CN1255022C - 兜兰的无菌播种和组织培养方法 - Google Patents
兜兰的无菌播种和组织培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1255022C CN1255022C CN 200310112035 CN200310112035A CN1255022C CN 1255022 C CN1255022 C CN 1255022C CN 200310112035 CN200310112035 CN 200310112035 CN 200310112035 A CN200310112035 A CN 200310112035A CN 1255022 C CN1255022 C CN 1255022C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- medium
- litre
- paphiopedilum
- seedling
- aseptic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明涉及兜兰的无菌播种和组织培养技术。兜兰又名拖鞋兰，在我国所有的原生种都是国家一级保护植物。而兜兰种子由于胚发育不完全，自然状态下极难萌发，其无菌播种技术虽早有研究，但普遍存在萌发率低，成苗率低的困难，其无性增殖更是困难重重；目前兜兰的商业生产中多利用自交生产种苗，而兜兰的现代杂交种的倍性复杂，往往只能获得少量种子，难以进行大规模生产。本发明提供的兜兰的无菌播种和组织培养技术，采用人工营养液利用无菌播种的方法能获得大量试管苗，并利用无菌播种出的原球茎和小苗进行增殖，通过生根培养能形成完整植株。具有萌发率高，出苗快，苗壮，种苗品质好生长良好等优势。
Description
技术领域
本发明涉及兜兰的无菌播种和组织培养方法。
背景技术
兜兰(Epidendrum)又名拖鞋兰，本属植物全球约有70多种，附生或地全部为珍贵的濒危物种，在我国所有的原生种都是国家一级保护植物。兜兰的栽培和育种历史悠久，目前有大量的杂交品种，在世界范围内有众多的狂热爱好者。兜兰的繁殖多采用分株法，繁殖速度慢；而兜兰种子由于胚发育不完全，自然状态下极难萌发，其无菌播种技术虽早有研究，但普遍存在萌发率低，成苗率低的困难，其无性增殖更是困难重重；目前兜兰的商业生产中往往利用自交生产种苗，而兜兰的现代杂交种的倍性复杂，往往只能获得少量种子，难以进行大规模生产。
本发明提供的兜兰的无菌播种和组织培养技术，采用人工营养液利用无菌播种的方法能获得大量试管苗，并利用无菌播种出的原球茎和小苗进行增殖，通过生根培养能形成完整植株。
发明内容
本发明提供的兜兰的无菌播种和组织培养方法，在开花时选取生长健壮的母株进行人工授粉，授粉后120天，果实成熟时取下，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分种，无菌水冲洗4-5次切开果实，用接种针将白色粉末状胚接种到改良R培养基(R培养基+NDM培养基维生素成分)附加10％的椰子汁、6-苄基嘌呤0.5毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升、活性碳2g/升的培养基中，30天左右胚萌发，萌发率在30％-95％之间，60天左右形成整株后，接种到改良R培养基附加马铃薯提取液100毫升/升、6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升的壮苗培养基上壮苗培养。为获得更多的种庙，利用原球茎或小苗继代培养在改良R培养基附加6-苄基嘌呤2-5毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升上，能形成芽和类原球茎混合组织，这类组织在壮苗培养基上，30天后可形成带短根的丛生植株，及时将植株分开，接种到新的壮苗培养基上培养壮庙，种子萌发与生根壮苗时蔗糖浓度以2％最佳，继代培养时以3％最佳，当试管苗长至3-4厘米时，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入蕨根和水苔的混合基质中，保持适当的通风和足够的湿度，移栽的成活率可达90％以上。
本发明所述的技术包括如下的步骤：
1、材料：开花时选取生长健壮的母株进行人工授粉，授粉后果实120天成熟做为外植体用播种。
2、无菌播种：用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4-5次后切开果实，用接种针将白色粉末状胚接种到附加6-苄基嘌呤0.5毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升、活性碳2g/升、10％椰子汁和NDM培养基维生素成分的R培养基中，30天左右胚萌发，60天左右形成完整小植株，及时将小植株转入改良R培养基附加马铃薯提取液100毫升/升、6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升壮苗培养基。
3、组织培养：将无菌播种产生的原球茎或小苗培养在改良R培养基附加6-苄基嘌呤2-5毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升上能形成芽和类原球茎混合组织，在相同的培养基上能进行继代增殖，将混合组织接种到壮苗培养基上，30天后可形成带短根的丛生植株，及时将植株分开，接种到新的壮苗培养基上培养壮苗。
4、试管苗移栽：试管苗壮苗培养90天后(植株约3-8厘米高)，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入泥炭：蕨根为1∶1的混合基质中，保持适当通风和足够的湿度，移栽成活率可达90％以上。所用培养基种子萌发与壮苗时蔗糖浓度以2％最佳，增殖培养时以3％最佳，pH5.8-6.0，琼脂0.7％。培养温度(26±2)℃，光照度1500-2000lx，光照12小时/天。
本发明所述的无菌播种和试管育苗方法，与现有技术相比，具有萌发率高，出苗快，苗壮，种苗品质好、生长良好等优势。本发明供试材料有广泛代表性，可作为兜兰属其它种、属内或与其它属间杂种的无菌播种和组织培养方法，具有配方简单有效、投入少，产出高的特点，培养设备简单，因而有很好的应用前景。
实施例：
1、材料：开花时选取生长健壮的兜兰母株进行人工授粉，授粉后果实120天成熟，做为外植体用播种。
2、无菌播种：取下果实，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4-5次后切开果实，用接种针将白色粉末状胚接种到附加6-苄基嘌呤0.5毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升、活性碳2g/升、10％椰子汁和NDM培养基维生素成分的R培养基中，30天左右胚萌发，60天左右形成完整小植株，及时将小植株转入改良R培养基附加马铃薯提取液100毫升/升、6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升壮苗培养基。
3、组织培养：将无菌播种产生的原球茎或小苗培养在改良R培养基附加6-苄基嘌呤2-5毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升上能形成芽和类原球茎混合组织，在相同的培养基上能进行继代增殖，将混合组织接种到壮苗培养基上，30天后可形成带短根的丛生植株，及时将植株分开，接种到新的壮苗培养基上培养壮苗。
4、试管苗移栽：试管苗壮苗培养90天后(植株约3-8厘米高)，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入泥炭：蕨根为1∶1的混合基质中，保持适当通风和足够的湿度，移栽成活率可达90％以上。所用培养基种子萌发与壮苗时蔗糖浓度以2％最佳，增殖培养时以3％最佳，pH5.8-6.0，琼脂0.7％。培养温度(26±2)℃，光照度1500-2000lx，光照12小时/天。
Claims (3)
1、一种兜兰的无菌播种和组织培养方法，其特征在于，在开花时选取生长健壮的母株进行人工授粉，授粉后120天，成熟果实取下，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分种，无菌水冲洗4-5次切开果实，用接种针将白色粉末状胚接种到种子萌发培养基即为NDM培养基维生素成分的改良R培养基附加10％的椰子汁、6-苄基嘌呤0.5毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升及活性炭2克/升的培养基中，60天形成整株后，接种到壮苗培养基即改良R培养基附加马铃薯提取液100毫升/升、6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升的培养基上壮苗培养，为获得更多的种苗，利用原球茎或小苗继代培养在改良R培养基附加6-苄基嘌呤2-5毫克/升，萘乙酸0.2毫克/升上形成芽和类原球茎混合组织，这类组织在该培养基上，30天后形成带短根的丛生植株，及时将植株分开，接种到新的壮苗培养基即改良R培养基附加6-苄基嘌呤2-5毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升培养基上，培养壮苗，当试管苗长至3-4厘米时，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入蕨根和水苔的混合基质中，保持通风和湿度，形成完整植株。
2、根据权利要求1中所述的兜兰无菌播种和组织培养方法，其特征在于所述种子萌发与生根壮苗时蔗糖浓度为2％，继代培养时蔗糖浓度为3％。
3、根据权利要求1中所述的兜兰无菌播种和组织培养方法，其特征在于所述方法作为兜兰属其它种、属内的无菌播种和组织培养方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200310112035 CN1255022C (zh) | 2003-11-06 | 2003-11-06 | 兜兰的无菌播种和组织培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200310112035 CN1255022C (zh) | 2003-11-06 | 2003-11-06 | 兜兰的无菌播种和组织培养方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1541519A CN1541519A (zh) | 2004-11-03 |
| CN1255022C true CN1255022C (zh) | 2006-05-10 |
Family
ID=34336356
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200310112035 Expired - Fee Related CN1255022C (zh) | 2003-11-06 | 2003-11-06 | 兜兰的无菌播种和组织培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1255022C (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101569287B (zh) * | 2009-06-02 | 2011-08-10 | 中国科学院华南植物园 | 接瓣兰种苗的试管繁殖方法 |
| CN101569285B (zh) * | 2009-06-02 | 2011-10-26 | 中国科学院华南植物园 | 兜兰的杂交育种及其种苗繁殖方法 |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101066041B (zh) * | 2007-06-08 | 2011-01-12 | 中国科学院昆明植物研究所 | “莲瓣兰”的无菌播种和组织培养方法 |
| CN102763598B (zh) * | 2012-08-16 | 2013-09-11 | 云南省农业科学院花卉研究所 | 利用体细胞胚繁育文山兜兰苗的方法 |
| CN102884980B (zh) * | 2012-09-17 | 2014-04-02 | 贵州省林业科学研究院 | 巨瓣兜兰组培快繁方法 |
| CN103416294A (zh) * | 2013-08-06 | 2013-12-04 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 同色兜兰的杂交育种及其种苗繁殖方法 |
| CN103704139B (zh) * | 2013-12-30 | 2016-04-06 | 浙江森禾种业股份有限公司 | 多花型兜兰试管苗培育方法 |
| CN105145312A (zh) * | 2015-10-09 | 2015-12-16 | 中国科学院昆明植物研究所 | 一种兜兰瓶苗整体移栽方法 |
| CN105165629A (zh) * | 2015-10-26 | 2015-12-23 | 临沂大学 | 一种虎斑兜兰组培快繁方法 |
| CN105494103B (zh) * | 2016-01-13 | 2017-12-29 | 中国科学院华南植物园 | 一种摩帝类兜兰优质种苗组织培养快速繁殖方法 |
| CN106613960B (zh) * | 2016-10-28 | 2019-06-14 | 中国科学院华南植物园 | 一种海伦兜兰愈伤组织再生体系快速繁殖方法 |
| CN106561456B (zh) * | 2016-10-28 | 2019-03-05 | 中国科学院华南植物园 | 一种海伦兜兰无菌播种快速繁殖方法 |
| CN108633376B (zh) * | 2018-04-21 | 2021-01-12 | 云南省林业和草原科学院 | 一种格力兜兰种子非共生萌发的培养方法 |
| CN109258463B (zh) * | 2018-09-18 | 2022-08-02 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 一种杏黄兜兰的无性繁殖方法 |
| CN109699429A (zh) * | 2019-01-22 | 2019-05-03 | 深圳市荣燊花木有限公司 | 一种蝴蝶兰的培育方法 |
| CN115474546B (zh) * | 2022-10-27 | 2023-10-03 | 广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所 | 一种海伦兜兰素花的繁育方法 |
-
2003
- 2003-11-06 CN CN 200310112035 patent/CN1255022C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101569287B (zh) * | 2009-06-02 | 2011-08-10 | 中国科学院华南植物园 | 接瓣兰种苗的试管繁殖方法 |
| CN101569285B (zh) * | 2009-06-02 | 2011-10-26 | 中国科学院华南植物园 | 兜兰的杂交育种及其种苗繁殖方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1541519A (zh) | 2004-11-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103371100B (zh) | 春石斛兰种苗的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN1255022C (zh) | 兜兰的无菌播种和组织培养方法 | |
| CN101889547B (zh) | 齿瓣石斛种子无菌快速繁殖方法 | |
| CN102884982A (zh) | 金线莲无激素种苗快繁有机生产方法 | |
| CN111616052A (zh) | 一种苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法、应用 | |
| CN117898209B (zh) | 一种色素万寿菊制种过程中快速收集花粉的方法 | |
| CN101695280B (zh) | 红树莓的组织培养与快速繁殖方法 | |
| CN114375840A (zh) | 恢复绣球花杂交后代生长势的培养基及恢复生长的方法 | |
| CN104221861A (zh) | 一种利用幼胚拯救实现小豆和饭豆远缘杂交的方法 | |
| CN111919749B (zh) | 一种金钗石斛种苗快繁用培养基及其快繁方法 | |
| KR20080070106A (ko) | 새우난속 식물의 기내 무균발아를 통한 증식방법 | |
| CN1284444C (zh) | 万带兰的无菌播种和组织培养方法 | |
| CN1631102A (zh) | 独蒜兰的试管种球生产技术 | |
| CN112931197A (zh) | 一种菠萝组织培养苗的制备方法 | |
| CN1541518A (zh) | 独角石斛兰无菌播种和试管育苗技术 | |
| CN1284447C (zh) | 卡特兰的无菌播种和组织培养方法 | |
| CN1255023C (zh) | 火焰兰的快速繁殖方法 | |
| CN108112479A (zh) | 一种番木瓜组培苗分化芽的茎段悬空植叶促根方法 | |
| CN1139318C (zh) | 非洲菊工厂化试管快繁方法 | |
| CN109258475B (zh) | 一种木槿繁殖培育的方法 | |
| CN1218629C (zh) | 树兰的无菌播种和组织培养方法 | |
| CN113826549A (zh) | 一种观赏石斛兰杂交育种方法 | |
| CN101375670B (zh) | 五唇兰的无菌播种和组织培养方法 | |
| CN105613302A (zh) | 一种甜薯茎尖离体快速繁殖的方法 | |
| CN114568301B (zh) | 一种优质高产啤酒大麦的选育方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |