CN110278877A

CN110278877A - 一种丝瓜未受精子房诱导培养基及诱导培养方法

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Publication number: CN110278877A
Application number: CN201910725097.5A
Authority: CN
Inventors: 杨泗海
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2019-08-07
Filing date: 2019-08-07
Publication date: 2019-09-27

Abstract

本发明提供了一种丝瓜未受精子房诱导培养基，其配方包括KNO₃、NH₄NO₃、柠檬酸钙等大量元素，铁盐及络合物，H₃BO₃、KI等微量元素，肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素、甘氨酸、精氨酸、脯氨酸、水解乳蛋白、泛酸钙、TDZ、6‑BA、NAA、精胺、硫酸二乙酯、N‑乙酰基‑5‑甲氧基色胺、氨基氧乙酸、丝瓜伤流液、蔗糖和植物凝胶。本发明还提供了一种丝瓜未受精子房诱导培养方法，采集的丝瓜未受精子房经预处理和消毒后接种于上述诱导培养基上进行培养，可以获得24.89%的平均胚状体诱导率，同时，所得胚状体的生长状况良好。本发明为建立丝瓜未受精子房离体培养体系以及开展丝瓜单倍体育种研究奠定基础。

Description

一种丝瓜未受精子房诱导培养基及诱导培养方法

技术领域

本发明涉及一种丝瓜未受精子房诱导培养基及诱导培养方法，属于蔬菜培育技术领域。

背景技术

丝瓜系葫芦科丝瓜属一年生攀缘性草本植物，又名天丝瓜、天络瓜、蛮瓜、天罗、绵瓜和布瓜等，雌、雄花。丝瓜起源于亚洲热带地区，自宋、明代引入我国以来，经过长期的自然选择和进化，迄今共发现9个不同种，其中普通丝瓜（Luffa cylindrica (L.)Roem.）和有棱丝瓜（Luffa acutangula(L.)Roxb.）为我国的主要栽培种。丝瓜以嫩果食用，瓜肉细腻柔软，味道鲜美，由于它产量高、品质好，我国南北各地均普遍种植。丝瓜营养丰富，具有很高的营养保健价值。据测定，每100g丝瓜中含水分95.2g、蛋白质1g、脂肪0.2g、碳水化合物3.4g，维生素B1 0.01mg、B2 0.02mg、B6 0.05mg、维生素C 6mg，钾60mg、钙10mg、镁9mg、磷26mg、铁0.2mg、锌0.2mg、钠3.7mg。丝瓜还含有皂苷、丝瓜苦味素、大量的黏液、精氨酸、瓜氨酸等，这些营养物质对机体的生理活动十分重要。丝瓜的药用价值也很高，丝瓜的果实、叶、藤、花、蒂、种子、根、络、伤流液等均可入药。中医认为，丝瓜味甘，性凉，无毒，有清热利肠、凉血解毒、活络通经、解暑热、消烦渴、祛风化痰、行血脉、下乳汁、杀虫等功效，是夏日保健的佳品。

近年来，丝瓜种植面积不断增加，已成为我国主要蔬菜品种。随着丝瓜需求量的急剧增长，对产量、抗病性、商品性等育种目标提出了更高的要求。我国自20世纪60年代开始丝瓜新品种选育研究，进入90年代后育种研究工作得到深入开展，育成了一批新品种在各地推广，但由于各地消费和栽培习惯差异大，育成品种难以满足生产的需要，到目前生产上地方品种所占比例仍较高，因此面临着品种退化的问题，而且也不适宜保护地栽培。我国丝瓜育种研究主要还是利用常规育种、杂种一代优势利用等方法进行丰产、熟性育种，抗病育种、品质育种仍较少，而利用生物技术育种则很少涉及，落后于其他作物的育种进程。随着我国社会进步和人们生活水平的提高，对食品安全和营养品质的要求将越来越高，抗病虫品种的选育是安全蔬菜生产最经济有效的措施，因此抗病虫、优质将是今后丝瓜的主要育种目标。此外设施园艺的发展，保护地专用型品种的选育亦变得重要。丝瓜杂交优势明显，利用常规方法选育自交系需要进行大规模、长时间的自交选择，获得纯合株系通常需要5~7年，甚至更长的时间，严重制约丝瓜的育种进程。因此，怎样提高自交系的选育效率成为加快其F1代选育进程的关键，而单倍体培养和染色体加倍是快速培育 F1代品种的最有效方式。因此，丝瓜单倍体诱导技术研究的开展显得极为必要。此外诱变单倍体可迅速发现隐性突变。单倍体培养获得的纯合植株，有利和不利的隐性突变基因都可以得到表达，进行离体诱变和抗性突变体筛选，可使选择效率大大提高，为品种改良提供更多中间材料。

