CN105684910B

CN105684910B - 细叶石斛的组培快繁方法

Info

Publication number: CN105684910B
Application number: CN201610080991.8A
Authority: CN
Inventors: 谷海燕; 熊铁; 熊铁一; 谢孔平; 鲁松; 李策宏; 彭启新; 余道平
Original assignee: SICHUAN PROVINCE NATURAL RESOURCES SCIENCE ACADEMY
Current assignee: SICHUAN PROVINCE NATURAL RESOURCES SCIENCE ACADEMY
Priority date: 2016-02-04
Filing date: 2016-02-04
Publication date: 2018-06-05
Anticipated expiration: 2036-02-04
Also published as: CN105684910A

Abstract

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种细叶石斛的组培快繁方法。针对自然条件下细叶石斛自然萌发率低、现有技术中缺乏系统全面快速的繁育方法等问题，本发明提供一种细叶石斛的组培快繁方法，通过将细叶石斛的蒴果消毒后，以其种子为外植体，经过诱导、增殖分化及生根阶段，得到大量的细叶石斛组培苗。本发明技术方案建立组培快繁技术体系，实现了细叶石斛的大量人工繁育，为该植物以后的工厂化生产打下基础，并对于保护其野生资源，扩大其种植面积，以实现其种质资源的可持续利用，具有重要的现实意义和经济效益。

Description

细叶石斛的组培快繁方法

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种细叶石斛的组培快繁方法。

背景技术

细叶石斛Dendrobium hancockii Rolfe为兰科石斛属的多年生草本植物，在我国主要分布于陕西秦岭以南、四川、甘肃、河南及广西等地，附生在密林中树干上或山谷岩石上。该种是我国传统的名贵中药材，全草药用，其茎干可加工成枫斗，是石斛类药材来源之一，具有生津养胃、止咳润肺等功效，用于治疗病后虚热、口干燥咳、食欲不振等病症，在中药材市场上深受欢迎。近年来，由于石斛价格昂贵，供不应求，药民无节制地采挖细叶石斛野生资源，致使其采集量大于生长量，造成其野生资源稀缺，已被列于《中国稀有濒危保护植物名录Ⅱ》中。

细叶石斛亦是我国名贵的观赏类石斛兰，该植物兼具竹子的秀丽和兰花的幽香。虽为草本植物，但其茎质地较硬，紫红色，小枝披散，植株具备似竹的秀美；盛开金黄色的花朵，花质地厚，具有微香。虽然细叶石斛具有很高的观赏价值，且为阴性湿生植物中耐寒冷和稍耐干旱的种类，较其他石斛类植物更易管理和栽培，但目前在我国细叶石斛的观赏价值并未得到开发利用，花卉市场中难觅其的踪迹。

石斛属植物对自然生态环境要求苛刻，其种子细如微尘，在自然条件下萌发率极低。目前我国关于细叶石斛方面的研究甚少，且无系统全面的关于其快速繁殖方面的研究。

发明内容

针对现有技术中缺乏系统、快速的细叶石斛快速培育方法，本发明的发明目的在于提供一种细叶石斛的组培快繁方法。该方法通过以细叶石斛种子为外植体进行组培，建立快繁技术体系，实现了细叶石斛的大量人工繁育，为该植物以后的工厂化生产打下基础，并对于保护其野生资源，扩大其种植面积，以实现其种质资源的可持续利用，具有重要的现实意义和经济效益。

本发明要解决的技术问题是提供一种细叶石斛的组培快繁方法，包括以下步骤：

a、外植体处理

采摘细叶石斛蒴果作为外植体材料，进行消毒处理；

b、诱导培养

剪开消毒后蒴果，将种子分散于诱导培养基上培养至长出原球茎；

c、增殖分化培养

将步骤b中原球茎接种到增殖分化培养基上进行增殖分化培养至具2～4个叶片、高3～4cm的无根苗；

d、生根培养

将步骤c中无根苗移植到生根培养基上培养为高7～8cm、有5～10条根的幼苗；

e、炼苗培养

将步骤d中幼苗进行炼苗，炼苗后移栽大棚培养。

其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤a中所述消毒处理为：用73～75wt％的酒精浸泡15～30s后，再用0.09～0.1wt％氯化汞溶液或0.9～1wt％次氯酸钠溶液浸泡10～20min，无菌水冲洗，再用无菌滤纸吸干。

优选的，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤a中所述消毒处理在酒精浸泡前，先用0.2～0.3wt％的洗衣粉水浸泡15～30min，用水冲洗10～30min；

更优选的，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤a中所述消毒处理在酒精浸泡后，先用无菌水冲洗干净，再用0.09～0.1wt％氯化汞溶液或0.9～1wt％次氯酸钠溶液浸泡。

其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤b中所述诱导培养基组成为：VW基础培养基+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l，PH为5.4～5.6。

其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤b中所述培养温度为22±2℃，光照强度为1500～2000Lux，光照时间为11～13h/d，培养时间45～55天。

其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤c中所述增殖分化培养基组成为：VW基础培养基+萘乙酸0.05～0.15mg/l+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l，PH为5.4～5.6。

其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤c中所述培养温度为22±2℃，光照强度为1500～2000Lux，光照时间为11～13h/d，培养时间为45～60天。

其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤c中所述接种时每瓶接种2～4个团，每团约20～30个原球茎。

其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤d中所述生根培养基组成为：1/2VW基础培养基+吲哚丁酸0.1～0.3mg/l+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l+土豆90～110g/l+活性炭2～2.5g/l，PH 5.4～5.6。

其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤d中所述生根培养温度为22±2℃，光照强度为1500～2000Lux，光照时间11～13h/d，培养时间35～45天。

其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤e中所述炼苗是于培养室中炼苗5～7天、自然光下炼苗2～4天。

其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤e中所述移栽大棚培养时，培养基质为7～10cm厚的松树皮上层覆盖一层1～2cm厚的水苔，基质湿度60～70％；移栽前10～15天内每1～2天洒一次水，之后每2～3天洒一次水，移栽培养时间为30～35天；待组培苗成活后，转移到大棚常规管理。

其中，上述细叶石斛的组培快繁方法中，步骤c、d、e中的高不包含根的长度。

本发明技术方案为细叶石斛的育苗开辟了新的途径，采用本发明的组培快繁技术，能将细叶石斛种子染菌率控制在10％以内，染菌弱苗少，培育的细叶石斛幼苗质量好；同时，本发明技术方案能有效促进细叶石斛种子的萌发，诱导的种子萌发率几近100％；还能促进萌发的幼苗快速增殖、分化和生根，增殖系数10～25，分化率和生根率均在95％左右；此外，采用本发明技术方案，由于染菌少，幼苗质量好，移栽成活率高，基本达到95％以上。本发明技术方案能快速得到优良的细叶石斛幼苗，对推动细叶石斛的产业发展具有重大的意义。

具体实施方式

本发明提供一种细叶石斛的组培快繁方法，具体操作过程如下：

a、采摘细叶石斛未开裂的蒴果，用0.2～0.3wt％的洗衣粉水浸泡15～30min后，于自来水冲洗10～30min后放入超净工作台上备用；在无菌条件下，用73～75wt％的酒精处理15～30s、无菌水冲洗4～6次；0.09～0.1wt％氯化汞溶液或0.9～1.0wt％次氯酸钠溶液灭菌10～20min，无菌水冲洗4～6次，再用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分；

b、用灭菌剪刀剪开无菌蒴果一端，轻轻晃动蒴果，把种子接入诱导培养基上；诱导培养基以VW为基础培养基，每L中添加19～21g蔗糖，5.3～5.5g琼脂，100～150g香蕉，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为1500～2000Lux之间，培养45～55天至诱导出原球茎；

c、选取原球茎团，接种到增殖与分化培养基上；接种时每瓶接种2～4个团，每团约20～30个原球茎；增殖和分化培养基以VW为基础培养基，每L中添加0.05～0.15mg NAA，19～21g蔗糖，5.3～5.5g琼脂，100～150g香蕉，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为1500～2000Lux之间，培养45～60天后原球茎得到大量增殖，分化生长为具2～4个叶片、高3～4cm的无根苗；

d、将步骤c中无根苗移植到生根培养基上培养；生根培养基以1/2VW为基础培养基，每L中添加0.1～0.3mg IBA，19～21g蔗糖，5.3～5.5g琼脂，100～150g香蕉，90～110g土豆，2～2.5g活性炭，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为1500～2000Lux之间，培养35～45天至幼苗高7～8cm、有5～10条根；

e、将步骤d中高8cm、有5～10条根的幼苗在培养室中炼苗5～7天，自然光下炼苗2～4天，小心取出组培苗用自来水冲洗干净根部的培养基，晾干后移栽入湿润的栽培基质(7～10cm厚的松树皮上层覆盖一层1～2cm厚的水苔)，保持其所处温度在22±2℃，基质湿度60～70％；移栽前10天内每1～2天洒一次水，之后2～3天洒一次水，移栽培养时间为30～35天。

本发明的发明人严格的控制了灭菌条件、根据细叶石斛本身的生长习性和特点，创造性的选择了诱导、增殖分化、生根培养基，再配合适宜本发明技术方案的接种密度，提供了一种全新的适于细叶石斛的组培快繁方法。为了更好的灭菌，降低种子的染菌率，本发明技术方案采用0.2～0.3wt％的洗衣粉溶液、73～75wt％的酒精和0.09～0.1wt％的氯化汞溶液对细叶石斛蒴果进行消毒处理。洗衣粉溶液主要是为了去掉蒴果表面的灰尘，保持其清洁，普通的市售洗衣粉产品均可实现；酒精溶液、氯化汞溶液虽然都可以作为消毒溶液，防止染菌，但两者单独使用时效果不佳，发明人经过长期的研究，发现两者配合使用能够达到很好的消毒效果，基本可以达到100％无菌，种子萌发时无染菌现象。其中0.09～0.1wt％氯化汞溶液亦可用0.9～1.0wt％的次氯酸钠溶液等效代替，也可达到同样的灭菌消毒功效。

为了更好的诱导种子萌发生长为原球茎，本发明技术方案中的诱导培养基采用VW基础培养基，相比于传统的MS培养基，VW基础培养基更适合细叶石斛的生长；此外，发明人创造性的在诱导培养基中添加了香蕉，香蕉选取新鲜成熟的市售香蕉，加水熬制成糊状，冷却后加入培养基中。香蕉含有丰富的K等微量元素，为原球茎的生长提供一定的微量元素，使原球茎生长更为整齐、饱满。发明人在实验过程中，发现PH过高、PH太低时培养基均不利于细叶石斛的组织培养，经过反复筛选，最终得出PH值5.4～5.6之间培养基最适合细叶石斛的生长。

种子萌发为原球茎后，原球茎的增殖分化也对细叶石斛的组织培养至关重要。在本发明技术方案中，由于细叶石斛种子诱导的原球茎颗粒大、饱满，增殖系数大，因此不宜接种过多，以免接种数量太大，造成培养瓶内挤压，影响原球茎的增殖、分化，也不利于统计数量。发明人经过反复的筛选，最终得出本发明技术方案最为适宜的原球茎接种数量为每瓶接种2～4个原球茎团，每个原球茎团约20～30个原球茎。

