CN116171859B - 一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法 - Google Patents
一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116171859B CN116171859B CN202310194706.5A CN202310194706A CN116171859B CN 116171859 B CN116171859 B CN 116171859B CN 202310194706 A CN202310194706 A CN 202310194706A CN 116171859 B CN116171859 B CN 116171859B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cypripedium
- biaolan
- seeds
- long
- yunnanensis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241001516485 Cypripedium Species 0.000 title claims abstract description 49
- 230000035784 germination Effects 0.000 title claims abstract description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000010977 jade Substances 0.000 claims abstract description 14
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical class [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 230000010152 pollination Effects 0.000 claims abstract description 8
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 claims abstract description 6
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000010154 cross-pollination Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 4
- 241000519455 Cypripedium macranthos Species 0.000 claims abstract description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 8
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 5
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 3
- 239000002655 kraft paper Substances 0.000 claims description 3
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 claims description 3
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000000123 paper Substances 0.000 claims description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 230000003716 rejuvenation Effects 0.000 abstract description 4
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 abstract description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 8
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 241000218691 Cupressaceae Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000012869 germination medium Substances 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000262613 Michelia alba Species 0.000 description 2
- 235000003415 Michelia alba Nutrition 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 description 2
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- NNBFNNNWANBMTI-UHFFFAOYSA-M brilliant green Chemical compound OS([O-])(=O)=O.C1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 NNBFNNNWANBMTI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 description 1
- 235000015393 sodium molybdate Nutrition 0.000 description 1
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 description 1
- 235000019158 vitamin B6 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011726 vitamin B6 Substances 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/002—Culture media for tissue culture
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Cultivation Of Plants (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明属于植物组织培养快速繁殖技术领域，具体公开一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法，包括以下步骤：玉龙杓兰人工异花授粉；玉龙杓兰果荚采收：采集野外人工授粉145天后成熟饱满未裂开的果荚作为玉龙杓兰种子非共生萌发的材料；玉龙杓兰果荚及种子预处理；玉龙杓兰非共生萌发培养：所述非共生萌发培养用培养基为改良B5培养基，所述改良B5培养基为在B5基本培养基的基础上再加上10g/L椰子粉、0.5g/L活性碳粉、0.5mg/L6‑BA；玉龙杓兰继代培养，通过本发明的非共生萌发方法可以快速获得玉龙杓兰实生苗，为玉龙杓兰的回归、种群复壮奠定基础。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养快速繁殖技术领域，具体涉及一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法。
背景技术
玉龙杓兰(CypripediumforrestiiCribb)为兰科杓兰属(Cypripedium)植物，植物学家George Forrest于1913年在云南省丽江地区采集并命名，只分布在云南西北部(丽江、中甸)，生于海拔3500米的松林下、灌木丛生的坡地或开旷林地上，花期6月。玉龙杓兰植株高3-5厘米，具细长而横走的根状茎，叶片翠绿且美，观为椭圆形和卵形的形状，叶片上面带有着黑色的小斑点。花序顶生，无花苞片，暗黄色，有栗色细斑，花朵的花瓣造型为卵形，具有非常高的观赏和经济价值。玉龙杓兰生长环境苛刻，自然更新较慢，现存活体种群数量极少，《中国生物多样性红色名录-高等植物卷》将其评估为极危等级(CR)，在2021年最新的国家动植物保护名录中被列为国家二级保护植物。由于玉龙杓兰分布区域发生泥石流等自然灾害、加之不断有人为干扰，使其野生环境破坏严重，加剧该物种濒危，对玉龙杓兰的保育工作刻不容缓。
玉龙杓兰生长对生境要求比较严苛，宜采用就地划定保护小区进行保护。同时，通过人工繁育、驯化及回归复壮等措施进行辅助保护。玉龙杓兰因所处海拔比较高，生境极为恶劣，传粉昆虫较少，所以野外几乎看不到玉龙杓兰果荚结实，玉龙杓兰自然更新主要是靠横走的根状茎，因此野外居群均以片状集中分布。种子非共生萌发是人工繁殖种苗的有效途径，在不破坏原有种群的基础上，采用人工异花授粉获得果荚，通过种子非共生萌发方法获得实生苗，为玉龙杓兰的回归、种群复壮奠定基础。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法以解决玉龙杓兰种苗繁殖问题。
为实现以上目的，本发明提供以下技术方案：
一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法，包括以下步骤：
(1)玉龙杓兰人工异花授粉；
(2)玉龙杓兰果荚采收：采集野外人工授粉145天后成熟饱满未裂开的果荚作为玉龙杓兰种子非共生萌发的材料；
(3)玉龙杓兰果荚及种子预处理；
(4)玉龙杓兰非共生萌发培养：所述非共生萌发培养用培养基为改良B5培养基，所述改良B5培养基为在B5基本培养基的基础上再加上10g/
L椰子粉、0.5g/L活性碳粉、0.5mg/L 6-BA；
(5)玉龙杓兰继代培养。
进一步的，步骤(2)中，所述果夹采摘后用牛皮纸装袋，放入4℃的冰箱存储备用。
