CN102630568B

CN102630568B - 千日红试管花培养方法

Info

Publication number: CN102630568B
Application number: CN 201210127686
Authority: CN
Inventors: 邹娜; 林庆良
Original assignee: Jiangxi Agricultural University
Current assignee: Jiangxi Agricultural University
Priority date: 2012-04-27
Filing date: 2012-04-27
Publication date: 2013-08-28
Anticipated expiration: 2032-04-27
Also published as: CN102630568A

Abstract

本发明涉及一种千日红试管花及其培养方法。千日红试管花的培养方法，包括无菌苗培养、增殖培养、生根培养、瓶苗开花培养。本发明的千日红试管花培养方法，由于不受季节限制，随时可以诱导千日红试管苗开花，并且能够缩短其营养生长时间使之提前开花，可用于千日红杂交育种，从而加快了千日红品种改良进程；本发明的千日红试管花培养方法，首次解决了千日红试管内难开花的问题，接种到工艺瓶内，可以制成试管花卉投放消费市场，开花率可以达到86%，为花卉爱好者提供了一种新的试管花；操作简单，实用性强、推广性好。

Description

千日红试管花培养方法

技术领域

本发明涉及一种组培花卉培养方法，具体涉及千日红试管花培养方法。

背景技术

千日红（Gomphrena globosa）别名火球花、红光球、千年红，是苋科千日红属一年生草木花卉，原产亚洲热带，现我国及世界各地广为栽培。千日红花期可由6月直到11月霜前,且花色艳丽具光泽。其球状花序主要由膜质苞片组成,花干后不凋,经久不变,故得名千日红。千日红植株低矮,花繁色浓,是配置秋季花坛、种植钵和花镜的好材料，干后花朵群集一株,宛如繁星点点灿烂多姿。因其花期长，花色与花形经久不变,所以又是作鲜切花的良好材料。此外，其花序及全草皆可入药，具有清肝、散结、止咳和定喘之效。千日红多用种子繁殖,由于其种子体积太小,采收不易,即使采收到的种子再进行播种繁殖也很难保证其具有母株原有的优良性状。因此，利用组培技术对千日红进行快繁,不仅可在短期内大量繁殖,加速推广应用,还可对其进行种质保存，是行之有效的途径。鉴于千日红花色艳丽、花期长且其花序观赏及应用价值均较高，可作为试管开花研究及应用开发的优良植物材料，且目前尚未有对其进行试管开花研究的相关文献报道。为此，研究探讨千日红种子离体快繁和成花诱导的适宜条件，为千日红的大量繁殖推广及其试管开花提供培养技术，具有较高的商业开发价值。

在自然条件下，植物必须达到某种成熟阶段时才能开花。虽然对于花芽的焕醒及开花诱导已进行了不少研究,但至今其机理还不是很清楚。自从1946年罗士韦首次报道田野菟丝子在试管中开花以来，植物组织培养技术已用于植物离体开花研究。利用现代植物离体培养技术，使植物开花过程在密闭的培养容器内完成，这就叫植物试管开花。目前国内外已报道了约30多个科的近百种植物可诱导试管开花，研究对象包括药用植物和田间杂草等,其中以花卉研究得最多。试管开花由于具有生长条件相对可控、重复性强、组织培养的周期短等特点，可为研究植物由营养生长向生殖发育的转变以及开花生理机制研究,提供更精准的研究手段和良好的实验系统。由于试管开花不受季节限制，可以随时诱导并且能缩短从瓶苗到成花的时间，因而可以大大降低栽培设施的投入和生产管理费用。此外，植物试管开花还是促使植物生物技术与育种结合的另一条途径，通过该途径，打破了植物在自然条件下的生活周期，缩短植物营养生长时间，使植物开花提前，从而缩短育种年限，更加有利于杂交选育出新的品系，加快品种改良进程。另外，将开花的试管苗接种到装有色彩艳丽的果冻状营养液的密封玻璃瓶中，只要给予一定的光照和温度，就能正常生长，因而可开发成时尚礼品直接进入消费市场，丰富试管花卉种类,为这一产业注入新鲜血液，并为人们日益增长的鲜花需求开辟广阔的市场前景。目前，在国内外，试管花卉很流行,并且已形成一定产业,但可以大量稳定开花的试管花卉商品还很少。

发明内容

本发明的目的是提供一种千日红试管花培养方法。利用植物组织培养方法，通过对培养基成分的调控，提供一种培育千日红试管花的培养基及组培苗试管内开花的培养方法。

本发明的目的是通过以下方法实现的：

本发明的千日红试管花的培养方法，包括无菌苗培养、增殖培养、生根培养、瓶苗开花培养，其特征在于：

（1）无菌苗培养：将千日红的种子用体积比为75%的酒精表面消毒30 s，再用重量比为0.1%的升汞消毒10min，无菌水冲洗3～5次后，接种到无菌苗培养基上；所述无菌苗培养基为改良MS+0.5～1.5 mg/L 6-BA +0.1～0.4 mg/L NAA +5-20 mg/L PP₃₃₃ +20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉；MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述改良MS培养基：在MS培养基中，将KNO₃的用量改为950mg/L、NH₄NO₃的用量改为500mg/L，其余成分及用量不变；改良MS培养基的全部成分及用量如表1所示；所述6-BA，指6－苄氨基嘌吟；所述KT，指6－糠氨基嘌吟；所述PP₃₃₃指重量比为15%的多效唑；

（2）增殖培养：取步骤（1）无菌苗切成带芽茎段，接种到增殖培养基中增殖培养，培养温度为23～27 ℃，光照强度为1000～1500 LX，光照时间为12～16 h/d；所述增殖培养基为MS+0.1～1.0 mg/L 6-BA +0.1～0.8 mg/L NAA +20 g/L 蔗糖＋6 g/L琼脂粉；

（3）生根培养：将步骤（2）增殖的芽苗，接到生根培养基上诱导生根。培养温度为23～27 ℃，光照强度为1000～1500 LX，光照时间为12～16h/d；所述生根培养基为1/2 MS+0.5 mg/L NAA +20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉；

（4）瓶苗开花培养：从步骤（3）培养的植株中，切取3cm含顶芽和/或含腋芽的茎段，接种到瓶苗开花培养基中，在培养温度为25℃～28℃，光照强度为1000～1500 LX，光照时间为12～16 h/d的培养条件下培养不少于60d；所述瓶苗开花培养基为改良MS+4～10 mg/L亚精胺＋20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉。

表1: 改良MS培养基成分及用量

在本发明的瓶苗开花培养基中，当取亚精胺浓度为7 mg/L时，我们将基本培养基分别用MS、1/2MS和改良MS，进行对千日红试管苗开花影响的对比试验，培养60d统计开花率，结果如表2所示：在瓶苗开花培养基中只有使用改良MS为基本培养基时，开花率为25.3%；在瓶苗开花培养基中基本培养基用MS、1/2MS时，开花率都为0。开花率指开花的株数与总株数的比值。接种材料为整株切成2-3cm长，含顶芽和腋芽的茎段。

表2 不同基本培养基对千日红试管苗开花的影响

表2采用字母标记方法来表示多重比较结果，按照统计分析平均数多重比较标记字母法规定，用小写拉丁字母a、b、c、d......表示差异显著水平α＝0.05，用大写拉丁字母A、B、C、D......表示差异显著水平α＝0.01。先将各处理平均数由大到小排列，最大平均数后标记a或A，并将该平均数与以下各平均数相比，差异显著的依次标记b或B。依次类推，不显著的标记同一字母。两平均数之间凡有相同字母的即为差异不显著，否则为差异显著。　　

在本发明的瓶苗开花培养基中，我们做了亚精胺浓度分别为4 mg/L、7 mg/L、10 mg/L时，对千日红试管苗开花影响的对比试验，培养60d统计开花率，结果如表3所示：在瓶苗开花培养基中当亚精胺浓度为7 mg/L时，瓶苗开花率达25.3%，为开花率最高。因此，最佳的瓶苗开花培养基为改良MS+7 mg/L亚精胺＋20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉。接种材料为整株切成2-3cm长，含顶芽和腋芽的茎段。

表3 不同亚精胺浓度对千日红试管苗开花的影响

在最佳的瓶苗开花培养基：改良MS+7 mg/L亚精胺＋20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉的基础上，研究顶芽和腋芽对试管苗诱导开花的影响。结果如表4所示，顶芽的开花率可以达到86%，而腋芽的开花率只有6.25 %，差异达到极显著水平。

表4 不同材料对开花率的影响

综上所述，本发明的红试管花培养方法，具有如下有益效果：

1.本发明的千日红试管花培养方法，首次解决了千日红试管内难开花的问题，接种到工艺瓶内，可以制成试管花卉投入消费市场，为花卉爱好者提供了一种新的试管花。

2.本发明的千日红试管花培养方法，开花率可以达到86%。

3. 本发明的千日红试管花培养方法，由于不受季节限制，随时可以诱导千日红试管苗开花，并且能够缩短其营养生长时间使之提前开花，因而本发明可用于千日红杂交育种，加快千日红品种改良进程。

4. 本发明的千日红试管花培养方法，操作简单，实用性强、推广性好。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的阐述。

实施例一一种千日红试管花培养方法，包括以下步骤：

1．无菌苗培养：将千日红种子用体积比为75%的酒精表面消毒30分钟，用0.1%升汞消毒10分钟，无菌水浸洗4遍后，接种到无菌苗培养基中；培养室温度为26℃，光照12 h/d，光照强度为1300 LX；所述无菌苗培养基为：改良MS+1 mg/L 6-BA +0.2 mg/L NAA + 10 mg/L PP₃₃₃+20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉；

2．增殖培养：取步骤1无菌苗的萌发芽，切割成1 cm的带芽茎段，接种到增殖培养基中，每30d后继代培养一次；培养室温度为28℃，光照12 h/d，光照强度为1500 LX；所述增殖培养基为：MS+0.5 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA +20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉；

3．生根培养：将步骤2增殖培养的芽丛切为单芽，接种到生根培养基中，培养室温度为26℃，光照12 h/d，光照强度为1300 LX；所述生根培养基为1/2 MS+0.5 mg/L NAA +20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉；

4．瓶苗开花培养：从步骤3培养的植株中，选择的接种材料为健壮植株的顶部，切取长度为3 cm含顶芽的茎段，接种到瓶苗开花培养基中，培养室温度为27℃，光照12 h/d，光照强度为1500 LX；所述瓶苗开花培养基为：改良MS+7 mg/L亚精胺＋20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉。

按实施例一的方法培养千日红试管花，60d后即可形成花蕾并开花，开花率可以达到86%。

实施例二一种千日红试管花培养方法，包括以下步骤：

1．无菌苗培养：将千日红种子用体积比为75%的酒精表面消毒30分钟，用0.1%升汞消毒10分钟，无菌水浸洗3遍后，接种到无菌苗培养基中，培养室温度为28℃，光照12 h/d，光照强度为1200 LX；所述无菌苗培养基为：改良MS+1 mg/L 6-BA +0.2 mg/L NAA +10 mg/L PP₃₃₃ +20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉；

2．增殖培养：取步骤1萌发芽，切割成长1cm的带芽茎段，接种到增殖培养基中；每30d继代培养一次；培养室温度为28℃，光照12 h/d，光照强度为1300 LX；所述增殖培养基为：MS+0.5 mg/L6-BA +0.5 mg/LNAA +20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉；

3．生根培养：参照实施例一的生根培养。

4．瓶苗开花培养：选健壮植株，切取含顶芽和腋芽的茎段2-3cm，接种到瓶苗开花培养基中，培养室温度为25℃，光照12 h/d，光照强度为1300 LX；所述瓶苗开花培养基为：改良MS+4 mg/L亚精胺＋20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉。

按实施例二的方法培养千日红试管花，60d就可以形成花蕾并开花，开花率可以达到15.6%。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims

1.一种千日红试管花培养方法，包括无菌苗培养、增殖培养、生根培养、瓶苗开花培养，其特征在于：

（1）无菌苗培养：将千日红的种子用体积比为75%的酒精表面消毒30 s，再用重量比为0.1%的升汞消毒10min，无菌水冲洗3～5次后，接种到无菌苗培养基上；所述无菌苗培养基为改良MS+0.5～1.5 mg/L 6-BA +0.1～0.4 mg/L NAA +5-20 mg/L PP₃₃₃ +20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉；MS培养基为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述改良MS培养基：在MS培养基中，将KNO₃的用量改为950mg/L、NH₄NO₃的用量改为500mg/L，其余成分及用量不变；所述6-BA，指6－苄氨基嘌吟；所述KT，指6－糠氨基嘌吟；所述PP₃₃₃指重量比为15%的多效唑；

（2）增殖培养：取步骤（1）无菌苗切成带芽茎段，接种到增殖培养基中增殖培养，培养温度为28℃，光照强度为1000～1500 LX，光照时间为12～16 h/d；所述增殖培养基为MS+0.1～1.0 mg/L 6-BA +0.1～0.8 mg/L NAA +20 g/L 蔗糖＋6 g/L琼脂粉；

（3）生根培养：将步骤（2）增殖的芽苗，接到生根培养基上诱导生根；培养温度为23～27 ℃，光照强度为1000～1500 LX，光照时间为12～16h/d；所述生根培养基为1/2 MS+0.5 mg/L NAA +20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉；

2.根据权利要求1所述的一种千日红试管花培养方法，其特征在于所述瓶苗开花培养基为改良MS+7mg/L亚精胺＋20 g/L蔗糖＋6 g/L琼脂粉。

3.根据权利要求1或2所述的一种千日红试管花培养方法，其特征在于所述瓶苗开花培养中，选择的接种材料为健壮植株的顶部，切取长度为3cm含顶芽的茎段，接种到瓶苗开花培养基中。