CN109220790A - 一种红果参离体外繁方法 - Google Patents

一种红果参离体外繁方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109220790A
CN109220790A CN201811004746.4A CN201811004746A CN109220790A CN 109220790 A CN109220790 A CN 109220790A CN 201811004746 A CN201811004746 A CN 201811004746A CN 109220790 A CN109220790 A CN 109220790A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seedling
minimal medium
culture
callus
red fruit
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201811004746.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109220790B (zh
Inventor
黄衡宇
李文忠
王美蓉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lijiang Gucheng District Qiu Cheng Breeding Co Ltd
Original Assignee
Lijiang Gucheng District Qiu Cheng Breeding Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lijiang Gucheng District Qiu Cheng Breeding Co Ltd filed Critical Lijiang Gucheng District Qiu Cheng Breeding Co Ltd
Priority to CN201811004746.4A priority Critical patent/CN109220790B/zh
Publication of CN109220790A publication Critical patent/CN109220790A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109220790B publication Critical patent/CN109220790B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种红果参离体外繁方法，首先进行愈伤组织诱导，将消毒灭菌处理后红果参外植体接种于MS基本培养基A中培养后有愈伤组织出现，将愈伤组织切割转接至MS基本培养基B中培养，愈伤组织不断增殖，且表面分化出丛生芽，将丛生芽切割转接至MS基本培养基C中；将丛生芽按40d的生长周期轮流接入MS基本培养基B与MS基本培养基C，作为红果参丛生芽分化和增殖的培养方式，反复继代增殖3～4代，得到种苗；取种苗中高3‑4cm的健壮主苗接种于MS基本培养基D中培养获得苗壮根粗的生根苗；取生根苗置于室温下炼苗移栽至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，生长30d后，即得生根移栽苗。本发明的有益效果是红果参繁殖方法成本低、繁殖周期短、质量和成活率高。

