养条件为：培养温度为25±2℃，光照时间12h/d,光照强度2000～3000lux；
   （4）将上述诱导培养生长良好的丛生芽，从无菌根上切下接种到生根培养基中，再次将无菌根接种到诱导丛生芽培养基上继代培养，可再次得到大量的丛生芽丛，分别接种在芽增殖培养基中继代培养；由于褐化对外植体的影响，20天继代一次，增殖倍数为10株以上，试管苗出瓶种植生长性状稳定；
   （5）诱导生根成苗：当丛生芽长至2cm高时，将芽分割成单株，转移到生根培养基中如步骤2；
   （6）小苗移栽：当试管苗长至3～4cm高，有2～3条根，3～4片叶片，长度2～3cm时，可进行炼苗，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开瓶盖上的封口膜先进行炼苗2天，期间用喷壶喷洒叶片保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，对根用0.1%高锰酸钾侵泡5min后取出晒干，用干净的水苔包裹根部种植于穴盘中，保持空气湿度在80%以上，放置在阴凉通风处，光线由前期弱到强。
本发明的优点是，采用本发明所述的无菌根诱导丛生芽增殖获得大量丛生芽进而对蝴蝶兰进行扩繁，实现蝴蝶兰的工业化生产，通过该本发明方法极大提高繁育系数，缩短了繁育的周期，成活率可达90%以上。
具体实施方式
本发明包括以下技术步骤：
（1）选取无病虫害的红花蝴蝶兰品种的植株，切取带腋芽的2-3cm的花梗茎段为外植体材料；将芽点外层的苞叶用镊子剔除，加入2滴吐温20在自来水下冲洗半个小时，转移至超净工作台内以质量浓度为75%的酒精消毒摇荡30s．后倒出酒精，用无菌水处理2次，加入质量分数为2%NaclO溶液处理5～6min，将NacloO倒出用无菌水冲洗4～5遍后，用消毒滤纸吸干表面水分；切去花梗上下两端与消毒液接触的表面，接种至初代培养基中培养。花梗初代培养为:1/2MS +5mg/L 6-BA +0.5mg/L NAA +30g/L、蔗糖 +6 g/L琼脂 +400mg/L、柠檬酸 +40g/L香蕉泥， pH值为5.4。 
（2）待花梗腋芽叶片伸展至2cm，在无菌操作台上切下腋芽接种到生根培养基上。腋芽诱导生根培养基为：1/2MS +0.5mg/L +NAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L 琼脂 +1g/L 活性炭+40g/L香蕉泥  pH值为5.4；
（3）当腋芽有2～3条根长约2～3cm时，切下腋芽的根接种到诱导丛生芽培养基上培养。20天后从切口处长出芽点，继续进行继代培养得到大量的丛生芽。无菌根诱导丛生芽培养基为：1/2MS +10mg/L 6-BA +0.5mg/LNAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L 琼脂 +400mg/L 柠檬酸 +40g/L香蕉泥  pH值为5.4。培养条件为：培养温度为25±2℃，光照时间12h/d,光照强度2000～3000lux；
   (4) 将上述诱导培养生长良好的丛生芽，从无菌根上切下接种到生根培养基中，再次将无菌根接种到诱导丛生芽培养基上继代培养，可再次得到大量的丛生芽丛，分别接种在芽增殖培养基中继代培养；由于褐化对外植体的影响，20天继代一次，增殖倍数为10株以上，试管苗出瓶种植生长性状稳定。
(5)诱导生根成苗：当丛生芽长至2cm高时，将芽分割成单株，转移到生根培养基中如步骤2；
(6)小苗移栽：当试管苗长至3～4cm高，有2～3条根，3～4片叶片，长度2～3cm时，可进行炼苗，将试管苗放在自然光下炼苗5天，打开瓶盖上的封口膜先进行炼苗2天，期间用喷壶喷洒叶片保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，对根用0.1%高锰酸钾侵泡5min后取出晒干，用干净的水苔包裹根部种植于穴盘中，保持空气湿度在80%以上，放置在阴凉通风处，光线由前期弱到强。
虽然以上对本发明目的的构思和实施例作了详尽说明，但本领域普通技术人员可以认识到，在没有脱离权利要求限定范围的前提条件下，仍然可以对本发明作出各种改进和变换，而这种改进和变换仍然应当属于本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种蝴蝶兰无菌根扩繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：
   （1）选取根系较多的蝴蝶兰无菌植株，切取无菌根为外植体材料，接种到诱导丛生芽培养基上培养，15～25d后切口处长出芽点，把带芽点的根用原培养基继续进行继代培养得到大量的丛生芽，无菌根诱导丛生芽培养基为：1/2MS或MS+5～10mg/L的6-BA+0.5～1.5mg/L的NAA+0.5～1.5mg/L的KT +25～30g/L的蔗糖+5～6.5g/L的琼脂+350～450mg/L的柠檬酸或/和维生素C或/和pvp或/和活性炭+40g/L的香蕉泥或/和马铃薯汁或/和椰子汁，pH值为5.4～5.9，培养条件为：温度为25±2℃，开始5～8d暗培养，后光照时间12～14h/d,光照强度2000～3000lux；
（2）将上述诱导培养生长良好的丛生芽，从无菌根上切下接种到生根培养基中得到再生植株，生根培养基：1/2MS+0.5～1.5mg/L的NAA+25～30g/L的蔗糖+5～6.5g/L的琼脂+30～40g/L的香蕉泥+1～3g/L的活性炭，pH值为5.85～5.90，培养条件为：光照强度为2000～3000lux、光照时间为12～14h/d，培养温度为25±2℃，湿度60～80%；
（3）再生植株炼苗及移栽：当试管苗长至3～4cm高，诱导出2～3条根，3～4片叶片，长度2～3cm时，进行炼苗，将试管苗带试管放在自然光下炼苗5d～6d，后取掉瓶口上的封口膜进行炼苗2d～3d，期间在叶片上喷洒水，然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，把根部用0.1%高锰酸钾浸泡4～6min后取出用滤纸吸干或自然干燥，用灭菌的水苔包裹根部种植于穴盘中，保持空气湿度在80%以上。
2. 根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的无菌根诱导丛生芽培养基为：1/2MS+5～10mg/L的6-BA+0.5～1.5mg/L的NAA+0.5～1.5mg/L的KT +25～30g/L的蔗糖+5～6.5g/L的琼脂+350～450mg/L的柠檬酸 +40g/L的香蕉泥，，pH值为5.80。
3.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法，其特征在于，步骤（2）所述的生根培养基：1/2MS+1mg/L的NAA+25～30g/L的蔗糖+5～6.5g/L的琼脂+40g/L的香蕉泥+2g/L的活性炭，pH值为5.90。
4.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的无菌根诱导丛生芽培养基为：1/2MS+10mg/L的6-BA+1.5mg/L的NAA+0.5mg/L的KT +30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+400mg/L的柠檬酸 +40g/L的香蕉泥，pH值为5.80。
5.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法，其特征在于，步骤（2）所述的生根培养基：1/2MS+1mg/L的NAA+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+40g/L的香蕉泥+2g/L的活性炭，pH值为5.90。
6.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的培养条件为：温度为25±2℃，开始7d暗培养，后光照时间12/d,光照强度2000～3000lux。
7.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌根扩繁的方法，其特征在于，步骤（2）所述的培养条件为：光照强度为2000～3000lux、光照时间为12h/d，培养温度为25±2℃，湿度80%。
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