CN110476811B - 一种提高双线竹芋组培苗质量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及双线竹芋种植领域,提供一种提高双线竹芋组培苗质量的方法,用于解决双线竹芋组培苗的易黄叶的问题。本发明提供的一种提高双线竹芋组培苗质量的方法,包括:S11.取双线竹芋母株在地下生长的侧芽,清洗去除基质,除根;S12.将侧芽清洗干净,晾干至表面干燥,消毒灭菌后清洗干净,得到外植体;S13.对外植体进行不定芽诱导培养,至获取不定芽;S14.将诱导出的不定芽进行增殖培养,扩繁到一定数量;S15.将健壮的不定芽分割为单芽,对单芽进行生根培养一定时间后,既得可以移栽的组培苗。培养过程中幼苗成活率高,繁殖效率得到了极大的提高,并可以减少植株黄叶率发生,缩短组培苗移栽后的生长周期。

Description

一种提高双线竹芋组培苗质量的方法
技术领域
本发明涉及双线竹芋种植领域,具体涉及一种提高双线竹芋组培苗质量的方法。
背景技术
双线竹芋(Calathea sanderiana),竹芋科,肖竹芋属多年生常绿草本观叶植物,产地巴西等南美及中美地方。喜温暖、湿润和半荫蔽的环境。叶基生或茎生,叶片呈长椭圆形,主脉两侧有白色带与暗绿色带交互成羽状排列,叶面色彩对比鲜明,由于株型美观、观赏价值高,又具有较强的耐阴性,应用广泛,是著名的观叶植物,市场需求一直保持良好的势头。双线竹芋传统的繁殖方式一般有分株繁殖和扦插繁殖两种方式,但这两种繁殖方式的繁殖系数低,生产速度慢,植株生长不整齐,难以批量生产。
目前的双线竹芋组培技术易产生黄叶现象, 不但影响瓶苗的增殖分化和生根,也造成炼苗移栽后叶片焦枯、小苗成活率低、恢复时间长等问题。
组织培养技术是在人为创造的无菌条件下将生活的离体器官(如根、茎、叶、茎段、原生质体)、组织或细胞置于培养基内,并放在适宜的环境中,进行连续培养以获得细胞、组织或个体的技术。
如何利用组织培养技术快速大量地繁殖出高质量的双线竹芋种苗来解决市场的需求是亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明解决的技术问题为解决双线竹芋的易黄叶率发生的问题,提供一种提高双线竹芋组培苗质量的方法。
为了解决上述技术问题,本发明提供的技术方案为:
一种提高双线竹芋组培苗质量的方法,包括:S11.取双线竹芋母株在地下生长的侧芽,清洗去除基质,除根;S12.将侧芽清洗干净,晾干至表面干燥,用酒精擦拭后加入到酒精中灭菌0.1~2min后,再将侧芽加入到次氯酸钠溶液继续灭菌20~60min,清洗干净,得到外植体; S13.对外植体进行不定芽诱导培养,至获取不定芽;S14.去除不定芽的顶部和基部,并将不定芽上长出的新芽分离,得到新芽和原芽,对新芽和原芽进行继代增殖,至获取多个健壮的不定芽,对诱导出的不定芽进行扩繁;S15.将健壮的不定芽分割为单芽,对单芽进行生根培养一定时间后,既得可以移栽的组培苗。
将双线竹芋的母本,多次消毒后依次进行诱导、增殖和生根培养,可以获取大量的双线竹芋的植株,满足市场需求。
培养过程中幼苗成活率高,同样的培养时间内可以获取更多的双线竹芋植株,繁殖效率得到了极大的提高,并可以减少植株黄叶率发生。
优选地,所述S11步骤中,控制双线竹芋母株的基质至干燥需补水的程度时获取双线竹芋母株在地下生长的侧芽,所述侧芽为未完全展叶的侧芽,所述侧芽的长度为5cm。优选截取的部位,可以显著的提高外植体的灭菌效果。
优选地,所述S12步骤中,将侧芽清洗干净,晾干至表面干燥,用75%酒精擦拭,擦拭后侧芽的长度不小于3cm;将侧芽加入到75%的酒精中灭菌0.1~2min后,再将侧芽加入到0.6~0.8%次氯酸钠溶液继续灭菌20~60min,清洗干净,得到外植体。
优选地,所述S13步骤中,剥去1~2层外植体的苞片使得外植体的长度不少于2cm,控制培养温度25~26℃,湿度45~60%,培养光照强度1000~3000Lux,培养时间10h/d,培养40~50d后获得不定芽。其中d为天。
优选地,所述S14步骤中,所述继代增殖为:将不定芽切割,去除不定芽的基部和顶部,将不定芽上长出的新芽分离,得到新芽和原芽;控制培养温度25~26℃,湿度45~60%,培养光照强度1000~3000Lux,光照时间10h/d,培养40~50d;得到多个不定芽,将不定芽切割成2~3个一团,继续进行继代增殖,重复继代增殖15~20次。
