CN1568670A - 高山杜鹃的组织培养快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种高山杜鹃的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，在试管内由培养基培养，培养基由下述原料配制：外植体诱导培养基：1/4MS、MS铁盐、维生素B50.2mg、水解乳蛋白300mg、蔗糖30g+Kt1.0mg/L；丛生芽增殖培养基：1/2MS、Kt0.5mg/L；生根培养基：1/2MS；NAA5mg/L、活性炭0.5％；高山杜鹃的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，采用嫩茎段腋芽培养法及“二步法”的试管苗假植育苗方法。本发明的优点是不受季节影响，生长快，分枝性好，抗逆性强，且花大、花色艳丽纯正。

Description

高山杜鹃的组织培养快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种高山杜鹃的组织培养快速繁殖方法，属于花卉培养技术领域。
背景技术
高山杜鹃(Rhododendron radinum)是杜鹃花科杜鹃花属灌木类高档花卉植物，原产我国中西部地区的高山密林中，后由德国、比利时等国引种栽培驯化，并改良选育出许多优良品种，花色有红、粉、紫、黄、白等多种，艳丽华贵，深受人们喜爱。高山杜鹃通常无种子，主要靠扦插繁殖，而扦插繁殖受母株材料和繁殖季节的影响，往往无法满足市场的需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种繁殖速度快，不受季节影响的高山杜鹃的组织培养快速繁殖方法。
为实现以上目的，本发明的技术方案是提供一种高山杜鹃的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，在试管内由培养基培养，培养基由下述原料配制：
外植体诱导培养基：
              1/4MS
              MS铁盐
              维生素B50.2mg
              水解乳蛋白300mg
              蔗糖30g+Kt1.0mg/L
丛生芽增殖培养基：
              1/2MS
              Kt0.5mg/L
生根培养基：
              1/2MS
              NAA5mg/L
              活性炭0.5％
2.一种高山杜鹃的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，采用嫩茎段腋芽培养法及“二步法”的试管苗假植育苗方法，它包括下列步骤：
一.采用嫩茎段腋芽培养法：
(1)外植体的准备
a.将进口种苗栽种在塑料花盆中养护，成活后剪去枝条顶端部份，以促进分枝生长；
b.当新抽生的分枝长至5-7厘米，叶片刚转绿平展时，剪下枝条，去除叶片，用自来水冲洗15分钟，用洗洁精洗涤二次后吸干；
c.在无菌室超净台上用73-76％酒精消毒1-2分钟；用1∶50新洁尔灭液消毒18-22分钟；再用0.1％氯化汞消毒13-16分钟；
d.用无菌蒸馏水冲洗数遍后吸干。
(2)无菌培养系的建立与增殖
a.在超净台上剥取茎尖，长度0.5-1.0mm，余下的枝条，切成1cm长的茎段，每段带1-3个腋芽节，浅插于培养基中，外植体诱导初始无菌芽的培养基为1/4MS、MS铁盐、维生素B50.2mg、水解乳蛋白300mg、蔗糖30g、Kt1.0mg/L；培养基中琼脂为6-8g/L，PH5.8；培养室温度为22℃-24℃，光照12h/d，光照强度为2000LX。
b.丛生芽增殖培养基为1/2MS+Kt0.5mg/L，增殖阶段的培养物每30天增殖培养一次。
(3)试管苗的生根培养
a.在培养瓶中加入半瓶1/2MS、NAA5mg、活性炭0.5％/L生根培养基作20-30天的壮苗培养，培养室温度为22℃-24℃，光照12h/d，光照强度为2000LX。
二.“二步法”的育苗方法：
(4)试管苗假植炼苗与穴盘苗的培育
