CN104737912A

CN104737912A - 一种非洲菊组培快繁培养基及其培育方法

Info

Publication number: CN104737912A
Application number: CN201510149499.7A
Authority: CN
Inventors: 廉玉姬
Original assignee: Linyi University
Current assignee: Linyi University
Priority date: 2015-03-31
Filing date: 2015-03-31
Publication date: 2015-07-01
Anticipated expiration: 2035-03-31
Also published as: CN104737912B

Abstract

本发明公开了一种非洲菊组培快繁培养基及其培育方法，组培培养基包括诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，使用所述的培养基进行非洲菊幼嫩花托离体再生，该技术包括不定芽的诱导、增殖、生根、驯化移栽等过程。采用该方法与配方不仅可提高非洲菊的增值系数、可培育优质壮苗，而且可缩短培养周期，提高成活率，还可使非洲菊提早开花15天左右，可提早大棚栽培时的小苗的分化时间，可提高采花产量和质量。

Description

一种非洲菊组培快繁培养基及其培育方法

技术领域

本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种非洲菊组培快繁培养基及其培育方法。

背景技术

非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus)，别名扶郎花，为菊科(Compositae)、扶郎花属(Gerbera Bolus)多年生草本植物，株高30～40cm，叶多数基生，叶柄长10～20cm，其花朵硕大，花枝挺拔，花色艳丽，花期较长，产花量高，栽培管理方便，在温暖条件下可以周年不断地供应切花，因此其生产规模愈来愈大，为世界五大切花之一，具有很高的商业价值。非洲菊为异花授粉植物，自然条件下结实率很低且种子极易丧失萌发力，并且种子繁殖还存在其后代性状容易发生变异问题。非洲菊花苗生产多采用无性繁殖的方式，传统的无性繁殖的方式主要是采用分株繁殖。但是，非洲菊分株增殖速度较慢。常规的种子繁殖和分株繁殖均增殖率低，难以满足旺盛的市场需求。

目前非洲菊种苗生产上大多采用组织培养进行快繁，因为幼小花蕾具有较强的再分化能力，常作为非洲菊种苗诱导的外植体。现有技术一般以非洲菊的幼小花蕾，剥去花萼及小花序后纵切为四块，接种于诱导培养基中，正常光照培养。也有以叶片为外植体诱导不定芽的快繁方法。但这些方法存在诱导率较低，不同品种间的不定芽诱导率差异很大，发生突变等问题而严重制约了非洲菊种苗工厂化、规模化生产。

分化的不定芽经多代继代培养后很容易出现小苗的质量衰减或退化引起的弱苗现象、增殖的小芽的增值系数低、易苍老等问题；在生根培养基上诱导生根时，出现根细而长，生根数量较少。根系伸长时互相盘在培养基里，给非洲菊组培苗移栽增加洗苗、清理根系等环节，影响移栽苗的成活率。为此，有必要对非洲菊增殖培养和生根培养阶段的培养基配方进行优化，以达简单、经济的方法生产优质组培壮苗的目的。

发明内容

本发明目的在于提供一种非洲菊的壮苗增殖和生根培养基及其培育方法，用非洲菊未成熟小花为材料，通过调整培养基的有机物物成分和植物生长调节剂的配比，提高小花的再生频率和小芽增殖系数，从而建立了高品质和高数量快繁体系。

本发明具体通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种非洲菊组培培养基，包括诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，所述的诱导培养基为修订的MS培养基添加3.0mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA+1.0mg/L CPPU(N-2-氯-4-吡啶基苯-N’-苯基脲)，30g/L糖，0.8％琼脂，用0.1N NaOH或HCl调至pH 5.8，在104kPa，121℃下高压蒸汽灭菌20min；所述的增殖培养基为修订的MS培养基+0.6mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+60mg/L硫酸盐腺嘌呤；所述的生根培养基为修订的MS+0.2mg/L NAA。

所述修订MS培养基是以MS培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整其中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸和泛酸钙的含量分别为：10mg/L，1.0mg/L，1.0mg/L，1.0mg/L，并充分混匀成混合溶液。

本发明还提供了一种非洲菊组培快繁培育方法，包括以下步骤：

1)外植体的选择和处理

选取幼嫩花托作为外植体，于当日用饱和洗衣粉溶液清洗，自来水冲洗干净，接种前用0.15％HgCl2加0.1％吐温置于摇床上以100rpm/s震荡消毒5min，用无菌水冲洗干净，再用70％酒精浸泡10s，最后无菌水冲洗，备用；

2)不定芽诱导

将将处理好的外植体吸干水分，剥去花萼和花托基部，将带部分花托的小花纵切成1～2mm的厚的小块，接种于不定芽诱导培养基中；

3)不定芽增殖

外植体上分化出不定芽，将不定芽转接至修订的MS培养基中壮苗；培养4周后，将不定芽切成单棵转接至上述增殖培养基；

4)不定芽生根

增殖35天的不定芽切成单棵转接到生根培养基上，诱导生根；

5)驯化移栽

生根两周后将培养瓶转移至温室驯化2～5天，用清水漂洗粘在根系上的培养基，移栽到基质上。

本发明步骤(2)中所述的培养条件为：(25±1)℃、16h/d光培养，光照强度4000μmol·m^-2·s。

本发明步骤(5)所述的基质为丹麦品氏托普基质与珍珠岩按质量比3:2制备。

本发明的有益效果为：利用本发明培养基及其培育方法，可提高非洲菊增值系数，经试验证实，可提高增殖系数2倍，增殖周期短，培养的苗株高5cm以上的达95％，苗均为健康的单棵小苗簇成的丛生芽，大大提高组培苗质量，而且可获得健壮、优质丛生芽，这种优质小苗在生根培养基上生根率高、苗壮、移栽时成活率高；同时可使非洲菊提早开花15天左右，提早大棚栽培时的小苗的分化时间，提提高采花产量和质量。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。

实施例1

一、培养基的配置

修订MS培养基是以MS培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整其中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸和泛酸钙的含量分别为：10mg/L，1.0mg/L，1.0mg/L，1.0mg/L，并充分混匀成混合溶液。

诱导培养基为修订的MS培养基添加3.0mg/L 6-BA+0.5mg/LIAA+1.0mg/L CPPU(N-2-氯-4-吡啶基苯-N’-苯基脲)，30g/L糖，0.8％琼脂，用0.1N NaOH或HCl调至pH 5.8，在104kPa，121℃下高压蒸汽灭菌20min。

增殖培养基为修订的MS培养基+0.6mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA+60mg/L硫酸盐腺嘌呤。

生根培养基为修订的MS+0.2mg/L NAA。

二、非洲菊组培快繁培育方法

1)外植体的消毒

将直径小于0.5cm幼嫩花托于取材当日用饱和洗衣粉溶液清洗,然后用流水冲洗约2h左右,以便除去表面污物,置于超净工作台上备用。在接种前先用0.15％HgCl₂加0.1％吐温放在摇床上震荡消毒5min,震荡速度为100rpm/s，用无菌水冲洗3次。再用70％酒精浸泡10s，最后无菌水冲洗5次。放在灭菌的不锈钢盘子里，用灭菌滤纸吸干表面水分，备用。每个品种采10个花托，实验重复三次。

2)不定芽诱导与增殖

将消毒好的材料放在无菌滤纸上吸干水分，剥去花萼和花托基部，将带部分花托的小花纵切成1～2mm的厚的小块，接种于不定芽诱导培养基中。外植体的培养条件为：(25±1)℃、16h/d光培养，光照强度4000μmol·m^-2·s。

培养2个月开始，外植体上分化出不定芽，当不定芽生长到0.5cm大小是将不定芽转接到MS培养基上壮苗。在MS培养基上培养4周后，将不定芽切成单棵转接到上述修订的MS培养基+0.6mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+60mg/L硫酸盐腺嘌呤的培养基(M1)上诱导不定芽的增殖和生长。试验时，以MS基本培养基添加2.0mg/L6-BA+0.2mg/L NAA培养基(M2)为对照比较增值效果。增殖35天的不定芽切成单棵转接到生根培养基上，诱导生根。

3)非洲菊生根

在两种增殖培养基上生长的不定芽转接到修订的MS培养基添加0.2mg/L NAA，0.5％琼脂粉的生根培养基上诱导生根。

4)驯化移栽

生根两周后将培养瓶转移到温室驯化2～5天，之后打开瓶盖用清水漂洗粘在根系上的培养基，移栽到基质上。基质的配比丹麦品氏托普基质珍珠岩按3︰2。移栽之后扣小拱棚、保持温度和湿度。

实施例2

利用实施例1方案进行非洲菊组培快繁培育，并对其培育过程数据进行记录和统计。

1)不定芽的诱导

小花在不定芽诱导培养基上培养一周时切割部分膨大，培养7天左右花托的小花膨大、变绿，花托的切面膨大，但没有愈伤组织。培养10天左右是小花上开始出现愈伤组织，小花膨大呈菊花状，愈伤组织上开始分化出小芽。培养35-42天时，小花逐渐变黑，变黑的小花愈伤组织上不断分化出丛生小芽。不同品种不定芽分化能力不同，大雪菊的不定芽分化率最高为56.6％，水粉为45.5％、四季红为38.5％等。

2)不定芽的伸长、壮苗

在不定芽诱导培养基上分化出的不定芽为丛生芽。在诱导培养基上丛生芽的分化旺盛而影响不定芽的伸长。将丛生芽切成几块转移至MS培养基促进不定芽的伸长，可提高组培快繁种苗的质量。在MS培养基上培养21天左右可获得粗壮、健康的小苗。