Description

一种红果参离体外繁方法
技术领域
本发明属于中草药繁殖技术领域，涉及一种红果参离体外繁方法。
背景技术
红果参学名长叶轮钟草[Campanumoealancifolia(Roxb.)Merr.]，为桔梗科(Campanulaceae)金钱豹属(Campanumoea)多年生植物，别名肉算盘、山荸荠，主要分布在东南亚部分国家，在我国仅产长江以南的部分地区，生长于海拔300～1800m的草坡、沟边或林中，为药食两用植物，同时也具有很强的观赏性。红果参以根入药，味甘、微苦、性平，具有补虚益气，祛痰止痛的功效，主治劳倦气虚乏力，跌打损伤，肠绞痛等。红果参果实亦可食用，主含多糖、天然纤维、粗蛋白、粗脂肪和矿质素等，多糖含量高达45.80％，其多糖能很好的清除羟基自由基和超氧阴离子自由基，对油脂的氧化有明显的抑制作用。
红果参通常以种子为繁殖单位，但其种子苗生长缓慢、后代变异大，并受到萌发季节的限制，难以进行规模化、标准化(基因型背景一致)种植和优质品种的大面积推广。因此，需要寻求一种新的成本低、时间短、质量和成活率高，且能将优良性状固定下来的无性繁殖方法来扩大红果参种苗的繁殖量，进行红果参高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种红果参离体外繁方法，解决了红果参种子苗生长缓慢、并受到萌发季节的限制，难以进行规模化繁殖的问题。
本发明所采用的技术方案是按照以下步骤进行：
步骤1：愈伤组织诱导
将消毒灭菌处理后红果参外植体接种于MS基本培养基A中：
MS基本培养基A配方如下
培养条件：在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下进行愈伤组织诱导，培养15d后有愈伤组织出现，质地紧密，颜色翠绿，30d后愈伤组织膨大；
步骤2：丛芽发生和增殖同步培养
将步骤1中培养的愈伤组织切割为0.5～1.0cm2大小，转接至MS基本培养基B中：
MS基本培养基B配方
在光照度1500-2000lx，光照时间10h/d，温度控制在20±1℃的条件下，培养10d后愈伤组织不断增殖，且表面分化出丛生芽，待丛生芽生长旺盛时，将丛生芽切割为3～5芽一丛转接至MS基本培养基C中；
MS基本培养基C配方
蔗糖 30000mg/L
琼脂粉 4800mg/L
pH 5.4～5.8
在光照度1500-2000lx，光照时间10h/d，温度控制在20±1℃的条件下，丛生芽生长良好；
步骤3：将丛生芽按40d的生长周期轮流接入MS基本培养基B与MS基本培养基C，作为红果参丛生芽分化和增殖的培养方式，反复继代增殖3～4代，得到增殖苗；
步骤4：取种苗中高3-4cm的健壮主苗接种于MS基本培养基D中：
MS基本培养基D配方
培养条件：在光照度1500-2000lx，光照时间10h/d，温度控制在20±1℃的条件下，培养30d获得苗壮根粗的生根苗；
步骤5：取6-8cm高的生根苗置于室温下炼苗7d后，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0.1-0.2％的多菌灵溶液中消毒2-3min，后移栽至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，保持温度在20～25℃左右、湿度在75％～95％之间，生长30d后，即得生根移栽苗。
进一步，步骤1中消毒灭菌处理方法为：先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再放到流水下冲洗2h后，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒60s，再用质量百分比为0.1％的HgCl2灭菌6min，最后用无菌水冲洗若干次后放在无菌滤纸上吸干表面水分，最终得到消毒灭菌处理的外植体。
进一步，步骤1中红果参外植体为生长健壮的野生植株带芽茎段，按1.5-2.0cm长度切取。
本发明的有益效果是红果参繁殖方法成本低、繁殖周期短、质量和成活率高。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
实施例1：
1、外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形的健壮植株，取其茎尖下第3-5节茎段，用手术刀切割为约2-3cm长。
2、将1步骤的带芽茎段先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再放到流水下冲洗2h后，置于超净工作台上用75％(体积比)酒精消毒60s，再用0.1％HgCl2(质量比)灭菌6min，最后用无菌水冲洗8次后放在无菌滤纸上吸干表面水分。在整个消毒过程中充分摇动器皿。
3、愈伤组织诱导：将经过2步骤消毒灭菌好的带芽茎段为材料，切割为1.5-2.0cm长，接入下列MS基本培养基A中：
在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在21℃的条件下，外植体培养15d后有愈伤组织出现，质地紧密，颜色翠绿，30d后愈伤组织膨大。
4、丛芽发生和增殖同步培养：将步骤3中培养的愈伤组织转入MS基本培养基B中：
在光照度1500-2000lx，光照时间10h/d，温度控制在21℃的条件下，培养10d后愈伤组织不断增殖，且表面分化出丛生芽。
5、优化培养：将步骤4中培养的丛生芽切割为3～5芽一丛转接至MS基本培养基C中。
蔗糖 30000mg/L
琼脂粉 4800mg/L
pH 5.6
在光照度1500-2000lx，光照时间10h/d，温度控制在21℃的条件下，且丛生芽生长良好。
6、将丛生芽丛按40d的生长周期轮流接入MS基本培养基B与MS基本培养基C，各培养40d，得到种苗，平均繁殖系数亦达12.0以上；在本步骤中可大量繁殖至生产所需的种苗基数。
7、取6步骤种苗中高3-4cm的健壮主苗接种于MS基本培养基D中：
在光照度1500-2000lx，光照时间10h/d，温度控制在21℃的条件下，培养30d后获得苗壮根粗的生根苗，其生根率可达100％。
8、炼苗和移栽：取7步骤长至6cm高的生根苗，连培养瓶一起置于室温下炼苗7d后，打开瓶盖，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0.1％的多菌灵溶液中消毒2min后，移栽至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，保持温度在20℃左右、湿度在85％％生长30d后，即得移栽苗，成活率可达96％。
本发明提供的红果参繁殖方法成本低、繁殖周期短、质量和成活率高，这种能将优良性状固定下来的无性繁殖方法可以用来扩大红果参种苗的繁殖量，进行红果参高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。本发明优点还在于：
1、用组织培养技术在培养室内好可实现周年生产，既节约了土地资源，又提高了经济效益，克服了传统繁殖方式无法周年进行生产的难点。
2、实现了高效快繁的目的，35-45d为一个培养周期，繁殖系数可达12.0以上。3、解决了红果参快速繁殖中愈伤组织多样且难以分化丛芽的问题，提高了种苗质量。
4、解决了传统种子繁殖后代分离大、性状不稳定而导致的种苗品质不一的难题，通过本发明，可使所有种苗保持同一基因型背景，易于标准化、工厂化操作，有效地提高了种苗质量，可为大面积推广种植提供统一标准的优良种苗。
5、对红果参快速繁殖体系进行了优化，轮流使用丛生芽诱导与增殖培养基和空白MS培养基，以丛生芽诱导与增殖培养基同时进行丛芽发生和增殖培养，以空白培养基保持丛芽分化，获得丛芽的快速增殖。整个快速繁殖过程所需培养基简单，完全解决了从愈伤组织、丛芽发生和增殖以及生根问题，利于安排生产计划。
以上所述仅是对本发明的较佳实施方式而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

Claims (3)

1.一种红果参离体外繁方法，其特征在于按照以下步骤进行：
步骤1：愈伤组织诱导
将消毒灭菌处理后红果参外植体接种于MS基本培养基A中：
MS基本培养基A配方如下
培养条件：在光照度1500-2000lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下进行愈伤组织诱导，培养15d后有愈伤组织出现，质地紧密，颜色翠绿，30d后愈伤组织膨大；
步骤2：丛芽发生和增殖同步培养
将步骤1中培养的愈伤组织切割为0.5～1.0cm2大小，转接至MS基本培养基B中：
MS基本培养基B配方
在光照度1500-2000lx，光照时间10h/d，温度控制在20±1℃的条件下，培养10d后愈伤组织不断增殖，且表面分化出丛生芽，待丛生芽生长旺盛时，将丛生芽切割为3～5芽一丛转接至MS基本培养基C中；
MS基本培养基C配方
蔗糖 30000mg/L
琼脂粉 4800mg/L
pH 5.4～5.8
在光照度1500-2000lx，光照时间10h/d，温度控制在20±1℃的条件下，丛生芽生长良好；
步骤3：将丛生芽按40d的生长周期轮流接入MS基本培养基B与MS基本培养基C，作为红果参丛生芽分化和增殖的培养方式，反复继代增殖3～4代，得到增殖苗；
步骤4：取种苗中高3-4cm的健壮主苗接种于MS基本培养基D中：
MS基本培养基D配方
培养条件：在光照度1500-2000lx，光照时间10h/d，温度控制在20±1℃的条件下，培养30d获得苗壮根粗的生根苗；
步骤5：取6-8cm高的生根苗置于室温下炼苗7d后，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0.1-0.2％的多菌灵溶液中消毒2-3min，后移栽至消毒后的腐殖质中保温保湿培养，保持温度在20～25℃左右、湿度在75％～95％之间，生长30d后，即得生根移栽苗。
2.按照权利要求1所述一种红果参离体外繁方法，其特征在于：所述步骤1中消毒灭菌处理方法为：先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再放到流水下冲洗2h后，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒60s，再用质量百分比为0.1％的HgCl2灭菌6min，最后用无菌水冲洗若干次后放在无菌滤纸上吸干表面水分，最终得到消毒灭菌处理的外植体。
3.按照权利要求1所述一种红果参离体外繁方法，其特征在于：所述步骤1中红果参外植体为生长健壮的野生植株带芽茎段，按1.5-2.0cm长度切取。
CN201811004746.4A 2018-08-30 2018-08-30 一种红果参离体外繁方法 Active CN109220790B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811004746.4A CN109220790B (zh) 2018-08-30 2018-08-30 一种红果参离体外繁方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811004746.4A CN109220790B (zh) 2018-08-30 2018-08-30 一种红果参离体外繁方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109220790A true CN109220790A (zh) 2019-01-18
CN109220790B CN109220790B (zh) 2022-03-08