接种原球茎后，要选择适宜的培养基对其进行增殖分化。为了促进细叶石斛增殖分化，本发明中以VW为基本培养基，培养基组成为：VW基础培养基+NAA 0.05～0.15mg/l+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l，PH为5.4～5.6。NAA为萘乙酸，是一种常用的植物生长激素，能够有效的促进细叶石斛细胞分裂增殖。本发明技术方案仅添加很低浓度的萘乙酸，已经能够达到良好的增殖分化效果，不需要添加其他生长素和细胞分裂素，一定程度上避免这些物质在药用植物细叶石斛种苗中的积累，为细叶石斛种苗的质量提供了保证。

诱导增殖分化后的细叶石斛幼苗为无根苗，要得到适合移栽培育的细叶石斛幼苗，还需要进行生根培养。发明人经过大量的实验，最终发现吲哚丁酸(IBA)诱导细叶石斛生根的效果最为明显。本发明中采用的生根培养基组成为：1/2VW基础培养基+IBA 0.1～0.3mg/l+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l+土豆90～110g/l+活性炭2～2.5g/l，PH 5.4～5.6。为了促进细叶石斛幼苗生根，生根培养基以1/2VW为基础培养基，一方面是因为生根并不需要过多的营养；另一方面，当只有少量营养存在时，细叶石斛为吸收营养而会加速生根，提高了生根率。此外，培养基中添加的土豆，是将新鲜土豆在无菌锅中蒸熟后捣烂成泥状，土豆起到了壮苗健苗的作用，使生根培养后的幼苗适合炼苗；培养基中创造性的加入了活性炭，避免了培养基褐化，也减少了光对培养基的穿透，营造了一个有利于生根的环境。

本发明技术方案将上述处理方式创造性的结合在一起，提供了一种全新的专门适宜细叶石斛的快繁组培方法，开创了细叶石斛快繁组培的先河。采用本发明技术方案，能实现细叶石斛的大量人工繁育，为其以后的工厂化生产打下基础，并对于保护其野生资源，扩大其种植面积，以实现其种质资源的可持续利用，具有重要的现实意义和经济效益。

下面通过实施例对本发明的具体实施方式做进一步的说明，但并不因此将本发明的保护范围限制在实施例之中。

实施例中的酒精、氧化汞、萘乙酸和吲哚丁酸等产品均为普通市售产品。

实施例1

细叶石斛的组培快繁方法，具体操作过程如下：

a、采摘细叶石斛未开裂的蒴果，用0.2wt％的洗衣粉水浸泡15min后，于自来水冲洗10min后放入超净工作台上备用。在无菌条件下，先后用73wt％的酒精处理15s、0.09％氯化汞溶液灭菌10min，并各自用无菌水冲洗5次，再用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分；用灭菌剪刀剪开无菌蒴果一端，轻轻晃动蒴果，把种子接入诱导培养基上。最终种子萌发培养瓶染菌率为9％。

b、诱导培养基以VW为基础培养基，每L中添加19g蔗糖，5.3g琼脂，100g香蕉，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为1500Lux。培养45天后可成功诱导出原球茎，萌发率为90％以上。此时原球茎颗粒较大，饱满。培养55天待到可看到叶原基时，选取原球茎团，接种到增殖与分化培养基上。

c、增殖和分化培养基以VW为基础培养基，每L中添加0.05mg NAA，19g蔗糖，5.3g琼脂，100g香蕉，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为1500Lux。接种时每瓶接种2个团，每团约20个原球茎，培养45d后原球茎得到大量增殖，增殖系数为12.5；原先形成的转移原球茎在在55d天时可生长成为健壮的无根苗，分化率为97.5。取出长出2～4片新叶、高3cm左右的无根苗转移到生根培养基上。

d、生根培养基以1/2VW为基础培养基，每L中添加0.1mg IBA，19g蔗糖，5.3g琼脂，100g香蕉，90g土豆，2g活性炭，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为1500Lux之间。培养45d后，生根率达到90％左右。

e、将组培苗在培养室中炼苗7d、自然散光下炼苗4d后，小心取出组培苗用自来水冲洗干净根部的培养基，晾干后栽入湿润的栽培基质(7cm厚的松树皮上层覆盖一层2cm左右厚的水苔)，保持其所处温度在22±2℃，湿度维持在60％以上。移栽10d内保持每天洒水，之后2或3天洒次水。35d后移栽的组培苗成活率为85％左右。

