CN103314861B - 一种石斛兰试管内杂交育种方法 - Google Patents

一种石斛兰试管内杂交育种方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种石斛兰试管内杂交育种方法。本发明采用试管内杂交育种的方法能大大缩短果实的成熟期并在短时间内使杂交后代在试管内开花并进行花形花色观察，培育出新品种，从而加快了石斛兰的育种速度，在国际上属于首次报道。同时由于试管内石斛能周年开花，能进行自然界花期不遇品种间的杂交。另外，本发明各阶段使用的培养基，其利用“花宝”为主要成分的培养基成份独特，不但成本低，而且开花率高，果实发育快。并且实施本发明只需有简单的植物组织培养设备即可进行，因此整个育种方法简便，成本低，为培育高品质的石斛兰品种创造了条件。

Description

一种石斛兰试管内杂交育种方法
技术领域：
本发明属于植物育种领域，具体涉及一种石斛兰试管内杂交育种方法。
背景技术：
石斛兰属(Dendrobium)植物约有1600种，我国有70多种，大多数种类具有较高的观赏价值，是世界兰花产业中最重要的种类之一，市场上流行的观赏石斛兰品种多为杂交品种。常规的石斛兰的杂交育种周期长，一个新的杂交种的育成常常需要4-6年的时间；同时，对于一些花期不遇的种类往往难以进行杂交，即使采用低温保存花粉，也常常因为花粉污染或失去活力而难以成功。
发明内容：
本发明的目的是提供一种能在试管内成功的进行石斛兰的杂交育种并育出新品种，从而加快石斛兰的育种进程的石斛兰试管内杂交育种方法。
本发明的石斛兰试管内杂交育种方法，其特征在于，包括以下步骤：
材料：开花时选取生长健壮的不同品种的石斛兰母株进行人工授粉，待果实基本成熟时，选择果实中的种子用于无菌播种；
a、无菌播种：先将果实消毒后，用无菌水冲洗若干遍，再切开果实，用接种针将黄白色粉末状胚接种到种子萌发培养基上培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，种子萌发，形成原球茎，直至形成2～3厘米高的完整的小植株；
b、试管开花诱导和试管内杂交育种：将2～3厘米高的完整的小植株转到试管开花诱导培养基上，培养直至开花，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，选取试管内花色、花形正常的不同品种的石斛兰花朵在无菌条件下进行相互间的人工授粉，授粉后将带花植株转移到生根壮苗培养基上培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，直至果实成熟，
c、杂交组合的无菌播种和试管开花诱导：采取b步骤的试管内的成熟果实，切开，将胚在种子萌发培养基上播种培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，种子萌发形成原球茎，直至形成完整的小植株，再将小植株转移到试管开花诱导培养基上进行开花诱导培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，试管内开花后，观察杂交组合的花形和花色；
d、新品种的组织培养：开花后选择花形、花色优良的株系进行组织培养，操作时以优良株系的茎尖或茎节为外植体，在原球茎诱导和继代增殖培养基上进行继代增殖培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，形成类原球茎，将类原球茎转移到生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，得到试管苗；
e、试管苗移栽：当试管苗能长至3～4厘米高时，转移到自然光下进行炼苗，再移栽到基质中培养，得到石斛兰杂交种苗；
所述的种子萌发培养基为每升含有：花宝1号2～3克、蛋白胨0.5～2克、椰子汁50～100亳升、蔗糖15～30克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、活性炭0.5～1克，常量的琼脂，余量为水，pH5.2～5.4；
所述的试管开花诱导培养基每升含有：花宝1号1～1.5克、花宝2号1～1.5克、水解酪蛋白0.1～0.3克、6-苄基嘌呤0.5～3.0毫克、萘乙酸0.1～0.5毫克、多效唑0.1～0.5毫克、蔗糖30～40克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分，常量的琼脂，余量为水，pH5.2～5.4；
所述的生根壮苗培养基每升含有：花宝1号1～2克、花宝2号1～1.5克、蛋白胨0.5～2克、蔗糖15～30克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、萘乙酸0.1～0.5毫克、香蕉汁50～100克、活性炭0.5～1克、常量的琼脂，余量为水，pH5.2～5.4；
所述的原球茎诱导和继代增殖培养基每升含有：花宝1号1～2克，花宝2号1～1.5克、蛋白胨0.5～2克、椰子汁50～100亳升、蔗糖20～30克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、6-苄基嘌呤0.5～2.0毫克、常量的琼脂，余量为水，pH5.2～5.4。
所述的步骤a无菌播种：先将果实消毒后，用无菌水冲洗若干遍优选为先将果实用体积分数75%的酒精浸泡30秒后置于质量分数0.1%的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4～5次。
所述的步骤d的类原球茎还可以转接到新的原球茎诱导和继代增殖培养基上进行继代增殖培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，形成的类原球茎，类原球茎再转移到生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养。
所述的试管苗移栽优选为当试管苗能长至3～4厘米高时，每丛有2～3个芽时，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用泥炭和兰石按体积比1：1比例混合的混合基质中栽培，常规条件下培养，得到石斛兰杂交种苗，移栽的成活率均可达95%以上。
所述的花宝1号和花宝2号属于现有技术中的产品，从市场上可以购买到。
所述的种子萌发培养基中的MS培养基的维生素（含肌醇）成分是指每升MS培养基中含有多少的维生素（含肌醇）成分，在种子萌发培养基中也含有同等量，下面的试管开花诱导培养基、生根壮苗培养基、原球茎诱导和继代增殖培养基按相同的方式处理。
琼脂主要的目的是让培养基成为固体状，其量属于常规知识，一般为6～8%。
本发明采用试管内杂交育种的方法能大大缩短果实的成熟期并在短时间内使杂交后代在试管内开花并进行花形花色观察，培育出新品种，从而加快了石斛兰的育种速度，在国际上属于首次报道。同时由于试管内石斛能周年开花，能进行自然界花期不遇品种间的杂交。另外，本发明各阶段使用的培养基，其利用“花宝”为主要成分的培养基成份独特，不但成本低，而且开花率高，果实发育快。并且实施本发明只需有简单的植物组织培养设备即可进行，因此整个育种方法简便，成本低，为培育高品质的石斛兰品种创造了条件。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：铁皮石斛（Dendrobium officinale）和霍山石斛（Dendrobium huoshanense）的杂交育种
1．材料：开花时选取生长健壮的铁皮石斛和霍山石斛母株分别进行种内人工异花授粉，在授粉后110天，两种石斛兰的果实基本成熟，选择果实中的种子用于无菌播种。
2．无菌播种：播种时，先将果实用体积分数75%的酒精浸泡30秒后置于质量分数0.1%的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4次后切开果实，用接种针将黄白色粉末状胚接种到种子萌发培养基上培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天，12天左右种子开始萌发，形成原球茎。75天时能形成2～3厘米高的完整的小植株。
3.试管开花诱导和试管内杂交育种：将2～3厘米高的铁皮石斛和霍山石斛小植株转瓶到试管开花诱导培养基上，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天，50天左右，铁皮石斛的开花率可达50%，霍山石斛能达到30%。选取试管内花色、花形正常的不同品种的石斛兰花朵在超净工作台上进行不同品种相互间的人工授粉，授粉后将带花植株转移到生根壮苗培养基培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天，50天果实即可成熟。
4．杂交组合的无菌播种和试管开花诱导：采下上一步骤的试管内成熟的果实，无需消毒，切开果实将胚在种子萌发培养基上播种培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天，10天左右杂交组合的种子能萌发形成原球茎，60天时能形成完整的小植株。再将小植株转移到试管开花诱导培养基上进行开花诱导培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天，试管内开花后，观察杂交组合的花形和花色。
5．新品种的组织培养：由于杂交亲本双方均为原生种，杂交后代的花形花色没有发生分离，选择生长健壮的开花株系的茎尖或茎节为外植体，在原球茎诱导和继代增殖培养基上进行继代增殖培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天，30天后时增殖倍数可达到5倍，形成的类原球茎可继续进行增殖。也可将类原球茎转移到生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天，得到试管苗。
6．试管苗移栽：当试管苗能长至3～4厘米高时，每丛有2～3个芽时，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用泥炭和兰石的混合基质（体积比1：1）中栽培，保持适当通风和足够的湿度（常规条件），移栽的成活率均可达95%以上，得到石斛兰杂交种苗。
所述的种子萌发培养基为每升含有：花宝1号2克、蛋白胨0.5克、椰子汁50亳升、蔗糖15克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、活性炭0.5克，琼脂6.5克，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用。
所述的试管开花诱导培养基每升含有：花宝1号1克、花宝2号1克、水解酪蛋白0.1克、6-苄基嘌呤0.5毫克、萘乙酸0.1毫克、多效唑0.1毫克、蔗糖30克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分，琼脂6.5克，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用。
所述的生根壮苗培养基每升含有：花宝1号1克、花宝2号1克、蛋白胨0.5克、蔗糖15克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、萘乙酸0.1毫克、香蕉汁50克、活性炭0.5克、琼脂6.5克，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用。
所述的原球茎诱导和继代增殖培养基每升含有：花宝1号1克，花宝2号1克、蛋白胨0.5克、椰子汁50亳升、蔗糖20克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、6-苄基嘌呤0.5毫克、琼脂6.5克，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用。
上述在种子萌发培养基、试管开花诱导培养基、生根壮苗培养基和原球茎诱导和继代增殖培养基的培养条件都为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12小时/天。
实施例2：金钗石斛（Dendrobium nobile）和独角石斛（Dendrobium unicum）的杂交育种
1．材料：开花时选取生长健壮的金钗石斛和独角石斛母株进行人工授粉，在授粉后130天，果实基本成熟时，选择果实中的种子用于无菌播种。
2．无菌播种：播种时，先将果实用体积分数75%的酒精浸泡30秒后置于质量分数0.1%的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4次后切开果实，用接种针将黄白色粉末状胚接种到种子萌发培养基上，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照14小时/天，12天左右种子开始萌发，形成原球茎。75天时能形成完整的小植株。
3.试管开花诱导和试管内杂交育种：将2～3厘米高的完整的小植株转瓶到试管开花诱导培养基上，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照14小时/天，50天开花率金钗石斛可达40%，独角石斛可达50%。选取试管内花色、花形正常的金钗石斛和独角石斛花朵在超净工作台上进行相互间的人工授粉，授粉后将带花植株转移到生根壮苗培养基上培养，55天果实即可成熟。
4．杂交组合的无菌播种和试管开花诱导：采下上一步骤试管内成熟的果实无需消毒，切开果实将胚在种子萌发培养基上播种培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照14小时/天，10天左右杂交组合的种子能萌发形成原球茎，70天时能形成完整的小植株。再将其转移到试管开花诱导培养基上进行开花诱导培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照14小时/天，试管内开花后，观察杂交组合的花形和花色。
5．新品种的组织培养：由于杂交亲本双方均为原生种，杂交后代的花形花色没有发生分离。选择生长健壮的开花株系的茎尖或茎节为外植体，在原球茎诱导和继代增殖培养基上进行继代增殖培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照14小时/天，35天后时增殖倍数可达到4.5倍，形成的类原球茎可继续进行增殖。也可将类原球茎转移到生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照14小时/天，得到试管苗。
6．试管苗移栽：当试管苗能长至3～4厘米高时，每丛有2～3个芽时，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用泥炭和兰石的混合基质（体积比1：1）中栽培，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达90%以上，得到石斛兰杂交种苗。
所述的种子萌发培养基为每升含有：花宝1号2.5克、蛋白胨1克、椰子汁75亳升、蔗糖20克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、活性炭0.75克，琼脂6.5g，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用；
所述的试管开花诱导培养基每升含有：花宝1号1.2克、花宝2号1.2克、水解酪蛋白0.2克、6-苄基嘌呤1.0毫克、萘乙酸0.3毫克、多效唑0.3毫克、蔗糖35克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分，琼脂6.5g，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用；
所述的生根壮苗培养基每升含有：花宝1号1.2克、花宝2号1.2克、蛋白胨1克、蔗糖20克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、萘乙酸0.3毫克、香蕉汁75克、活性炭0.75克、琼脂6.5g，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用；
所述的原球茎诱导和继代增殖培养基每升含有：花宝1号1.5克，花宝2号1.2克、蛋白胨1克、椰子汁75亳升、蔗糖25克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、6-苄基嘌呤1.0毫克、琼脂6.5g，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用。
上述在种子萌发培养基、试管开花诱导培养基、生根壮苗培养基和原球茎诱导和继代增殖培养基的培养条件都为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照14小时/天。
实施例3：春石斛杂交种红星（Dendrobium Red Star）和粉红佳人（Dendrobium PinkLady）的杂交育种
1．材料：开花时选取生长健壮的春石斛杂交种红星和粉红佳人母株进行人工授粉，在授粉后150天，果实基本成熟时，选择果实中的种子用于无菌播种。
2．无菌播种：播种时，先将果实用体积分数75%的酒精浸泡30秒后置于质量分数0.1%的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗5次后切开果实，用接种针将黄白色粉末状胚接种到种子萌发培养基上，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照16小时/天，15天左右种子开始萌发，形成原球茎。90天时能形成完整的小植株。
3.试管开花诱导和试管内杂交育种：将2～3厘米高的完整的小植株转瓶到试管开花诱导培养基上培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照16小时/天，60天红星开花率可达35％，粉红佳人为20%。选取试管内花色、花形正常的红星和粉红佳人花朵在超净工作台上进行相互间的人工授粉，授粉后将带花植株转移到生根壮苗培养基培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照16小时/天，60天果实即可成熟。
4．杂交组合的无菌播种和试管开花诱导：采下上一步骤试管内成熟的果实无需消毒，切开果实将胚在种子萌发培养基上播种，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照16小时/天，15天左右杂交组合的种子能萌发形成原球茎，80天时能形成完整的小植株。再将其转移到试管开花诱导培养基上进行开花诱导培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照16小时/天，试管内开花后，观察杂交组合的花形和花色。
5．新品种的组织培养：由于杂交亲本均为杂交种，后代性状发生了大量分离。开花后选择花形、花色优良的株系进行组织培养。操作时以优良株系的茎尖或茎节为外植体，在原球茎诱导和继代增殖培养基上能进行继代增殖，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照16小时/天，40天后时增殖倍数可达到4倍，形成的类原球茎可继续进行增殖。也可将类原球茎转移到生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养，培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照16小时/天，得到试管苗。
6．试管苗移栽：当试管苗能长至3～4厘米高时，每丛有2～3个芽时，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用泥炭和兰石的混合基质（体积比1：1）中栽培，保持适当通风和足够的湿度，移栽的成活率均可达98%以上，得到石斛兰杂交种苗。
所述的种子萌发培养基为每升含有：花宝1号3克、蛋白胨2克、椰子汁100亳升、蔗糖30克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、活性炭1克，琼脂6.5g，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用；
所述的试管开花诱导培养基每升含有：花宝1号1.5克、花宝2号1.5克、水解酪蛋白0.3克、6-苄基嘌呤3.0毫克、萘乙酸0.5毫克、多效唑0.5毫克、蔗糖40克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分，琼脂6.5g，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用；
所述的生根壮苗培养基每升含有：花宝1号2克、花宝2号1.5克、蛋白胨2克、蔗糖30克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、萘乙酸0.5毫克、香蕉汁100克、活性炭1克、琼脂6.5g，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用；
所述的原球茎诱导和继代增殖培养基每升含有：花宝1号2克，花宝2号1.5克、蛋白胨2克、椰子汁100亳升、蔗糖30克、MS培养基的维生素（含肌醇）成分、6-苄基嘌呤2.0毫克、琼脂6.5g，余量为水，pH5.2～5.4，将上述组份混合均匀在一起，然后高温灭菌备用。
上述在种子萌发培养基、试管开花诱导培养基、生根壮苗培养基和原球茎诱导和继代增殖培养基的培养条件都为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照16小时/天。

Claims (4)

1.一种石斛兰试管内杂交育种方法，其特征在于，包括以下步骤：
材料：开花时选取生长健壮的不同品种的石斛兰母株进行人工授粉，待果实基本成熟时，选择果实中的种子用于无菌播种；
a、无菌播种：先将果实消毒后，用无菌水冲洗若干遍，再切开果实，用接种针将黄白色粉末状胚接种到种子萌发培养基上培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，种子萌发，形成原球茎，直至形成2～3厘米高的完整的小植株；
b、试管开花诱导和试管内杂交育种：将2～3厘米高的完整的小植株转到试管开花诱导培养基上，培养直至开花，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，选取试管内花色、花形正常的不同品种的石斛兰花朵在无菌条件下进行相互间的人工授粉，授粉后将带花植株转移到生根壮苗培养基上培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，直至果实成熟，
c、杂交组合的无菌播种和试管开花诱导：采取b步骤的试管内的成熟果实，切开，将胚在种子萌发培养基上播种培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，种子萌发形成原球茎，直至形成完整的小植株，再将小植株转移到试管开花诱导培养基上进行开花诱导培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，试管内开花后，观察杂交组合的花形和花色；
d、新品种的组织培养：开花后选择花形、花色优良的株系进行组织培养，操作时以优良株系的茎尖或茎节为外植体，在原球茎诱导和继代增殖培养基上进行继代增殖培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，形成类原球茎，将类原球茎转移到生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，得到试管苗；
e、试管苗移栽：当试管苗能长至3～4厘米高时，转移到自然光下进行炼苗，再移栽到基质中培养，得到石斛兰杂交种苗；
所述的种子萌发培养基为每升含有：花宝1号2～3克、蛋白胨0.5～2克、椰子汁50～100亳升、蔗糖15～30克、含肌醇的MS培养基的维生素成分、活性炭0.5～1克，常量的琼脂，余量为水，pH 5.2～5.4；
所述的试管开花诱导培养基每升含有：花宝1号1～1.5克、花宝2号1～1.5克、水解酪蛋白0.1～0.3克、6-苄基嘌呤0.5～3.0毫克、萘乙酸0.1～0.5毫克、多效唑0.1～0.5毫克、蔗糖30～40克、含肌醇的MS培养基的维生素成分，常量的琼脂，余量为水，pH 5.2～5.4；
所述的生根壮苗培养基每升含有：花宝1号1～2克、花宝2号1～1.5克、蛋白胨0.5～2克、蔗糖15～30克、含肌醇的MS培养基的维生素成分、萘乙酸0.1～0.5毫克、香蕉汁50～100克、活性炭0.5～1克、常量的琼脂，余量为水，pH 5.2～5.4；
所述的原球茎诱导和继代增殖培养基每升含有：花宝1号1～2克，花宝2号1～1.5克、蛋白胨0.5～2克、椰子汁50～100亳升、蔗糖20～30克、含肌醇的MS培养基的维生素成分、6-苄基嘌呤0.5～2.0毫克、常量的琼脂，余量为水，pH 5.2～5.4。
2.根据权利要求1所述的石斛兰试管内杂交育种方法，其特征在于，所述的步骤a无菌播种：先将果实消毒后，用无菌水冲洗若干遍，其为先将果实用体积分数75％的酒精浸泡30秒后置于质量分数0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水漂洗4～5次。
3.根据权利要求1所述的石斛兰试管内杂交育种方法，其特征在于，所述的步骤d的类原球茎能再转接到新的原球茎诱导和继代增殖培养基上进行继代增殖培养，培养条件为：培养温度24～28℃，光照度1500～2000lx，光照12～16小时/天，形成类原球茎，类原球茎再转移到生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养。
4.根据权利要求1所述的石斛兰试管内杂交育种方法，其特征在于，所述的试管苗移栽是当试管苗能长至3～4厘米高时，每丛有2～3个芽时，转移到自然光下炼苗10天，然后将其从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，用泥炭和兰石按体积比1：1比例混合的混合基质中栽培，常规条件下培养，得到石斛兰杂交种苗。
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