CN104920218A - 地皮消的繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种地皮消的繁殖方法，该方法包括将消毒灭菌处理后的地皮消外植体先后接种于不同的培养基中进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖同步培养的步骤。本发明方法解决了地皮消属植物无性快繁中常见的玻璃化现象，且成本低、时间短、质量和成活率高。
Description
技术领域
本发明涉及中草药繁殖技术，尤其涉及一种地皮消的繁殖方法。
背景技术
地皮消Pararuellia delavayana为爵床科(Acanthaceae)地皮消属(Pararuellia)多年生草本，别名地皮胶、刀口药、蛆药，是我国特有药用植物，产四川南部、云南中北部及贵州，生于海拔750-3000m的山地草坡、疏林下。地皮消全草入药具有清热解毒、散瘀消肿、拔毒生肌、散瘀生新、杀虫等功效，主治肺炎、扁桃体炎、腮腺炎、瘰疬、脓肿疮毒、骨折等。在云南寻甸、石林、弥勒等原生地，当地人称地皮消为“小奇药”，用于感冒发热、跌打损伤、腰膝酸痛等。水煎服用于感冒发热；用白酒浸泡成为药酒温热外擦治跌打损伤；治腰膝酸痛，则直接服用药酒。
地皮消通常以种子为繁殖单位，但其种子萌发率低，种子苗生长缓慢、后代变异大，并受到萌发季节的限制，难以进行规模化、标准化(基因型背景一致)种植和高药效品种的大面积推广。因此，需要寻求一种新的成本低、时间短、质量和成活率高，且能将优良性状固定下来的无性繁殖方法来扩大地皮消种苗的繁殖量，进行地皮消高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。
发明内容
本发明的目的在于解决地皮消现有繁殖技术存在的缺陷，提供一种能够在短时间内获得质优量大的地皮消无性种苗方法，该方法为保护地皮消野生资源和发展人工种植奠定技术基础，同时可将优良性状予以固定，提供基因型背景一致的优质种苗以满足人工种植的需求。
一种地皮消的繁殖方法，包括将消毒灭菌处理后地皮消外植体先后接种于不同的培养基中进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖同步培养步骤。
进一步地，如上所述的地皮消的繁殖方法，所述愈伤组织诱导的步骤包括：
步骤1：将消毒灭菌处理后地皮消外植体接种于培养基A中：
培养条件：在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下进行愈伤组织诱导，培养20d后出现质地紧密的愈伤组织，继续培养20d后愈伤组织分化出大量致密丛生芽，此时将丛生芽切割为3-5株一丛，转接至相同的新培养基A中继续培养20d，丛生芽繁殖生长为增殖芽；
其中，所述外植体为生长健壮的野生植株带芽茎段，按1.5-2.0cm长度切取。
进一步地，如上所述的地皮消的繁殖方法，所述丛芽发生和增殖同步培养包括以下步骤：
步骤2：将步骤1培养的增殖芽切割为3-5株一丛，转接至培养基B中：
培养条件：在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下继续培养40d；
步骤3：将步骤2培养的增殖芽按40d的生长周期轮流接入培养基A和培养基B中进行增殖，直到丛芽高3-4cm；
步骤4：取步骤3丛芽中高3-4cm的健壮主苗接种于培养基C中：
培养条件：在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下，培养45d获得苗壮根粗的生根苗；
步骤5：取步骤4中6-8cm高的生根苗置于室温下炼苗3d后，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0.1-0.2％的多菌灵溶液中消毒2-3min，后移栽至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，生长30d后，即得移栽苗。
进一步地，如上所述的地皮消的繁殖方法，步骤1中所述消毒灭菌处理的方法为：先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再放到流水下冲洗2h后，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒60s，再用质量百分比为0.1％的HgCl2灭菌6min，最后用无菌水冲洗若干次后放在无菌滤纸上吸干表面水分，最终得到消毒灭菌处理的外植体。
本发明提供的地皮消的繁殖方法具有以下有益效果：
1、用组织培养技术在培养室内好可实现周年生产，既节约了土地资源，又提高了经济效益，克服了传统繁殖方式无法周年进行生产的难点。
2、实现了高效快繁的目的，40-55d为一个培养周期，繁殖系数可达15.0以上。
3、解决了地皮消属植物快速繁殖中易出现的玻璃化现象，提高了种苗质量。
4、解决了传统种子繁殖后代分离大、性状不稳定而导致的种苗品质不一的难题，通过本发明，可使所有种苗保持同一基因型背景，易于标准化、工厂化操作，有效地提高了种苗质量，可为大面积推广种植提供统一标准的优良种苗。
5、对地皮消快速繁殖体系进行了优化，在同一培养基中，可同时进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖培养，简化了培养程序；整个快速繁殖过程只需3种培养基就解决了从愈伤组织、丛芽发生和增殖、克服玻璃化现象以及生根问题，利于安排生产计划。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
1、外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形的健壮植株，取其茎尖下第3-5节茎段，用手术刀切割为约2-3cm长。
2、将1步骤的带芽茎段先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再放到流水下冲洗2h后，置于超净工作台上用75％(体积比)酒精消毒60s，再用0.1％HgCl2(质量比)灭菌6min，最后用无菌水冲洗8次后放在无菌滤纸上吸干表面水分。在整个消毒过程中充分摇动器皿。
3、愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖同步培养：将经过2步骤消毒灭菌好的带芽茎段为材料，切割为1.5-2.0cm长，接入下列培养基中：
在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下，同步进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖，外植体培养20d后，其基部出现质地紧密的愈伤组织，继续培养20d后愈伤组织分化出大量致密丛生芽，将丛生芽切割为3-5株一丛，转接至相同的新鲜培养基中，培养20d后，丛生芽大量繁殖，30d后繁殖系数可达15.38；
4、优化培养：在3步骤培养基中继代增殖6代时，增殖苗出现易断、畸形、透明状及叶片易脱落等玻璃化现象，严重影响丛芽质量和增殖倍数，因此，将步骤3中培养的增殖苗转入下列培养基中：
在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在(22±1)℃的条件下，瓶苗玻璃化现象得到明显改善，但繁殖系数略有下降且生长较慢；
5、将增殖芽丛按40d的生长周期轮流接入3和4步骤培养基中，在保持增殖系数的同时又有效抑制了玻璃化苗的发生，其中，培养基A和培养基B轮流使用，各培养40d，平均繁殖系数亦达15.0以上；在本步骤中可大量繁殖至生产所需的种苗基数。
6、取5步骤丛芽中高3-4cm的健壮主苗接种于下列培养基中：
在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在(22±1)℃的条件下，培养45d后获得苗壮根粗的生根苗，其生根率可达100％。
7、炼苗和移栽：取6步骤长至约6-8cm高的生根苗，连培养瓶一起置于室温下炼苗3d后，打开瓶盖，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0.1-0.2％的多菌灵溶液中消毒2-3min后，移栽至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，生长30d后，即得移栽苗，成活率可达95％以上。
本发明提供的地皮消繁殖方法成本低、繁殖周期短、质量和成活率高，这种能将优良性状固定下来的无性繁殖方法可以用来扩大地皮消种苗的繁殖量，进行地皮消高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (4)
1.一种地皮消的繁殖方法，其特征在于，包括将消毒灭菌处理后的地皮消外植体先后接种于不同的培养基中进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖同步培养的步骤。
2.根据权利要求1所述的地皮消的繁殖方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导的步骤包括：
步骤1：将消毒灭菌处理后地皮消外植体接种于培养基A中：
MS培养液
培养条件：在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下进行愈伤组织诱导，培养20d后出现质地紧密的愈伤组织，继续培养20d后愈伤组织分化出大量致密丛生芽，此时将丛生芽切割为3-5株一丛，转接至相同的新培养基A中继续培养20d，丛生芽繁殖生长为增殖芽；
其中，所述外植体为生长健壮的野生植株带芽茎段，按1.5-2.0cm长度切取。
3.根据权利要求2所述的地皮消的繁殖方法，其特征在于，所述丛芽发生和增殖同步培养包括以下步骤：
步骤2：将步骤1培养的增殖芽切割为3-5株一丛，转接至培养基B中：
B5培养液
培养条件：在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下继续培养40d；
步骤3：将步骤2培养的增殖芽按40d的生长周期轮流接入培养基A和培养基B中进行增殖培养，直到丛芽高3-4cm；
步骤4：取步骤3丛芽中高3-4cm的健壮主苗接种于培养基C中：
MS培养液
培养条件：在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下，培养45d获得苗壮根粗的生根苗；
步骤5：取步骤4中6-8cm高的生根苗置于室温下炼苗3d后，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0.1-0.2％的多菌灵溶液中消毒2-3min，后移栽至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，生长30d后，即得移栽苗。
4.根据权利要求1所述的地皮消的繁殖方法，其特征在于，步骤1中所述消毒灭菌处理的方法为：先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再放到流水下冲洗2h后，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒60s，再用质量百分比为0.1％的HgCl2灭菌6min，最后用无菌水冲洗若干次后放在无菌滤纸上吸干表面水分，最终得到消毒灭菌处理的外植体。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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