CN105191796A - 一种蓝雪花组织培养外植体消毒方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蓝雪花组织培养外植体消毒方法，包括以下步骤：(1)外植体选择；(2)外植体预处理；(3)外植体消毒。相对于现有技术，本发明方法操作简单，步骤科学合理，既具有很好的消毒效果，又对外植体不会造成太大伤害，能够显著提高外植体成活率，同时有效减少环境污染。

Description

一种蓝雪花组织培养外植体消毒方法

技术领域

本发明涉及一种蓝雪花组织培养外植体消毒方法，属于植物组培技术领域。

背景技术

蓝雪花(Plumbagoauriculata)原产南非，又名蓝花丹、蓝雪丹、蓝花矶松、蓝茉莉等，属于白花丹科(蓝雪科)白花丹属多年生常绿灌木。蓝雪花长势强健，耐热，较耐高温高湿，病虫害少，管理简单，观赏期长。叶色翠绿，花色淡雅，炎热的夏季给人以清凉感觉，可盆栽点缀居室、阳台；成熟植株枝条悬垂，适宜大型容器组合盆栽，也可用于场馆周边、道路、立交桥等主要路段的绿化美化，也可地栽林缘种植或点缀草坪。

蓝雪花花期正值少花吋节,而且是自然界少有的蓝色花,受到园林工作者青睐。目前蓝雪花在国内作为一种新优观花花卉被引种栽培，特别是2008年北京奥运会期间，在一些重要绿化地段被推广应用，发挥了很好的景观效果，是奥运会期间装饰北京环境的新优观花花卉之一。

蓝雪花播种繁殖，种子自然结实率低，不易获得种子，国内引种栽培大多数是利用进口种子栽培，价格较贵。扦插繁殖生根率较低，且适宜扦插的时间有限，不易获得大量种苗。组织培养繁殖技术所需繁殖材料少，不受季节限制，繁殖系数高，繁殖速度快，是针对材料缺乏，不易繁殖植物快速获得大量种苗的有效途径。

利用组织培养技术，外植体的选择、预处理、及消毒方法是初代培养成功的关键，也是减少污染、保证成活获得无菌体系的核心技术，是组培快繁种苗的基础。但是，现有蓝雪花组培技术中，消毒方法选择不够合理，导致成活率过低，并且易造成环境污染。

发明内容

发明目的：为了解决上述技术问题，本发明提供一种蓝雪花组织培养外植体消毒方法。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明公开了一种蓝雪花组织培养外植体消毒方法，包括以下步骤：

(1)外植体选择：选择具有品种典型特征明显、生长势强、无病虫害的优良蓝雪花单株作外植体取材母株，剪取枝条的中上部分作为外植体，剪取后立即插入盛有清水的烧杯中；

(2)外植体预处理：把步骤(1)剪取的枝条剪成小段，每个小段保证有1-2个腋芽，剪掉较大的叶片，清洗所得小段；

(3)外植体消毒：将步骤(2)所得小段，先用75％乙醇浸润，用无菌水漂洗1-2次，再用10％的NaClO溶液中浸泡，用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用，即得。

作为优选，步骤(1)中所述蓝雪花单株为2-3年生单株。

作为另一种优选，步骤(1)中所述枝条为生长健壮、节间均匀、叶色翠绿的枝条。

作为另一种优选，步骤(2)中所述小段的长度为5-8cm。

作为另一种优选，步骤(2)中所述清洗所得小段的方法为：把小段放入烧杯中，加入洗衣粉，搅拌冲洗，然后用纱布封住烧杯口，放在自来水下流水冲洗30-40min。

作为另一种优选，步骤(3)中所述75％乙醇浸润的时间为120-140秒。

作为另一种优选，步骤(3)中所述NaClO溶液中浸泡的时间为10-20min。

1、利用本发明所述外植体的选择标准，能够很好地保证蓝雪花的优良特性，选择健壮的枝条及中上部腋芽营养能够保证外植体的成活。

2、利用本发明所述外植体的预处理，方便操作，用洗衣粉及流水冲洗，操作简单，清洁外植体效果好。

3、利用本发明所述外植体消毒的方法，步骤科学合理，消毒剂酒精及NaClO容易获得，所用浓度及处理时间，既具有很好的消毒效果，又对外植体不会造成太大伤害，达到减少污染保证成活的目的。

技术效果：相对于现有技术，本发明方法操作简单，步骤科学合理，既具有很好的消毒效果，又对外植体不会造成太大伤害，能够显著提高外植体成活率，同时有效减少环境污染。

具体实施方式

实施例1

(1)外植体选择：选择具有品种典型特征明显、生长势强、无病虫害的2-3年生优良蓝雪花单株作外植体取材母株，选择生长健壮、节间均匀、叶色翠绿的枝条，剪取枝条的中上部分作为外植体，剪取后立即插入盛有清水的烧杯中；

(2)外植体预处理：把步骤(1)剪取的枝条剪成5-8cm小段，每个小段保证有1-2个腋芽，剪掉较大的叶片，清洗所得小段，方法为：把小段放入烧杯中，加入洗衣粉，搅拌冲洗，然后用纱布封住烧杯口，放在自来水下流水冲洗30min。；

