CN109874670A - 一种百香果快速组培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明一种百香果快速组培方法，包括获取外植体及预处理、初代诱导、继代培养、生根培养、壮芽培养及炼苗移栽工序。本发明通过对百香果外植体及预处理、初代诱导、继代培养、生根培养、壮芽培养等各项因素及培养方式的筛选，并采用适宜的炼苗、育苗措施，建立了百香果组培快繁技术体系，具有育苗周期短、成活率高、芽增殖系数高、易生根种苗健壮、无病毒等优点，为百香果组培工厂化育苗提供了技术支撑，对于推动百香果产业的发展具有重要意义。
Description
技术领域
本发明涉及百香果繁殖技术领域，具体是一种百香果快速组培方法。
背景技术
百香果（Passiflora edulia Sims），又称西番莲 ，是西番莲科西番莲属的草质藤本植物 ，原产于南美洲巴西 ，现广植于热带和亚热带地区 ，在我国台湾地区和福建、广东、海南、广西、云南、四川等省均有种植 。 百香果的果汁色、香、味俱佳，营养丰富 ，含有人体必需的17种氨基酸及多种维生素 、微量元素等有益成分，具有美容养颜 、助消化、 抗衰老、 排毒、清热等功效 ，受到广大消费者的喜爱。 随着人们对百香果营养价值认识的加深 ，百香果消费量逐年提高 ，种植面积不断扩大，使得种苗繁殖满足不了生产发展的需要。
百香果属蔓径性果树，适宜于温暖、全年无冻害天气的北纬24 度以南的地区种植。百香果的繁殖方法主要有2 种，一是用种子直接播种繁殖，二是用蔓条扦插繁殖。用种子直接播种繁殖易引起杂种分离，存在着品质偏酸、甜度不够、产量不高的问题；而不加选择地随意扦插繁殖，加快了品种的退化，病害增加，特别容易感染茎腐病，产量大大降低。
植物组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。组织培养育苗已成为经济作物的重要育苗方法。组织培养的优点为繁殖速度快、繁殖系数大，种苗无病毒；用试管快繁技术繁殖, 可节约繁殖材料，繁殖后代整齐一致,能保持原有品种的优良性状。因此，通过组织培养可获得大量的统一规格、高质量的苗木，苗木商品性好，但也存在生产成本较高、组培苗炼苗难、移栽成活率较低等问题。目前也有采用组织培养繁殖百香果的方法，如中国专利CN 105794640 B公开了一种黄金百香果组织培养育苗的方法，该方法通过获取外植体、丛生芽诱导培养、继代增殖培养、炼苗、分割试管苗、试管苗消毒、试管苗移植和生根管理等步骤。该方法育苗速度快，生根率高，种苗成活率大于95%，种苗无病虫害，且操作简单，成
本低廉。但也存在芽增殖系数低，种苗不够壮，组培苗炼苗难、种苗生长较慢等不足。
发明内容
本发明针对现有百香果繁殖存在的问题，提供育苗周期短、成活率高、芽增殖系数高、易生根种苗健壮、容易炼苗的百香果快速组培方法。
为了实现以上目的，本发明采用的技术方案如下：
一种百香果快速组培方法，包括获取外植体及预处理、初代诱导、继代培养、生根培养、壮芽培养及炼苗移栽工序，具体操作步骤如下：
（1）获取外植体及预处理：选取健壮无病虫害的百香果植株，截取3-5cm的茎段，用温水清洗3-5次后，在放入含有酒精和壳寡糖的消毒液中浸泡20-30min,再用清水清洗干净，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干；
（2）初代诱导：将消毒灭菌好的百香果外植体横向每0 .2cm-0 .4cm划刀，并用刀片在茎段表面纵向划几刀，然后接种在诱导愈伤组织的培养基上培养获得愈伤组织，所述诱导愈伤组织的培养基配方为：MS+6-BA 0.5 mg／L+NAA 1.0mg/L+抗坏血酸0.5mg/L+海藻粉2g/L+蔗糖50g/L+缬氨酸0.5mg/L+叶酸0.2mg/L；
（3）继代培养：当愈伤组织生长至2-3cm后，分割成 2mm-3mm 小块，继续转入继代培养基培养，得继代不定芽；所述继代培养基配方为：MS+细胞分裂素0 .5mg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖15g/L+蛋白胨10mg/L+壳寡糖0.5mg/L+腐殖酸0.5g/L；
（4）生根培养：将继代不定芽转移至生根培养基上培养至每苗长出3-5条根；所述生根培养基的配方为：1/4MS+IBA 0 .8mg/L+IAA1 .5mg/L+蜜糖10mg/L+维生素B12 0 .5mg/L+柠檬酸0 .5mg/L；
（5）壮芽培养：将生根的幼苗转至壮芽培养基进行壮芽培养7-10d，所述壮芽培养基的配方为：MS+6-BA0 .5mg/L+ZT0 .5mg/L＋NAA0 .2mg/L+蔗糖30g/L+腐殖酸5mg/L+啤酒酵母2mg/L+氨基酸5mg/L；
（6）炼苗：将壮芽处理后的幼苗，打开瓶口3-5d进行炼苗，取出植株用清水清洗干净后，装入装有育苗基质的育苗杯中，按照常规方法进行苗木管理后即可移栽。
进一步的，步骤（1）所述的消毒液酒精的浓度为5-10%。
进一步的，所述消毒液中壳寡糖的使用量为5-10g/L。
进一步的，步骤（2）的培养条件在温度22±2℃、暗培养、无菌环境下进行。
进一步的，步骤（3）、（4）、（5）的培养条件是在温度25±2℃、光照强度3000-5000lx、光照时间8-10h/d、无菌环境下进行。
进一步的，所述育苗基质由塘泥、菌糠、蚓粪、珍珠岩和羊粪。优选的，所述育苗基质中各组分的重量比为：100:10-15:1-3:5-10:3-5。
与现有技术相比，本发明的优点及有益效果为：
1、本发明通过对百香果外植体及预处理、初代诱导、继代培养、生根培养、壮芽培养等各项因素及培养方式的筛选，并采用适宜的炼苗、育苗措施，建立了百香果组培快繁技术体系，具有育苗周期短、成活率高、芽增殖系数高、易生根种苗健壮、无病毒等优点，为百香果组培工厂化育苗提供了技术支撑，对于推动百香果产业的发展具有重要意义。
2、本方法在初代诱导前先用酒精和壳寡糖对百香果外植体进行消毒处理，减少了农药的使用，绿色环保，获得的植物无病害，且壳寡糖可诱导外植体发芽。
3、本发明所使用诱导愈伤组织的培养基、继代培养基配方由于各组分的协同作用，使得培养基更科学，更有针对性，更易促使百香果芽诱导的发生、增殖和壮芽，效果显著。
4、本方法还经过生根培养和壮芽培养，可以促进幼苗快速生长，育苗期明显缩短，根系更为发达，培养的幼苗更为健壮，移栽后成活率更高，生长更快。
5、本方法将幼苗移栽至装有塘泥、菌糠、蚓粪、珍珠岩和羊粪的育苗基质中，所用的育苗基质营养丰富，透水性好，为幼苗提供充足的营养促使组培苗快速生长，提高移栽生活率和种苗的质量。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。应该强调的是，下述说明仅仅是示例性的，而不是为了限制本发明的范围及其应用。
实施例1
一种百香果快速组培方法，具体操作步骤如下：
（1）获取外植体及预处理：选取健壮2年生无病虫害，品种为“台农”的百香果植株，截取3-5cm的茎段，用温水清洗5次后，在放入含有酒精和壳寡糖的消毒液中浸泡30min，所述消毒液酒精的浓度为10%，壳寡糖用量为5g/L，再用清水清洗干净，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干；
（2）初代诱导：将消毒灭菌好的百香果外植体横向每0 .2cm-0 .4cm划刀，并用刀片在茎段表面纵向划几刀，然后接种在诱导愈伤组织的培养基上，在温度22±2℃、暗培养、无菌环境下培养获得愈伤组织，所述诱导愈伤组织的培养基配方为：MS+6-BA 0.5 mg／L+NAA1.0mg/L+抗坏血酸0.5mg/L+海藻粉2g/L+蔗糖50g/L+缬氨酸0.5mg/L+叶酸0.2mg/L；
（3）继代培养：诱导培养10d后愈伤组织生长至2-3cm后，分割成 2mm-3mm 小块，继续转入继代培养基培养25d，是在温度25±2℃、光照强度3000-5000lx、光照时间8-10h/d、无菌环境下进行，得继代不定芽；所述继代培养基配方为：MS+细胞分裂素0 .5mg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖15g/L+蛋白胨10mg/L+壳寡糖0.5mg/L+腐殖酸0.5g/L；
（4）生根培养：将继代不定芽转移至生根培养基上培养至每苗长出3-5条根；所述生根培养基的配方为：1/4MS+IBA 0 .8mg/L+IAA1 .5mg/L+蜜糖10mg/L+维生素B12 0 .5mg/L+柠檬酸0 .5mg/L；
（5）壮芽培养：将生根的幼苗转至壮芽培养基进行壮芽培养8d，所述壮芽培养基的配方为：MS+6-BA0 .5mg/L+ZT0 .5mg/L＋NAA0 .2mg/L+蔗糖30g/L+腐殖酸5mg/L+啤酒酵母2mg/L+氨基酸5mg/L；
（6）炼苗：将壮芽处理后的幼苗，打开瓶口3d进行炼苗，取出植株用清水清洗干净后，装入装有育苗基质的育苗杯中，所述培养基由重量比为：100:10-15:1-3:5-10:3-5的塘泥、菌糠、蚓粪、珍珠岩和羊粪组成，按照常规方法进行苗木管理后即可移栽。
移栽15天后对试管苗进行统计，种植500株，存活496株，存活率达到99.2%。
实施例2
一种百香果快速组培方法，具体操作步骤如下：
（1）获取外植体及预处理：选取健壮1年生无病虫害，品种为“满天星”的百香果植株，截取3-5cm的茎段，用温水清洗3次后，在放入含有酒精和壳寡糖的消毒液中浸泡20min，所述消毒液酒精的浓度为5%，壳寡糖用量为8g/L，再用清水清洗干净，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干；
（2）初代诱导：将消毒灭菌好的百香果外植体横向每0 .2cm-0 .4cm划刀，并用刀片在茎段表面纵向划几刀，然后接种在诱导愈伤组织的培养基上，在温度22±2℃、暗培养、无菌环境下培养获得愈伤组织，所述诱导愈伤组织的培养基配方为：MS+6-BA 0.5 mg／L+NAA1.0mg/L+抗坏血酸0.5mg/L+海藻粉2g/L+蔗糖50g/L+缬氨酸0.5mg/L+叶酸0.2mg/L；
（3）继代培养：诱导培养13d后愈伤组织生长至2-3cm后，分割成 2mm-3mm 小块，继续转入继代培养基培养20d，是在温度25±2℃、光照强度3000-5000lx、光照时间8-10h/d、无菌环境下进行，得继代不定芽；所述继代培养基配方为：MS+细胞分裂素0 .5mg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖15g/L+蛋白胨10mg/L+壳寡糖0.5mg/L+腐殖酸0.5g/L；
（4）生根培养：将继代不定芽转移至生根培养基上培养至每苗长出3-5条根；所述生根培养基的配方为：1/4MS+IBA 0 .8mg/L+IAA1 .5mg/L+蜜糖10mg/L+维生素B12 0 .5mg/L+柠檬酸0 .5mg/L；
（5）壮芽培养：将生根的幼苗转至壮芽培养基进行壮芽培养10d，所述壮芽培养基的配方为：MS+6-BA0 .5mg/L+ZT0 .5mg/L＋NAA0 .2mg/L+蔗糖30g/L+腐殖酸5mg/L+啤酒酵母2mg/L+氨基酸5mg/L；
（6）炼苗：将壮芽处理后的幼苗，打开瓶口7d进行炼苗，取出植株用清水清洗干净后，装入装有育苗基质的育苗杯中，所述培养基由重量比为：100:10-15:1-3:5-10:3-5的塘泥、菌糠、蚓粪、珍珠岩和羊粪组成，按照常规方法进行苗木管理后即可移栽。
移栽15天后对试管苗进行统计，种植500株，存活498株，存活率达到99.6%。
实施例3
一种百香果快速组培方法，具体操作步骤如下：
（1）获取外植体及预处理：选取健壮2年生无病虫害，品种为“黄金”的百香果植株，截取3-5cm的茎段，用温水清洗3次后，在放入含有酒精和壳寡糖的消毒液中浸泡25min，所述消毒液酒精的浓度为7.5%，壳寡糖用量为10g/L，再用清水清洗干净，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干；
（2）初代诱导：将消毒灭菌好的百香果外植体横向每0 .2cm-0 .4cm划刀，并用刀片在茎段表面纵向划几刀，然后接种在诱导愈伤组织的培养基上，在温度22±2℃、暗培养、无菌环境下培养获得愈伤组织，所述诱导愈伤组织的培养基配方为：MS+6-BA 0.5 mg／L+NAA1.0mg/L+抗坏血酸0.5mg/L+海藻粉2g/L+蔗糖50g/L+缬氨酸0.5mg/L+叶酸0.2mg/L；
（3）继代培养：诱导培养15d后愈伤组织生长至2-3cm后，分割成 2mm-3mm 小块，继续转入继代培养基培养23d，是在温度25±2℃、光照强度3000-5000lx、光照时间8-10h/d、无菌环境下进行，得继代不定芽；所述继代培养基配方为：MS+细胞分裂素0 .5mg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖15g/L+蛋白胨10mg/L+壳寡糖0.5mg/L+腐殖酸0.5g/L；
（4）生根培养：将继代不定芽转移至生根培养基上培养至每苗长出3-5条根；所述生根培养基的配方为：1/4MS+IBA 0 .8mg/L+IAA1 .5mg/L+蜜糖10mg/L+维生素B12 0 .5mg/L+柠檬酸0 .5mg/L；
（5）壮芽培养：将生根的幼苗转至壮芽培养基进行壮芽培养8d，所述壮芽培养基的配方为：MS+6-BA0 .5mg/L+ZT0 .5mg/L＋NAA0 .2mg/L+蔗糖30g/L+腐殖酸5mg/L+啤酒酵母2mg/L+氨基酸5mg/L；
（6）炼苗：将壮芽处理后的幼苗，打开瓶口4d进行炼苗，取出植株用清水清洗干净后，装入装有育苗基质的育苗杯中，所述培养基由重量比为：100:10-15:1-3:5-10:3-5的塘泥、菌糠、蚓粪、珍珠岩和羊粪组成，按照常规方法进行苗木管理后即可移栽。
移栽15天后对试管苗进行统计，种植500株，存活493株，存活率达到98.6%。
以上内容是结合具体的/优选的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，其还可以对这些已描述的实施例做出若干替代或变型，而这些替代或变型方式都应视为属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种百香果快速组培方法，其特征在于：包括获取外植体及预处理、初代诱导、继代培养、生根培养、壮芽培养及炼苗移栽工序，具体操作步骤如下：
(1)获取外植体及预处理：选取健壮无病虫害的百香果植株，截取3-5cm的茎段，用温水清洗3-5次后，在放入含有酒精和壳寡糖的消毒液中浸泡20-30min,再用清水清洗干净，用灭菌纸将外植体表面的水分吸干；
(2)初代诱导：将消毒灭菌好的百香果外植体横向每0 .2cm-0 .4cm划刀，并用刀片在茎段表面纵向划几刀，然后接种在诱导愈伤组织的培养基上培养获得愈伤组织，所述诱导愈伤组织的培养基配方为：MS+6-BA 0.5 mg／L+NAA 1.0mg/L+抗坏血酸0.5mg/L+海藻粉2g/L+蔗糖50g/L+缬氨酸0.5mg/L+叶酸0.2mg/L；
(3)继代培养：当愈伤组织生长至2-3cm后，分割成 2mm-3mm 小块，继续转入继代培养基培养，得继代不定芽；所述继代培养基配方为：MS+细胞分裂素0 .5mg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖15g/L+蛋白胨10mg/L+壳寡糖0.5mg/L+腐殖酸0.5g/L；
(4)生根培养：将继代不定芽转移至生根培养基上培养至每苗长出3-5条根；所述生根培养基的配方为：1/4MS+IBA 0 .8mg/L+IAA1 .5mg/L+蜜糖10mg/L+维生素B12 0 .5mg/L+柠檬酸0 .5mg/L；
(5)壮芽培养：将生根的幼苗转至壮芽培养基进行壮芽培养7-10d，所述壮芽培养基的配方为：MS+6-BA0 .5mg/L+ZT0 .5mg/L＋NAA0 .2mg/L+蔗糖30g/L+腐殖酸5mg/L+啤酒酵母2mg/L+氨基酸5mg/L；
(6)炼苗：将壮芽处理后的幼苗，打开瓶口3-5d进行炼苗，取出植株用清水清洗干净后，装入装有育苗基质的育苗杯中，按照常规方法进行苗木管理后即可移栽。
2.根据权利要求1所述百香果快速组培方法，其特征在于：步骤（1）所述的消毒液酒精的浓度为5-10%。
3.根据权利要求1所述百香果快速组培方法，其特征在于：所述消毒液中壳寡糖的使用量为5-10g/L。
4.根据权利要求1所述百香果快速组培方法，其特征在于：步骤（2）的培养条件在温度22±2℃、暗培养、无菌环境下进行。
5.根据权利要求1所述百香果快速组培方法，其特征在于：步骤（3）、（4）、（5）的培养条件是在温度25±2℃、光照强度3000-5000lx、光照时间8-10h/d、无菌环境下进行。
6.根据权利要求1所述百香果快速组培方法，其特征在于：所述育苗基质由塘泥、菌糠、蚓粪、珍珠岩和羊粪。
7.根据权利要求6所述百香果快速组培方法，其特征在于：所述育苗基质中各组分的重量比为：100:10-15:1-3:5-10:3-5。
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