1922年首次有了关于单倍体的报道（Blakes Lee 1922），从此单倍体技术便引起了育种者的高度关注。由于单倍体自发发生的频率很低，大大地阻碍了单倍体的推广应用，为此科学家们尝试提高单倍体诱导率，采用的方法通常有：离体雄核（花粉、花药）发育途径、离体雌核（未受精胚珠、子房）发育途径和活体雌核发育途径等。其中以花药及花粉的研究最成功，研究表明目前已经能够得到大量的单倍体植株，且经诱导加倍后得到纯合二倍体植株，因此应用广泛。对葫芦科作物进行花药和小孢子离体培养研究发现，离体雄核途径创制单倍体难度较大。西贞夫对黄瓜花药进行离体培养，诱导获得愈伤组织并分化形成茎叶器官，开创了葫芦科作物花药培养的先河。喻财铃研究了丝瓜小孢子囊与雄配子体发育过程，并利用8个丝瓜品种进行花药培养获得少量分化苗。但是迄今为止利用丝瓜花药培养还没有获得单倍体再生植株。鉴于大孢子也具备单倍性特质，利用未授粉子房或胚珠进行离体培养是葫芦科作物离体雌核发育途径创制单倍体材料的主要方法。对未授粉的子房或胚珠进行离体培养诱导雌核发育创制单倍体在葫芦科的黄瓜、甜瓜、南瓜属上均已见成功报道。

综合未受精子房和胚珠离体培养研究的文献资料后，我们发现，影响未受精子房和胚珠培养的因素有很多，包括供体植株的基因型、未受精子房和胚珠的发育时期即胚囊细胞的发育时期、基本培养基类型、供体植株的栽培季节、外植体培养前的预处理、外植体的接种方式、培养方式、以及培养条件等，其中培养条件又包括激素组成、pH值、外源添加物等。培养基通常是未受精子房人工诱导形态建成的首要影响因素。培养基包括基本培养基、激素、碳源及添加物等几方面。前人的研究结果表明，很难找到一种通用培养基对每种植物都适用，只能针对特定材料、环境条件进行筛选，在大量比较分析的基础上再加以优化。

目前通过未授粉子房或胚珠进行离体培养在黄瓜、甜瓜、西瓜、南瓜上已经成功获得单倍体，但丝瓜离体雌核发育诱导单倍体研究尚未报道。发明人通过对影响丝瓜未受精子房培养的诸因素进行分析，旨在建立一种丝瓜未受精子房诱导培养获得胚状体的方法，为开展丝瓜离体雌核发育培养和单倍体育种提供参考。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种丝瓜未受精子房诱导培养基及诱导培养方法，通过该方法可以成功诱导丝瓜未受精子房形成胚状体，并且具有一定的诱导率。

本发明提供的技术方案是：

一种丝瓜未受精子房诱导培养基，其特征在于，所述培养基的配方为：KNO₃1700~1800mg/L，NH₄NO₃1580~1640mg/L，柠檬酸钙 440~460mg/L，MgSO₄·7H₂O 210~240mg/L，KH₂PO₄ 330~360mg/L，Na₂-EDTA 37~38mg/L，FeSO₄·7H₂O 27.4~28.2mg/L，H₃BO₃ 11.7~13.5mg/L，KI 0.72~0.78mg/L，MnSO₄·4H₂O 21.8~23.0mg/L，ZnSO₄·7H₂O 4.9~6.1mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.2~0.3mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.02~0.03mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.02~0.03mg/L，肌醇90~110mg/L，烟酸1.4~1.8mg/L，盐酸吡哆醇0.8~1.0mg/L，盐酸硫胺素0.6~0.8mg/L，甘氨酸2.0~3.0mg/L，脯氨酸28~36mg/L，水解乳蛋白275~325mg/L，泛酸钙0.5~0.9mg/L，TDZ0.07~0.09mg/L，6-BA 0.9~1.1mg/L，NAA0.4~0.6mg/L，精胺10~15mg/L，N-乙酰基-5-甲氧基色胺0.18~0.22mg/L，硫酸二乙酯1.1~1.3mg/L，氨基氧乙酸17~23mg/L，丝瓜伤流液130~170ml/L，蔗糖35~45g/L，植物凝胶5~7g/L。

包括以下步骤：

（1）丝瓜植株栽培：将丝瓜于秋季8-9月播种育苗，待幼苗长到三叶一心时定植，进行常规栽培管理；

（2）未受精子房的采集与预处理：在开花前1天下午对雌花进行套袋处理，确保其未授粉；开花当天从第2个雌花节位以后开始取样，将采集的未受精子房用冰壶带回实验室，流水下冲洗30min后置于TDZ溶液中预处理5~10min；

（3）外植体消毒与接种：将预处理后的子房先用无菌水冲洗20min，在超净工作台上，用75%的酒精表面消毒30s，刮去子房皮后将每个子房两端约0.3cm的部分切除，剩余的中间部分横切成1~2mm的小薄片，用0.1%HgCl₂消毒8min，再无菌水冲洗4~5遍，最后用无菌滤纸吸干子房切片表面水分，将子房切片作为外植体接种于诱导培养基上，每个三角瓶接种6~10个外植体；

（4）诱导培养：将上述外植体先置于35℃黑暗条件下热激3d，再置于23~27℃黑暗条件下培养7~10d，然后转入光照条件下进行培养至胚状体形成。

所述丝瓜伤流液的采集方法为：当丝瓜生长进入结瓜时期时，在丝瓜藤距离地面50~80cm处切断，将切断的一截口倒插入收集瓶中，使伤流液自然从伤口流出。

所述培养基的pH值为5.6~6.0。

所述培养基的最佳配方为：KNO₃1750mg/L，NH₄NO₃1610mg/L，MgSO₄·7H₂O 225mg/L，KH₂PO₄ 345mg/L，葡萄糖酸钙450mg/L，Na₂-EDTA 37.5mg/L，FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L，H₃BO₃12.6mg/L，KI 0.75mg/L，MnSO₄·4H₂O 22.4mg/L，ZnSO₄·7H₂O 5.5mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.6mg/L，盐酸吡哆醇0.9mg/L，盐酸硫胺素0.7mg/L，甘氨酸2.5mg/L，脯氨酸32mg/L，水解乳蛋白300mg/L，泛酸钙0.7mg/L，TDZ 0.08mg/L，6-BA 1.0mg/L，NAA 0.5mg/L，精胺12.5mg/L，N-乙酰基-5-甲氧基色胺0.2mg/L，硫酸二乙酯1.2mg/L，氨基氧乙酸20mg/L，丝瓜伤流液150ml/L，蔗糖40g/L，植物凝胶6g/L。

所述采集的未受精子房要求生长于健壮植株之上，且没有病虫害。

所述TDZ溶液的浓度为40mg/L。

所述光照条件为：光照强度1800~2400lx，光照时间13~15h/d。

本发明具有如下有益效果：

本发明对影响丝瓜未受精子房离体培养的多种因素进行了深入研究，初步建立了丝瓜未受精子房诱导培养获得胚状体的方法。本发明的诱导培养基是根据丝瓜未受精子房发育特性进行优化的结果，该培养基调整了大量元素、微量元素、维生素等的浓度，添加了精氨酸、脯氨酸、水解乳蛋白、泛酸钙、精胺这些有机成分，植物激素采用TDZ、6-BA、NAA进行复配，还添加了N-乙酰基-5-甲氧基色胺、硫酸二乙酯、氨基氧乙酸、丝瓜伤流液，对于提高胚状体诱导率具有显著效果。

本发明的诱导培养方法采用TDZ溶液对未受精子房进行预处理，诱导培养时对外植体先进行适宜的高温热激预处理，再进行常温暗培养转光照培养，可以促进胚胎发育，在一定程度上提高胚状体的诱导效率。本发明为建立丝瓜未受精子房离体培养体系以及开展丝瓜单倍体育种研究奠定了基础。

具体实施方式

为使本发明的目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

实施例1

1 材料与方法

1.1试验材料

选择普通丝瓜品种‘南京蛇形丝瓜’和‘皖绿１号’作为供试材料，丝瓜种子购于南京嘉华农业发展有限公司。

1.2试验方法

（1）丝瓜植株栽培：将丝瓜种子于秋季8-9月播种育苗，待幼苗长到三叶一心时定植，进行常规栽培管理。

（2）未受精子房的采集与预处理：在开花前1天下午对雌花进行套袋处理，确保其未授粉；开花当天从第2个雌花节位以后开始取样，采集生长于健壮植株之上，且没有病虫害的未受精子房；将采集的未受精子房用冰壶带回实验室，流水下冲洗30min后置于TDZ溶液中预处理8min。

（3）外植体消毒与接种：将预处理后的子房先用无菌水冲洗20min，在超净工作台上，用75%的酒精表面消毒30s，刮去子房皮后将每个子房两端约0.3cm的部分切除，剩余的中间部分横切成1~2mm的小薄片，用0.1%HgCl₂消毒8min，再无菌水冲洗4~5遍，最后用无菌滤纸吸干子房切片表面水分，将子房切片作为外植体接种于诱导培养基上，每个三角瓶接种6~10个外植体。

基本诱导培养基的配方为：KNO₃1750mg/L，NH₄NO₃1610mg/L，MgSO₄·7H₂O 225mg/L，KH₂PO₄ 345mg/L，葡萄糖酸钙450mg/L，Na₂-EDTA 37.5mg/L，FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L，H₃BO₃12.6mg/L，KI 0.75mg/L，MnSO₄·4H₂O 22.4mg/L，ZnSO₄·7H₂O 5.5mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.6mg/L，盐酸吡哆醇0.9mg/L，盐酸硫胺素0.7mg/L，甘氨酸2.5mg/L，脯氨酸32mg/L，水解乳蛋白300mg/L，泛酸钙0.7mg/L，TDZ 0.08mg/L，6-BA 1.0mg/L，NAA 0.5mg/L，精胺12.5mg/L，丝瓜伤流液150ml/L，蔗糖40g/L，植物凝胶6g/L，pH值为5.8；其中丝瓜伤流液的采集方法为：当丝瓜生长进入结瓜时期时，在丝瓜藤距离地面50~80cm处切断，将切断的一截口倒插入收集瓶中，使伤流液自然从伤口流出。

（4）诱导培养：将上述外植体置于25℃黑暗条件下培养7d，然后转入光照强度2100lx、光照时间14h/d的光照条件下进行培养至胚状体形成。

1.2.1 N-乙酰基-5-甲氧基色胺对胚状体诱导影响的试验：

将‘南京蛇形丝瓜’和‘皖绿１号’两个品种的外植体分别接种到添加不同浓度N-乙酰基-5-甲氧基色胺（0mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L）的基本诱导培养基上进行诱导培养，观察并统计胚状体诱导率，比较添加N-乙酰基-5-甲氧基色胺对胚状体诱导影响。胚状体诱导率= （形成胚状体的外植体数/接种外植体数）×100%。

