CN104642098A - 一种无毒蝴蝶兰新品种的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及农业生物工程技术领域，具体来说是一种无毒蝴蝶兰新品种的培育方法；本发明目的是解决蝴蝶兰新品种的培育中大部分品种都带病毒的问题，该方法包括选种杂交、组培、繁育、第一次脱毒处理、第二次脱毒处理、出瓶培养、病毒检测等步骤，利用本发明方法培育的蝴蝶兰新品种株型美观大方、生长势强、生长快、病菌少、成活率高、养护成本相对低，产品均能达到出口的要求。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物工程技术领域，具体来说是一种无毒蝴蝶兰新品种的培育方法。
背景技术
蝴蝶兰是一种观赏价值很高的洋兰，素有“洋兰皇后”之称。其株型非常奇特，为单茎性气生兰。蝴蝶兰花朵大、花期长,花形婀娜多姿,色彩淡雅、柔和，株型秀气。蝴蝶兰产业在中国的兴起不过十年，作为花卉业中的一个新兴类别，蝴蝶兰一直受到中国花卉市场的喜爱。国内蝴蝶兰市场一路向好，而在国际市场，蝴蝶兰市场的发展更是方兴未艾。
蝴蝶兰单株性比较强，在栽培过程中很少会产生分株。目前国际上常用的繁殖方法是组织培养无性繁殖法，即所谓克隆繁殖。利用蝴蝶兰花梗芽外植体，经消毒处理后接种到改良过的花宝+MS的培养基+BA3.5mg/L+NAA2mg/L+GA3 0.2mg/L诱导出营养芽或原球茎。将原球茎置于花宝+MS的培养基+BA3.5mg/L+NAA2mg/L+GA3 0.2mg/L+Adenine0.3mg/L的培养基中，可进行大量增殖。当原球茎繁殖至一定数量后，转入到改良过的花宝+MS培养基中进行生根培养，这样就可培养出大量的植株。克隆繁殖的蝴蝶兰苗生长、开花比较整齐一致，可完全保存母株的花色性状。
蝴蝶兰新品种的培育方法基本上都是经过杂交得来，大部分品种都带病毒，有记录显示，截至目前，至少有28种病毒曾经感染兰科植物。据调查，中国兰科植物感染的病毒以东亚兰嵌纹病毒(Cymbidiummosaicvirus,简称CyMV)、齿舌兰轮斑病毒(Odontoglossumringspotvirus,简称ORSV)这两种病毒复合感染为多数，也有少数蝴蝶兰感染胡瓜嵌纹病毒(Cucumbermosalcvlrus，简称CMV)。以上三种病毒病是在很多兰园中分布非常普遍的病害。ORSV与CyMV之所以广泛存在于兰园中，主要是在栽培过程中人为传播所致。目前，根据业内相关人士估计，国内生产者使用的蝴蝶兰种苗几乎90％以上携带这两种病毒，台湾地区生产的蝴蝶兰种苗中，这两种病毒的携带率也在70％左右。
目前，蝴蝶兰产业处于世界领先水平的我国台湾地区针对蝴蝶兰病毒病的防治策略主要有三种：一是全面无病毒化策略。这个策略基本上是最完备、最根本也是最彻底的病治策略。因为一种作物可能会感染多种病毒，不同病毒种类对于作物之产量与质量会有不同程度之影响。全面执行无毒化，可能所要耗费的成本与时间很高，并不完全符合市场的经济考虑。二是关键病毒之无毒化策略。ORSV与CyMV乃影响蝴蝶兰质量与生长速度最严重之病毒，对于销售瓶苗的业者，去除ORSV与CyMV几乎是必要的防治策略。三是无病征化的策略。这个策略可以应用在末端产品尤其是开花株的市场上，例如美加与日本地区。只要确保开花株叶片玉销售期间不产生病征，即可不影响产品之销售，相对也减轻生产期间病毒控管的成本。
开发一种品种稳定且成活率高，养护成本低的无病毒新品种成为蝴蝶兰领域一种亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种生长势强、生长快、病菌少、成活率高、养护成本相对低且无病毒的蝴蝶兰新品种。
为实现上述目的，本发明一种无毒蝴蝶兰新品种的培育方法，包括以下步骤：
(1)、选种杂交：将Dtps.I-Hsin Pink Baby(KHM555)作为父本，将Dtps.I-HsinMaple#5872作为母本，将所述父本与母本进行杂交得种子；
