CN101375670B - 五唇兰的无菌播种和组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种五唇兰的无菌播种和组织培养方法,其特征在于选用海南产的原生种为材料,开花时,选择健康母株进行人工授粉,授粉后100-120天将果实取下,用70%-80%酒精浸泡25-35秒后置于0.05%-0.15%的升汞溶液中消毒15-25分钟,无菌水冲洗4~5次后切开果实,用接种针将白色粉末状的种子接种到种子萌发培养基上培养25-30天直到出现原球茎和芽,培养温度为25-28℃,利用原球茎和芽的混合组织在继代培养基上增殖25-35天,增殖温度为25-28℃,使原球茎和芽增加4-6倍,这类组织在壮苗培养基上培养25-35天后形成小苗,把小苗再转到新鲜壮苗培养基上培养,培养25-35天后瓶苗长至3-5厘米高时,把瓶苗移到自然光下炼苗10-20天,光照度为1500~2000LX,而后从瓶中取出,洗净根部的培养基,移入水苔基质或火山石中栽培。其优点为,五唇兰种子萌发率高,试管苗培育时间短、生长健壮,具有可操作性强,应用价值高。
Description
技术领域
本发明涉及一种五唇兰的无菌播种和组织培养方法。
背景技术
五唇兰(Doritis pulcherrima Lindl.)又称朵丽兰,本属原种有两个种,我国只有一种,产于海南。附生或地生。目前有许多与蝴蝶兰杂交的品种(朵丽兰系列),是非常优秀的系列品种,商品价值高,需求量大。五唇兰是极其重要的杂交亲本,由于其株型和花色都相当好,抗逆性又强,自身就具有很高的观赏价值。世界各国的兰花育种工作者都非常重视它,但自然界生存的不多,处于濒危状态。
目前,五唇兰的繁殖主要采用分株繁殖,繁殖速度极慢,而其种子由于胚发育不完全,在自然状态下需与一些特殊的真菌共生才能萌发,实际上是极其困难,萌发率和成苗率都很低。
发明内容
本发明是克服现有技术的不足而提供种子萌发率高,试管苗培育时间短,生长健壮,可操作性强,应用价值高的一种五唇兰的无菌播种和组织培养方法。
为了达到上述目的,本发明是这样实现的,其是一种五唇兰的无菌播种和组织培养方法,其特征在于选用海南产的原生种为材料,开花时,选择健康母株进行人工授粉,授粉后100-120天将果实取下,用70%-80%酒精浸泡25-35秒后置于0.05%-0.15%的升汞溶液中消毒15-25分钟,无菌水冲洗4~5次后切开果实,用接种针将白色粉末状的种子接种到种子萌发培养基上培养25-30天直到出现原球茎和芽,培养温度为25-28℃,利用原球茎和芽的混合组织在继代培养基上增殖25-35天,增殖温度为25-28℃,使原球茎和芽增加4-6倍,这类组织在壮苗培养基上培养25-35天后形成小苗,把小苗再转到新鲜壮苗培养基上培养,培养25-35天后瓶苗长至3-5厘米高时,把瓶苗移到自然光下炼苗10-20天,光照度为1500~2000LX,而后从瓶中取出,洗净根部的培养基,移入水苔基质或火山石中栽培。
在所述种子萌发和壮苗所用的培养基中蔗糖浓度为2%,继代培养基中蔗糖浓度为1.5%。
所述的种子萌发培养基、继代培养基及壮苗培养基的PH值为5.5-6,在种子萌发培养基、继代培养基及壮苗培养基中含有0.7%的琼脂。
所述的种子萌发培养基包括VW培养基,并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升及10%的椰子汁。
所述的壮苗培养基包括VW培养基,并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升及马铃薯提取液100毫升/升。
所述的继代培养基包括VW培养基,并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升及萘乙酸0.5毫克/升。
本发明与现有技术相比的优点为,五唇兰种子萌发率高,试管苗培育时间短、生长健壮,具有可操作性强,应用价值高等优点。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明做进一步的详述:
实施例一
包括下列主要步骤:
1、材料:选择健康母株进行人工授粉,授粉后110天将果实取下作为外植体用于播种;
2、无菌播种:果实用75%酒精浸泡30秒后置于0.1%的升汞溶液中消毒20分钟,无菌水冲洗4~5次后切开果实,用接种针将白色粉末状的种子接种到种子萌发培养基中培养25天左右直到出现原球茎和芽,其培植温度为27℃;种子萌发率在60-95%之间。该种子萌发培养基包括VW培养基,且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升、10%的椰子汁。
3、组织培养:为获得更多的种苗,将在原球茎和芽的混合组织在继代培养基上增殖30天,增殖温度为27℃,使原球茎和芽增加4-6倍。该继代培养基包括VW培养基,且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升及萘乙酸0.2毫克/升。
4、瓶苗移栽:将增殖后的原球茎和芽在壮苗培养基中培养30天后,瓶苗长至3-5厘米高时,把瓶苗移到自然光下炼苗15天,其光照度为1800LX而后从瓶中取出,洗净根部的培养基,移入水苔基质或火山石中培养,保持通风和适当的湿度,移栽的成活率达95%以上。该壮苗培养基包括VW培养基,且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升及马铃薯提取液100毫升/升。
其中种子萌发培养基和壮苗培养基的蔗糖浓度为2%,继代培养基的蔗糖浓度为1.5%。种子萌发培养基、壮苗培养基及继代培养基的PH为5.5-6,在它们中还含有琼脂0.7%。
实施例二
包括下列主要步骤:
1、材料:选择健康母株进行人工授粉,授粉后100天将果实取下作为外植体用于播种;
2、无菌播种:果实用70%酒精浸泡25秒后置于0.05%的升汞溶液中消毒15分钟,无菌水冲洗4~5次后切开果实,用接种针将白色粉末状的种子接种到种子萌发培养基中培养25天左右直到出现原球茎和芽,其培植温度为25℃;种子萌发率在60-95%之间。该种子萌发培养基包括VW培养基,且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升、10%的椰子汁。
3、组织培养:为获得更多的种苗,将在原球茎和芽的混合组织在继代培养基上增殖25天,增殖温度为25℃,使原球茎和芽增加4-6倍。该继代培养基包括VW培养基,且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升及萘乙酸0.2毫克/升。
4、瓶苗移栽:将增殖后的原球茎和芽在壮苗培养基中培养25天后,瓶苗长至3-5厘米高时,把瓶苗移到自然光下炼苗10天,其光照度为1500LX而后从瓶中取出,洗净根部的培养基,移入水苔基质或火山石中培养,保持通风和适当的湿度,移栽的成活率达95%以上。该壮苗培养基包括VW培养基,且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升及马铃薯提取液100毫升/升。
其中种子萌发培养基和壮苗培养基的蔗糖浓度为2%,继代培养基的蔗糖浓度为1.5%。种子萌发培养基、壮苗培养基及继代培养基的PH为5.5-6,在它们中还含有琼脂0.7%。
实施例三
包括下列主要步骤:
1、材料:选择健康母株进行人工授粉,授粉后120天将果实取下作为外植体用于播种;
2、无菌播种:果实用80%酒精浸泡35秒后置于0.15%的升汞溶液中消毒25分钟,无菌水冲洗4~5次后切开果实,用接种针将白色粉末状的种子接种到种子萌发培养基中培养30天左右直到出现原球茎和芽,其培植温度为28℃;种子萌发率在60-95%之间。该种子萌发培养基包括VW培养基,且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升及10%的椰子汁。
3、组织培养:为获得更多的种苗,将在原球茎和芽的混合组织在继代培养基上增殖35天,增殖温度为28℃,使原球茎和芽增加4-6倍。该继代培养基包括VW培养基,且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升及萘乙酸0.2毫克/升。
4、瓶苗移栽:将增殖后的原球茎和芽在壮苗培养基中培养35天后,瓶苗长至3-5厘米高时,把瓶苗移到自然光下炼苗15天,其光照度为2000LX而后从瓶中取出,洗净根部的培养基,移入水苔基质或火山石中培养,保持通风和适当的湿度,移栽的成活率达95%以上。该壮苗培养基包括VW培养基,且在每升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升及马铃薯提取液100毫升/升。
其中种子萌发培养基和壮苗培养基的蔗糖浓度为2%,继代培养基的蔗糖浓度为1.5%。种子萌发培养基、壮苗培养基及继代培养基的PH为5.5-6,在它们中还含有琼脂0.7%。
Claims (3)
1.一种五唇兰的无菌播种和组织培养方法,其特征在于选用海南产的原生种为材料,开花时,选择健康母株进行人工授粉,授粉后100-120天将果实取下,用70%-80%酒精浸泡25-35秒后置于0.05%-0.15%的升汞溶液中消毒15-25分钟,无菌水冲洗4~5次后切开果实,用接种针将白色粉末状的种子接种到种子萌发培养基上培养25-30天直到出现原球茎和芽,培养温度为25-28℃,利用原球茎和芽的混合组织在继代培养基上增殖25-35天,增殖温度为25-28℃,使原球茎和芽增加4-6倍,这类组织在壮苗培养基上培养25-35天后形成小苗,把小苗再转到新鲜壮苗培养基上培养,培养25-35天后瓶苗长至3-5厘米高时,把瓶苗移到自然光下炼苗10-20天,光照度为1500~2000LX,而后从瓶中取出,洗净根部的培养基,移入水苔基质或火山石中栽培;所述的种子萌发培养基包括VW培养基,并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.2毫克/升及10%的椰子汁;所述的继代培养基包括VW培养基,并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升及萘乙酸0.5毫克/升;所述的壮苗培养基包括VW培养基,并在每1升VW培养基中含有6-苄基嘌呤0.2毫克/升、萘乙酸0.5毫克/升及马铃薯提取液100毫升/升。
2.根据权利要求1中所述的五唇兰的无菌播种和组织培养方法,其特征在于在所述种子萌发和壮苗所用的培养基中蔗糖浓度为2%,继代培养基中蔗糖浓度为1.5%。
3.根据权利要求1中所述的五唇兰的无菌播种和组织培养方法,其特征在于所述的种子萌发培养基、继代培养基及壮苗培养基的PH值为5.5-6,在种子萌发培养基、继代培养基及壮苗培养基中含有0.7%的琼脂。
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