1.2.2 硫酸二乙酯对胚状体诱导影响的试验：

将‘南京蛇形丝瓜’和‘皖绿１号’两个品种的外植体分别接种到添加不同浓度硫酸二乙酯（0mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L、1.2mg/L、1.6mg/L、2.0mg/L）的基本诱导培养基上进行诱导培养，观察并统计胚状体诱导率，比较添加硫酸二乙酯对胚状体诱导影响。

1.2.3氨基氧乙酸对胚状体诱导影响的试验：

将‘南京蛇形丝瓜’和‘皖绿１号’两个品种的外植体分别接种到添加不同浓度氨基氧乙酸（0mg/L、10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L）的基本诱导培养基上进行诱导培养，观察并统计胚状体诱导率，比较添加氨基氧乙酸对胚状体诱导影响。

1.2.4热激处理对胚状体诱导影响的试验：

外植体接种后进行热激处理试验，热激温度设置为33℃、35℃，热激时间设置为1d、2d、3d、4d、5d，热激处理后再将外植体置于25℃黑暗条件下培养7d，然后转入光照强度2100lx、光照时间14h/d的光照条件下进行培养至胚状体形成；以不进行热激处理作为对照，观察并统计各试验组胚状体诱导率。

2 结果与分析

2.1几种添加物及浓度对丝瓜未受精子房胚状体诱导的影响

2.1.1 N-乙酰基-5-甲氧基色胺对胚状体诱导的影响：

N-乙酰基-5-甲氧基色胺中文名称为褪黑素，是由脑松果体分泌的激素之一，属于吲哚杂环类化合物。经研究发现N-乙酰基-5-甲氧基色胺也广泛存在于植物中，在植物体内有调节光周期、清除自由基、保护叶绿素和刺激根生长等多方面的生理功能，因此本试验尝试添加不同浓度的N-乙酰基-5-甲氧基色胺来观察能否促进胚状体的诱导。从表1可以看出，与对照组相比，添加0.05~0.5mg/L浓度的N-乙酰基-5-甲氧基色胺均可以促进胚状体的诱导，0.2mg/L的浓度使得这种促进作用达到最佳效果，胚状体诱导率达到最高值，分别为南京蛇形丝瓜15.12%，皖绿１号18.86%；而添加1.0mg/L浓度的N-乙酰基-5-甲氧基色胺时，其胚状体诱导率低于对照组，说明此浓度下胚状体的形成受到抑制，因此N-乙酰基-5-甲氧基色胺的最佳添加浓度为0.2mg/L。

2.1.2硫酸二乙酯对胚状体诱导的影响：

硫酸二乙酯是一种化学诱变剂，经诱变处理的未受精子房或胚珠由于诱变剂的作用，在离体培养过程中胚胎发育过程必然受到一定影响，因此本试验尝试添加不同浓度的硫酸二乙酯来观察能否促进胚状体的诱导。从表2可以看出，与对照组相比，添加试验浓度范围的硫酸二乙酯均可以促进胚状体的形成，提高胚状体诱导率。其中添加1.2mg/L的硫酸二乙酯使得这种促进作用达到最佳效果，胚状体诱导率达到最高值，分别为南京蛇形丝瓜16.63%，皖绿１号19.55%，继续增加硫酸二乙酯的浓度，胚状体诱导率反而降低，可能是硫酸二乙酯会产生一定的毒害作用，导致外植体细胞生理损伤，因此硫酸二乙酯的最佳添加浓度为1.2mg/L。