优选地,所述S15步骤中,将健壮的不定芽分割为单芽,对单芽进行生根培养;控制培养温度27℃,湿度45~60%,培养光照强度5000Lux,光照时间8h/d,培养20~30d;所述不定芽的高度不小于5cm且为刚展开叶片的正常植株。
优选地,所述S13步骤中进行不定芽诱导培养、S14步骤中进行不定芽增殖培养、S15步骤中进行生根培养过程选用的培养基中包括:NH4NO3 825~1650mg/L、KNO3950~1900mg/L、MgSO4·7H2O 185~740mg/L、KH2PO4 120~170mg/L、CaCl2·2H2O 220~880mg/L、KI0.42~0.83mg/L、H3BO3 3.1~6.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9~33.8mg/L、ZnSO4·7H2O 4.3~8.6mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.13~0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.013~0.025mg/L、CoCl2·6H2O0.013~0.025mg/L、FeSO4·7H2O 13.9~55.6mg/L、Na2·EDTA 18.7~74.6mg/L、盐酸硫胺素0.05~0 .1mg/L、烟酸0.2~0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.3~0 .5mg/L、甘氨酸1~2mg/L、肌醇50~100mg/L。
优选地,所述S13步骤中,对外植体进行不定芽诱导培养时选用诱导培养基,所述诱导培养基还包括6-苄氨基嘌呤1.0-3.0mg/L、萘乙酸0.1~0.2mg/L、白糖30g/L、卡拉胶5.5g/L。
优选地,所述S14步骤中,进行不定芽增殖培养时选用增殖培养基,所述增殖培养基还包括白糖30g/L、卡拉胶6.2g/L、6-苄氨基嘌呤0.5~1.0mg/L、萘乙酸0.05~0.1mg/L。
优选地,所述S15步骤中,所述生根诱导培养过程中选用生根培养基,所述生根培养基还包括白糖20g/L、卡拉胶7.0g/L、萘乙酸0 .4~0 .5mg/L、活性炭3g/L。
与现有技术相比,本发明具有的有益效果为:培养过程中幼苗成活率高,同样的培养时间内可以获取更多的双线竹芋植株,繁殖效率得到了极大的提高,并可以减少植株黄叶率发生。
本发明将双线竹芋的组培诱导率提高20%,增殖系数达到2-3倍,黄叶率降低至1.5%-3.5%,变异率降低至5.5%,成苗率提高20%-30%,所以本发明的优势在于优化了双线竹芋的组培技术体系,提高双线竹芋组培苗的繁殖系数,降低其黄叶率与变异率,保持双线竹芋组培苗的品质稳定,从而解决优质种苗供不应求的现状
具体实施方式
以下实施列是对本发明的进一步说明,不是对本发明的限制。
实施例1
一种提高双线竹芋组培苗质量的方法,包括:S11.取双线竹芋母株在地下生长的侧芽,清洗去除基质,除根;S12.将侧芽清洗干净,晾干至表面干燥,用酒精擦拭后加入到酒精中灭菌0.5~1min后,再将侧芽中的大芽加入到次氯酸钠溶液继续灭菌40~50min,清洗干净,得到外植体;S13.对外植体进行不定芽诱导培养,至获取不定芽;S14.去除不定芽的顶部和基部,并将不定芽上长出的新芽分离,得到新芽和原芽,对新芽和原芽进行继代增殖,至获取多个健壮的不定芽,对不定芽进行扩繁;S15.将健壮的不定芽分割为单芽,对单芽进行生根培养一定时间后,既得可以移栽的组培苗。所述S11步骤中,控制双线竹芋母株的基质至干燥需补水的程度时获取双线竹芋母株在地下生长的侧芽,所述侧芽为未完全展叶的侧芽,所述侧芽的长度为5cm。所述S12步骤中,将侧芽清洗干净,晾干至表面干燥,用75%酒精擦拭,擦拭后侧芽的长度不小于3cm;将侧芽加入到75%的酒精中灭菌0.5~1min后,再将侧芽加入到0.75%次氯酸钠溶液继续灭菌40~50min,清洗干净,得到外植体。所述S13步骤中,剥去1~2层外植体的苞片使得外植体的长度不少于2cm,控制培养温度25~26℃,湿度50%,培养光照强度2000Lux,培养时间10h/d,培养40~50d后获得不定芽。所述S14步骤中,所述继代增殖为:将不定芽切割,去除不定芽的基部和顶部,将不定芽上长出的新芽分离,得到新芽和原芽;控制培养温度25~26℃,湿度50%,培养光照强度2000Lux,光照时间10h/d,培养40~50d;得到多个不定芽,将不定芽切割成2~3个一团,继续进行继代增殖,重复继代增殖15~20次。所述S15步骤中,将健壮的不定芽分割为单芽,对单芽进行生根培养;控制培养温度27℃,湿度50%,培养光照强度5000Lux,光照时间8h/d,培养20~30d;所述不定芽的高度不小于5cm且为刚展开叶片的正常植株。所述S13步骤中,对外植体进行不定芽诱导培养时选用诱导培养基,所述诱导培养基包括:NH4NO3 1650mg/L、KNO31900mg/L、MgSO4·7H2O 185~740mg/L、KH2PO4 170mg/L、CaCl2·2H2O 220~880mg/L、KI 0.42~0.83mg/L、H3BO3 3.1~6.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9~33.8mg/L、ZnSO4·7H2O 4.3~8.6mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.13~0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.013~0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.013~0.025mg/L、FeSO4·7H2O 13.9~55.6mg/L、Na2·EDTA 18.7~74.6mg/L、盐酸硫胺素0 .1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、6-苄氨基嘌呤1.0-3.0mg/L、萘乙酸0.1~0.2mg/L、白糖30g/L、卡拉胶5.5g/L。所述S14步骤中,进行不定芽增殖培养时选用增殖培养基,所述增殖培养基还包括:NH4NO3 1650mg/L、KNO31900mg/L、MgSO4·7H2O 185~740mg/L、KH2PO4170mg/L、CaCl2·2H2O 220~880mg/L、KI 0.42~0.83mg/L、H3BO3 3.1~6.2mg/L、MnSO4·4H2O16.9~33.8mg/L、ZnSO4·7H2O 4.3~8.6mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.13~0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.013~0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.013~0.025mg/L、FeSO4·7H2O 13.9~55.6mg/L、Na2·EDTA18.7~74.6mg/L、盐酸硫胺素0 .1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、白糖30g/L、卡拉胶6.2g/L、6-苄氨基嘌呤0.5~1.0mg/L、萘乙酸0.05~0.1mg/L。所述S15步骤中,所述生根诱导培养过程中选用生根培养基,所述生根培养基还包括:NH4NO31650mg/L、KNO31900mg/L、MgSO4·7H2O 185~740mg/L、KH2PO4 170mg/L、CaCl2·2H2O 220~880mg/L、KI 0.42~0.83mg/L、H3BO3 3.1~6.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9~33.8mg/L、ZnSO4·7H2O 4.3~8.6mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.13~0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.013~0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.013~0.025mg/L、FeSO4·7H2O 13.9~55.6mg/L、Na2·EDTA 18.7~74.6mg/L、盐酸硫胺素0 .1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L白糖20g/L、卡拉胶7.0g/L、萘乙酸0 .4~0 .5mg/L、活性炭3g/L。