a.在培养瓶中加入半瓶50％珍珠岩+50％泥炭混和成的基质，经高温120-125℃、高压1.1大气压下消毒并自然冷却，轻轻取出试管苗，洗净基部培养基，然后将幼苗切口处在生根粉中蘸一下，再接种至培养瓶中培养，即瓶内微型扦插培养，用尼龙薄膜覆盖密闭，遇晴天强光，用50-75％遮光率的遮阳网遮光；
b.三天后根据气候适当揭开尼龙并继续叶面喷雾逐渐炼苗，一星期后新根长出，不盖尼龙，每天喷雾1-2次，10天后新根新叶均已生长，用0.2硝酸铵+0.2％磷酸二氢钾叶面喷洒补充养份，15天后用0.1％自配营养液追肥，每月二次；
c.幼苗炼苗二个月后，长度3厘米，3对叶片以上时，将苗拔起移至泥炭和珍珠岩比例为2∶1的基质的塑料穴盘中作穴盘苗培育二个月。
在应用组培技术进行观赏植物的快速繁殖中，繁殖系数是决定试管苗生产效益和成本的一个重要因素。在高山杜鹃的组织培养过程中发现，繁殖系数的高低，主要取决于培养基中kt的用量，培养室温度的高低也起一定的调节作用。繁殖系数随kt浓度提高而提高，但kt浓度过高，培养的试管苗细弱、还容易形成玻璃苗。本研究中，为保证高山杜鹃试管苗的质量，当培养获得丛生芽后，以1/2MS+kt0.5mg/L的培养基进行增殖培养获得了较好的效果。
组织培养技术的应用成败很大程度上取决于试管苗移栽的成活率及成活质量。我们在实验中发现，将无根试管苗置于无任何激素的MS0培养基上壮苗培养1个月后再生根，对提高试管苗的质量及生根率具促进作用。在1/2MS+NAA5mg+活性炭0.5％/L的生根培养基上，可达95％以上的高生根率。将试管苗假植炼苗于1∶1的泥炭土+珍珠岩基质中，进行肥水管理2个月后，移栽于2∶1的泥炭土+珍珠岩基质的穴盘容器中培育，可达到苗齐苗壮的目的。这种假植炼苗2步法的育苗技术能够确保种苗的移栽成活率。采用这种方法培育的种苗，上盆移栽存活率可达100％。
本发明的优点是不受季节影响，生长快，分枝性好，抗逆性强，且花大、花色艳丽纯正。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明：
实施例
供繁殖种为高山杜鹃中的粉红系品种，名为：“火箭(Rocket)”，来源于德国布莱梅。
采用嫩茎段腋芽培养法及“二步法”的试管苗假植育苗方法，它包括下列步骤：
一.采用嫩茎段腋芽培养法：
(1)外植体的准备
a.将进口种苗栽种在塑料花盆中养护，成活后剪去枝条顶端部份，以促进分枝生长；
b.当新抽生的分枝长至5-7厘米，叶片刚转绿平展时，剪下枝条，去除叶片，用自来水冲洗15分钟，用洗洁精洗涤二次后吸干；
c.在无菌室超净台上用75％酒精消毒1分钟；用1∶50新洁尔灭液消毒20分钟；再用0.1％氯化汞消毒15分钟；
d.用无菌蒸馏水冲洗数遍后吸干。
(2)无菌培养系的建立与增殖
a.在超净台上剥取茎尖，长度0.5-1.0mm，余下的枝条，切成1cm长的茎段，每段带1-3个腋芽节，浅插于培养基中，外植体诱导初始无菌芽的培养基为1/4MS、MS铁盐、维生素B50.2mg、水解乳蛋白300mg、蔗糖30g、Kt1.0mg/L；培养基中琼脂为7g/L，PH5.8；培养室温度为22℃- 24℃，光照12h/d，光照强度为2000LX。
b.丛生芽增殖培养基为1/2MS+Kt0.5mg/L，增殖阶段的培养物每30天增殖培养一次。
(3)试管苗的生根培养
a.在培养瓶中加入半瓶1/2MS、NAA5mg、活性炭0.5％/L生根培养基作20-30天的壮苗培养，培养室温度为22℃- 24℃，光照12h/d，光照强度为2000LX。
二.“二步法”的育苗方法：
(4)试管苗假植炼苗与穴盘苗的培育
a.在培养瓶中加入半瓶50％珍珠岩+50％泥炭混和成的基质，经高温120125℃、高压1.1大气压下消毒并自然冷却，轻轻取出试管苗，洗净基部培养基，然后将幼苗切口处在生根粉中蘸一下，再接种至培养瓶中培养，即瓶内微型扦插培养，用尼龙薄膜覆盖密闭，遇晴天强光，用50-75％遮光率的遮阳网遮光；
b.三天后根据气候适当揭开尼龙并继续叶面喷雾逐渐炼苗，一星期后新根长出，不盖尼龙，每天喷雾1-2次，10天后新根新叶均已生长，用0.2硝酸铵+0.2％磷酸二氢钾叶面喷洒补充养份，15天后用0.1％自配营养液追肥，每月二次；
c.幼苗炼苗二个月后，长度3厘米，3对叶片以上时，将苗拔起移至泥炭和珍珠岩比例为2∶1的基质的塑料穴盘中作穴盘苗培育二个月。
本发明采用嫩茎段腋芽培养法及“二步法”的试管苗假植育苗方法，“二步法”的育苗方法，经前后4个月左右的培养，最后以穴盘苗的标准苗出圃，其种苗质量标准为：苗高6-8厘米，叶片6-8对，主茎粗0.2-0.3厘米，叶色深绿，叶片肥厚，无病虫害。其中前二个月的假植移栽存活率达98.6％，后二个月的穴盘苗存活率达100％，且十分健壮，这种穴盘苗经2003年3万株的作盆花培育养护的示范推广，证明上盆后种苗存活率达100％，生长快，分枝性好，抗逆性强，能耐夏季室外30℃以上的高温和冬季零下7.0度的低温，不到一年的养护已长至20-30厘米高度，且有少量开花，表现花大、花色艳丽纯正，与母株无差异，充分显示出组培苗良好的遗传稳定性和明显的生长优势。

Claims (2)

1.一种高山杜鹃的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，在试管内由培养基培养，培养基由下述原料配制：
外植体诱导培养基：
              1/4MS
              MS铁盐
              维生素B50.2mg
              水解乳蛋白300mg
              蔗糖30g+Kt1.0mg/L
丛生芽增殖培养基：
              1/2MS
              Kt0.5mg/L
生根培养基：
              1/2MS
              NAA5mg/L
              活性炭0.5％
2.一种高山杜鹃的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，采用嫩茎段腋芽培养法及“二步法”的试管苗假植育苗方法，它包括下列步骤：
一.采用嫩茎段腋芽培养法：
(1)外植体的准备
a.将进口种苗栽种在塑料花盆中养护，成活后剪去枝条顶端部份，以促进分枝生长；
b.当新抽生的分枝长至5-7厘米，叶片刚转绿平展时，剪下枝条，去除叶片，用自来水冲洗15分钟，用洗洁精洗涤二次后吸干；
c.在无菌室超净台上用73-76％酒精消毒1-2分钟；用1∶50新洁尔灭液消毒18-22分钟；再用0.1％氯化汞消毒13-16分钟；
d.用无菌蒸馏水冲洗数遍后吸干。
(2)无菌培养系的建立与增殖
a.在超净台上剥取茎尖，长度0.5-1.0mm，余下的枝条，切成1cm长的茎段，每段带1-3个腋芽节，浅插于培养基中，外植体诱导初始无菌芽的培养基为1/4MS、MS铁盐、维生素B50.2mg、水解乳蛋白300mg、蔗糖30g、Kt1.0mg/L；培养基中琼脂为6-8g/L，PH5.8；培养室温度为22℃-24℃，光照12h/d，光照强度为2000LX。
 b.丛生芽增殖培养基为1/2MS+Kt0.5mg/L，增殖阶段的培养物每30天增殖培养一次。
(3)试管苗的生根培养
 a.在培养瓶中加入半瓶1/2MS、NAA5mg、活性炭0.5％/L生根培养基作20-30天的壮苗培养，培养室温度为22℃-24℃，光照12h/d，光照强度为2000LX。
二.“二步法”的育苗方法：
(4)试管苗假植炼苗与穴盘苗的培育
a.在培养瓶中加入半瓶50％珍珠岩+50％泥炭混和成的基质，经高温120-125℃、高压1.1大气压下消毒并自然冷却，轻轻取出试管苗，洗净基部培养基，然后将幼苗切口处在生根粉中蘸一下，再接种至培养瓶中培养，用尼龙薄膜覆盖密闭，遇晴天强光，用50-75％遮光率的遮阳网遮光；
b.三天后根据气候适当揭开尼龙并继续叶面喷雾逐渐炼苗，一星期后新根长出，不盖尼龙，每天喷雾1-2次，10天后新根新叶均已生长，用0.2硝酸铵+0.2％磷酸二氢钾叶面喷洒补充养份，15天后用0.1％自配营养液追肥，每月二次；
c.幼苗炼苗二个月后，长度3厘米，3对叶片以上时，将苗拔起移至泥炭和珍珠岩比例为2∶1的基质的塑料穴盘中作穴盘苗培育二个月。
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