CN101933456B

CN101933456B - 铁皮石斛蒴果快繁育苗方法

Info

Publication number: CN101933456B
Application number: CN2009100946737A
Authority: CN
Inventors: 彭贵湖; 徐金富
Original assignee: XISHUANGBANNA ZENGLIANG BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: XISHUANGBANNA ZENGLIANG BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2009-06-29
Filing date: 2009-06-29
Publication date: 2012-06-27
Anticipated expiration: 2029-06-29
Also published as: CN101933456A

Abstract

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种珍稀濒危中药材铁皮石斛蒴果的快繁育苗方法。本发明的目的在于利用现代生物技术，在不破坏野生石斛资源的前提下，快速扩繁优质铁皮石斛种苗。一颗铁皮石斛蒴果通过5～6月的组培培养可快繁培育出10万株以上石斛组培苗，炼苗移栽成活率达到96％以上。本发明了提高铁皮石斛种苗的扩繁速度和生产量，变野生为家种，实施人工大面积栽培，对濒危紧缺药用植物资源再生和持续利用具有十分积极的影响。

Description

铁皮石斛蒴果快繁育苗方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种珍稀濒危中药材铁皮石斛蒴果的快繁育苗方法。

背景技术

铁皮石斛是《中国药典》收载的主要品种之一，药用价值高、保健功能强，主要成分为多糖、石斛碱、氨基酸和微量元素等，具有滋阴清热、益胃生津、清嗓明目、增强人体免疫力、抗衰老、抗肿瘤等功效。在《神农本草经》、《本草纲目》和《纲目拾遗》中早有记载，赞铁皮石斛是“滋阴补益珍品”，道家经典《道藏》称其为我国“九大仙草”之首。多年来，由于产区药农毁灭性采挖，使野生铁皮石斛资源濒临灭绝，国家已将铁皮石斛列为二类重点保护的珍稀濒危物种，并鼓励人工大面积栽培铁皮石斛，变野生为家种，以保障铁皮石斛资源的可持续性利用和发展。

本发明运用现代生物组培繁育技术，在不破坏石斛野生资源的前提下，快速扩繁优质铁皮石斛种苗；一颗铁皮石斛蒴果通过公司自创的培养基配方和培养方法，通过5～6月的组培培养可快繁培育出10万株以上石斛组培苗，炼苗移栽成活率达到96％以上。而目前国内很多科研单位和公司采用野生铁皮石斛的茎段和茎尖进行组培育苗研究，比如“一种铁皮石斛快繁的组培方法”(申请号：2008101108704.5)、“一种铁皮石斛茎尖组培快速繁殖的育苗方法”(申请号：200710066480.1)、“一种应用铁皮石斛激素自养型茎尖培养生产药材的方法”(申请号：02136925.9)、“一种铁皮石斛的培育方法”(申请号：200410017380.6)等。

本发明的目的在于利用现代生物技术，在不破坏野生石斛资源的前提下，提高铁皮石斛种苗的扩繁速度和生产量，变野生为家种，实施人工大面积栽培，对濒危紧缺药用植物资源再生和持续利用具有十分积极的影响。

发明内容

为了实现这一目的，发明人经过试验，成功完成了可用于铁皮石斛的组织培养基质配方及其培养方法研制，对组织培养基质配方和生产工艺进行了试验和完善，特别是对基本培养基、细胞分裂素、生长素和有机添加物的筛选和用量，进行了多次研究和试验，获得了独创的培养配方和培养方法，取得了良好效果，解决了铁皮石斛组培苗生产过程中出现的问题，完成了铁皮石斛蒴果快繁育苗生产技术的发明研究。

铁皮石斛蒴果快繁育苗方法分为三个阶段：

1、将新鲜的未裂开的果实或储存的种子经过消毒处理程序，播入1/2MS基本培养基+NAA(α-萘乙酸)0.01～0.5mg/L+土豆汁15％(V/V)+蛋白胨0.1～5g/L+琼脂5g/L的培养基里，进行种子萌发培养，培养温度22～25℃，每日光照10-12小时，光强1800～2500lx，约10～15天种胚开始萌动，15～25天种胚膨大，逐渐萌发形成绿色的原球茎；

2、将原球茎转入MS基本培养基+BA(6-苄基腺嘌呤)0.01～0.5mg/L+NAA(α-萘乙酸)0.01～0.5mg/L+土豆汁20％(V/V)+蛋白胨0.1～5g/L+琼脂5g/L的培养基里进行原球茎增殖、分化培养，约25天可观察到瓶内原球茎重叠堆积在培养基中，并有叶原茎和小苗出现，将小苗转入同样的培养基继续培养2个月，将小苗培养成中苗，苗高3cm左右同时伴随有部分新的原球茎产生；

3、将中苗转入MS基本培养基+NAA(α-萘乙酸)0.01～0.5mg/L+香蕉汁15％(V/V)+土豆汁10％(V/V)+琼脂6g/L+蛋白胨0.1～5g/L的壮苗培养基里，继续培养，约1.5个月可培养出5cm高以上的大苗，大苗可出瓶炼苗、移栽。

上述的铁皮石斛蒴果快繁育苗方法中，所提到的对于铁皮石斛各生长过程培养基质的配方是：(1)种胚诱导培养基：1/2MS基本培养基+NAA(α-萘乙酸)0.01～0.5mg/L+土豆汁15％(V/V)+蛋白胨0.1～5g/L+琼脂5g/L；(2)原球茎增殖与分化培养基：MS基本培养基+BA(6-苄基腺嘌呤)0.01～0.5mg/L+NAA(α-萘乙酸)0.01～0.5mg/L+土豆汁20％(V/V)+蛋白胨0.1～5g/L+琼脂5g/L；(3)壮苗生根培养基：MS基本培养基+NAA(α-萘乙酸)0.01～0.5mg/L+香蕉汁15％(V/V)+土豆汁10％(V/V)+琼脂6g/L+蛋白胨0.1～5g/L。

采用本发明所提供的铁皮石斛蒴果快繁育苗方法，可有效解决铁皮石斛种苗的来源和种苗的地道性，从铁皮石斛种子到培养成大苗，只需5～6个月，大大缩短了种苗组培时间和成本，与传统种苗扩繁相比，种苗的扩繁速度和生产量都有了较大的提高，实现铁皮石斛产业化发展。

本发明研究结果对解决铁皮石斛变野生为家种，实施人工大面积栽培中，所面临的种苗来源紧缺等问题，起到了关键性的作用，为尽快推动铁皮石斛产业化、规模化发展，提供了科学依据和有力保证。本发明具有良好的社会效益、经济效益和生态效益。

具体实施方式

实施例1：铁皮石斛蒴果快繁育苗方法

将收集的铁皮石斛种源在每年4～5月开花时进行异花授粉，在当年的10月底蒴果成熟后进行采收，放在干净的培养皿里，放于冰箱内保存。

a、将新鲜的未裂开的果实或储存的种子经过消毒处理程序，播入1/2MS基本培养基+NAA(α-萘乙酸)0.01～0.5mg/L+土豆汁15％(V/V)+蛋白胨0.1～5g/L+琼脂5g/L的培养基里，进行种子萌发培养，培养温度22～25℃，每日光照10--12小时，光强1800～2500lx，约15天种胚开始萌动，25天种胚膨大，逐渐萌发形成绿色的原球茎；

b、将原球茎转入MS基本培养基+BA(6-苄基腺嘌呤)0.01～0.5mg/L+NAA(α-萘乙酸0.01～0.5mg/L+土豆汁20％(V/V)+蛋白胨0.01～5g/L+琼脂5g/L的培养基里进行原球茎增殖、分化培养，约25天可观察到瓶内原球茎重叠堆积在培养基中，并有叶原茎和小苗出现，将小苗转入同样的培养基继续培养，2个月将小苗培养成中苗，苗高3cm左右同时伴随有部分新的原球茎产生；

c、将中苗转入MS基本培养基+NAA(α-萘乙酸)0.01～0.5mg/L+香蕉汁15％(V/V)+土豆汁10％(V/V)+琼脂6g/L+蛋白胨0.1～5g/L的壮苗培养基里，继续培养，约1.5个月可培养出5cm高以上的大苗，大苗可出瓶炼苗、移栽。

Claims

1.一种铁皮石斛蒴果快繁育苗方法，其特征在于该方法在不破坏野生石斛资源前提下，能够快速培育出铁皮石斛试管苗，包括下列步骤完成：

①　将新鲜的未裂开的果实或储存的种子经过消毒处理程序，播入1／2MS基本培养基+NAA（a-萘乙酸）0.01~0.5㎎／L+土豆汁15％（V/V)+蛋白胨0.1~5g／L+琼脂5g／L的培养基里，进行种子萌发培养，培养温度22~25℃，每日光照10—12小时，光照1800~2500lx, 10~15天种胚开始萌动，15~25天种胚膨大，逐渐萌发形成绿色的原球茎；

②　将原球茎转入MS基本培养基+BA（6-苄基腺嘌呤）0.01~0.5㎎／L+NAA(a-萘乙酸）0.01~0.5㎎／L+土豆汁20％（V／V)+蛋白胨0.1~5g／L+琼脂5g/L的培养基里进行原球茎增殖、分化培养，25天观察到瓶内原球茎重叠堆积在培养基中，并有叶原茎和小苗出现，将小苗转入同样的培养基继续培养2个月，将小苗培养成中苗，苗高3㎝同时伴随有部分新的原球茎产生；

③　将中苗转入MS基本培养基+NAA（a-萘乙酸）0.01~0.5㎎／L+香蕉汁15％（V/V)+土豆汁10％（V/V)+琼脂6g/L+蛋白胨0.1~5g／L的壮苗培养基里面，继续培养，1.5个月能够培养出5㎝高以上的大苗，大苗能够出瓶炼苗、移栽。