(3)外植体消毒：将步骤(2)所得小段，先用75％乙醇浸润120秒，用无菌水漂洗1-2次，再用10％的NaClO溶液中浸泡10min，用无菌水冲洗4-6次，最后用无菌滤纸吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用，即得。

实施例2：

(1)外植体选择：选择具有品种典型特征明显、生长势强、无病虫害的2-3年生优良蓝雪花单株作外植体取材母株，选择生长健壮、节间均匀、叶色翠绿的枝条，剪取枝条的中上部分作为外植体，剪取后立即插入盛有清水的烧杯中；

(2)外植体预处理：把步骤(1)剪取的枝条剪成5-8cm小段，每个小段保证有1-2个腋芽，剪掉较大的叶片，清洗所得小段，方法为：把小段放入烧杯中，加入洗衣粉，搅拌冲洗，然后用纱布封住烧杯口，放在自来水下流水冲洗40min。；

(3)外植体消毒：将步骤(2)所得小段，先用75％乙醇浸润140秒，用无菌水漂洗1-2次，再用10％的NaClO溶液中浸泡20min，用无菌水冲洗4-6次，最后用无菌滤纸吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用，即得。

实施例3：

(1)外植体选择：选择具有品种典型特征明显、生长势强、无病虫害的2-3年生优良蓝雪花单株作外植体取材母株，选择生长健壮、节间均匀、叶色翠绿的枝条，剪取枝条的中上部分作为外植体，剪取后立即插入盛有清水的烧杯中；

(2)外植体预处理：把步骤(1)剪取的枝条剪成5-8cm小段，每个小段保证有1-2个腋芽，剪掉较大的叶片，清洗所得小段，方法为：把小段放入烧杯中，加入洗衣粉，搅拌冲洗，然后用纱布封住烧杯口，放在自来水下流水冲洗35min。；

(3)外植体消毒：将步骤(2)所得小段，先用75％乙醇浸润130秒，用无菌水漂洗1-2次，再用10％的NaClO溶液中浸泡15min，用无菌水冲洗4-6次，最后用无菌滤纸吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用，即得。

实验例1不同外植体的选择对蓝雪花成活率的研究

实验分别以叶片为外植体，将叶片进行初步消毒处理后，在带叶脉部分切割成2cm*2cm左右大小的方块；以茎段为外植体，将枝条上的叶片去除后，切成2cm长左右带1～2个腋芽的茎段接种到MS培养基上，2个月后观测腋芽成活及发育情况。结果如下表1。

表1不同外植体的选择对蓝雪花成活率的影响

由上表2结果可得，利用带腋芽的茎段芽分化成活率远高于叶片。

实验例2不同灭菌剂及灭菌时间的控制对蓝雪花成活率的研究

各实验组为按照本发明消毒方法，不同之处10％的NaClO溶液中浸泡时间不同，分别为5min、15min和25min。

各对照组也按照本发明消毒方法，不同之处为采用1％升汞浸泡替代10％的NaClO溶液浸泡，且浸泡时间分别为3min、6min和9min。(升汞浓度和浸泡时间均为现有技术中常用)

上述各组均采用同一批次的蓝雪花，其外植体成活率，结果如下表2：

表2各外植体成活率结果

由上表2结果可得，应用1％升汞进行消毒，成活率最高的为浸泡6min，成活率为65.82％，而采用本发明方法，成活率最高可以达到79.03％，显著优于1％升汞。并且，升汞为剧毒溶液不容易获得，且易污染环境，而本发明所用NaClO溶液不仅效果好，而且无污染。

Claims (7)

1.一种蓝雪花组织培养外植体消毒方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体选择：选择具有品种典型特征明显、生长势强、无病虫害的优良蓝雪花单株作外植体取材母株，剪取枝条的中上部分作为外植体，剪取后立即插入盛有清水的烧杯中；

(2)外植体预处理：把步骤(1)剪取的枝条剪成小段，每个小段保证有1-2个腋芽，剪掉较大的叶片，清洗所得小段；

(3)外植体消毒：将步骤(2)所得小段，先用75％乙醇浸润，用无菌水漂洗1-2次，再用10％的NaClO溶液中浸泡，用无菌水冲洗，最后用无菌滤纸吸去表面水分，置于无菌培养皿中备用，即得。

2.根据权利要求1所述的蓝雪花组织培养外植体消毒方法，其特征在于，步骤(1)中所述蓝雪花单株为2-3年生单株。

3.根据权利要求1所述的蓝雪花组织培养外植体消毒方法，其特征在于，步骤(1)中所述枝条为生长健壮、节间均匀、叶色翠绿的枝条。

4.根据权利要求1所述的蓝雪花组织培养外植体消毒方法，其特征在于，步骤(2)中所述小段的长度为5-8cm。

5.根据权利要求1所述的蓝雪花组织培养外植体消毒方法，其特征在于，步骤(2)中所述清洗所得小段的方法为：把小段放入烧杯中，加入洗衣粉，搅拌冲洗，然后用纱布封住烧杯口，放在自来水下流水冲洗30-40min。

6.根据权利要求1所述的蓝雪花组织培养外植体消毒方法，其特征在于，步骤(3)中所述75％乙醇浸润的时间为120-140秒。

7.根据权利要求1所述的蓝雪花组织培养外植体消毒方法，其特征在于，步骤(3)中所述NaClO溶液中浸泡的时间为10-20min。