CN104686353A - 一种蓝雪花组织培养技术 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蓝雪花组织培养技术，蓝雪花（Plumbago auriculata）结实率低,种子价格较为昂贵,扩繁系数低、造成目前传统繁殖方式己无法满足蓝雪花的应用需求,而本发明可以克服传统繁殖方法的不足之处,在相对短的时间内可大量生产蓝雪花优良品种。本发明以蓝雪花细嫩枝条为外植体，经过外植体处理、单芽诱导、丛生芽增殖、生根、炼苗及移栽等过程建立了蓝雪花离体再生体系，大大提高蓝雪花增殖率,对实现蓝雪花组织培养工厂化生产提供技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种蓝雪花组织培养技术。
背景技术
蓝雪花（Plumbago auriculata）又名蓝花丹、蓝花矶松、蓝茉莉、蓝雪丹，为白花丹科白花丹属多年生常绿灌木。原产南非,目前在世界热带、亚热带均有栽培,是一种观赏价值与药用价值俱佳的新型花卉。蓝雪花管理粗放,病虫害少,耐高温、高湿,长势健壮,观赏期长。其叶色翠绿,花色淡雅,炎炎夏日给人清凉之感,可盆栽点缀居室、阳台。成年植株冠幅较大,耐修剪,适合与其他观赏植物进行组合造景,用于城市建筑物、道路、立交桥绿化,也可以种植于林缘、草坪。蓝雪花全株富含白花丹素，对风湿关节疼痛、血瘀经闭、跌打损伤、肿毒恶疮以及疥癣具有较好的治疗作用。
蓝雪花是一种集观赏价值与药用价值于一体的新型花卉,具有优良的市场应用潜力。但是受限于材料的缺乏,目前人们对蓝雪花的了解和应用还非常有限。目前蓝雪花主要通过播种、扦插等繁殖方式进行种苗繁育，存在繁殖系数低、周期长、成本高等缺点。植物的组织培养技术是自20世纪以来科技进步的主要成果之一。组织培养技术既不会受到地理位置的限制、也不会受到季节的限制，它仅需要足够的实验材料，繁殖就可以进行，且遗传背景一致、生长周期短、成本低。目前关于蓝雪花植物组织培养方面的研究还没有任何报道，而本发明通过单芽诱导与增殖、再生幼苗诱导生根等关键技术环节，大大提高蓝雪花增殖率,对实现蓝雪花组织培养工厂化生产提供技术支持。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种蓝雪花组织培养技术，本发明以蓝雪花细嫩枝条为外植体，经过外植体处理、单芽诱导、丛生芽增殖、生根、炼苗及移栽等过程建立了蓝雪花离体再生体系，大大提高蓝雪花增殖率，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种蓝雪花组织培养技术，包括以下的步骤：
（1）外植体消毒：剪取长势良好无病虫害的幼嫩枝条,用洗衣粉溶液浸泡处理40～90min后流水冲洗1～3h，于超净工作台中用75%乙醇消毒30～60s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次后用无菌滤纸吸去水分备用。
（2）单芽诱导：将步骤（1）处理后的外植体切成1.0cm长左右的茎段,其中以茎节为界,上半部分保留0.3cm，下半部分保留0.7cm，每个茎段保留一个茎节。将茎段接种到诱导培养基中进行单芽诱导，接种后先在25～28℃条件下全暗培养5～10天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为1500～3000lx条件下培养直至形成单芽。
（3）丛生芽培养及增殖：将步骤（2）培养得到的单芽长至2～3cm高时，切下单芽并转入丛生芽培养基上进行丛生芽培养及增殖，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成丛生芽。
（4）生根培养：将步骤（3）的丛生芽长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。
（5）炼苗移栽：将高约6～7cm的生根试管苗的培养瓶盖半开炼苗3～5天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5～7天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。
上述步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+1.0～4.0mg/L6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（3）所述的丛生芽培养基为：MS+1.0～3.0mg/L6-BA+0.1～1.0mg/LNAA+0.5～1.0mg/LIAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
上述步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.5～1.5mg/LNAA +15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
本发明的优点是：蓝雪花（Plumbago auriculata）结实率低,种子价格较为昂贵,扩繁系数低、造成目前传统繁殖方式己无法满足蓝雪花的应用需求,而本发明可以克服传统繁殖方法的不足之处,在相对短的时间内可大量生产蓝雪花优良品种。本发明以蓝雪花细嫩枝条为外植体，经过外植体处理、单芽诱导、丛生芽增殖、生根、炼苗及移栽等过程建立了蓝雪花离体再生体系，大大提高蓝雪花增殖率,对实现蓝雪花组织培养工厂化生产提供技术支持。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1：
（1）外植体消毒：剪取长势良好无病虫害的幼嫩枝条,用洗衣粉溶液浸泡处理50min后流水冲洗1h，于超净工作台中用75%乙醇消毒30s后用无菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒10min，用无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸去水分备用。
（2）单芽诱导：将步骤（1）处理后的外植体切成1.0cm长左右的茎段,其中以茎节为界,上半部分保留0.3cm，下半部分保留0.7cm，每个茎段保留一个茎节。将茎段接种到诱导培养基中进行单芽诱导，接种后先在25℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照12小时，光照强度为1500lx条件下培养26天即可形成单芽，诱导率为81.9%。所述的诱导培养基为：MS+2.0mg/L6-BA+25g/L蔗糖+3.9g/L琼脂，pH为5.6。
（3）丛生芽培养及增殖：将步骤（2）培养得到的单芽长至2～3cm高时，切下单芽并转入丛生芽培养基上进行丛生芽培养及增殖，接种后先在25℃条件下全暗培养2天，然后置于每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为25℃的条件下培养30天即可形成丛生芽，增殖系数为4.8。所述的丛生芽培养基为：MS+1.5mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+0.5mg/LIAA+18g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.6。
（4）生根培养：将步骤（3）的丛生芽长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照14小时，光照强度为3000lx，培养温度为25℃的条件下培养30天时主根长度长至5cm以上，且主根周围毛细根长势强健，生根率为97.3%。所述的生根培养基为：1/2MS+0.8mg/LNAA +20g/L蔗糖+3.8g/L琼脂，pH为5.6。
（5）炼苗移栽：将高约6～7cm的生根试管苗的培养瓶盖半开炼苗3天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为87.6%。
实施例2：
（1）外植体消毒：剪取长势良好无病虫害的幼嫩枝条,用洗衣粉溶液浸泡处理80min后流水冲洗3h，于超净工作台中用75%乙醇消毒50s后用无菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒12min，用无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸去水分备用。
（2）单芽诱导：将步骤（1）处理后的外植体切成1.0cm长左右的茎段,其中以茎节为界,上半部分保留0.3cm，下半部分保留0.7cm，每个茎段保留一个茎节。将茎段接种到诱导培养基中进行单芽诱导，接种后先在26℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照13小时，光照强度为2000lx条件下培养28天即可形成单芽，诱导率为84.8%。所述的诱导培养基为：MS+4.0mg/L6-BA+28g/L蔗糖+4.3g/L琼脂，pH为5.8。
（3）丛生芽培养及增殖：将步骤（2）培养得到的单芽长至2～3cm高时，切下单芽并转入丛生芽培养基上进行丛生芽培养及增殖，接种后先在28℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照14小时，光照强度为2500lx，置于培养温度为26℃的条件下培养27天即可形成丛生芽，增殖系数为5.01。所述的丛生芽培养基为：MS+1.8mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+1.0mg/LIAA+24g/L蔗糖+3.8g/L琼脂，pH为5.6。
（4）生根培养：将步骤（3）的丛生芽长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养3天，然后置于每天光照15小时，光照强度为3500lx，培养温度为26℃的条件下培养26天时主根长度长至5cm以上，且主根周围毛细根长势强健，生根率为100%。所述的生根培养基为：1/2MS+1.0mg/LNAA +23g/L蔗糖+4.0g/L琼脂，pH为5.6。
（5）炼苗移栽：将高约6～7cm的生根试管苗的培养瓶盖半开炼苗4天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗7天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为90%。
Claims (4)
1.一种蓝雪花组织培养技术，其特征在于包括以下步骤：
（1）外植体消毒：剪取长势良好无病虫害的幼嫩枝条,用洗衣粉溶液浸泡处理40～90min后流水冲洗1～3h，于超净工作台中用75%乙醇消毒30～60s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次后用无菌滤纸吸去水分备用；
（2）单芽诱导：将步骤（1）处理后的外植体切成1.0cm长左右的茎段,其中以茎节为界,上半部分保留0.3cm，下半部分保留0.7cm，每个茎段保留一个茎节，将茎段接种到诱导培养基中进行单芽诱导，接种后先在25～28℃条件下全暗培养5～10天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为1500～3000lx条件下培养直至形成单芽；
（3）丛生芽培养及增殖：将步骤（2）培养得到的单芽长至2～3cm高时，切下单芽并转入丛生芽培养基上进行丛生芽培养及增殖，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为2000～3000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成丛生芽；
（4）生根培养：将步骤（3）的丛生芽长至3～4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；
（5）炼苗移栽：将高约6～7cm的生根试管苗的培养瓶盖半开炼苗3～5天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5～7天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。
2. 根据权利要求1所述的一种蓝雪花组织培养技术，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+1.0～4.0mg/L6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
3. 根据权利要求1所述的一种蓝雪花组织培养技术，其特征在于步骤（3）所述的丛生芽培养基为：MS+1.0～3.0mg/L6-BA+0.1～1.0mg/LNAA+0.5～1.0mg/LIAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
4.根据权利要求1所述的一种蓝雪花组织培养技术，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.5～1.5mg/LNAA +15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。
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