CN110521598B - 一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的叶片外植体接种于培养基中，进行愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖、生根诱导、炼苗移栽。本发明对西番莲杂交种种苗的生产工艺进行了优化调整，同步进行愈伤组织生长、丛芽发生和丛芽增殖，简化了组培过程，3个培养过程同时在一个培养基中进行，大大提高了繁殖效率。此外，本发明解决了西番莲属植物组织培养过程中易发生的植株黄化、落叶等现象，且成本低、周期短、质量和成活率高。

Description

一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法。
背景技术
西番莲(Passiflora coerulea L.)，又名百香果、鸡蛋果、巴西果，为西番莲科(Passifloraceae)西番莲属(Passiflora)多年生草质到半木质藤本攀缘性热带及亚热带植物；原产于南美洲巴西至阿根廷一带，我国主要分布于台湾、广东、福建、广西、浙江、四川、云南等省区。西番莲四季常青，花色艳丽，花瓣5枚，淡绿色，外副花冠裂片丝状，内副花冠流苏状，其果实为浆果卵圆球形至近圆球形，熟时橙黄色或黄色，耐贮运，口感好，具“果汁之王”的美誉。
西番莲为异花授粉植物，自然群体中具有高度的异质性。西番莲传统上主要以种子和扦插方式进行繁殖，种子实生苗存在萌发率低、缓苗期较长、成活率低、性状分离大、健壮度不高等问题；而扦插苗亦存在周期长和成活率低等问题，且长期无性繁殖容易造成病毒积累，致使西番莲种性退化，品种质量下降，产量逐年降低。这些不利因素制约了西番莲种植业和加工业的发展，使我国西番莲在国际上毫无市场竞争力。云南西双版纳曼飞龙农场在以本地紫色种(P.edulis S.)为父本，台湾黄色种(P.edulis F.)为母本的杂交F1代中，筛选出抗病性强、具自交亲和性、果实紫红色、座果率达70％以上，且果汁香味浓烈、甜度高等特点的杂交种(尚未申请新品种)；但该品种具很大的不稳定性，无法以有性生殖的方法固定上述优良性状。西番莲各品种的组织培养报道很多，但在繁殖系数和周期、瓶苗黄化及落叶、移栽成活率及较高成本方面仍存在一些问题，使组培苗的整体应用仍处于较低水平。因此，需要寻求一种新的成本低、时间短、质量和成活率高，无黄化落叶且能将优良性状固定下来的无性繁殖方法来扩大西番莲尤其是优质杂交种种苗的繁殖量，进行高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。
发明内容
本发明的目的在于解决上述现有繁殖技术存在的缺陷，提供一种能够提高西番莲优质杂交种快速繁殖效率的方法，该方法为固定杂交优质品种性状、发展人工种植奠定了技术基础。通过本发明，可提供基因型背景一致的优质种苗以满足人工种植的需求。
为了解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种西番莲优质杂交种的高效率人工快繁新方法，包括的步骤有：将消毒灭菌处理后的叶片外植体接种于培养基中，进行愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖、生根诱导、炼苗移栽。
进一步地，所述的西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，包括以下步骤：
(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形果的健壮杂交F1代植株，取其当年生叶片；
(2)将1步骤的叶片进行消毒处理；
(3)愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖：将经过2步骤消毒灭菌好的叶片为材料，以平放的方式接入下列培养基A中，所述A培养基，包括以下原料：
OM基本培养液
6-苄胺基嘌呤(6-BA)
吲哚丁酸(IBA)
激动素(KT)
蔗糖
琼脂粉
控制光照度、温度、光照时间的条件下进行愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖；
(4)优化培养：在步骤3培养基中继代增殖3代后，将步骤3中培养的增殖苗转入下列培养基B中，所述B培养基，包括以下原料：
改良的OM基本培养液
6-苄胺基嘌呤(6-BA)
吲哚丁酸(IBA)
激动素(KT)
蔗糖
琼脂粉
控制光照度、温度、光照时间的条件下进行优化培养；
(5)将增殖芽丛按生长周期轮流接入3和4步骤培养基中，在保持增殖系数的同时又有效抑制了玻璃化苗的发生，其中，培养基A和培养基B轮流使用，在本步骤中可大量繁殖至生产所需的种苗基数；
(6)取5步骤丛芽中的健壮主苗接种于下列培养基C中，所述C培养基，包括以下原料：
OM基本培养液
吲哚丁酸(IBA)
蔗糖
琼脂粉
控制光照度、温度、光照时间的条件下进行培养，即可获得苗壮根粗的生根苗；
(7)炼苗和移栽：取步骤6中的生根植株置于室温下炼苗，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入多菌灵溶液中消毒，后移栽至经消毒的沙土基质中保温保湿培养，即得移栽苗。
进一步地，步骤2中所述叶片进行消毒处理的方法为：用自来水清洗表面灰尘和杂物，再用10％洗衣粉溶液浸泡10min并轻微震荡搅动后流水冲洗30min，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒15s，再用质量百分比为0.1％的HgCl2灭菌4min，最后无菌水冲洗5-6次，每次不低于3min，在整个消毒过程中充分摇动器皿。
进一步地，步骤3中所述A培养基，包括以下原料：
OM(Olive medium)基本培养液：
大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L
钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L
铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L
有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L
微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L
Figure BDA0002199240940000041
进一步地，所述A培养基的pH值为5.6-5.8。
进一步地，步骤4中所述B培养基，包括以下原料：
改良的OM基本培养液：将铁盐成份增加为原来的2.0倍，其余成分不变其中OM(Olive medium)基本培养液如下：
大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L
钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L
铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L
有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L
微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L
Figure BDA0002199240940000042
进一步地，所述B培养基的pH值为5.6-5.8。
进一步地，步骤6中所述C培养基，包括以下原料：
OM基本培养液
大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L
钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L
铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L
有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L
微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L
吲哚丁酸(IBA) 0.5-1.0mg/L
蔗糖 20000mg/L
琼脂粉 5000mg/L
进一步地，所述C培养基的pH值为5.6-5.8pH。
进一步地，所述多菌灵溶液的质量浓度为0.1-0.2％。
本发明具有以下有益效果：
(1)本发明用组织培养技术在培养室内好可实现周年生产，既节约了土地资源，又提高了经济效益，克服了传统繁殖方式无法周年进行生产的难点；
(2)本发明实现了高效快繁的目的，30d为一个增殖培养周期，繁殖系数可达7.5以上；
(3)本发明用两种培养基交替使用的方法，解决了西番莲属植物快速繁殖中易出现的黄化落叶现象，提高了种苗质量；
(4)本发明解决了传统种子繁殖后代分离大、性状不稳定而导致的种苗品质不一的难题，通过本发明，可使所有种苗保持同一基因型背景，易于标准化、工厂化操作，有效地提高了种苗质量，可为大面积推广种植提供统一标准的优良种苗；
(5)本发明对西番莲杂交种快速繁殖体系进行了优化，在同一培养基中，可同时进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖培养，简化了培养程序；整个快速繁殖过程只需3种培养基就解决了从愈伤组织、丛芽发生和增殖、克服黄化落叶现象以及生根问题，利于安排生产计划；
(6)本发明生根瓶苗移栽成活率高，且生长迅速，目前已在云南省云南西双版纳曼飞龙农场进行示范推广栽培，效果很好；
(7)本发明对西番莲杂交优质品种离体快速繁殖和遗传改良具有重要意义和价值，同时也可为其他西番莲品种的体外快繁提供技术参考。
附图说明
图1为愈伤组织诱导和不定芽发生各个生长阶段的图；
其中图1-A为叶片边缘出现愈伤组织图；图1-B为愈伤组织明显增殖图；图1-C为愈伤组织上分化出大量不定芽点图；图-D、E为1-2个不定芽点成小植株后，愈伤分化出更多不定芽点图；图1-F为不定芽生长迅速图；图G为愈伤组织产生3-5d后，直接出现的单株不定芽图；图1-H为随着单株不定芽的生长，其基部出现类似“分蘗苗”的现象图。
图2为叶片黄化现象及优化培养后的图。
其中图2-A为OM培养基中的黄化现象图；图2-B为MS培养基中的黄化现象图；图2-C为OM中添加1.0倍铁盐的生长情况图；图2-D为OM中添加2.0倍铁盐的生长情况图。
图3为生根与移栽图
其中图3-A、B为瓶内生根苗图；图3-C、D为移栽苗图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，包括以下步骤：
1、外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形果的健壮杂交F1代植株，取其当年生叶片。
2、将1步骤的叶片先用自来水清洗表面灰尘和杂物，再用10％洗衣粉溶液(质量比)浸泡10min并轻微震荡搅动后流水冲洗30min，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒15s，再用质量百分比为0.1％的HgCl2灭菌4min，最后无菌水冲洗5次，每次3min。在整个消毒过程中充分摇动器皿。
3、愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖：将经过2步骤消毒灭菌好的叶片为材料，按0.5×0.5cm大小切取，以平放的方式接入下列培养基A中：
OM(Olive medium)基本培养液：
大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L
钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L
铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L
有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L
微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L
Figure BDA0002199240940000071
培养条件：在光照度2000-2500lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下进行愈伤组织诱导，7d叶片外植体边缘即出现愈伤组织；14d后愈伤组织明显增多，此时，出愈率便已达100％；21d左右愈伤组织上开始出现较多绿色不定芽点；培养30d待致密芽点出现后，按0.5×0.5cm大小包含若干芽点为一丛切割，转接至相同的新鲜培养基A中继续培养30d，丛生芽生长为增殖芽，此时繁殖系数可达8.58。
4、优化培养：在步骤3培养基中继代增殖3代后，增殖苗出现较明显的黄化与落叶现象，严重影响瓶苗质量和繁殖系数，因此，将步骤3中培养的增殖苗转入下列培养基B中：
改良的OM基本培养液：将铁盐成份的用量增加为原来的2.0倍，其余成分不变
其中OM(Olive medium)基本培养液如下：
大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L
钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L
铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L
有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L
微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L
Figure BDA0002199240940000081
培养条件：在光照度2000-2500lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下，瓶苗黄化与落叶得到明显改善，但繁殖系数有所下降，为7.36。
5、将增殖芽丛按生长周期轮流接入3和4步骤培养基中，在保持增殖系数的同时又有效抑制了玻璃化苗的发生，其中，培养基A和培养基B轮流使用，各培养30d，平均繁殖系数亦达7.85；在本步骤中可大量繁殖至生产所需的种苗基数。
6、取5步骤丛芽中高3-4cm的健壮主苗接种于下列培养基中：
OM基本培养液
大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L
钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L
铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L
有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L
微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L
Figure BDA0002199240940000091
培养条件：在光照度2000-2500lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下培养45d后即可获得苗壮根粗的生根苗。
7、炼苗和移栽：取步骤6中6cm高的生根植株置于室温下炼苗3d后，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0.1％的多菌灵溶液中消毒3min，后移栽至经高温消毒的沙土基质中保温保湿培养40d后，即得移栽苗，成活率可达90％。
实施例2
一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，包括以下步骤：
1、外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形果的健壮杂交F1代植株，取其当年生叶片。
2、将1步骤的叶片先用自来水清洗表面灰尘和杂物，再用10％洗衣粉溶液(质量比)浸泡10min并轻微震荡搅动后流水冲洗30min，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒15s，再用质量百分比为0.1％的HgCl2灭菌4min，最后无菌水冲洗6次，每次3min。在整个消毒过程中充分摇动器皿。
3、愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖：将经过2步骤消毒灭菌好的叶片为材料，按0.5×0.5cm大小切取，以平放的方式接入下列培养基A中：
OM基本培养液
大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L
钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L
铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L
有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L
微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L
Figure BDA0002199240940000101
培养条件：在光照度2000-2500lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下进行愈伤组织诱导，7d叶片外植体边缘即出现愈伤组织；14d后愈伤组织明显增多，此时，出愈率便已达100％；21d左右愈伤组织上开始出现较多绿色不定芽点；培养30d待致密芽点出现后，按0.5×0.5cm大小包含若干芽点为一丛切割，转接至相同的新鲜培养基A中继续培养30d，丛生芽生长为增殖芽，此时繁殖系数可达9.15。
4、优化培养：在步骤3培养基中继代增殖4代后，增殖苗出现较明显的黄化与落叶现象，严重影响瓶苗质量和繁殖系数，因此，将步骤3中培养的增殖苗转入下列培养基B中：
改良的OM基本培养液：将铁盐成份的用量增加为原来的2.0倍，其余成分不变
其中OM(Olive medium)基本培养液如下：
大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L
钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L
铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L
有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L
微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L
Figure BDA0002199240940000111
培养条件：在光照度2000-2500lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下，瓶苗黄化与落叶得到明显改善，但繁殖系数有所下降，为7.18。
5、将增殖芽丛按生长周期轮流接入3和4步骤培养基中，在保持增殖系数的同时又有效抑制了玻璃化苗的发生，其中，培养基A和培养基B轮流使用，各培养30d，平均繁殖系数亦达8.10；在本步骤中可大量繁殖至生产所需的种苗基数。
6、取5步骤丛芽中高4cm的健壮主苗接种于下列培养基中：
OM基本培养液
大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L
钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L
铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L
有机成份：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L
微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L
Figure BDA0002199240940000121
培养条件：在光照度2000-2500lx，光照时间12h/d，温度控制在22±1℃的条件下培养45d后即可获得苗壮根粗的生根苗。
7、炼苗和移栽：取步骤6中6-8cm高的生根植株置于室温下炼苗3d后，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入质量浓度0.2％的多菌灵溶液中消毒2min，后移栽至经高温消毒的沙土基质中保温保湿培养40d后，即得移栽苗，成活率可达92％。
本发明的技术原理：
1、本发明用组织培养技术在培养室内好可实现周年生产，既节约了土地资源，又提高了经济效益，克服了传统繁殖方式无法周年进行生产的难点。
2、本发明实现了高效快繁的目的，30d为一个增殖培养周期，繁殖系数可达7.5以上。
3、本发明用两种培养基交替使用的方法，解决了西番莲属植物快速繁殖中易出现的黄化落叶现象，提高了种苗质量。
4、本发明解决了传统种子繁殖后代分离大、性状不稳定而导致的种苗品质不一的难题，通过本发明，可使所有种苗保持同一基因型背景，易于标准化、工厂化操作，有效地提高了种苗质量，可为大面积推广种植提供统一标准的优良种苗。
5、本发明对西番莲杂交种快速繁殖体系进行了优化，在同一培养基中，可同时进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖培养，简化了培养程序；整个快速繁殖过程只需3种培养基就解决了从愈伤组织、丛芽发生和增殖、克服黄化落叶现象以及生根问题，利于安排生产计划。
6、本发明提供的西番莲杂交种高效人工繁殖方法成本低、时间短、质量和成活率高，且能将优良性状固定下来；通过该方法可用来扩大西番莲优质杂交种种苗的繁殖量，从而进行高品质种苗的工厂化生产，以满足种植需求。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (6)

1.一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)外植体的获取：选择生长势好、无病虫害、无畸形果的健壮杂交F1代植株，取其当年生叶片；
(2)将步骤(1)的叶片进行消毒处理；
(3)愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖：将经过步骤(2)消毒灭菌好的叶片为材料，以平放的方式接入下列培养基A中，所述培养基A，包括以下原料：
OM基本培养液
6-苄氨基嘌呤 1.5-2.0 mg/L
吲哚丁酸 0.3-0.5 mg/L
激动素 1.0-1.5 mg/L
蔗糖 20000 mg/L
琼脂粉 5000 mg/L；
控制光照度、温度、光照时间的条件下进行愈伤组织诱导、丛生芽发生和增殖；
(4)优化培养：在步骤(3)培养基中继代增殖3代后，将步骤(3)中培养的增殖苗转入下列培养基B中，所述培养基B，包括以下原料：
改良的OM基本培养液：将铁盐成分增加为原来的2.0倍，其余成分不变
6-苄氨基嘌呤 1.5-2.0 mg/L
吲哚丁酸 0.3-0.5 mg/L
激动素 1.0-1.5 mg/L
蔗糖 20000 mg/L
琼脂粉 5000 mg/L；
控制光照度、温度、光照时间的条件下进行优化培养；
(5)将增殖芽丛按生长周期轮流接入步骤(3)和步骤(4)培养基中，在保持增殖系数的同时又有效抑制了植株黄化落叶的现象；其中，培养基A和培养基B轮流使用，在本步骤中大量繁殖至生产所需的种苗基数；
(6)取步骤(5)丛芽中的健壮主苗接种于下列培养基C中，所述培养基C，包括以下原料：
OM基本培养液
吲哚丁酸 0.5-1.0mg/L
蔗糖 20000mg/L
琼脂粉 5000mg/L；
控制光照度、温度、光照时间的条件下进行培养，即可获得苗壮根粗的生根苗；
(7)炼苗和移栽：取步骤(6)中的生根植株置于室温下炼苗，从培养基中取出幼苗，将残留培养基清洗干净，放入多菌灵溶液中消毒，后移栽至经消毒的沙土基质中保温保湿培养，即得移栽苗；
其中，OM基本培养液的组分为：
大量元素：硝酸钾:1772mg/L；硝酸铵:412.5mg/L；7水合硫酸镁:731mg/L；磷酸二氢钾:340mg/L
钙盐：4水合硝酸钙:1300mg/L
铁盐：7水合硫酸亚铁:27.8mg/L；乙二胺四乙酸二钠:37.5mg/L
有机成分：肌醇：100mg/L；甘氨酸：2.0mg/L；盐酸硫胺素：0.5mg/L；盐酸吡哆醇：0.5mg/L；烟酸：5.0mg/L；生物素：0.05mg/L；叶酸：0.5mg/L；谷氨酰胺：1178mg/L
微量元素：4水合硫酸锰：16.9mg/L；硼酸：12.4mg/L；7水合硫酸锌：14.3 mg/L；2水合钼酸钠：0.25mg/L；5水合硫酸铜：0.25mg/L；6水合氯化钴：0.02mg/L；碘化钾：0.83mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，其特征在于，步骤(2)中所述叶片进行消毒处理的方法为：用自来水清洗表面灰尘和杂物，再用质量比为10％洗衣粉溶液浸泡10min并轻微震荡搅动后流水冲洗30min，置于超净工作台上用体积比为75％的酒精消毒15s，再用质量百分比为0.1％的HgCl2灭菌4min，最后无菌水冲洗5-6次，每次不低于3min，在整个消毒过程中充分摇动器皿。
3.根据权利要求1所述的一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，其特征在于，所述培养基A的pH值为5.6-5.8。
4.根据权利要求1所述的一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，其特征 在于，所述培养基B的pH值为5.6-5.8。
5.根据权利要求1所述的一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，其特征在于，所述培养基C的pH值为5.6-5.8。
6.根据权利要求1所述的一种西番莲优质杂交种的高效人工育苗方法，其特征在于，所述多菌灵溶液的质量浓度为0.1-0.2％。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104920218A (zh) * 2015-06-16 2015-09-23 云南中医学院 地皮消的繁殖方法
CN105794640A (zh) * 2016-03-29 2016-07-27 柳州嘉沃农业科技有限公司 一种黄金百香果组织培养育苗的方法
CN109874670A (zh) * 2019-02-22 2019-06-14 广西福桐林业科技有限公司 一种百香果快速组培方法
CN110073977A (zh) * 2019-05-15 2019-08-02 福建农林大学 黄金百香果叶片诱导分化成苗方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104920218A (zh) * 2015-06-16 2015-09-23 云南中医学院 地皮消的繁殖方法
CN105794640A (zh) * 2016-03-29 2016-07-27 柳州嘉沃农业科技有限公司 一种黄金百香果组织培养育苗的方法
CN109874670A (zh) * 2019-02-22 2019-06-14 广西福桐林业科技有限公司 一种百香果快速组培方法
CN110073977A (zh) * 2019-05-15 2019-08-02 福建农林大学 黄金百香果叶片诱导分化成苗方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
In vitro culture of adult and juvenile bud explants of Passiflora species;Roderick A. Drew;《Plant Cell, Tissue and Organ Culture》;19910731;第26卷;23-27 *
Induction and Morpho-Ultrastructural Analysis of Organogenic Calli of a Wild Passionfruit;Milene Alves de Figueiredo Carvalho等;《Brazilian Archives of Biology and Technology》;20141231;第57卷(第6期);851-859 *
百香果的组织培养研究;史沉鱼、潘大庆、覃国乐;《大众科技》;20170430;第19卷(第4期);74-76 *

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