将双线竹芋的母本,多次消毒后依次进行诱导、增殖和生根培养,可以获取大量的双线竹芋的植株,满足市场需求。培养过程中幼苗成活率高,同样的培养时间内可以获取更多的双线竹芋植株,繁殖效率得到了极大的提高,并可以减少植株黄叶率发生,缩短组培苗移栽后的生长周期。
实施例2
实施例2同实施例1不同之处在于,所述S14步骤中,进行不定芽增殖培养时选用增殖培养基,所述增殖培养基还包括:NH4NO3 825~1650mg/L、KNO31900mg/L、MgSO4·7H2O 740~925mg/L、KH2PO4 170~340mg/L、CaCl2·2H2O 110~220mg/L、KI 0.42~0.83mg/L、H3BO3 3.1~6.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9~33.8mg/L、ZnSO4·7H2O 4.3~8.6mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.13~0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.013~0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.013~0.025mg/L、FeSO4·7H2O13.9~55.6mg/L、Na2·EDTA 18.7~74.6mg/L、盐酸硫胺素0 .1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、白糖30g/L、卡拉胶6.2g/L、6-苄氨基嘌呤0.5~1.0mg/L、萘乙酸0.05~0.1mg/L。
实施例3
实施例3同实施例1不同之处在于,所述S14步骤中,进行不定芽增殖培养时选用增殖培养基,所述增殖培养基还包括:NH4NO3 1650mg/L、KNO31900mg/L、MgSO4·7H2O 185~740mg/L、KH2PO4 170mg/L、CaCl2·2H2O 220~880mg/L、KI 0.42~0.83mg/L、H3BO3 3.1~6.2mg/L、MnSO4·4H2O 8.5~15mg/L、ZnSO4·7H2O 4.3~8.6mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.13~0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.013~0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.013~0.025mg/L、FeSO4·7H2O13.9~55.6mg/L、Na2·EDTA 18.7~74.6mg/L、盐酸硫胺素0 .1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、白糖30g/L、卡拉胶6.2g/L、6-苄氨基嘌呤1.5~2.0mg/L、萘乙酸0.15~0.3mg/L。
实施例4
实施例4同实施例1不同之处在于,所述S14步骤中,进行不定芽增殖培养时选用增殖培养基,所述增殖培养基还包括:NH4NO3 1650mg/L、KNO3950~1800mg/L、MgSO4·7H2O 185~740mg/L、KH2PO4 170mg/L、CaCl2·2H2O 100~210mg/L、KI 0.42~0.83mg/L、H3BO3 3.1~6.2mg/L、MnSO4·4H2O 8.5~15mg/L、ZnSO4·7H2O 4.3~8.6mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.13~0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.013~0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.013~0.025mg/L、FeSO4·7H2O13.9~55.6mg/L、Na2·EDTA 18.7~74.6mg/L、盐酸硫胺素0 .1mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、白糖30g/L、卡拉胶6.2g/L、6-苄氨基嘌呤1.5~2.0mg/L、萘乙酸0.15~0.3mg/L。
实施例5
实施例5同实施例1不同之处在于,所述S14步骤中,所述继代增殖为:将不定芽切割,去除不定芽的基部和顶部,将不定芽上长出的新芽分离,得到新芽和原芽;控制培养温度27℃,湿度50%,培养光照强度2000Lux,光照时间10h/d,培养40~50d;得到多个不定芽,将不定芽切割成4~5个一团,继续进行继代增殖,重复继代增殖15~20次。
实施例6
实施例6同实施例1不同之处在于,所述S14步骤中,所述继代增殖为:将不定芽切割,去除不定芽的基部和顶部,将不定芽上长出的新芽分离,得到新芽和原芽;控制培养温度28~29℃,湿度50%,培养光照强度2000Lux,光照时间10h/d,培养40~50d;得到多个不定芽,将不定芽切割成2~3个一团,继续进行继代增殖,重复继代增殖15~20次。
实施例7
实施例7同实施例1不同之处在于,所述S15步骤中,将健壮的不定芽分割为单芽,对单芽进行生根培养;控制培养温度28~29℃,湿度45~60%,培养光照强度5000Lux,光照时间8h/d,培养20~30d;所述不定芽的高度不小于5cm且为刚展开叶片的正常植株。
实施例8
实施例8同实施例1不同之处在于,所述S12步骤中进行不定芽诱导培养、S13步骤中进行不定芽增殖培养、S15步骤中进行生根培养过程选用的培养基中包括:NH4NO3 825mg/L、KNO3950~1900mg/L、MgSO4·7H2O 185~370mg/L、KH2PO4 120~170mg/L、CaCl2·2H2O 220~440mg/L、KI 0.21mg/L、H3BO3 3.1~6.2mg/L、MnSO4·4H2O 5.5mg/L、ZnSO4·7H2O 4.3~8.6mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.1~0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.01~0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.026~0.05mg/L、FeSO4·7H2O 13.5~27.8mg/L、Na2·EDTA 16.3~37.3mg/L、盐酸硫胺素0.05~0.1mg/L、烟酸0.2~0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.3~0 .5mg/L、甘氨酸1~2mg/L、肌醇50~100mg/L。
实验例
统计实施例1~8及双线竹芋最终的黄叶率、变异率和成苗率的提高率。
Figure 823600DEST_PATH_IMAGE001
从实施例1可以看出,采用本申请的培养基、培养温度、切芽方式等可以显著的抑制双线竹芋的黄叶率、变异率并提高成苗率。
实施例2、实施例3、实施例4中不定芽增殖培养基配方中的多种元素含量同实施例1不同,实施例5中增殖芽的切割方式同实施例1不同,实施例6中不定芽增殖的温度同实施例1不同,实施例7中生根诱导的温度同实施例1不同,实施例8中培养基同实施例1不同,其效果均低于实施例1,表明本申请中的多种参数对提高双线竹芋的质量均有重要的作用。
上列详细说明是针对本发明可行实施例的具体说明,以上实施例并非用以限制本发明的专利范围,凡未脱离本发明所为的等效实施或变更,均应包含于本案的专利范围中。

Claims (7)

1.一种提高双线竹芋组培苗质量的方法,其特征在于,包括:
S11.取双线竹芋母株在地下生长的侧芽,清洗去除基质,除根;