进一步的，步骤(3)中，玉龙杓兰果荚预处理步骤为：在超净工作台中用无菌水将玉龙杓兰果荚冲洗干净，用75％无水乙醇浸泡果荚1分钟，后用0.1％升汞浸泡消毒20分钟，再用大量无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干果荚表面水分备用。
优选的，步骤(3)中，玉龙杓兰种子预处理步骤为：用灭菌手术刀将果荚横切成两段，将所有种子抖落到无菌培养皿中，用无菌水将种子制成种子悬浮液，在悬浮液中加入一滴表面活性剂备用。
优选的，所述表面活性剂为吐温20。
进一步的，步骤(5)中，玉龙杓兰继代培养所用培养基为在改良B5培养基的基础上加0.2mg/L NAA和100g/L土豆匀浆，活性炭的用量增加为1.0g/L。
进一步的，步骤(4)和步骤(5)中，所述培养基的pH为5.6。
进一步的，步骤(4)和步骤(5)中，培养条件为温度：23±2℃，暗培养。
通过本发明的非共生培养方法，能使玉龙杓兰萌发率达到78.67％。在萌发出白色原球茎后，当原球茎分化出1-2厘米根时，将玉龙杓兰转接到继代培养基中，继续进行暗培养，暗培养一段时间后，根继续长长，根上长出细小绒毛，并且长出芽，在该继代培养基中，98％以上的玉龙杓兰都能成活并长根和芽，当根长到10-12cm，芽长到2-3cm，即可将幼苗进行炼苗移栽到栽培基质中，通过种子非共生萌发方法获得实生苗，为玉龙杓兰的回归、种群复壮奠定基础。
附图说明
图1野生玉龙杓兰形态图；
图2玉龙杓兰非共生萌发用果荚形态图；
图3玉龙杓兰果荚预处理过程图；
图4玉龙杓兰种子形态图；
图5玉龙杓兰种子萌发并长出根及芽状态图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施例中的百分比均表达是重量百分比，即质量分数。
实施例1
1.玉龙杓兰人工授粉
将在哈巴自然保护区玉龙杓兰保护小区内开花的玉龙杓兰植株进行人工异花授粉，记录授粉时间(授粉日期：2021年6月18日)。
2.玉龙杓兰果荚采收
采集野外人工授粉145天(授粉日期：2021年6月18日，果荚采收日期：2021年11月10日)后成熟饱满未裂开的果荚作为玉龙杓兰种子非共生萌发的材料，采集好的果荚用牛皮纸袋装着放入4℃的冰箱尽快播种。
3.玉龙杓兰果荚及种子预处理
将玉龙杓兰果荚清洗干净，在超净工作台中用无菌水冲洗果荚，用75％无水乙醇浸泡果荚1分钟，后用0.1％升汞浸泡消毒20分钟，再用大量无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干果荚表面水分，用灭菌手术刀将果荚横切成两段，将所有种子抖落到无菌培养皿中。用无菌水将种子制成种子悬浮液，在悬浮液中加入一滴表面活性剂吐温20备用。
4.玉龙杓兰非共生萌发培养基配方
B5基本培养基配方：0.11324g/L无水氯化钙、0.15g/L磷酸二氢钠、2.5g/L硝酸钾、0.134g/L硫酸铵、0.122.09g/L无水硫酸镁、27.8mg/L硫酸亚铁、37.3mg/L乙二胺四乙酸二钠、10.0mg/L硫酸锰、2.0mg/L硫酸锌、0.25mg/L钼酸钠、0.025mg/L氯化钴、3.0mg/L硼酸、0.75mg/L碘化钾、0.025mg/L硫酸铜、10.0mg/L维生素B1、1.0mg/L维生素B6、1.0mg/L烟酸、1g/L肌醇、20g/L蔗糖、7g/L琼脂。
玉龙杓兰非共生萌发培养基配方为在B5基本培养基的基础上再加上10g/L椰子粉、0.5g/L活性碳粉、0.5mg/L 6-BA进行改良(后续称为改良B5培养基)。
玉龙杓兰继代培养基：在改良B5培养基的基础上加0.2mg/L NAA和100g/L土豆匀浆，活性炭的用量增加为1.0g/L。
对照组萌发培养基：MS、KC、VW、H1(花宝1号)、H2(花宝2号)。对照组培养基中均加入10g/L椰子粉、0.5g/L活性碳粉、0.5mg/L 6-BA进行改良。
以上培养基用氢氧化钠溶液和盐酸调节培养基pH至5.6。在100mL锥形瓶中装入20mL培养基并进行灭菌处理(灭菌锅中121℃灭菌20min)，自然冷却后用于玉龙杓兰种子播种。
5.玉龙杓兰种子播种
用移液枪吸取种子悬浮液500μL,添加到改良B5培养基中进行非共生萌发培养。与以往直接用果荚播种不同，此次播种将不同果荚种子取出，制备混合种子悬浊液，充分考虑不同果荚质量问题对萌发的影响。
6.玉龙杓兰非共生萌发培养
将已播种的三角培养瓶置于培养架上进行培养，培养条件为温度：23±2℃，暗培养。
7.不同基础培养基对玉龙杓兰种子非共生萌发的影响
玉龙杓兰种子在播种时，同时采用MS、KC、VW、H1(花宝1号)、H2(花宝2号)、B5几种培养基作为基础萌发培养基，均加入10g/L椰子粉、0.5g/L活性碳粉、0.5mg/L 6-BA进行改良。玉龙杓兰在不同基础培养基中的萌发情况如下表1所示：玉龙杓兰启动萌发时间为播种后120D，到180D基本完成萌发(原球茎数量不再增加)。玉龙杓兰在B5、MS、KC、VW、H1中均能萌发出白色原球茎，在H2中不能萌发。萌发率分别为78.67％、25.67％、14.67％、21.33％、11.33％(180D)。在萌发出白色原球茎后，继续暗培养，玉龙杓兰在B5中能分化出根和芽，在MS、VW中继续暗培养120D，原球茎不在继续长大分化，在KC、H1中，原球茎褐化死亡。综合原球茎分化出根和芽的表现，后续继代培养继续采用B5作为基础培养基。