2.1.3氨基氧乙酸对胚状体诱导的影响：

外植体受到创伤之后会大量形成乙烯，而乙烯对器官发生和细胞胚胎发生均有抑制作用，随着培养时间的延长，培养容器中的乙烯含量会逐渐积累，而乙烯的积累会抑制培养材料的生长发育以及芽、胚状体的分化。氨基氧乙酸是一种乙烯合成抑制剂，因此本试验尝试添加不同浓度的氨基氧乙酸来观察能否促进胚状体的诱导。从表3可以看出，与对照组相比，添加10~30mg/L浓度的氨基氧乙酸，胚状体诱导率均有所提高，其中添加20mg/L的氨基氧乙酸效果最明显，胚状体诱导率达到最高值，分别为南京蛇形丝瓜15.45%，皖绿１号19.17%；而添加40~50mg/L的氨基氧乙酸，其胚状体诱导率反而低于对照组，说明氨基氧乙酸的浓度超过一定数量，对胚的诱导有抑制作用，因此氨基氧乙酸的最佳添加浓度为20mg/L。

2.2热激处理对丝瓜未受精子房胚状体诱导的影响

根据前人研究经验，葫芦科作物未受精子房多采用高温热激处理来提高未受精子房离体培养的诱导率，但不同作物最适的热激处理时间与温度不同，因此本试验的目的是探索适用于丝瓜未受精子房培养的热激处理条件。由表4可知，在热激处理温度相同的情况下，热激处理3d时南京蛇形丝瓜和皖绿１号的胚状体诱导率均最高，其次是热激处理4d，而热激处理5d时胚诱导率显著降低，可能是由于热激时间过长导致胚珠内部的生理活性受到影响，胚状体的诱导受到一定抑制；在热激处理时间为3d的情况下，35℃热激处理时南京蛇形丝瓜和皖绿１号的胚状体诱导率更高，分别达到17.61%和20.38%。综上所述，丝瓜未受精子房的热激处理以35℃处理3d的效果最好。

实施例2

根据实施例1中的研究结果，本发明的最佳丝瓜未受精子房诱导培养基为：KNO₃1750mg/L，NH₄NO₃1610mg/L，MgSO₄·7H₂O 225mg/L，KH₂PO₄ 345mg/L，葡萄糖酸钙450mg/L，Na₂-EDTA 37.5mg/L，FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L，H₃BO₃ 12.6mg/L，KI 0.75mg/L，MnSO₄·4H₂O22.4mg/L，ZnSO₄·7H₂O 5.5mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.6mg/L，盐酸吡哆醇0.9mg/L，盐酸硫胺素0.7mg/L，甘氨酸2.5mg/L，脯氨酸32mg/L，水解乳蛋白300mg/L，泛酸钙0.7mg/L，TDZ0.08mg/L，6-BA 1.0mg/L，NAA 0.5mg/L，精胺12.5mg/L，N-乙酰基-5-甲氧基色胺0.2mg/L，硫酸二乙酯1.2mg/L，氨基氧乙酸20mg/L，丝瓜伤流液150ml/L，蔗糖40g/L，植物凝胶6g/L，pH值为5.8。

最佳丝瓜未受精子房诱导培养方法为：

（1）丝瓜植株栽培：将丝瓜种子于秋季8-9月播种育苗，待幼苗长到三叶一心时定植，进行常规栽培管理；

（2）未受精子房的采集与预处理：在开花前1天下午对雌花进行套袋处理，确保其未授粉；开花当天从第2个雌花节位以后开始取样，采集生长于健壮植株之上，且没有病虫害的未受精子房；将采集的未受精子房用冰壶带回实验室，流水下冲洗30min后置于TDZ溶液中预处理8min；

（4）诱导培养：将上述外植体先置于35℃黑暗条件下热激3d，再置于25℃黑暗条件下培养7d，然后转入光照强度2100lx、光照时间14h/d的光照条件下进行培养至胚状体形成；

以普通丝瓜品种‘南京蛇形丝瓜’和‘皖绿１号’作为供试材料，最终获得的胚状体诱导率高达23.05%和26.73%。

以上实施例仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明保护范围之内；本发明未涉及的技术均可通过现有技术加以实现。

Claims

1.一种丝瓜未受精子房诱导培养基，其特征在于，所述培养基的配方为：KNO₃1700~1800mg/L，NH₄NO₃1580~1640mg/L，柠檬酸钙 440~460mg/L，MgSO₄·7H₂O 210~240mg/L，KH₂PO₄ 330~360mg/L，Na₂-EDTA 37~38mg/L，FeSO₄·7H₂O 27.4~28.2mg/L，H₃BO₃ 11.7~13.5mg/L，KI 0.72~0.78mg/L，MnSO₄·4H₂O 21.8~23.0mg/L，ZnSO₄·7H₂O 4.9~6.1mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.2~0.3mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.02~0.03mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.02~0.03mg/L，肌醇90~110mg/L，烟酸1.4~1.8mg/L，盐酸吡哆醇0.8~1.0mg/L，盐酸硫胺素0.6~0.8mg/L，甘氨酸2.0~3.0mg/L，脯氨酸28~36mg/L，水解乳蛋白275~325mg/L，泛酸钙0.5~0.9mg/L，TDZ0.07~0.09mg/L，6-BA 0.9~1.1mg/L，NAA0.4~0.6mg/L，精胺10~15mg/L，N-乙酰基-5-甲氧基色胺0.18~0.22mg/L，硫酸二乙酯1.1~1.3mg/L，氨基氧乙酸17~23mg/L，丝瓜伤流液130~170ml/L，蔗糖35~45g/L，植物凝胶5~7g/L。

2.一种丝瓜未受精子房诱导培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求1所述的一种丝瓜未受精子房诱导培养基，其特征在于，所述丝瓜伤流液的采集方法为：当丝瓜生长进入结瓜时期时，在丝瓜藤距离地面50~80cm处切断，将切断的一截口倒插入收集瓶中，使伤流液自然从伤口流出。

4.根据权利要求1所述的一种丝瓜未受精子房诱导培养基，其特征在于，所述培养基的pH值为5.6~6.0。

5.根据权利要求1所述的一种丝瓜未受精子房诱导培养基，其特征在于，所述培养基的最佳配方为：KNO₃1750mg/L，NH₄NO₃1610mg/L，MgSO₄·7H₂O 225mg/L，KH₂PO₄ 345mg/L，葡萄糖酸钙450mg/L，Na₂-EDTA 37.5mg/L，FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L，H₃BO₃ 12.6mg/L，KI 0.75mg/L，MnSO₄·4H₂O 22.4mg/L，ZnSO₄·7H₂O 5.5mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，肌醇100mg/L，烟酸1.6mg/L，盐酸吡哆醇0.9mg/L，盐酸硫胺素0.7mg/L，甘氨酸2.5mg/L，脯氨酸32mg/L，水解乳蛋白300mg/L，泛酸钙0.7mg/L，TDZ0.08mg/L，6-BA 1.0mg/L，NAA 0.5mg/L，精胺12.5mg/L，N-乙酰基-5-甲氧基色胺0.2mg/L，硫酸二乙酯1.2mg/L，氨基氧乙酸20mg/L，丝瓜伤流液150ml/L，蔗糖40g/L，植物凝胶6g/L。

6.根据权利要求2所述的一种丝瓜未受精子房诱导培养方法，其特征在于，所述采集的未受精子房要求生长于健壮植株之上，且没有病虫害。

7.根据权利要求2所述的一种丝瓜未受精子房诱导培养方法，其特征在于，所述TDZ溶液的浓度为40mg/L。

8.根据权利要求2所述的一种丝瓜未受精子房诱导培养方法，其特征在于，所述光照条件为：光照强度1800~2400lx，光照时间13~15h/d。