(2)、组培：将步骤(1)所得种子在组培实验室内播种，培育出实生苗，之后移至密闭式温棚内培育至开花；
(3)、繁育：挑选步骤(2)中实生苗内最优良一株取其芽进行繁育，得分生苗；
(4)、第一次脱毒处理：将步骤(3)中所得分生苗进行培育，在所述分生苗养至分化，然后做全暗光处理，使所述分化苗花梗快速徒长，徒长10cm～12cm时，取其顶芽；
(5)、第二次脱毒处理：将步骤(4)所述顶芽取下后，用酒精擦拭干净，切取芽点，用漂白水浸泡1min，然后用无菌水清洗3次，之后将芽点分割放入培养基中培养，成活后进入正常的母瓶培养，待1年后出瓶；
(6)、出瓶培养：出瓶后具体种植过程分为四个阶段：第一阶段：把瓶苗出瓶后用水苔种在1.7寸的透明营养杯内养育，温度控制为：白天25～30℃，晚上：20～25℃，湿度：40％～60％，光照：6000～8000lux，5～7天浇一次肥水；第二阶段：在1.7寸养护4～5个月后便换到较大的2.5寸花杯内养护，温度控制为：白天25～30℃，晚上：20～25℃，湿度：40％～60％，光照：8000～10000lux。5～7天浇一次肥水；第三阶段：2.5寸花杯内养护4～5个月后换至3.5寸透明营养杯中继续养护，温度控制为：白天25～30℃，晚上：20～25℃，湿度：40％～60％，光照：10000～15000lux，5～7天浇一次肥水；第四阶段：3.5寸养护4～5个月后进入生殖期，即，白天高温、高湿、高光照，晚间低温控制管理，具体白天温度28～32℃，晚间：16～18℃，湿度：60％～70％，光照：15000～20000lux，用此方式让已全面成熟的苗分化抽梗，大约在4多个月左右即开花。
(7)、病毒检测：利用RT-PCR病毒检测技术将步骤(6)种植所得苗，取其叶片或花梗进行病毒检测，直到得到脱毒苗为止。
进一步的，所述第二次脱毒处理步骤中所述芽点分割为0.5mm*0.5mm。
进一步的，所述第二次脱毒处理步骤中所述芽点培养方式为先进入全暗光培养室培养1周，之后转为弱光培养15天，其中弱光条件为600～800lux。
本发明的有益技术效果是：
①、本发明培育所得一种蝴蝶兰新品种，花径比父母本大，有13CM，且花色均匀、稳定，排列整齐，整体株型美观大方。
②、本发明培育所得一种蝴蝶兰新品种，经过脱毒所得种苗在种植过程中，生长势强、生长快、病菌少、成活率高、养护成本相对低，均能达到出口的要求。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：一种无毒蝴蝶兰新品种的培育方法，包括以下步骤：
(1)、选种杂交：从台湾引进杂交先种，将Dtps.I-Hsin Pink Baby(KHM555)作为父本，将Dtps.I-Hsin Maple #5872作为母本，将所述父本与母本进行杂交得种子，Dtps.I-Hsin Pink Baby(KHM555)与Dtps.I-Hsin Maple #5872是台湾已养育成熟且稳定性较佳的两个品种，父本Dtps.I-Hsin Pink Baby(KHM555)的父母本是：Dtps.I-Hsin Pink Face(母本)×Dtps.Taisuco Firebird(父本)登录名是Dtps.I-Hsin Pink Baby；母本Dtps.I-Hsin Maple #5872的父母本是：Dtps.Minho Venus(母本)×P.Hwafeng Redjcwel(父本)登录名是Dtps.I-HsinMaple；
(2)、组培：将步骤(1)所得种子在组培实验室内播种，培育出实生苗，之后移至密闭式温棚内并培育至开花；
(3)、繁育：挑选步骤(2)中实生苗内最优良一株取其芽进行繁育，得分生苗，从实生苗中选出的优良母株需要再次的观察其遗传基因，取其中与母株完全相同者，从外观看：花色、花型、花期、植株形态与母株完全一致，从内部特征看：抗病性、生长习性、开花期等均与母株完全相同；
(4)、第一次脱毒处理：将步骤(3)中所得分生苗进行培育，在所述分生苗养至分化时做全暗光处理，暗光处理期间不进行喷水、喷肥，这期间不给光照、肥水是因为酶在自然光照条件下生长在植物体内非常活跃，从这样的植株上取的材料很容易发生病菌及褐变，这样处理可以使植物组织内光诱导的那些参与酚类合成的氧化酶活性减弱、酚类化合物的合成减少、氧化产物也减少，使所述分化苗花梗快速徒长，徒长10cm时，取其顶芽；
(5)、第二次脱毒处理：将步骤(4)所述顶芽取下后，用酒精擦拭干净，切取芽点，用漂白水浸泡1min，然后用无菌水清洗3次，之后将芽点分割为0.5mm*0.5mm大小，之后放入培养基中培养，培养方式为先进入全暗光培养室培养1周，之后转为弱光培养15天，其中弱光条件为光照600lux，成活后进入正常的母瓶培养，待1年后出瓶。(6)、出瓶培养：出瓶后具体种植过程分为四个阶段：第一阶段：把瓶苗出瓶后用水苔种在1.7寸的透明营养杯内养育，温度控制为：白天25℃，晚上：20℃，湿度：40％，光照：6000lux，5天浇一次肥水；第二阶段：在1.7寸养护4个月后便换到较大的2.5寸花杯内养护，温度控制为：白天25℃，晚上：20℃，湿度：40％，光照：8000lux。5天浇一次肥水；第三阶段：2.5寸花杯内养护4个月后换至3.5寸透明营养杯中继续养护，温度控制为：白天25℃，晚上：20℃，湿度：40％，光照：10000lux，5天浇一次肥水；第四阶段：3.5寸养护4个月后进入生殖期，即，白天高温、高湿、高光照，晚间低温控制管理，具体白天温度28℃，晚间：16℃，湿度：60％，光照：15000lux，用此方式让已全面成熟的苗分化抽梗，大约在4个月左右即开花。
(7)、病毒检测：利用RT-PCR病毒检测技术将步骤(6)种植所得苗，取其叶片或花梗进行病毒检测，直到得到脱毒苗为止。其中RT-PCR病毒检测技术是：抽取样本蝴蝶兰RNA→将蝴蝶兰RNA反转录成Cnda→以RT-PCR分析产物。RT-PCR病毒检测技术非常准确，利用RT-PCR病毒检测技术对亲本到组织的每个环节进行病毒检测，以确保组培的每个环节没有感染病毒。
实施例2：一种无毒蝴蝶兰新品种的培育方法，包括以下步骤：
(1)、选种杂交：从台湾引进杂交先种，将Dtps.I-Hsin Pink Baby(KHM555)作为父本，将Dtps.I-Hsin Maple #5872作为母本，将所述父本与母本进行杂交得种子，Dtps.I-Hsin Pink Baby(KHM555)与Dtps.I-Hsin Maple#5872是台湾已养育成熟且稳定性较佳的两个品种，父本Dtps.I-Hsin Pink Baby(KHM555)的父母本是：Dtps.I-Hsin Pink Face(母本)×Dtps.Taisuco Firebird(父本)登录名是Dtps.I-Hsin Pink Baby；母本Dtps.I-Hsin Maple #5872的父母本是：Dtps.Minho Venus(母本)×P.Hwafeng Redjcwel(父本)登录名是Dtps.I-Hsin Maple；
(2)、组培：将步骤(1)所得种子在组培实验室内播种，培育出实生苗，之后移至密闭式温棚内并培育至开花；
(3)、繁育：挑选步骤(2)中实生苗内最优良一株取其芽进行繁育，得分生苗，从实生苗中选出的优良母株需要再次的观察其遗传基因，取其中与母株完全相同者，从外观看：花色、花型、花期、植株形态与母株完全一致，从内部特征看：抗病性、生长习性、开花期等均与母株完全相同；
(4)、第一次脱毒处理：将步骤(3)中所得分生苗进行培育，在所述分生苗养至分化时做全暗光处理，暗光处理期间不进行喷水、喷肥，这期间不给光照、肥水是因为酶在自然光照条件下生长在植物体内非常活跃，从这样的植株上取的材料很容易发生病菌及褐变，这样处理可以使植物组织内光诱导的那些参与酚类合成的氧化酶活性减弱、酚类化合物的合成减少、氧化产物也减少，使所述分化苗花梗快速徒长，徒长12cm时，取其顶芽；
(5)、第二次脱毒处理：将步骤(4)所述顶芽取下后，用酒精擦拭干净，切取芽点，用漂白水浸泡1min，然后用无菌水清洗3次，之后将芽点分割为0.5mm*0.5mm大小，之后放入培养基中培养，培养方式为先进入全暗光培养室培养1周，之后转为弱光培养15天，其中弱光条件为光照800lux，成活后进入正常的母瓶培养，待1年后出瓶种植。
(6)、出瓶培养：出瓶后具体种植过程分为四个阶段：第一阶段：把瓶苗出瓶后用水苔种在1.7寸的透明营养杯内养育，温度控制为：白天30℃，晚上：25℃，湿度：60％，光照：8000lux，7天浇一次肥水；第二阶段：在1.7寸养护5个月后便换到较大的2.5寸花杯内养护，温度控制为：白天30℃，晚上：25℃，湿度：60％，光照：10000lux。7天浇一次肥水；第三阶段：2.5寸花杯内养护5个月后换至3.5寸透明营养杯中继续养护，温度控制为：白天30℃，晚上：25℃，湿度：60％，光照：15000lux，7天浇一次肥水；第四阶段：3.5寸养护5个月后进入生殖期，即，白天高温、高湿、高光照，晚间低温控制管理，具体白天温度32℃，晚间：18℃，湿度：70％，光照：20000lux，用此方式让已全面成熟的苗分化抽梗，大约在4个月左右即开花。
(7)、病毒检测：利用RT-PCR病毒检测技术将步骤(6)种植所得苗，取其叶片或花梗进行病毒检测，直到得到脱毒苗为止。其中RT-PCR病毒检测技术是：抽取样本蝴蝶兰RNA→将蝴蝶兰RNA反转录成Cnda→以RT-PCR分析产物。RT-PCR病毒检测技术非常准确，利用RT-PCR病毒检测技术对亲本到组织的每个环节进行病毒检测，以确保组培的每个环节没有感染病毒。
实施例3：一种无毒蝴蝶兰新品种的培育方法，包括以下步骤：
(1)、选种杂交：从台湾引进杂交先种，将Dtps.I-Hsin Pink Baby(KHM555)作为父本，将Dtps.I-Hsin Maple #5872作为母本，将所述父本与母本进行杂交得种子，Dtps.I-Hsin Pink Baby(KHM555)与Dtps.I-Hsin Maple #5872是台湾已养育成熟且稳定性较佳的两个品种，父本Dtps.I-Hsin Pink Baby(KHM555)的父母本是：Dtps.I-Hsin Pink Face(母本)×Dtps.Taisuco Firebird(父本)登录名是Dtps.I-Hsin Pink Baby；母本Dtps.I-Hsin Maple #5872的父母本是：Dtps.Minho Venus(母本)×P.Hwafeng Redjcwel(父本)登录名是Dtps.I-HsinMaple；
(2)、组培：将步骤(1)所得种子在组培实验室内播种，培育出实生苗，之后移至密闭式温棚内并培育至开花；
(3)、繁育：挑选步骤(2)中实生苗内最优良一株取其芽进行繁育，得分生苗，从实生苗中选出的优良母株需要再次的观察其遗传基因，取其中与母株完全相同者，从外观看：花色、花型、花期、植株形态与母株完全一致，从内部特征看：抗病性、生长习性、开花期等均与母株完全相同；
(4)、第一次脱毒处理：将步骤(3)中所得分生苗进行培育，在所述分生苗养至分化时做全暗光处理，暗光处理期间不进行喷水、喷肥，这期间不给光照、肥水是因为酶在自然光照条件下生长在植物体内非常活跃，从这样的植株上取的材料很容易发生病菌及褐变，这样处理可以使植物组织内光诱导的那些参与酚类合成的氧化酶活性减弱、酚类化合物的合成减少、氧化产物也减少，使所述分化苗花梗快速徒长，徒长11cm时，取其顶芽；
(5)、第二次脱毒处理：将步骤(4)所述顶芽取下后，用酒精擦拭干净，切取芽点，用漂白水浸泡1min，然后用无菌水清洗3次，之后将芽点分割为0.5mm*0.5mm大小，之后放入培养基中培养，培养方式为先进入全暗光培养室培养1周，之后转为弱光培养15天，其中弱光条件为光照700lux，成活后进入正常的母瓶培养，待1年后出瓶种植。
(6)、出瓶培养：出瓶后具体种植过程分为四个阶段：第一阶段：把瓶苗出瓶后用水苔种在1.7寸的透明营养杯内养育，温度控制为：白天28℃，晚上：23℃，湿度：50％，光照：7000lux，6天浇一次肥水；第二阶段：在1.7寸养护4.5个月后便换到较大的2.5寸花杯内养护，温度控制为：白天28℃，晚上：23℃，湿度：50％，光照：9000lux。6天浇一次肥水；第三阶段：2.5寸花杯内养护4.5个月后换至3.5寸透明营养杯中继续养护，温度控制为：白天28℃，晚上：23℃，湿度：50％，光照：12500lux，6天浇一次肥水；第四阶段：3.5寸养护4.5个月后进入生殖期，即，白天高温、高湿、高光照，晚间低温控制管理，具体白天温度30℃，晚间：17℃，湿度：65％，光照：18000lux，用此方式让已全面成熟的苗分化抽梗，大约在4多个月左右即开花。
(7)、病毒检测：利用RT-PCR病毒检测技术将步骤(6)种植所得苗，取其叶片或花梗进行病毒检测，直到得到脱毒苗为止。其中RT-PCR病毒检测技术是：抽取样本蝴蝶兰RNA→将蝴蝶兰RNA反转录成Cnda→以RT-PCR分析产物。RT-PCR病毒检测技术非常准确，利用RT-PCR病毒检测技术对亲本到组织的每个环节进行病毒检测，以确保组培的每个环节没有感染病毒。
经此方法培养所得的蝴蝶兰新品种与其他品种相比，具有以下指标优势：
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种无毒蝴蝶兰新品种的培育方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)、选种杂交：将Dtps.I-Hsin Pink Baby(KHM555)作为父本，将Dtps.I-HsinMaple#5872作为母本，将所述父本与母本进行杂交得到种子；
(2)、组培：将步骤(1)所得种子在组培实验室内播种，培育出实生苗，之后移至密闭式温棚内培育至开花；
(3)、繁育：挑选步骤(2)中实生苗内最优良一株取其芽进行繁育，得分生苗；
(4)、第一次脱毒处理：将步骤(3)中所得分生苗进行培育，在所述分生苗养至分化，然后做全暗光处理，使所述分化苗花梗快速徒长，徒长10cm～12cm时，取其顶芽；
(5)、第二次脱毒处理：将步骤(4)所述顶芽取下后，用酒精擦拭干净，切取芽点，用漂白水浸泡1min，然后用无菌水清洗3次，之后将芽点分割放入培养基中培养，成活后进入正常的母瓶培养，待1年后出瓶；
(6)、出瓶培养：出瓶后具体种植过程分为四个阶段：第一阶段：把瓶苗出瓶后用水苔种在1.7寸的透明营养杯内养育，温度控制为：白天25～30℃，晚上：20～25℃，湿度：40％～60％，光照：6000～8000lux，5～7天浇一次肥水；第二阶段：在1.7寸养护4～5个月后便换到较大的2.5寸花杯内养护，温度控制为：白天25～30℃，晚上：20～25℃，湿度：40％～60％，光照：8000～10000lux。5～7天浇一次肥水；第三阶段：2.5寸花杯内养护4～5个月后换至3.5寸透明营养杯中继续养护，温度控制为：白天25～30℃，晚上：20～25℃，湿度：40％～60％，光照：10000～15000lux，5～7天浇一次肥水；第四阶段：3.5寸养护4～5个月后进入生殖期，即，白天高温、高湿、高光照，晚间低温控制管理，具体白天温度28～32℃，晚间：16～18℃，湿度：60％～70％，光照：15000～20000lux，用此方式让已全面成熟的苗分化抽梗，大约在4多个月左右即开花。
(7)、病毒检测：利用RT-PCR病毒检测技术将步骤(6)种植所得苗，取其叶片或花梗进行病毒检测，直到得到脱毒苗为止。
2.根据权利要求1所述的一种无毒蝴蝶兰新品种的培育方法，其特征在于：所述第二次脱毒处理步骤中所述芽点分割为0.5mm*0.5mm。
3.根据权利要求1所述的一种无毒蝴蝶兰新品种的培育方法，其特征在于：所述第二次脱毒处理步骤中所述芽点培养方式为先进入全暗光培养室培养1周，之后转为弱光培养15天，其中弱光条件为600～800lux。
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