CN112715366A - 一种岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，属于植物组织培养技术领域。本发明方法包括以下步骤：(1)选取岷江蓝雪花无菌外植体；(2)向基础培养基中添加30g/L洋葱泥、30g/L香蕉块和10g/L马铃薯泥；(3)将步骤(1)的外植体接种到步骤(2)的培养基中进行组织培养。本发明主要以植物组织培养作为技术支撑，选用前期继代快繁方法得到的组培苗，通过添加一定配比组合的洋葱泥、香蕉块和马铃薯泥培养基，满足岷江蓝雪花工厂化快速生根壮苗生产之目的。在本发明方法下，大幅度提高了岷江蓝雪花组培苗的生根率、减少了污染率，且达到较好的壮苗效果，出苗优质，大大缩短了生产周期、降低育苗成本。

Description

一种岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法。
背景技术
岷江蓝雪花(Ceratostigma willmottianum Stapf)为白花丹科(Plumbaginaceae)蓝雪花属(Ceratostigma)多年生落叶半灌木，又名紫金莲，花蓝紫色，花期长，为5-11月，我国本土特产野生种，生于干热河谷的林边或灌丛间。主要分布在云贵川、西藏等地，尤以四川为主要分布区域。因其秀雅的自然界中不多见的蓝紫色小花，是园林造景中不可多得的野生观赏花卉。除用于造景观赏外，因其根部富含白花丹醌等具有镇痛消炎、抗癌、抗病菌功效的活性物质，在我国民间早有用于中草药典，用于老年慢性气管炎等疾病。该植物早在1807年被威尔逊从中国采至英国后，被英国著名执业医生爱德华·贝曲作为“贝曲花精”植物，用于园艺疗法中。岷江蓝雪花是38种贝曲花精植物中唯一一种来源于我国的“花精植物”，作为可调理怀疑、恐惧及胆小负面情绪的康养产品，在世界范围畅销。可见，岷江蓝雪花一种集药用康养和观赏为一体的多功能本土野生植物。
然而作为一种“观赏+药用+康养”复合型本土新秀花卉，岷江蓝雪花因受种苗短缺的影响，至今还未得到应用。因此，工厂化生产优质种苗是扩大其应用推广的基本保障。目前，其繁殖方式主要为种子、和扦插。由于其具有不完全异型自交不亲和(HetSI)特性，自然结实率较低，种子萌发率不高，扦插受枝条木质化程度及季节影响，成活率低，繁殖系数不高，无法满足大规模种苗需求。目前我们利用组织培养技术，成功建立无菌繁殖体系，并获得继代快繁方法的国家发明专利授权(CN 107667865 B)。在组织苗生根培养中，发现外植体茎段基部易褐化致其难以生根，生根速度慢，且生根苗生长较细弱，无法满足生产应用需要。
为适应工厂化种苗生产，需要快速获得生根组培苗，壮苗是保障炼苗成活的关键基础。因此，如何获得一种岷江蓝雪花组培苗快速生根及壮苗的方法，成为本发明解决的技术问题。
发明内容
本发明为解决上述技术问题，提供一种岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法。本发明方法将洋葱和马铃薯榨制成泥状，香蕉切成小块，以一定比例进行组合添加到培养基中，可抑制褐变、促生根、抑菌和壮苗，实现岷江蓝雪花高效快速生根及壮苗，加快工厂化生产，操作简便易行，成本低，对野生种质资源保护及开发，加快城市植物造景应用推广具有重要现实意义。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，其包括以下步骤：
(1)选取岷江蓝雪花无菌外植体；
(2)向基础培养基中添加30g/L洋葱泥、30g/L香蕉块和10g/L马铃薯泥；
(3)将步骤(1)的岷江蓝雪花无菌外植体接种到步骤(2)的培养基中进行组织培养。
进一步的是，步骤(2)中所述基础培养基为MS培养基。
进一步的是，所述MS培养基中含蔗糖30g·L-1，琼脂6g·L-1，pH为5.8。
进一步的是，步骤(3)中所述组织培养的温度为20-28℃，光照强度为1500-2500Lx，光照时间为8-12h/d。
进一步的是，步骤(2)中所述洋葱泥的制作方法为：选用新鲜饱满、外表无病斑且颜色紫红的洋葱，洗净沥干后，切成小块，放进搅拌机中搅碎后，得到洋葱泥。
进一步的是，步骤(2)中所述香蕉块的制作方法为：选用表皮未有黑点、稍带青色的成熟香蕉，去除外皮和蕉络，切成不大于0.5cm×0.5cm的小块。
进一步的是，步骤(2)中所述马铃薯泥的制作方法为：选用外表无黑绿病斑、未长芽的新鲜马铃薯，洗净沥干后，带表皮切成小块，放进搅拌机中搅碎后，得到马铃薯泥。
进一步的是，所述岷江蓝雪花无菌外植体的获得方法采用高效继代快繁方法，其步骤为：
剪取无菌组培苗上半部分幼嫩带芽长约2cm茎段作为外植体，接种到MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1岷江蓝雪花腋芽诱导培养基，MS+6-BA 2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1腋芽增殖培养基，1/2MS+IBA0.5mg·L-1生根培养基。经过腋芽诱导-腋芽增殖-生根培养后获得的8cm高无菌苗，剪成各茎段带一个叶片的外植体。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明提供了一种岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗方法。主要以植物组织培养作为技术支撑，选用高效继代快繁法得到的组培苗外植体，以及添加一定配比组合的洋葱泥、香蕉块和马铃薯泥培养基，进行岷江蓝雪花扩繁生产。在本发明方法下，大幅度提高了其生根率、减少污染率，且达到壮苗效果，出苗优质，大大缩短生产周期、降低成本。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行具体描述，有必要指出的是，以下实施例仅仅用于对本发明进行解释和说明，并不用于限定本发明。本领域技术人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
以下实施例中，洋葱泥的制作方法为：选用新鲜饱满、外表无病斑且颜色紫红的洋葱，洗净沥干后，切成小块，放进搅拌机中搅碎后，得到洋葱泥；
香蕉泥的制作方法为：选用表皮未有黑点、稍带青色的成熟香蕉，去除外皮和蕉络，切成小块，放进搅拌机中搅碎后，得到香蕉泥。
马铃薯泥的制作方法为：选用外表无黑绿病斑、未长芽的新鲜马铃薯，洗净沥干后，带表皮切成小块，放进搅拌机中搅碎后，得到马铃薯泥。
实施例1
一种岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，其包括以下步骤：
(1)选取岷江蓝雪花无菌组培苗继代快繁方法获得的无菌外植体(方法参照申请人团队前期的专利CN 107667865 B)；
(2)向基础培养基(MS培养基)中添加30g/L洋葱泥、30g/L香蕉泥和10g/L马铃薯泥；所述MS培养基中含蔗糖30g·L-1，琼脂6g·L-1，pH为5.8；
(3)将步骤(1)的岷江蓝雪花无菌外植体接种到步骤(2)的培养基中进行组织培养，控制培养温度为20℃，光照强度为1500Lx，光照时间为8h/d，进行组织培养。
实施例2
一种岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，其包括以下步骤：
(1)选取岷江蓝雪花无菌组培苗继代快繁方法获得的无菌外植体(方法参照申请人团队前期的专利CN 107667865 B)；
(2)向基础培养基(MS培养基)中添加30g/L洋葱泥、30g/L香蕉泥和10g/L马铃薯泥；所述MS培养基中含蔗糖30g·L-1，琼脂6g·L-1，pH为5.8；
(3)将步骤(1)的岷江蓝雪花无菌外植体接种到步骤(2)的培养基中进行组织培养；控制培养温度为28℃，光照强度为2500Lx，光照时间为12h/d，进行组织培养。
对比例1
以实施例1的方法，按照如下表1的方案，考查不同氧化时间的洋葱对岷江蓝雪花组培苗生根壮苗影响。
用无菌组培苗，剪取长约2-3cm带1-2个芽茎段外植体，分别接种到未添加洋葱(空白对照)和添加氧化了0h、2h、4h、6h、8h、10h洋葱泥的培养基中。每种处理含60个外植体，3次重复。30d后统计外植体平均生根长度和宽度、初次生根时间、集中生根时间、平均生根数、生根外植体数、生根率、生长情况，观察洋葱氧化时间对岷江蓝雪花组培苗生根效果，试验结果见表1。
平均生根长度＝外植体生根长度总和/外植体数量
平均生根宽度＝外植体生根宽度总和/外植体数量
平均生根数＝外植体生根总数/外植体数量
生根率＝生根外植体数/外植体数量
初次生根时间：该处理水平的第一个生根外植体发根时间
集中生根时间：该处理水平≥60％外植体都生根的时间
表1
Figure BDA0002924730550000061
Figure BDA0002924730550000071
从表1的结果表明，将岷江蓝雪花无菌外植体接种到添加氧化了0h洋葱泥(即洋葱直接榨制成泥无需氧化立即使用)的培养基中，组培苗生根率最高，可达93.89％，促根效果最好；初次和集中生根时间分别为11d、12-14d，生根时间早；平均生根长度和宽度、平均生根数分别为3.25±0.13cm、0.50±0.08mm、7.1±0.18，虽不是最大的结果值，但与最大结果值相比未达到显著差异；且芽多、粗，叶片较绿，长势好，壮苗效果显著。因此，将岷江蓝雪花无菌外植体接种到添加氧化了0h洋葱泥的培养基中生根壮苗效果最佳。
对比例2
按照实施例1的方法，考查洋葱破碎程度对岷江蓝雪花组培苗生根壮苗影响，其方法为：将无菌组培苗剪取长约2-3cm带1-2个芽茎段外植体，分别接种到添加了泥状、小颗粒、中等颗粒、大颗粒洋葱的培养基中。每种处理含60个外植体，3次重复。30d后统计外植体平均生根长度和宽度、初次生根时间、集中生根时间、平均生根数、生根外植体数、生根率、生长情况，试验结果见表2。
平均生根长度＝外植体生根长度总和/外植体数量
平均生根宽度＝外植体生根宽度总和/外植体数量
平均生根数＝外植体生根总数/外植体数量
生根率＝生根外植体数/外植体数量
初次生根时间：该处理水平的第一个生根外植体发根时间
集中生根时间：该处理水平≥60％外植体都生根的时间段
表2
Figure BDA0002924730550000081
表2的结果表明，岷江蓝雪花无菌外植体接种到添加了泥状洋葱的培养基中，组培苗生根率最高，可达94.44％，促根效果最好；初次和集中生根时间分别为10d、12-13d，生根最快；平均最长生根长度和宽度、平均生根数达最大，分别为3.27±0.11cm、0.53±0.11mm、7.3±0.20，根系健壮；且芽多、粗，叶片较绿，长势好，壮苗效果显著。
实验例1
(一)生根、壮苗添加物组合筛选试验
在培养基中分别添加不同配比组合的洋葱泥(0g/L、15g/L、30g/L、45g/L)、香蕉泥(0g/L、10g/L、20g/L、30g/L)、马铃薯泥(0g/L、10g/L、20g/L、30g/L)，共16种处理，进行正交试验设计(设计组合见表3)。每种处理含90个岷江蓝雪花外植体，3次重复。30d后统计外植体平均生根长度和宽度、初次生根时间、集中生根时间、平均生根数、生根外植体数、生根率、生长情况，试验结果见表3。
平均生根长度＝外植体生根长度总和/外植体数量
平均生根宽度＝外植体生根宽度总和/外植体数量
平均生根数＝外植体生根总数/外植体数量
生根率＝生根外植体数/外植体数量
初次生根时间：该处理水平的第一个生根外植体发根时间
集中生根时间：该处理水平≥60％外植体都生根的时间段
表3
Figure BDA0002924730550000091
Figure BDA0002924730550000101
Figure BDA0002924730550000111
表3的结果表明，从岷江蓝雪花无菌组培苗生长情况看，在添加了洋葱泥、香蕉泥和马铃薯泥组合的处理号12、处理号13、处理号14、处理号15、处理号16的培养基中，根量多，促根效果好，芽多、粗，叶片较绿，长势好。其中，就平均生根长度和宽度、初次生根时间、集中生根时间、平均生根数和生根率而言，处理号12最优，其生根率可达96.67％，平均生根长度和宽度、平均生根数分别达4.16±0.21cm、0.55±0.12mm、12.2±0.15，根系多且健壮；初次和集中生根时间分别为10d、11-12d，生根时间最短；且芽多、粗，叶片绿，长势好，壮苗效果显著。因此，添加附加物到培养基中最佳处理组合为30g/L洋葱泥、30g/L香蕉泥和10g/L马铃薯泥。
实验例2
(二)添加物形态组合对比试验
按照实验例1确定的最佳条件，选取30g/L洋葱泥、30g/L香蕉泥和10g/L马铃薯泥组合，并与香蕉块(0.5cm×0.5cm)、马铃薯块(0.5cm×0.5cm)进行比较，考查添加物形态对岷江蓝雪花组培苗生根及壮苗的影响，所得结果如表4所示。
表4
Figure BDA0002924730550000112
Figure BDA0002924730550000121
从表4的结果可以看出，选择30g/L洋葱泥、30g/L香蕉块和10g/L马铃薯泥作为岷江蓝雪花组培苗扩繁的培养基添加物组合进行生产，生根率最高，可达97.37％，且平均生根长度和宽度、平均生根数最大分别为5.02±0.25cm、0.61±0.10mm、14.5±0.15，与其他处理组相比达显著性差异。其生根、壮苗效果最佳。

Claims (8)

1.一种岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)选取岷江蓝雪花无菌外植体；
(2)向基础培养基中添加30g/L洋葱泥、30g/L香蕉块和10g/L马铃薯泥；
(3)将步骤(1)的岷江蓝雪花无菌外植体接种到步骤(2)的培养基中进行组织培养。
2.根据权利要求1所述的岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，其特征在于，步骤(2)中所述基础培养基为MS培养基。
3.根据权利要求2所述的岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，其特征在于，所述MS培养基中含蔗糖30g·L-1，琼脂6g·L-1，pH为5.8。
4.根据权利要求1所述的岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，其特征在于，步骤(3)中所述组织培养的温度为20-28℃，光照强度为1500-2500Lx，光照时间为8-12h/d。
5.根据权利要求1所述的岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，其特征在于，步骤(2)中所述洋葱泥的制作方法为：选用新鲜饱满、外表无病斑且颜色紫红的洋葱，洗净沥干后，切成小块，放进搅拌机中搅碎后，得到洋葱泥。
6.根据权利要求1所述的岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，其特征在于，步骤(2)中所述香蕉块的制作方法为：选用表皮未有黑点、稍带青色的成熟香蕉，去除外皮和蕉络，切成不大于0.5cm×0.5cm的小块。
7.根据权利要求1所述的岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，其特征在于，步骤(2)中所述马铃薯泥的制作方法为：选用外表无黑绿病斑、未长芽的新鲜马铃薯，洗净沥干后，带表皮切成小块，放进搅拌机中搅碎后，得到马铃薯泥。
8.根据权利要求1所述的岷江蓝雪花组培苗高效快速生根及壮苗的方法，其特征在于，所述岷江蓝雪花无菌外植体的获得方法采用高效继代快繁方法，其步骤为：
剪取无菌组培苗上半部分幼嫩带芽长约2cm茎段作为外植体，接种到MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1岷江蓝雪花腋芽诱导培养基，MS+6-BA 2.0mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1腋芽增殖培养基，1/2MS+IBA 0.5mg·L-1生根培养基。经过腋芽诱导-腋芽增殖-生根培养后获得的8cm高无菌苗，剪成各茎段带一个叶片的外植体。
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