实施例2

细叶石斛的组培快繁方法，具体操作过程如下：

a、采摘细叶石斛未开裂的蒴果，用0.2wt％的洗衣粉水浸泡30min后，于自来水冲洗30min后放入超净工作台上备用。在无菌条件下，先后用75wt％的酒精处理30s、1wt％次氯酸钠灭菌20min，并各自用无菌水冲洗5次，再用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分；用灭菌剪刀剪开无菌蒴果一端，轻轻晃动蒴果，把种子接入诱导培养基上。培养瓶染菌率为0％，无染菌现象。

b、诱导培养基以VW为基础培养基，每L中添加20g蔗糖，5.4g琼脂，120g香蕉，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为2000Lux。培养45天后可成功诱导出原球茎，萌发率可达到100％。此时原球茎颗粒大，饱满。培养50天待到可看到叶原基时，选取原球茎团，接种到增殖与分化培养基上。

c、增殖和分化培养基以VW为基础培养基，每L中添加0.1mg NAA，20g蔗糖，5.4g琼脂，120g香蕉，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为2000Lux。接种时每瓶接种2个团，每团约20个原球茎培养45d后原球茎得到大量增殖，增殖系数为22.5；原先形成的转移原球茎在在55d天时可生长成为健壮的无根苗，分化率为100％。取出长出2～4片新叶、高3cm左右的无根苗转移到生根培养基上。

d、生根培养基以1/2VW为基础培养基，每L中添加0.2mg IBA，20g蔗糖，5.4g琼脂，120g香蕉，100g土豆，2.3g活性炭，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为2000Lux。培养35d后，生根率达到98％。

e、将组培苗在培养室中炼苗5d、自然散光下炼苗4d后，小心取出组培苗用自来水冲洗干净根部的培养基，晾干后栽入湿润的栽培基质(7cm厚的松树皮上层覆盖一层2cm左右厚的水苔)，保持其所处温度在22±2℃，湿度维持在60％以上。移栽10d内保持每天洒水，之后2或3天洒次水。35d后移栽的组培苗成活率可达到90％左右。

培养室中炼苗5d、自然散光下炼苗4d后，偶见培养瓶中出现染菌现象，染菌率为不及5％。

实施例3

细叶石斛的组培快繁方法，具体操作过程如下：

a、采摘细叶石斛未开裂的蒴果，用0.3wt％的洗衣粉水浸泡20min后，于自来水冲洗30min后放入超净工作台上备用。在无菌条件下，先后用74wt％的酒精处理20s、0.1wt％氯化汞溶液灭菌30min，并各自用无菌水冲洗5次，再用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分；用灭菌剪刀剪开无菌蒴果一端，轻轻晃动蒴果，把种子接入诱导培养基上。培养瓶染菌率为0％，无染菌现象。

b、诱导培养基以VW为基础培养基，每L中添加21g蔗糖，5.5g琼脂，150g香蕉，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为1500Lux。培养45天后可成功诱导出原球茎，萌发率为100％。此时原球茎颗粒大，饱满。培养50天待到可看到叶原基时，选取原球茎团，接种到增殖与分化培养基上。

c、增殖和分化培养基以VW为基础培养基，每L中添加0.15mg NAA，21g蔗糖，5.5g琼脂，150g香蕉，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为1500Lux。接种时每瓶接种4个团，每团约30个原球茎培养45d后原球茎得到大量增殖，增殖系数为16.5；原先形成的转移原球茎在在60d天时可生长成为健壮的无根苗，分化率为94.2％。取出长出2～4片新叶、高3cm左右的无根苗转移到生根培养基上。

d、生根培养基以1/2VW为基础培养基，每L中添加0.3mg IBA，21g蔗糖，5.5g琼脂，150g香蕉，110g土豆，2.5g活性炭，PH在5.4～5.6之间，培养温度为22±2℃，光照时间为11～13h/d，光照强度为1500Lux。培养35d后，生根率达到97％。

e、将组培苗在培养室中炼苗5d、自然散光下炼苗2d后，小心取出组培苗用自来水冲洗干净根部的培养基，晾干后栽入湿润的栽培基质(7cm厚的松树皮上层覆盖一层1cm左右厚的水苔)，保持其所处温度在22±2℃，湿度维持在60％以上。移栽10d内保持每天洒水，之后2或3天洒次水。30d后移栽的组培苗成活率可达到95％以上。

本发明技术方案为细叶石斛的育苗开辟了新的途径，采用本发明的组培快繁技术，能将染菌率控制在10％以内，染菌弱苗少，培育的细叶石斛幼苗质量好；同时，本发明技术方案能有效促进细叶石斛种子的萌发，诱导的种子萌发率几近100％；还能促进萌发的幼苗快速增殖、分化和生根，增殖系数10～25，分化率和生根率均在95％左右；此外，采用本发明技术方案，由于染菌少，幼苗质量好，移栽成活率高，基本达到95％以上；本发明技术方案能快速得到优良的细叶石斛幼苗，对推动细叶石斛的产业发展具有重大的意义。

Claims

1.一种细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、外植体处理

采摘细叶石斛蒴果作为外植体材料，进行消毒处理；所述消毒处理为：用73～75wt％的酒精浸泡15～30s后，再用0.09～0.1wt％氯化汞溶液或0.9～1wt％次氯酸钠溶液浸泡10～20min，无菌水冲洗；

b、诱导培养

剪开消毒后蒴果，将种子分散于诱导培养基上培养至长出原球茎；所述诱导培养基组成为：VW基础培养基+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l，PH为5.4～5.6；

c、增殖分化培养

将步骤b中原球茎接种到增殖分化培养基上进行增殖分化培养至具2～4个叶片、高3～4cm的无根苗；所述增殖分化培养基组成为：VW基础培养基+萘乙酸0.05～0.15mg/l+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l，PH为5.4～5.6；

d、生根培养

将步骤c中无根苗移植到生根培养基上培养为高7～8cm、有5～10条根的幼苗；所述生根培养基组成为：1/2VW基础培养基+吲哚丁酸0.1～0.3mg/l+蔗糖19～21g/l+琼脂5.3～5.5g/l+香蕉100～150g/l+土豆90～110g/l+活性炭2～2.5g/l，PH 5.4～5.6；

e、炼苗培养

将步骤d中幼苗进行炼苗，炼苗后移栽大棚培养。

2.根据权利要求1所述的细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于：步骤b中所述培养温度为22±2℃，光照强度为1500～2000Lux，光照时间为11～13h/d，培养时间45～55天。

3.根据权利要求1所述的细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于：步骤c中所述培养温度为22±2℃，光照强度为1500～2000Lux，光照时间为11～13h/d，培养时间为45～60天。

4.根据权利要求1所述的细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于：步骤c中所述接种时每瓶接种2～4个团，每团20～30个原球茎。

5.根据权利要求1所述的细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于：步骤d中所述生根培养温度为22±2℃，光照强度为1500～2000Lux，光照时间11～13h/d，培养时间35～45天。

6.根据权利要求1所述的细叶石斛的组培快繁方法，其特征在于：步骤e中所述移栽大棚培养时，培养基质为7～10cm厚的松树皮上层覆盖一层1～2cm厚的水苔，基质湿度60～70％；移栽前10～15天内每1～2天洒一次水，之后每2～3天洒一次水，移栽培养时间为30～35天；待组培苗成活后，转移到大棚常规管理。