S12.将侧芽清洗干净,晾干至表面干燥,用酒精擦拭后加入到酒精中灭菌0.1~2min后,再将侧芽加入到次氯酸钠溶液继续灭菌20~60min,清洗干净,得到外植体;
S13.对外植体进行不定芽诱导培养,至获取不定芽;
S14.去除不定芽的顶部和基部,并将不定芽上长出的新芽分离,得到新芽和原芽,对新芽和原芽进行继代增殖,至获取多个健壮的不定芽,对诱导出的不定芽进行扩繁;
S15.将健壮的不定芽分割为单芽,对单芽进行生根培养一定时间后,既得可以移栽的组培苗;
所述S13步骤中,对外植体进行不定芽诱导培养时选用诱导培养基,所述诱导培养基还包括6-苄氨基嘌呤1.0-3.0mg/L、萘乙酸0.1~0.2mg/L、白糖30g/L、卡拉胶5.5g/L;
所述S14步骤中,进行不定芽增殖培养时选用增殖培养基,所述增殖培养基还包括白糖30g/L、卡拉胶6.2g/L、6-苄氨基嘌呤0.5~1.0mg/L、萘乙酸0.05~0.1mg/L;
所述S15步骤中,所述生根诱导培养过程中选用生根培养基,所述生根培养基还包括白糖20g/L、卡拉胶7.0g/L、萘乙酸0.4~0.5mg/L、活性炭3g/L。
2.根据权利要求1所述的一种提高双线竹芋组培苗质量的方法,其特征在于,所述S11步骤中,控制双线竹芋母株的基质至干燥需补水的程度时获取双线竹芋母株在地下生长的侧芽,所述侧芽为未完全展叶的侧芽,所述侧芽的长度为5cm。
3.根据权利要求2所述的一种提高双线竹芋组培苗质量的方法,其特征在于,所述S12步骤中,将侧芽清洗干净,晾干至表面干燥,用75%酒精擦拭,擦拭后侧芽的长度不小于3cm;将侧芽加入到75%的酒精中灭菌0.1~2min后,再将侧芽加入到0.6~0.8%次氯酸钠溶液继续灭菌20~60min,清洗干净,得到外植体。
4.根据权利要求1所述的一种提高双线竹芋组培苗质量的方法,其特征在于,所述S13步骤中,剥去1~2层外植体的苞片使得外植体的长度不少于2cm,控制培养温度25~26℃,湿度45~60%,培养光照强度1000~3000Lux,培养时间10h/d,培养40~50d后获得不定芽。
5.根据权利要求1所述的一种提高双线竹芋组培苗质量的方法,其特征在于,所述S14步骤中,所述继代增殖为:将不定芽切割,去除不定芽的基部和顶部,将不定芽上长出的新芽分离,得到新芽和原芽;控制培养温度25~26℃,湿度45~60%,培养光照强度1000~3000Lux,光照时间10h/d,培养40~50d;得到多个不定芽,将不定芽切割成2~3个一团,继续进行继代增殖,重复继代增殖15~20次。
6.根据权利要求1所述的一种提高双线竹芋组培苗质量的方法,其特征在于,所述S15步骤中,将健壮的不定芽分割为单芽,对单芽进行生根培养;控制培养温度27℃,湿度45~60%,培养光照强度4000~6000Lux,光照时间8h/d,培养20~30d;所述不定芽的高度不小于5cm且为刚展开叶片的正常植株。
7.根据权利要求1所述的一种提高双线竹芋组培苗质量的方法,其特征在于,所述S13步骤中进行不定芽诱导培养、S14步骤中进行不定芽增殖培养、S15步骤中进行生根培养过程选用的培养基中包括:NH4NO3 825~1650mg/L、KNO3 950~1900mg/L、MgSO4·7H2O 185~740mg/L、KH2PO4 120~170mg/L、CaCl2·2H2O 220~880mg/L、KI 0.42~0.83mg/L、H3BO3 3.1~6.2mg/L、MnSO4·4H2O 16.9~33.8mg/L、ZnSO4·7H2O 4.3~8.6mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.13~0.25mg/L、CuSO4·5H2O 0.013~0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.013~0.025mg/L、FeSO4·7H2O13.9~55.6mg/L、Na2·EDTA 18.7~74.6mg/L、盐酸硫胺素0.05~0 .1mg/L、烟酸0.2~0.5mg/L、盐酸吡哆醇0.3~0 .5mg/L、甘氨酸1~2mg/L、肌醇50~100mg/L。
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