3)不定芽的增殖

将粗壮健康的丛生芽切成单株并转移到以下培养基。

M1：修订的MS培养基添加0.6mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+60mg/L硫酸盐腺嘌呤。培养21天左右小苗增殖效果较好，小苗呈绿色，株高均超过3cm，小苗的增值系数达5～10。培养28～30天时，小苗的株高为5cm以上的苗数达80％以上，丛生芽被切之后均成单棵。培养35天时，将小芽转接到生根培养基。

M2：在MS添加2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA培养基上培养的不定芽增殖效果比M1培养基差，小苗浅绿。28～30天时，大多数增殖苗的平均株高小于3cm,四季红、黄色风暴等品种的增殖苗不成单棵，增殖时间长。不定芽在不同培养基上的增殖效果见表1。

表1在不同非洲菊品种在增殖培养中的增殖效果

通过非洲菊增殖速度试验研究，可知修订的MS添加0.6mg/L6-BA，0.2mg/L NAA，60mg/L硫酸盐腺嘌呤的培养基上增殖不定芽时，提高增殖系数2倍，增殖周期短，培养的苗株高5cm以上的达95％，苗均为健康的单棵小苗簇成的丛生芽，大大提高组培苗质量。这技术为非洲菊高效快繁和生优质商品组培苗奠定了技术基础。

4)生根移栽

分别在M1和M2增殖培养基上培养的单棵小苗接种到修订的MS添加0.2mg/L NAA的生根培养基上诱导生根。分装生根培养基时，培养基的容量刚好小苗插进就可以，如660mL容量的组培瓶里分装培养基高度6～8mm高，转接小苗是，将小苗插入到3～4mm深度。

由表2结果显示，在M1培养基上增殖的小苗基部发生2～3条粗壮的根。由于生根时间差异不大，小苗从容器底部直立生长，根系高度超过培养基界面，几乎不沾培养基，生根率为93.3％。移栽时将小苗拔出之后再清水轻轻飘或直接可以移栽。但在M2培养基上增殖的小苗，首先发生一条根或两条根。跟在培养基上横向生长，根系不断伸长并互相盘在培养基里面，根生长较长而细，生根数量较少。因根系横向盘绕在一起，移栽洗苗时容易断根或伤害根系，影响成活率。

表2在不同非洲菊品种的生根效果

移栽结果显示，在M1培养基上增殖的小芽在生根培养基上生根交齐，移栽之后苗的大小比较均匀，成活率达95％，在苗床里生长45天后可起苗出售，组培苗定植45～50天开始开花。而在M2培养基上增殖过的小芽生根后成活率70～75％，移栽60天后才可出售商品苗。

综上所述，采用该方法与配方不仅可提高非洲菊的增值系数、可培育优质壮苗，而且可缩短培养周期，提高成活率。该发明可使非洲菊提早开花15天左右，可提早大棚栽培时的小苗的分化时间，可提高采花产量和质量。

Claims

1.一种非洲菊组培快繁培养基，包括诱导培养基、增殖培养基和生根培养基，其特征在于：所述的诱导培养基为修订的MS培养基添加3.0mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA+1.0mg/L CPPU，30g/L糖，0.8％琼脂，用0.1N NaOH或HCl调至pH 5.8，在104kPa，121℃下高压蒸汽灭菌20min；所述的增殖培养基为修订的MS培养基+0.6mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+60mg/L硫酸盐腺嘌呤；所述的生根培养基为修订的MS+0.2mg/L NAA。

2.根据权利要求1所述的一种非洲菊组培快繁培养基，其特征在于：所述的修订MS培养基是以MS培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整其中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸和泛酸钙的含量分别为：10mg/L，1.0mg/L，1.0mg/L，1.0mg/L，并充分混匀成混合溶液。

3.一种非洲菊组培快繁培育方法，其特征在于包括以下步骤：

1)外植体的选择和处理：选取幼嫩花托作为外植体，于当日用饱和洗衣粉溶液清洗，自来水冲洗干净，接种前用0.15％HgCl₂加0.1％吐温置于摇床上以100rpm/s震荡消毒5min，用无菌水冲洗干净，再用70％酒精浸泡10s，最后无菌水冲洗，备用；

2)不定芽诱导：将将处理好的外植体吸干水分，剥去花萼和花托基部，将带部分花托的小花纵切成1～2mm的厚的小块，接种于不定芽诱导培养基中；

3)不定芽增殖：外植体上分化出不定芽，将不定芽转接至修订的MS培养基中壮苗；培养4周后，将不定芽切成单棵转接至上述增殖培养基；

4)不定芽生根：增殖35天的不定芽切成单棵转接到生根培养基上，诱导生根；

5)驯化移栽：生根两周后将培养瓶转移至温室驯化2～5天，用清水漂洗粘在根系上的培养基，移栽到基质上。

4.根据权利要求3所述的一种非洲菊组培快繁培育方法，其特征在于：步骤(2)中所述的培养条件为：25±1℃、16h/d光培养，光照强度4000μmol·m^-2·s。

5.根据权利要求3所述的一种非洲菊组培快繁培育方法，其特征在于：步骤(5)所述的基质为丹麦品氏托普基质与珍珠岩按质量比3:2制备。