表1不同基础培养基对玉龙杓兰种子非共生萌发的影响(180D)
8.光照及暗培养对玉龙杓兰种子非共生萌发的影响
以改良B5培养基作为玉龙杓兰种子非共生萌发培养基，在培养过程中，分别采用光照培养及暗培养两种方式对种子进行培养，培养180D统计萌发情况。从表2中可以看出，在相同的培养基及培养温度下，玉龙杓兰在光下几乎没有萌发出白色原球茎，在暗培养下玉龙杓兰不仅萌发出原球茎，萌发率达78.33％，而且部分原球茎已经分化出根。
表2光暗培养对玉龙杓兰种子非共生萌发的影响(180D)
9.玉龙杓兰继代培养
在玉龙杓兰非共生萌发阶段，改良B5培养基能使玉龙杓兰种子萌发出白色原球茎，并且能进一步分化出根和芽，后续继续采用改良B5作为继代培养的培养基，在改良B5的基础上添加0.2mg/L NAA和100g/L土豆匀浆，并把活性炭的用量增加为1.0g/L。当原球茎分化出1-2厘米根时，将玉龙杓兰转接到继代培养基中，继续进行暗培养。暗培养一段时间后，根继续长长，根上长出细小绒毛，并且长出芽。在该继代培养基中，98％以上的玉龙杓兰都能成活并长根和芽，说明该培养基比较合适玉龙杓兰幼苗的生长。当根长到10-12cm，芽长到2-3cm，即可将幼苗进行炼苗移栽到栽培基质中。
尽管已经示出和描述了本发明的较佳实施例，本领域的普通技术人员应当理解不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰仍然视为本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）玉龙杓兰人工异花授粉；
（2）玉龙杓兰果荚采收：采集野外人工授粉145 天后成熟饱满未裂开的果荚作为玉龙杓兰种子非共生萌发的材料，所述果荚采摘后用牛皮纸装袋，放入4℃的冰箱存储备用；
（3）玉龙杓兰果荚及种子预处理；
（4）玉龙杓兰非共生萌发培养：所述非共生萌发培养用培养基为改良B5培养基，所述改良B5培养基为在B5基本培养基的基础上再加上10 g/ L 椰子粉、0.5 g/ L 活性碳粉、0.5mg/L 6-BA；
（5）玉龙杓兰继代培养；
玉龙杓兰继代培养所用培养基为在改良B5培养基的基础上加 0.2 mg/L NAA和100g/L土豆匀浆，活性炭的用量增加为1.0g/L；
步骤（4）和步骤（5）中，所述培养基的pH为5.6；培养条件为温度：23±2℃，暗培养；
步骤（3）中，玉龙杓兰果荚预处理步骤为：在超净工作台中用无菌水将玉龙杓兰果荚冲洗干净，用75%无水乙醇浸泡果荚1分钟，后用0.1%升汞浸泡消毒20分钟，再用大量无菌水冲洗，用无菌滤纸吸干果荚表面水分备用；
步骤（3）中，玉龙杓兰种子预处理步骤为：用灭菌手术刀将果荚横切成两段，将所有种子抖落到无菌培养皿中，用无菌水将种子制成种子悬浮液，在悬浮液中加入一滴表面活性剂备用；所述表面活性剂为吐温20。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310194706.5A CN116171859B (zh) | 2023-03-03 | 2023-03-03 | 一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310194706.5A CN116171859B (zh) | 2023-03-03 | 2023-03-03 | 一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116171859A CN116171859A (zh) | 2023-05-30 |
| CN116171859B true CN116171859B (zh) | 2024-05-03 |
Family
ID=86436373
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310194706.5A Active CN116171859B (zh) | 2023-03-03 | 2023-03-03 | 一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116171859B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116584394A (zh) * | 2023-06-21 | 2023-08-15 | 山西中医药大学 | 一种大花杓兰种子的非共生萌发、原球茎生根和成苗方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113924841A (zh) * | 2021-10-20 | 2022-01-14 | 云南省林业和草原科学院 | 一种丽江杓兰种子非共生萌发方法 |
| CN115104536A (zh) * | 2022-07-28 | 2022-09-27 | 云南省林业和草原科学院 | 一种暖地杓兰种子萌发及繁育栽培方法 |
| CN115589948A (zh) * | 2022-10-25 | 2023-01-13 | 云南省林业和草原科学院（Cn） | 一种华白及非共生萌发培养基及繁殖方法 |
-
2023
- 2023-03-03 CN CN202310194706.5A patent/CN116171859B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113924841A (zh) * | 2021-10-20 | 2022-01-14 | 云南省林业和草原科学院 | 一种丽江杓兰种子非共生萌发方法 |
| CN115104536A (zh) * | 2022-07-28 | 2022-09-27 | 云南省林业和草原科学院 | 一种暖地杓兰种子萌发及繁育栽培方法 |
| CN115589948A (zh) * | 2022-10-25 | 2023-01-13 | 云南省林业和草原科学院（Cn） | 一种华白及非共生萌发培养基及繁殖方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 兰花种子的原球茎诱导及其生长分化研究;古碧珠;刘柏涛;何嘉碧;梁红;;安徽农业科学;36(31);13511-13513 * |
| 华梅 ; 孔继君 ; 向振勇 ; 赵黎明 ; 蒋宏 ; .文山兜兰种子非共生萌发成苗的研究.西部林业科学.2020,(03),60-63、77. * |
| 古碧珠 ; 刘柏涛 ; 何嘉碧 ; 梁红 ; .兰花种子的原球茎诱导及其生长分化研究.安徽农业科学.2008,36(31),13511-13513. * |
| 文山兜兰种子非共生萌发成苗的研究;华梅;孔继君;向振勇;赵黎明;蒋宏;;西部林业科学(03);60-63、77 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116171859A (zh) | 2023-05-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HIDAKA et al. | In vitro differentiation of haploid plants by anther culture in Poncirus trifoliata (L.) Raf. | |
| CN111616052A (zh) | 一种苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法、应用 | |
| CN103461143B (zh) | 一种油茶组织培养快速繁殖方法 | |
| CN1255022C (zh) | 兜兰的无菌播种和组织培养方法 | |
| CN116171859B (zh) | 一种玉龙杓兰种子非共生萌发方法 | |
| CN113142059A (zh) | 一种花叶良姜组培芽增殖生根同步培养的方法 | |
| CN112335549A (zh) | 一种通过组织离体培养获得落叶松再生植株的方法 | |
| CN102144543A (zh) | 一项铁线莲阿拉贝拉组织培养快繁技术 | |
| CN104737912A (zh) | 一种非洲菊组培快繁培养基及其培育方法 | |
| CN105532467B (zh) | 一种濒危羊踯躅离体组织培养繁殖与保存的方法 | |
| CN108077071A (zh) | 穗花牡荆组织培养用培养基及快速繁殖方法 | |
| CN106857258B (zh) | 一种带叶兜兰的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN110754361B (zh) | 一种浙江安息香离体胚诱导丛生芽快速繁殖方法 | |
| CN112970585A (zh) | 一种面包果种苗的高通量繁育方法 | |
| CN108967196B (zh) | 一种油菜离体小孢子再生植株的培养方法 | |
| CN115589948B (zh) | 一种华白及非共生萌发培养基及繁殖方法 | |
| CN105379621A (zh) | 一种大岛樱成年优良单株“小乔”樱的高效离体植株再生方法 | |
| CN113207686B (zh) | 一种基于种皮愈伤组织分化的香椿再生技术 | |
| CN108112479A (zh) | 一种番木瓜组培苗分化芽的茎段悬空植叶促根方法 | |
| CN114431154A (zh) | 一种通过白牛槭休眠芽无性扩繁的方法 | |
| CN108094207A (zh) | 湿地松体细胞胚胎发生和植株再生的方法 | |
| CN109329047B (zh) | 一种提高玉铃花组织培养容器苗效率的方法 | |
| CN109863998B (zh) | 一种蒙椴种苗的组织培养方法 | |
| CN114467747A (zh) | 一种蒙自兰快速繁殖方法及培养基 | |
| Huang et al. | Chinese gooseberry, kiwifruit (Actinidia spp.) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |