CN104082148B - 蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法 - Google Patents

蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法 Download PDF

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Abstract

本发明为一种蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，涉及种苗培养技术领域，主要涉蝴蝶兰植株快速繁殖技术，具体涉及一种蝴蝶兰品种的植株再生方法。本发明是从健壮的蝴蝶兰母株上切取一定长度的花梗腋芽茎段为外植体材料，无菌花梗经过初代培养，腋芽张开且叶片翠绿有光泽，切下腋芽后对花梗在继代培养基上培养，之后从花梗腋芽切口处不断长出芽点逐渐形成腋芽，待腋芽张开继续切下，再次将花梗接种在继代培养基上培养，这样培养可以在一株花梗上获得大量的丛生芽，得到的丛生芽可以一部分以芽繁芽的方法继续继代培养。本发明的优点是后代可保持母系稳定的遗传性状，便于花期控制和产业化统一管理，成活率可达90%。

Description

蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法
技术领域
本发明涉及种苗培养技术领域，主要涉蝴蝶兰植株快速繁殖技术，具体涉及一种蝴蝶兰品种的植株再生方法。
背景技术
蝴蝶兰又称蝶兰，属热带气生兰，兰科蝴蝶兰属多年生草本植物。原产地在阿萨姆、缅甸、菲律宾、台湾等亚洲热带地区，其繁殖慢，生长周期长，株型美观、花大色艳、花形别致、花期持久,深受各国人民的喜爱，是具有商业价值的四大观赏热带兰之一。全世界原生种约有70多种，经杂交选育的品种有530多个，但原生种的观赏性较差，商业上用于大规模生产的品种多为杂交种。蝴蝶兰的学名按希腊文的原意为“好像蝴蝶般的兰花”。它能吸收空气中的养分而生存，归入气生兰范畴，每棵只长出数张活象汤匙般肥厚的阔叶，交互叠列在基部之上。白色粗大的气根则露在叶片周围，有的攀附在花盆的外壁，极富天然野趣。到了新春时节，一枝长达盈尺的花梗就从叶腋抽出，然后一朵接一朵地开放。每花均有5瓣，中间嵌镶唇瓣。其性喜高温、高湿、半阴环境，生长适温为20 ℃，冬季10℃以下就会停止生长，低于5℃容易死亡。在岭南各地如要进行批量生产，必须要有防寒设施，实行保护性栽培。如果家庭小量种植，在遇冷时立即移入室内便可以安全过冬。对它的繁殖大多采用细胞组织培养，经试管育成幼苗移栽，大约经过两年左右便可开花。有些母株当花期结束后，有时花梗上的腋芽也会生长发育成为子株，当它长出根时可从花梗上切下进行分株繁殖。其盆栽的植料不一宜用泥土，而要采用水苔、浮石、秒锣屑、木炭碎等，或者直接把幼苗固定在渺楞板上，让它自行附着生长。这种栽培方法乃系仿照它在原始时的生态环境。
发明内容
本发明目的是根据以上所述现有技术的不足之处，本发明提供一种蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁方法，通过该方法极大提高繁殖速度，可实现蝴蝶兰的产业化生产。
本发明目的实现由以下技术方案实现：
本发明的生产步骤如下：
（1）将带有侧芽的无病虫害的蝴蝶兰花梗剪成2～3cm的节段，将芽点外层的苞叶用镊子等工具剔除，加入4～6ml吐温20充分搅拌后在自来水下冲洗30min以上，转移至超净工作台内用70%～75%的酒精消毒30s左右，再用无菌水处理2～3次，加入2%NaClO溶液处理5～6min后用无菌水冲洗4～5次，用消毒滤纸吸干表面水分，切去花梗上下两端与消毒液接触的表面，接种至初代培养基中培养，初代培养基为: 1/2MS或/和MS +2.0～5.5mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+5～6.5g/L琼脂+350～450mg/L柠檬酸或/和维生素C或/和pvp或/和活性炭+30～40g/L香蕉泥或/和马铃薯汁或/和椰子汁，pH值为5.4～5.9，培养条件为：温度25±2℃，培养初期的7～10d进行暗培养，以后光照时间为11～13h/d,光照强度2000～3000lux；
（2）将被切腋芽花梗接种到继代培养基继代培养，继代培养基为: 1/2MS或/和MS+2.0～5.5mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+5～6.5g/L琼脂+350～450mg/L柠檬酸+30～40g/L香蕉泥，pH值为5.4～5.9；培养条件为：温度25±2℃，光照时间11～13h/d,光照强度2000～3000lux；
（3）当丛生芽被诱导长至2cm左右高时，将芽切割分开成单枝，转移到生根培养基中培养，生根培养基为：1/2MS+0.5～1.5mg/L NAA +25～30g/L 蔗糖 +6 g/L琼脂 +1～3g/L 活性炭或/和柠檬酸或/和维生素C或/和pvp +40g/L香蕉泥或/和马铃薯汁或/和椰子汁；培养条件为：温度25±2℃，光照时间11～13h/d，光照强度2000～3000lux；
（4）试管苗炼苗及移栽：当诱导出根系的培养苗长至3～4cm高，有2～3条根，3～4片叶片，叶长度2～3cm时，就可进行炼苗，将培育苗取出培养箱，带瓶培养苗在苗木培养室自然光下初炼苗放置4～6d，后在培养室自然光下打开培养瓶盖炼苗2～4d，期间用喷壶喷洒蒸馏水至叶片，保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，对根用0.1%高锰酸钾浸泡3～5min后取出用滤纸吸干或自然干燥，用灭菌的水苔包裹根部种植于穴盘中，保持空气湿度在80%以上；
所述的步骤（1）中的初代培养基为：1/2MS +5.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+20g/L蔗糖+6 /L琼脂+400mg/L柠檬酸+40g/L香蕉泥，pH值为5.8；所述的步骤（3）中的生根培养基进一步优化为：1/2MS+1.0mg/L NAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L琼脂 +2g/L 活性炭+40g/L香蕉泥，pH值为5.8；所述的步骤（1）的培养条件进一步优化为：温度25±2℃，光照时间12h/d,光照强度2000～3000lux，pH值为5.8；所述的步骤（3）中的生根培养条件进一步优化为：温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000～3000lux，所述的香蕉泥是把新鲜香蕉用榨汁机打碎。
本发明的优点是由于提出的外植体选取的是花梗，后代可保持母系稳定的遗传性状，特别是在不同阶段采用特别优选的培养基，成活率（诱导率）可达90%，本发明便于花期控制和产业化统一管理，为降低企业生产成本（降低）和提供品质优良产品，能站稳市场一定销售量并带来巨大的经济效益。
具体实施方式
本实施例技术方案如下
实施例1：
（1）将带有侧芽的无病虫害的蝴蝶兰花梗剪成2～3cm的节段，将芽点外层的苞叶用镊子等工具剔除，加入4～6ml吐温20充分搅拌后在自来水下冲洗30min以上，转移至超净工作台内用70%～75%的酒精消毒30s，再用无菌水处理2～3次，加入2%NaClO溶液处理5～6min后用无菌水冲洗4～5次，用消毒滤纸吸干表面水分，切去花梗上下两端与消毒液接触的表面，接种至初代培养基中培养，所述的初代培养基为：所述的步骤（1）中的初代培养基为：1/2MS +5.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+20g/L蔗糖+6 /L琼脂+400mg/L柠檬酸+40g/L香蕉泥，pH值为5.8，培养条件为：温度25±2℃，培养初期的7～10d进行暗培养，以后光照时间为11～13h/d,光照强度2000～3000lux；
（2）将被切腋芽花梗接种到继代培养基继代培养，所述的继代培养基为: 1/2MS +2.0～5.5mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+5～6.5g/L琼脂+350～450mg/L维生素C+30～40g/L香蕉泥，pH值为5.4～5.9；培养条件为：温度25±2℃，光照时间11～13h/d,光照强度2000～3000lux；
（3）当丛生芽被诱导长至2cm左右高时，将芽切割分开成单枝，转移到生根培养基中培养，所述的步骤（3）中的生根培养基为：1/2MS+0.5～1.5mg/L NAA +25～30g/L 蔗糖 +6 g/L琼脂 +1～3g/L 活性炭或/和柠檬酸或/和维生素C或/和pvp +40g/L香蕉泥或/和马铃薯汁或/和椰子汁；培养条件为：温度25±2℃，光照时间11～13h/d，光照强度2000～3000lux；
（4）试管苗炼苗及移栽：当诱导出根系的培养苗长至3～4cm高，有2～3条根，3～4片叶片，叶长度2～3cm时，就可进行炼苗，将培育苗取出培养箱，带瓶培养苗在苗木培养室自然光下初炼苗放置4～6d，后在培养室自然光下打开培养瓶盖炼苗2～4d，期间用喷壶喷洒蒸馏水至叶片，保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，对根用0.1%高锰酸钾浸泡3～5min后取出用滤纸吸干或自然干燥，用灭菌的水苔包裹根部种植于穴盘中，保持空气湿度在80%以上。
实施例2
与实施例1的区别是：
所述的步骤（1）中的初代培养基为：1MS +5.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+20g/L蔗糖+6/L琼脂+400mg/L维生素C+40g/L马铃薯汁，pH值为5.8。
实施例3
与实施例1的区别是：
所述的步骤（1）中的初代培养基为：1/2MS +3mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+25～30g/L蔗糖6.5g/L琼脂+350mg/L柠檬酸+35g/L香蕉泥；所述的步骤（2）中的继代培养基为: 1/2MS +5mg/L6-BA+0.4mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂+400mg/L活性炭+35g/L椰子汁；所述的步骤（3）中的生根培养基为：1/2MS+1.5mg/L NAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L琼脂 +3g/L 活性炭+40g/L香蕉泥；pH值为5.6。
实施例4
与实施例1的区别是：
所述的步骤（1）的培养条件进一步优化为：温度25±2℃，光照时间12h/d,光照强度2000～3000lux；所述的步骤（3）中的生根培养条件进一步优化为：温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000～3000lux。
为了减轻培养过程中褐化现象而本发明还可以加入抗褐化物如：如柠檬酸、pvp、维生素c或者活性炭。
虽然以上对本发明目的的构思和实施例作了详尽说明，但本领域普通技术人员可以认识到，在没有脱离权利要求限定范围的前提条件下，仍然可以对本发明作出各种改进和变换，而这种改进和变换仍然应当属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将带有侧芽的无病虫害的蝴蝶兰花梗剪成2～3cm的节段，将芽点外层的苞叶用镊子剔除，加入4～6ml吐温20充分搅拌后在自来水下冲洗30min以上，转移至超净工作台内用70%～75%的酒精消毒30s左右，再用无菌水处理2～3次，加入2%NaClO溶液处理5～6min后用无菌水冲洗4～5次，用消毒滤纸吸干表面水分，切去花梗上下两端与消毒液接触的表面，接种至初代培养基中培养，初代培养基为: 1/2MS或/和MS +2.0～5.5mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+5～6.5g/L琼脂+350～450mg/L柠檬酸或/和维生素C或/和pvp或/和活性炭+30～40g/L香蕉泥或/和马铃薯汁或/和椰子汁，pH值为5.4～5.9，培养条件为：温度25±2℃，培养初期的7～10d进行暗培养，以后光照时间为11～13h/d,光照强度2000～3000lux；
（2）将被切腋芽花梗接种到继代培养基继代培养，继代培养基为: 1/2MS或/和MS +2.0～5.5mg/L6-BA+0.2～0.5mg/LNAA+25～30g/L蔗糖+5～6.5g/L琼脂+350～450mg/L柠檬酸+30～40g/L香蕉泥，pH值为5.4～5.9；培养条件为：温度25±2℃，光照时间11～13h/d,光照强度2000～3000lux；
（3）当丛生芽被诱导长至2cm左右高时，将芽切割分开成单枝，转移到生根培养基中培养，生根培养基为：1/2MS或/和MS+0.5～1.5mg/L NAA +25～30g/L 蔗糖 +6 g/L琼脂 +1～3g/L 活性炭或/和柠檬酸或/和维生素C或/和pvp +40g/L香蕉泥或/和马铃薯汁或/和椰子汁；培养条件为：温度25±2℃，光照时间11～13h/d，光照强度2000～3000lux；
（4）试管苗炼苗及移栽：当诱导出根系的培养苗长至3～4cm高，有2～3条根，3～4片叶片，叶长度2～3cm时，就可进行炼苗，将培育苗取出培养箱，带瓶培养苗在苗木培养室自然光下初炼苗放置4～6d，后在培养室自然光下打开培养瓶盖炼苗2～4d，期间用喷壶喷洒蒸馏水至叶片，保证叶片不失水以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出小苗，洗净根部培养基，对根用0.1%高锰酸钾浸泡3～5min后取出用滤纸吸干或自然干燥，用灭菌的水苔包裹根部种植于穴盘中，保持空气湿度在80%以上。
2.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，所述的步骤（1）中的初代培养基为：1/2MS +5.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+20g/L蔗糖+6 /L琼脂+400mg/L柠檬酸+40g/L香蕉泥，pH值为5.8。
3.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，所述的步骤（3）中的生根培养基进一步优化为：1/2MS+1.0mg/L NAA +30g/L 蔗糖 +6 g/L琼脂 +2g/L活性炭+40g/L香蕉泥，pH值为5.8。
4.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，所述的步骤（1）的培养条件进一步优化为：温度25±2℃，光照时间12h/d,光照强度2000～3000lux。
5.根据权利要求1所述的蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，所述的步骤（3）中的生根培养条件进一步优化为：温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000～3000lux。
6.根据权利要求2、3所述的蝴蝶兰无菌花梗再生扩繁的方法，其特征在于，所述的香蕉泥是把新鲜香蕉用榨汁机打碎。
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