CN1284447C - 卡特兰的无菌播种和组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供卡特兰的实生种苗快速繁殖技术。卡特兰被喻为兰花之王，花型优美，色彩艳丽，观赏价值极高。国际市场上贸易额巨大，在我国市场上也将可能成为蝴蝶兰、大花惠兰之后的一个新的热带兰销售热点。但现有常规生产技术采用固体培养基播种，种子萌发时间长，生长缓慢；操作费工，培育时间长，成本高。本发明的目的是通过改进生产流程，前期利用液体培养，促使种子快速萌发生长，然后直接将原球茎接种到成苗培养基上，一步成苗，减少了中间环节，大大降低成本和培养时间，该技术可以应用于卡特兰属内，近源属间杂交种的实生种苗生产和育种工作，具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明提供卡特兰的实生种苗快速繁殖技术。
背景技术
卡特兰被喻为兰花之王，有大花品系，迷你品系，花型优美，色彩艳丽，观赏价值极高。可用于盆栽或吊盆观赏，也广泛应用于切花，国际市场上贸易额巨大，在我国市场上也将可能成为蝴蝶兰、大花惠兰之后的一个新的热带兰销售热点。
卡特兰商品苗中大部分是实生种苗，目前其生产流程为：
种子萌发培养基(母瓶)→生长增殖培养基(中母瓶)→成苗培养基
在固体萌发培养基上从种子萌发到继代转瓶依品种不同而需要2个月到半年之久，经中母瓶形成小苗后，再转接到成苗培养基上壮苗生根，这往往需要花费大量的人工和培养成本。
卡特兰的繁殖可采用分株法，但繁殖速度慢，而卡特兰种子由于胚发育不完全，自然状态下极难萌发。利用试管无菌播种的方法能获得大量试管苗，但现有常规生产技术采用固体培养基播种，种子萌发时间长，生长缓慢；其生产流程为播种母瓶---中母瓶---成苗培养，种子萌发后需要经过中母瓶阶段，操作费工，培育时间长，成本高。
发明内容
本发明的目的是通过改进生产流程，前期利用液体培养，促使种子快速萌发生长，然后直接将原球茎接种到成苗培养基上，一步成苗，减少了中间环节，大大降低成本和培养时间，最快4个月即可由种子成苗出瓶。
本发明提供了卡特兰实生种苗的液-固两步法快速试管繁殖方法和所使用的培养基，技术简单实惠可操作性强，应用价值高。
本发明技术即前期利用液体培养，促使种子快速萌发生长，然后直接将原球茎接种到成苗培养基上，一步成苗，提供的培养基极适合卡特兰生长发育需求，特别是具有很高的pH缓冲能力，其具体技术包括步骤如下：
1.材料：采用性状优良的卡特兰为亲本，开花时选取生长健壮的母株进行卡特兰的自交授粉及杂交，授粉后果实120-150天基本成熟时做为外植体用于播种；
2.无菌播种：取基本成熟的果实，用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水冲洗4～5次后切开果实，将白色粉末状种子接种到种子萌发液体培养基(改良V&W培养基+6-苄基嘌呤0.2-1毫克/升+萘乙酸0.2-1毫克/升10％+10-20％椰子汁)中，150rpm摇床振荡培养；一周左右胚萌发，20天左右形成直径1-2mm的绿色原球茎；
3.成苗培养：将液体培养基中形成的原球茎用吸管接种到成苗培养基(花宝一号(Hyponex1)3克/升+香蕉汁100克/升+6-苄基嘌呤0.1-1毫克/升+萘乙酸0.5-2毫克/升+活性碳0.5-2克/升+琼脂7克/升+MES1克/升)上培养，30天左右可形成完整的小植株，继续培养45天左右可以长成健壮大苗；
4.试管苗移栽：当试管苗能长至3-4厘米高时，转移到自然光下炼苗7-14天，观察植株形成较好的角质层；然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入塘基石2：炭化树皮1的混合基质中，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达95％以上；
在实验中所用的培养基都附加蔗糖20克/升，pH5.2-5.4。培养温度(25±1)℃，光照度1500～20001x，光照12小时/天。
本发明技术可大大降低卡特兰实生苗生产的成本和缩短生产周期，可以应用于卡特兰属内，近源属间杂交种的实生种苗生产和育种工作，具有良好的应用前景。
本发明技术提供的培养基具有高pH缓冲能力，这是进行液体培养和后期一步成苗(要求长期培养)成功的关键，本培养基极适合卡特兰生长发育。
本发明技术能成功地进行卡特兰实生种苗的快速繁殖。实施该技术只需有常规的植物组织培养设备即可进行，具有投入少，产出高的特点。
具体实施方式
实例1：
1、材料：Cattleya bowringiana var.coerulea(蓝宝石卡特兰)开花后3天取不同植株个体授粉，授粉后180天取未开裂果家荚播种。
2、果荚消毒：将果荚用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水冲洗5次。
3、种子液体培养：切开果荚，将白色粉末状种子接种到种子萌发液体培养基(改良V&W培养基+6-苄基嘌呤0.5毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+10％椰子汁)中，150rpm摇床振荡培养；一周左右胚萌发，20天左右形成直径1-2mm的绿色原球茎。
4、成苗培养：将液体培养基中培养25天形成的原球茎用吸管接种到成苗培养基(花宝一号(Hyponex 1)3克/升+香蕉汁100克/升+6-苄基嘌呤1毫克/升+萘乙酸0.5毫克/升+活性碳1克/升+琼脂7克/升+MES1克/升)上培养，30天左右形成完整的小植株，继续培养60天左右长成健壮大苗。
5、试管苗移栽：当试管苗培养65天时，苗长至3-4厘米高，转移到温室自然光下炼苗14天，观察植株已形成较好的角质层；然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入塘基石2：炭化树皮1的混合基质中，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率约95％。
在实验中所用的培养基都附加蔗糖20克/升，pH5.2-5.4。培养温度(25±1)℃，光照度1500～20001x，光照12小时/天。
Claims (2)
1、一种卡特兰的无菌播种和组织培养方法，其特征在于包括如下步骤：
1)、材料：采用卡特兰为亲本，开花时选取生长健壮的母株进行卡特兰的自交授粉及杂交，授粉后120-180天果实成熟时做为外植体用于播种；
2)、无菌播种：果实用75％的酒精浸泡30秒后置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水冲洗4～5次后切开果实，将白色粉末状种子接种到种子萌发液体培养基中，150rpm摇床振荡培养；一周胚萌发，20天形成直径1-2mm的绿色原球茎，所述种子萌发液体培养基为：改良V&W培养基+6-苄基嘌呤0.2-1毫克/升+萘乙酸0.2-1毫克/升+10％-20％椰子汁；
3).成苗培养：将液体培养基中形成的原球茎用吸管接种到成苗培养基上培养，30天形成完整的小植株，继续培养45-60天长成健壮大苗，所述成苗培养基为：花宝一号3克/升+香蕉汁100克/升+6-苄基嘌呤0.1-1毫克/升+萘乙酸0.5-2毫克/升+活性碳0.5-2克/升+琼脂7克/升+MES 1克/升；
4).试管苗移栽：当试管苗长至3-4厘米高时，转移到自然光下炼苗7-14天，观察植株形成较好的角质层；然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，移入塘基石∶炭化树皮为2∶1的混合基质中，保持通风和足够的湿度。
2、根据权利要求1所述的卡特兰的无菌播种和组织培养方法，其特征在于所用的培养基都附加蔗糖20克/升，pH 5.2-5.4；培养温度25±1℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天。
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