CN110301357A

CN110301357A - 一种丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗方法及专用培养基

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Publication number: CN110301357A
Application number: CN201910724911.1A
Authority: CN
Inventors: 杨泗海
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-08-07
Filing date: 2019-08-07
Publication date: 2019-10-08

Abstract

本发明公开了一种丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗方法及专用培养基。本发明提供的专用培养基，其配方包括NH₄NO₃、KNO₃等大量元素，MnSO₄·4H₂O等微量元素，乳酸亚铁、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸、赖氨酸、GA₃、5‑硝基愈创木酚钠、5‑氨基乙酰丙酸、蔗糖、酵母浸粉、聚乙烯醇、硫酸镨、番茄汁和植物凝胶。本发明提供的方法包括胚状体低温预处理、胚状体成苗培养、再生植株炼苗、再生植株移栽几个步骤。利用流式细胞仪进行倍性鉴定，胚囊再生植株中平均单倍体率为16.3%。本发明成功获得了丝瓜单倍体植株，证明丝瓜未受精子房离体培养获得单倍体的方法是可行的，为丝瓜单倍体育种开辟了新途径。

Description

一种丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗方法及专用培养基

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗方法及专用培养基。

背景技术

丝瓜为葫芦科（Cucurbitaceae）丝瓜属（Luffa spp.）一年生攀缘性草本植物，原产东印度，主要分布于热带、亚热带的亚洲各地，在我国南北均有栽培，是我国主要的瓜类蔬菜。丝瓜在我国有普通丝瓜和有棱丝瓜两个栽培种，广东、广西、海南等地以栽培有棱丝瓜为主，其他地区以栽培普通丝瓜为主。丝瓜为短日照作物，喜较强阳光，而且较耐弱光，尤以有棱丝瓜是典型的短日性植物，对短日照要求严格，在长日照条件下生长发育缓慢。丝瓜耐热耐湿，适应性较强，对土壤要求不严格，适于在炎热季节栽培，是夏、秋季主要蔬菜之一。丝瓜营养丰富，其蛋白质中的氨基酸种类齐全，包括人体必需的大多氨基酸，这些氨基酸对于调节人体平衡，提高营养素在体内的吸收，促进生长发育具有重要的作用。丝瓜中维生素 C的含量非常丰富，此外还含有尼克酸、维生素A及B族维生素，能保护皮肤、消除斑块，使皮肤洁白、细嫩，是不可多得的美容佳品，故丝瓜汁有“美人水”之称。丝瓜中含有多种黄酮类化合物，具有增强人体的耐受性、减少毛细血管的渗透性，对心绞痛及心功能有改善作用，对血液中的胆固醇、甘油三酯有明显的降低作用。中医认为丝瓜果实甘寒、无毒，入肝、胃经，可治燥热烦渴、痰喘咳嗽、肠风痔漏、崩带血淋、疔疮、乳汁不通、痈肿等病。现代医学认为，丝瓜含有抗病毒、抗过敏的活性成分。除丝瓜果实外，丝瓜花、瓜皮、瓜叶、瓜藤、瓜络、瓜子、瓜根均可药用。

近年来，我国各地设施蔬菜产业发展迅速、设施栽培丝瓜种植规模和种植区域也呈逐年扩大趋势，且已实现周年生产和供应，加之人们消费习惯不断改变以及对丝瓜食疗保健作用的日益了解，丝瓜市场需求不断扩大，因此对专用、优质丝瓜新品种选育提出了更高要求。国内丝瓜育种起步较晚，当前生产上多以地方品种为主，且育种方式多采用常规育种，以期达到丰产增收之目的，因此，不仅面临品种退化的严重问题，而且也不适宜面积不断增大的保护地栽培模式。目前丝瓜新品种选育途径主要有：1）通过自交、杂交、回交等系统选育法，如用此方法培育出的绿旺、碧绿等；2）通过结合单株与混合选择法，先选出优良单株，后稳定培育，如目前使用广泛的夏绿一号等；3）通过优势育种法，是当前丝瓜育种的主要途径。总体而言，尚未涉及利用传统的育种方法与生物技术、基因工程等现代技术相结合的育种方法进行育种技术改良、创造新的种质，这远远落后于其它作物的育种进程。

单倍体是指仅携有配子染色体数目的个体，单倍体材料具有重要的遗传研究价值和育种实践意义。首先，单倍体的每种基因都只有1个，是研究基因性质及其作用的良好材料；其次，单倍体可直接表达隐性基因的性状，更适于在细胞水平筛选突变体，进行植物基因克隆筛选；同时，单倍体材料可查明其原始亲本的染色体组构成，用于物种之间亲缘关系和物种进化的研究。由单倍体加倍获得的双单倍体（DH）即为纯系，可直接用于育种，极大地缩短育种周期；此外，DH群体也是构建连锁图的优良群体。因此若将单倍体技术应用于蔬菜育种实践，必将大大加快育种的速度，显著地提高选择效果，从而节省大量的人力物力。

单倍体材料的获得途径包括自然发生单倍体及人工诱导单倍体。前者发生频率极低，难以应用。目前人工诱导单倍体的方法主要有离体雄核发育途径（花药或小孢子培养）、雌核发育途径（未受精子房或胚珠离体培养，外源化学药剂、正常花粉或辐射过的花粉授粉诱导的孤雌生殖）等。花药和小孢子培养在大白菜、结球甘蓝、青花菜、萝卜等十字花科作物中已有较成熟的进展，但研究者发现葫芦科作物通过离体雄核发育途径诱导单倍体非常困难，仅在西瓜上获得一些成果，因此，对于葫芦科作物的单倍体诱导，人们把目光从离体雄核发育途径逐渐转向雌核发育途径。未受精子房或胚珠离体培养技术是葫芦科作物获得单倍体胚和单倍体植株的重要方式，该技术是将未受精子房/胚珠从母体上分离出来，在无菌的人工环境条件下诱导雌核发育，使其生长发育形成单倍体胚和植株的过程。利用该技术可快速获得纯系，缩短育种周期，加速育种进程。众多国内外学者研究了影响该技术的一些重要因素，总结出基因型、胚囊发育时期、接种方式、植株生长环境、基本培养基、植物生长调节剂、碳源、低温预处理、热激处理和培养条件等都是试验是否成功的主要原因。而且，这些因素相互作用和影响，并不是独立存在的。

目前，葫芦科作物通过未受精子房和胚珠离体培养获得单倍体的研究取得了一定进展，例如黄瓜的未受精子房培养已经建立了一套再生体系，单倍体培养获得的材料已经和育种实践相结合，并获得了20多个优良的育种材料；植物的离体雌核发育有愈伤组织和胚状体2条途径，陈学军等通过愈伤组织途径获得西葫芦再生植株，谢冰等通过诱导胚状体途径产生西葫芦再生植株；李迎迎等对西瓜3种基因型未受精子房离体培养中获得了4棵再生苗，倍性鉴定结果表明1株为四倍体，其余3株为单倍体与二倍体的嵌合体植株。但是，目前尚未见到丝瓜通过未受精子房或胚珠进行雌核发育诱导单倍体的研究报道。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种丝瓜未受精子房胚状体的成苗方法及专用培养基，利用该方法对丝瓜未受精子房胚状体进行成苗培养，能够获得完整的再生植株。

本发明的目的是通过以下技术方案解决的：

一种丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）胚状体低温预处理：将由丝瓜未受精子房离体诱导培养产生的胚状体放置于4℃冰箱中，进行低温预处理；

（2）胚状体成苗培养：将预处理后的胚状体转接至成苗培养基上，在温度为23~27℃，光、暗培养时间分别为15~17h/d和7~9h/d，光照强度为2500~3000lx的培养室内培养，使胚状体分化成具有叶片和根系的完整试管苗；

（3）再生植株炼苗：待胚状体试管苗长出5~6片真叶时开始炼苗，在培养室内先将培养瓶的瓶盖拧松，然后逐渐打开瓶口直至瓶口完全打开，炼苗时间为4~5d；

（4）再生植株移栽：将完成瓶内炼苗的试管苗从培养瓶中取出，清水冲洗干净根系上的培养基，避免损害根系及叶片，用1.5g/L的百菌清溶液浸根处理5min，然后清水洗净残留后栽到准备好的营养钵中；将营养钵埋入日光温室土壤中，保持一定的温湿度，1周左右后将已成活的再生植株定植于温室，进行常规栽培管理。

所述低温预处理的时间为2~3d。

所述成苗培养基的配方为：NH₄NO₃1950~2100mg/L，KNO₃1800~2000mg/L，NaH₂PO₄·H₂O 144~156mg/L，柠檬酸钙320~360mg/L，MgSO₄·7H₂O 350~400mg/L，MnSO₄·4H₂O 8~12mg/L，KI 0.80~0.86mg/L，H₃BO₃5.5~6.1mg/L，ZnSO₄·7H₂O 2.0~3.0mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.24~0.26mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.02~0.03mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.02~0.03mg/L，乳酸亚铁29.8~33.4mg/L，肌醇95~105mg/L，烟酸0.7~1.1mg/L，盐酸吡哆醇0.8~1.2mg/L，盐酸硫胺素5.6~6.2mg/L，甘氨酸2.4~3.0mg/L，赖氨酸3.7~4.5mg/L，GA₃ 0.4~0.6mg/L，5-硝基愈创木酚钠0.04~0.06mg/L，5-氨基乙酰丙酸0.8~1.2mg/L，蔗糖25~35g/L，酵母浸粉260~300mg/L，聚乙烯醇0.9~1.1g/L，硫酸镨1.7~2.3mg/L，番茄汁60~80ml/L，植物凝胶11~13g/L。

所述成苗培养基的pH值调节为5.6~6.0。

所述日光温室的温度保持在20~28℃，湿度保持在60~80%，自然光照。

所述成苗培养基的最佳配方为：NH₄NO₃2025mg/L，KNO₃1900mg/L，NaH₂PO₄·H₂O150mg/L，柠檬酸钙340mg/L，MgSO₄·7H₂O 375mg/L，KI 0.83mg/L，H₃BO₃5.8mg/L，MnSO₄·4H₂O 10mg/L，ZnSO₄·7H₂O 2.5mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，乳酸亚铁31.6mg/L，肌醇100mg/L，烟酸0.9mg/L，盐酸吡哆醇1.0mg/L，盐酸硫胺素5.9mg/L，甘氨酸2.7mg/L，赖氨酸4.1mg/L，GA₃ 0.5mg/L，5-硝基愈创木酚钠0.05mg/L，5-氨基乙酰丙酸1.0mg/L，蔗糖30g/L，酵母浸粉280mg/L，聚乙烯醇1.0g/L，硫酸镨2.0mg/L，番茄汁70ml/L，植物凝胶12g/L。

本发明具有以下有益效果：

1）本发明对丝瓜胚状体成苗因素进行了深入研究，发现对丝瓜胚状体先进行4℃低温预处理可以提高成苗率。本发明的专用培养基根据丝瓜胚状体的生长特性调整了大量元素、微量元素、有机成分等的浓度配比，提高了植物凝胶的含量，还添加了赖氨酸、GA₃、5-硝基愈创木酚钠、5-氨基乙酰丙酸、酵母浸粉、聚乙烯醇、硫酸镨、番茄汁，对于提高胚状体成苗率有显著效果。

2）采用本发明所提供的方法及专用培养基对丝瓜未受精子房胚状体进行成苗培养，成功获得了胚囊再生植株，利用流式细胞仪进行倍性鉴定，发现再生植株中单倍体率平均为16.3%。本发明首次获得了丝瓜单倍体植株，证明丝瓜未受精子房离体培养获得单倍体的方法是可行的，为建立丝瓜未受精子房离体培养体系以及开展丝瓜单倍体育种的研究奠定了基础。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。

实施例1

1材料与方法

1.1供试材料：

普通丝瓜品种‘南京蛇形丝瓜’和‘皖绿１号’的未受精子房经诱导培养形成的胚状体，为发明人前期试验所得。

1.2试验方法：

（1）胚状体低温预处理：将由丝瓜未受精子房离体诱导培养产生的胚状体放置于4℃冰箱中，进行低温预处理2~3d。

（2）胚状体成苗培养：将预处理后的胚状体转接至成苗培养基上，在温度为25℃，光、暗培养时间分别为16h/d和8h/d，光照强度为2800lx的培养室内培养，使胚状体分化成具有叶片和根系的完整试管苗。

基本成苗培养基的配方为：NH₄NO₃2025mg/L，KNO₃1900mg/L，NaH₂PO₄·H₂O 150mg/L，柠檬酸钙340mg/L，MgSO₄·7H₂O 375mg/L，KI 0.83mg/L，H₃BO₃5.8mg/L，MnSO₄·4H₂O10mg/L，ZnSO₄·7H₂O 2.5mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，乳酸亚铁31.6mg/L，肌醇100mg/L，烟酸0.9mg/L，盐酸吡哆醇1.0mg/L，盐酸硫胺素5.9mg/L，甘氨酸2.7mg/L，赖氨酸4.1mg/L，GA₃ 0.5mg/L，蔗糖30g/L，酵母浸粉280mg/L，聚乙烯醇1.0g/L，番茄汁70ml/L，植物凝胶12g/L，pH值调节为5.8。

胚状体成苗率（%）=（再生植株胚状体数量/转接的胚状体数量）×100%。

1.2.1培养基中添加5-硝基愈创木酚钠对胚状体再生成苗的影响研究：

将‘南京蛇形丝瓜’和‘皖绿１号’两个品种的胚状体分别接种到添加不同浓度5-硝基愈创木酚钠（0mg/L、0.01mg/L、0.03mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L）的基本成苗培养基上进行培养，30d后统计胚状体成苗率，比较不同浓度5-硝基愈创木酚钠处理对胚状体成苗的影响效果。

1.2.2培养基中添加5-氨基乙酰丙酸对胚状体再生成苗的影响研究：

将‘南京蛇形丝瓜’和‘皖绿１号’两个品种的胚状体分别接种到添加不同浓度5-氨基乙酰丙酸（0mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L）的基本成苗培养基上进行培养，30d后统计胚状体成苗率，比较不同浓度5-氨基乙酰丙酸处理对胚状体成苗的影响效果。

1.2.3培养基中添加硫酸镨对胚状体再生成苗的影响研究：

将‘南京蛇形丝瓜’和‘皖绿１号’两个品种的胚状体分别接种到添加不同浓度硫酸镨（0mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、3.0mg/L、4.0mg/L）的基本成苗培养基上进行培养，30d后统计胚状体成苗率，比较不同浓度硫酸镨处理对胚状体成苗的影响效果。

2结果与分析

2.1培养基中添加5-硝基愈创木酚钠对胚状体再生成苗的影响研究：

5-硝基愈创木酚钠是一种细胞赋活剂，可用于调节植物生长，具有加快植物生长速度，打破休眠，促进生长发育，防止落花落果，改善产品品质，提高产量等多重功效。从下表1可以看出，不添加5-硝基愈创木酚钠时，两个品种的胚状体成苗率最低，在一定范围内随着5-硝基愈创木酚钠浓度的增大，胚状体成苗率也随之提高，当5-硝基愈创木酚钠浓度达到0.05mg/L时，胚状体成苗率达到最高，分别为‘南京蛇形丝瓜’81.3%，‘皖绿１号’85.7%，随着5-硝基愈创木酚钠浓度继续增大，胚状体成苗率则开始降低，因此培养基中添加5-硝基愈创木酚钠的最适浓度为0.05mg/L。

2.2培养基中添加5-氨基乙酰丙酸对胚状体再生成苗的影响研究

5-氨基乙酰丙酸是一种广泛存在于植物、动物、真菌、细菌等生物机体活细胞中的非蛋白氨基酸，是卟啉化合物生物合成的关键前体物质。5-氨基乙酰丙酸是生物合成叶绿素、血红素、维生素B、光敏素等物质的必须因子，在生物体内光合作用与呼吸作用中联系十分广泛，还参与植物生长发育的调节过程，具有类似植物激素的生理活性，因此本试验尝试添加不同浓度的5-氨基乙酰丙酸来探索其对胚状体分化成苗的影响。从下表2可以看出，随着5-氨基乙酰丙酸浓度的增加，胚状体成苗率呈先升高后降低的趋势。当5-氨基乙酰丙酸浓度为0.5和1.0mg/L时，胚状体成苗率显著高于其他处理，5-氨基乙酰丙酸浓度为1.0mg/L时，胚状体成苗率大最高，分别为‘南京蛇形丝瓜’86.5%，‘皖绿１号’90.1%。当5-氨基乙酰丙酸浓度为5.0和10.0mg/L时，胚状体成苗率显著降低，说明5-氨基乙酰丙酸浓度过高不利于胚状体的生长。因此培养基中添加5-氨基乙酰丙酸的最适浓度为1.0mg/L。

2.3培养基中添加硫酸镨对胚状体再生成苗的影响研究

镨是一种稀土元素，具有慢性低毒，不是生物必须元素。但有研究表明稀土在一定条件下能够促进植物生根、发芽，增加叶绿素含量，增强光合速率，提高磷的吸收和运输，影响一些酶的活性；稀土在组织培养过程中作为一种添加元素，对外植体的培养能够起到重要的作用，因此本试验尝试添加不同浓度的硫酸镨来探索其对胚状体分化成苗的影响。从下表3可以看出，随着硫酸镨浓度的增加，胚状体成苗率呈先升高后降低的趋势。当硫酸镨浓度为2.0mg/L时，胚状体成苗率显著高于其他处理，达到最高值，分别为‘南京蛇形丝瓜’84.7%，‘皖绿１号’88.1%。当硫酸镨浓度继续增大，胚状体成苗率则开始降低，但还是高于不添加相硫酸镨的处理。因此培养基中添加硫酸镨的最适浓度为2.0mg/L。

实施例2

根据实施例1中的研究结果，本发明的最佳成苗培养基为：NH₄NO₃2025mg/L，KNO₃1900mg/L，NaH₂PO₄·H₂O 150mg/L，柠檬酸钙340mg/L，MgSO₄·7H₂O 375mg/L，KI 0.83mg/L，H₃BO₃5.8mg/L，MnSO₄·4H₂O 10mg/L，ZnSO₄·7H₂O 2.5mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，乳酸亚铁31.6mg/L，肌醇100mg/L，烟酸0.9mg/L，盐酸吡哆醇1.0mg/L，盐酸硫胺素5.9mg/L，甘氨酸2.7mg/L，赖氨酸4.1mg/L，GA₃0.5mg/L，5-硝基愈创木酚钠0.05mg/L，5-氨基乙酰丙酸1.0mg/L，蔗糖30g/L，酵母浸粉280mg/L，聚乙烯醇1.0g/L，硫酸镨2.0mg/L，番茄汁70ml/L，植物凝胶12g/L。

按照以下方法进行丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗试验：

（1）胚状体低温预处理：将由‘南京蛇形丝瓜’和‘皖绿１号’两个品种的未受精子房离体诱导培养产生的胚状体放置于4℃冰箱中，进行低温预处理2~3d。

（2）胚状体成苗培养：将预处理后的胚状体转接至成苗培养基上，在温度为25℃，光、暗培养时间分别为16h/d和8h/d，光照强度为2800lx的培养室内培养，30d后统计胚状体成苗率，分别为‘南京蛇形丝瓜’93.3%，‘皖绿１号’96.9%。

（3）再生植株炼苗：待胚状体试管苗长出5~6片真叶时开始炼苗，在培养室内先将培养瓶的瓶盖拧松，然后逐渐打开瓶口直至瓶口完全打开，炼苗时间为4~5d。

（4）再生植株移栽：将完成瓶内炼苗的试管苗从培养瓶中取出，清水冲洗干净根系上的培养基，避免损害根系及叶片，用1.5g/L的百菌清溶液浸根处理5min，然后清水洗净残留后栽到准备好的营养钵中；将营养钵埋入日光温室土壤中，日光温室的温度保持在20~28℃，湿度保持在60~80%，自然光照；1周左右后将已成活的再生植株定植于温室，进行常规栽培管理。

再生植株的倍性鉴定

流式细胞仪测定法：取新鲜待测植物叶0.5cm²，置于培养皿中，取细胞裂解液400µL加于植物叶片周围，用刀片将叶片切碎，以充分提取出完整的细胞核，提取时间为10s，然后将培养皿中的液体30µm滤网过滤至样品管中，上样于流式细胞仪测定植株细胞DNA的相对含量。以正常丝瓜二倍体（2n=26）植株叶片为对照，对所获得的再生植株进行倍性鉴定，结果见下表4。

从表4可以看出，采用本发明的培养基及方法成功获得了胚囊再生植株，其中单倍体植株所占比例平均为16.3%，二倍体所占比例平均为61.2%，混倍体所占比例平均为22.5%。

上述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。

Claims

1.一种丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗方法，其特征在于，所述低温预处理的时间为2~3d。

3.根据权利要求1所述的一种丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗方法，其特征在于，所述成苗培养基的配方为：NH₄NO₃1950~2100mg/L，KNO₃1800~2000mg/L，NaH₂PO₄·H₂O 144~156mg/L，柠檬酸钙320~360mg/L，MgSO₄·7H₂O 350~400mg/L，MnSO₄·4H₂O 8~12mg/L，KI0.80~0.86mg/L，H₃BO₃5.5~6.1mg/L，ZnSO₄·7H₂O 2.0~3.0mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.24~0.26mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.02~0.03mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.02~0.03mg/L，乳酸亚铁29.8~33.4mg/L，肌醇95~105mg/L，烟酸0.7~1.1mg/L，盐酸吡哆醇0.8~1.2mg/L，盐酸硫胺素5.6~6.2mg/L，甘氨酸2.4~3.0mg/L，赖氨酸3.7~4.5mg/L，GA₃ 0.4~0.6mg/L，5-硝基愈创木酚钠0.04~0.06mg/L，5-氨基乙酰丙酸0.8~1.2mg/L，蔗糖25~35g/L，酵母浸粉260~300mg/L，聚乙烯醇0.9~1.1g/L，硫酸镨1.7~2.3mg/L，番茄汁60~80ml/L，植物凝胶11~13g/L。

4.根据权利要求1所述的一种丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗方法，其特征在于，所述成苗培养基的pH值调节为5.6~6.0。

5.根据权利要求1所述的一种丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗方法，其特征在于，所述日光温室的温度保持在20~28℃，湿度保持在60~80%，自然光照。

6.根据权利要求3所述的一种丝瓜未受精子房胚状体的再生成苗方法，其特征在于，所述成苗培养基的最佳配方为：NH₄NO₃2025mg/L，KNO₃1900mg/L，NaH₂PO₄·H₂O 150mg/L，柠檬酸钙340mg/L，MgSO₄·7H₂O 375mg/L，KI 0.83mg/L，H₃BO₃5.8mg/L，MnSO₄·4H₂O 10mg/L，ZnSO₄·7H₂O 2.5mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O0.025mg/L，乳酸亚铁31.6mg/L，肌醇100mg/L，烟酸0.9mg/L，盐酸吡哆醇1.0mg/L，盐酸硫胺素5.9mg/L，甘氨酸2.7mg/L，赖氨酸4.1mg/L，GA₃ 0.5mg/L，5-硝基愈创木酚钠0.05mg/L，5-氨基乙酰丙酸1.0mg/L，蔗糖30g/L，酵母浸粉280mg/L，聚乙烯醇1.0g/L，硫酸镨2.0mg/L，番茄汁70ml/L，植物凝胶12g/L。