Family

ID=65069153

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811004746.4A Active CN109220790B (zh) 2018-08-30 2018-08-30 一种红果参离体外繁方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109220790B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109566417A (zh) * 2019-01-25 2019-04-05 徐州生物工程职业技术学院 一种虫草参的组织培养方法
CN110338020A (zh) * 2019-08-28 2019-10-18 丽江市古城区秋成种养殖有限公司 一种红果参组培苗大田种植方法
CN113519394A (zh) * 2021-07-15 2021-10-22 云南中医药大学 一种红果参多倍体诱导及多倍体植株的高效人工育苗方法
CN115943889A (zh) * 2023-03-14 2023-04-11 云南省农业科学院药用植物研究所 利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101057559A (zh) * 2007-06-07 2007-10-24 株洲千金药业股份有限公司 芸香科花椒属植物单面针的人工快速繁殖方法
CN104920218A (zh) * 2015-06-16 2015-09-23 云南中医学院 地皮消的繁殖方法
CN105961201A (zh) * 2016-05-16 2016-09-28 玉溪市六合农业科技发展有限公司 草莓移栽苗组培方法
CN107182780A (zh) * 2017-04-28 2017-09-22 玉溪市祥馨农业技术开发有限公司 滇黄精的育苗方法
CN107864865A (zh) * 2017-12-26 2018-04-03 丽江市古城区秋成种养殖有限公司 一种红果参组培苗的高效炼苗技术及驯化栽培方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101057559A (zh) * 2007-06-07 2007-10-24 株洲千金药业股份有限公司 芸香科花椒属植物单面针的人工快速繁殖方法
CN104920218A (zh) * 2015-06-16 2015-09-23 云南中医学院 地皮消的繁殖方法
CN105961201A (zh) * 2016-05-16 2016-09-28 玉溪市六合农业科技发展有限公司 草莓移栽苗组培方法
CN107182780A (zh) * 2017-04-28 2017-09-22 玉溪市祥馨农业技术开发有限公司 滇黄精的育苗方法
CN107864865A (zh) * 2017-12-26 2018-04-03 丽江市古城区秋成种养殖有限公司 一种红果参组培苗的高效炼苗技术及驯化栽培方法

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109566417A (zh) * 2019-01-25 2019-04-05 徐州生物工程职业技术学院 一种虫草参的组织培养方法
CN109566417B (zh) * 2019-01-25 2022-02-22 徐州生物工程职业技术学院 一种虫草参的组织培养方法
CN110338020A (zh) * 2019-08-28 2019-10-18 丽江市古城区秋成种养殖有限公司 一种红果参组培苗大田种植方法
CN110338020B (zh) * 2019-08-28 2021-08-06 丽江市古城区秋成种养殖有限公司 一种红果参组培苗大田种植方法
CN113519394A (zh) * 2021-07-15 2021-10-22 云南中医药大学 一种红果参多倍体诱导及多倍体植株的高效人工育苗方法
CN113519394B (zh) * 2021-07-15 2022-06-21 云南中医药大学 一种红果参多倍体诱导及多倍体植株的高效人工育苗方法
CN115943889A (zh) * 2023-03-14 2023-04-11 云南省农业科学院药用植物研究所 利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法
CN115943889B (zh) * 2023-03-14 2023-05-05 云南省农业科学院药用植物研究所 利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN109220790B (zh) 2022-03-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101822220B (zh) 一种春兰名品茎尖组织培养快速繁殖方法
CN109220790A (zh) 一种红果参离体外繁方法
CN105532448B (zh) 一种滇黄精组织培养的方法
CN105638477A (zh) 一种竹叶石斛种子快速繁殖方法
CN105104207A (zh) 一种通过花药培养获得甜叶菊再生植株的方法
CN101983557B (zh) 檀香种胚苗茎段的离体快速繁殖方法
CN102499088B (zh) 一种利用广西金线莲蒴果快速繁育其种苗的方法
CN113519394B (zh) 一种红果参多倍体诱导及多倍体植株的高效人工育苗方法
CN104396742B (zh) 用五步法诱导淡黄花百合珠芽愈伤组织再分化出无菌苗的方法
CN102090327A (zh) 三叶木通果种苗试管快速繁殖方法
CN101897297B (zh) 一种萱草组织培养两步成苗的快繁方法
CN100431407C (zh) 明日叶的组织培养和快速繁殖方法
CN104137779A (zh) 一种白木乌桕茎段快速诱导再生植株的方法
CN106305427A (zh) 一种茶条槭组织培养快速繁殖的方法
CN108419678A (zh) 一种砂质植物组织培养基及其制备方法与应用
CN104920218B (zh) 地皮消的繁殖方法
CN104604680B (zh) 能够促进白芨种子萌发和幼苗生长的培养基及其配方和制备方法
CN105766657A (zh) 一种金龙胆草组织培养方法
CN113598046B (zh) 一种粗叶榕高效组培繁育方法
CN101595845B (zh) 圆齿野鸦椿离体胚培养及植株再生方法
CN107743868A (zh) 一种利用自然光培养一步成苗高效繁殖金线莲的方法
CN101120654B (zh) 一种芡欧鼠尾草的组织培养方法
CN112616663A (zh) 一种大幅度缩短兰州百合种植周期和种苗快速繁殖的方法
CN104082147B (zh) 细柱五加的离体快速繁殖方法
CN106717303A (zh) 一种防止病虫害的甘蔗育种方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant