CN104145815B - 铁皮石斛培养基及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种铁皮石斛培养基及其制备方法，所述培养基包括：花宝一号，其在培养基溶液中的浓度为3～4g/L；有机元素类如柠檬酸、肌醇、维生素B1，其中每一种物质在培养基溶液中的浓度均为15～200mg/L；化合物如磷酸二氢钾，其在培养基溶液中的浓度为50～300mg/L；添加物如蛋白胨、马铃薯、香蕉等，其中每一种物质在培养基溶液中的浓度均为0.5～100g/L。本发明的培养基成分简单、营养全面、配制简便，能够很好的促进铁皮石斛壮苗生根，使得茎更粗壮，根系更发达，有效提高出瓶种苗的质量。

Description

铁皮石斛培养基及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种铁皮石斛培养基及其制备方法。

背景技术

石斛是为兰科石斛属多年生草本植物，是兰科植物中最大的一个属。石斛天然就是一个生命力很强的植物，多生长于人迹罕至的悬崖峭壁上，附生于树上或岩石边石缝中，喜温暖湿润和半阴半阳的气候环境。石斛在全世界有1600多种，我国约有76种，其中大部分分布于西南、华南、台湾等地。铁皮石斛是众多石斛中的一种,又名黄草、黑节草，是石斛中的极品，它因表面呈铁绿色而得名，具有独特的药用价值；民间俗称“救命仙草”，因其含有大量的石斛多糖、石斛碱等成分，而位列众石斛之首，是历代皇宫贵族养生保健首选的“滋阴圣品”。《道藏》将其尊为中华九大仙草之首。李时珍在《本草纲目》中评价铁皮石斛“补五脏虚劳羸弱，强阴益精，厚肠胃，补内绝不足，平胃气，长肌肉，益志除惊，轻身延年”。铁皮石斛自然产量极为稀少，加之长期掠夺式采掘，野生铁皮石斛已濒临枯竭。1975年，铁皮石斛被列为《濒危野生动植物国际贸易公约》濒危植物；1987年，国务院已将铁皮石斛列为野生名贵药材保护品种；2010年，由国内323位顶级药学专家编纂完成的2010版药品技术监督法定技术标准——《中华人民共和国药典》正式出版，因铁皮石斛价值远远高于其他石斛，为充分保护铁皮石斛产业的健康发展，首次将铁皮石斛作为一个单列品种从石斛中分列出来。

由于天然来源的铁皮石斛越来越少，近年来，铁皮石斛的组织培养技术成为了研究的热点。目前市场上关于铁皮石斛组培的培养基有很多种，其中成分含量也不尽相同，但这些培养基在铁皮石斛壮苗生根阶段的效果并不理想，茎不够粗壮，根系不够多等，使得种苗质量大大降低,不利于铁皮石斛的市场销售。而且其配制所需的药品众多，配制较为麻烦。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种铁皮石斛培养基及其制备方法，更有利于生根壮苗，能有效提高出瓶种苗的质量。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：

一种铁皮石斛培养基，每升培养基中含有以下组分：

花宝一号：3000～4000mg；柠檬酸：15～200mg；肌醇：15～200mg；维生素B1：15～200mg；磷酸二氢钾：50～300mg；蛋白胨：1000～5000mg；马铃薯：15000～100000mg；香蕉：15000～100000mg；白糖：18000～35000mg；琼脂：6000～8000mg；活性炭：500～5000mg。

一实施例中：每升培养基中含有以下组分：

花宝一号：3000～4000mg；柠檬酸：50～200mg；肌醇：15～25mg；维生素B1：15～25mg；磷酸二氢钾：50～200mg；蛋白胨：1500～2500mg；马铃薯：50000～100000mg；香蕉：50000～100000mg；白糖：20000～30000mg；琼脂：6000～7000mg；活性炭：1000～2000mg。

一实施例中：每升培养基中含有以下组分：

花宝一号：3500mg；柠檬酸：50～200mg；肌醇：20mg；维生素B1：20mg；磷酸二氢钾：50～200mg；蛋白胨：2000mg；马铃薯：70000mg；香蕉：70000mg；白糖：30000mg；琼脂：6500mg；活性炭：1000mg。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：

一种用于制备权利要求1所述的铁皮石斛培养基的制备方法，包括以下步骤：

1)按配置10升所述铁皮石斛培养基计，称取各组分；

2)将花宝一号、柠檬酸、肌醇、维生素B1、磷酸二氢钾及蛋白胨在室温下加入2升溶剂中，搅拌至溶解；

3)马铃薯用2升溶剂煮熟后搅碎，连同溶剂一并加入步骤2)所得溶液中；

4)香蕉搅碎后加入步骤3)所得溶液中；

5)白糖、琼脂在室温下加入3升溶剂中，白糖搅拌至溶解，琼脂搅拌至混匀，加入步骤4)所得溶液中；

6)活性炭加入步骤5)所得溶液中，搅拌至混匀；

7)将步骤6)所得溶液定容至10升，调节pH值至5.4～5.8；分装于组培瓶中，高压蒸汽灭菌20～30分钟，冷却凝固后即得。

一实施例中：所述溶剂为去离子水。

本发明所述的室温为25℃。

本发明所述的花宝一号为美国生产、台湾或香港分装产品，可从市场上购得。

本发明所述的各组分均为市场上销售的产品。

本技术方案与背景技术相比，它具有如下优点：

1.本发明的铁皮石斛培养基，以花宝一号为基质，加入柠檬酸、肌醇、维生素B1等补充有机元素，磷酸二氢钾能提供充足的磷与钾，蛋白胨能促进铁皮石斛种苗的整体生长，马铃薯能壮苗并改善培养基的硬度，香蕉可有效促进生根，白糖提供碳源，琼脂可使培养基成型以支撑种苗的生长，活性炭的添加则能大大减少褐变的产生，各组分营养全面、相辅相成，有利于生根壮苗，能有效提高出瓶种苗的质量。

2.本发明的铁皮石斛培养基组分简单，来源广泛，易于获得，价格低廉，配置步骤简便，适合用于铁皮石斛组培中的壮苗生根阶段，尤其适合大规模组织培养。

3.本发明的铁皮石斛培养基培养效果良好，出瓶种苗平均克重约0.75～0.9g，茎粗约0.4～0.5cm，每丛苗(三株一丛)2cm长以上的根5～6条；而市售的培养同样时间的铁皮石斛种苗平均克重0.4～0.5g，茎粗约0.15～0.2cm，每丛苗(三株一丛)2cm长以上的根4条以上，与之相比，本发明的培养基培养的铁皮石斛种苗克重明显增加，且根茎肥壮，根系发达，叶片青绿肥厚，出瓶种苗质量显著提高。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

图1为采用本发明的铁皮石斛培养基培养的铁皮石斛种苗与市售培养同样时间的铁皮石斛种苗对比示意图，图中左侧较为纤细的为市售铁皮石斛种苗，图中右侧较为粗壮的为采用本发明的铁皮石斛培养基培养的铁皮石斛种苗。

具体实施方式

下面通过实施例具体说明本发明的内容：

实施例1

1)按配置10升所述铁皮石斛培养基计，称取花宝一号35000mg、柠檬酸1000mg、肌醇200mg、维生素B1200mg、磷酸二氢钾1000mg、蛋白胨20000mg、马铃薯700000mg、香蕉700000mg、白糖300000mg、琼脂65000mg、活性炭10000mg；

2)将花宝一号、柠檬酸、肌醇、维生素B1、磷酸二氢钾及蛋白胨在室温下加入2升去离子水中，搅拌至溶解；

3)马铃薯用2升去离子水煮熟后搅碎，连同溶剂一并加入步骤2)所得溶液中；

4)香蕉搅碎后加入步骤3)所得溶液中；

5)白糖、琼脂在室温下加入3升去离子水中，白糖搅拌至溶解，琼脂搅拌至混匀，加入步骤4)所得溶液中；

6)活性炭加入步骤5)所得溶液中，搅拌至混匀；

7)将步骤6)所得溶液定容至10升，调节pH值至5.4～5.8；分装于组培瓶中，122℃、0.12MPa下高压蒸汽灭菌20分钟，冷却凝固后即得。

将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，90天后收获合格的铁皮石斛种苗，叶片数平均5片以上且叶片宽厚、颜色深绿，茎最粗处约为0.4～0.5cm，每丛苗(三株一丛)2cm长以上的根6条以上，每株苗平均克重为0.886g；

采用市售的培养同样时间的铁皮石斛种苗(购自福建某石斛科技有限公司、宁波某研究所等)作为对比发现(请查阅图1，图1中左侧较为纤细的为市售铁皮石斛种苗，图1中右侧较为粗壮的为本实施例的铁皮石斛培养基培养的铁皮石斛种苗)，市售铁皮石斛种苗叶片数平均5片但叶片纤细且颜色较浅，茎最粗处约为0.15～0.2cm，每丛苗(三株一丛)2cm长以上的根4条以上，每株苗平均克重为0.486g。

由此可见，本实施例的培养基培养的种苗，与市售铁皮石斛种苗相比，每株苗平均克重增长82.3％，茎粗明显增加，且根茎肥壮，根系发达，叶片青绿肥厚，出瓶种苗质量显著提高(图1)。

实施例2

1)按配置10升所述铁皮石斛培养基计，称取花宝一号30000mg、柠檬酸500mg、肌醇150mg、维生素B1150mg、磷酸二氢钾500mg、蛋白胨15000mg、马铃薯500000mg、香蕉500000mg、白糖300000mg、琼脂60000mg、活性炭15000mg；

2)将花宝一号、柠檬酸、肌醇、维生素B1、磷酸二氢钾及蛋白胨在室温下加入2升去离子水中，搅拌至溶解；

3)马铃薯用2升去离子水煮熟后搅碎，连同溶剂一并加入步骤2)所得溶液中；

4)香蕉搅碎后加入步骤3)所得溶液中；

5)白糖、琼脂在室温下加入3升去离子水中，白糖搅拌至溶解，琼脂搅拌至混匀，加入步骤4)所得溶液中；

6)活性炭加入步骤5)所得溶液中，搅拌至混匀；

7)将步骤6)所得溶液定容至10升，调节pH值至5.4～5.8；分装于组培瓶中，122℃、0.12MPa下高压蒸汽灭菌20分钟，冷却凝固后即得。

将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，90天后收获合格的铁皮石斛种苗，叶片数达5片以上叶片宽厚、颜色深绿，茎最粗处约为0.4～0.5cm，每丛苗(三株一丛)2cm长以上的根6条以上，每株苗平均克重为0.828g，显示出良好的壮苗生根效果。

实施例3

1)按配置10升所述铁皮石斛培养基计，称取花宝一号40000mg、柠檬酸2000mg、肌醇250mg、维生素B1250mg、磷酸二氢钾2000mg、蛋白胨25000mg、马铃薯1000000mg、香蕉1000000mg、白糖200000mg、琼脂70000mg、活性炭20000mg；

2)将花宝一号、柠檬酸、肌醇、维生素B1、磷酸二氢钾及蛋白胨在室温下加入2升去离子水中，搅拌至溶解；

3)马铃薯用2升去离子水煮熟后搅碎，连同溶剂一并加入步骤2)所得溶液中；

4)香蕉搅碎后加入步骤3)所得溶液中；

5)白糖、琼脂在室温下加入3升去离子水中，白糖搅拌至溶解，琼脂搅拌至混匀，加入步骤4)所得溶液中；

6)活性炭加入步骤5)所得溶液中，搅拌至混匀；

7)将步骤6)所得溶液定容至10升，调节pH值至5.4～5.8；分装于组培瓶中，122℃、0.12MPa下高压蒸汽灭菌20分钟，冷却凝固后即得。

将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，90天后收获合格的铁皮石斛种苗，叶片数达5片以上，茎最粗处约为0.4～0.5cm，每丛苗(三株一丛)2cm长以上的根6条以上，每株苗平均克重为0.844g，显示出良好的壮苗生根效果。

实施例4

1)按配置10升所述铁皮石斛培养基计，称取花宝一号35000mg、柠檬酸150mg、肌醇150mg、维生素B1150mg、磷酸二氢钾500mg、蛋白胨10000mg、马铃薯150000mg、香蕉150000mg、白糖350000mg、琼脂65000mg、活性炭10000mg；

2)将花宝一号、柠檬酸、肌醇、维生素B1、磷酸二氢钾及蛋白胨在室温下加入2升去离子水中，搅拌至溶解；

3)马铃薯用2升去离子水煮熟后搅碎，连同溶剂一并加入步骤2)所得溶液中；

4)香蕉搅碎后加入步骤3)所得溶液中；

5)白糖、琼脂在室温下加入3升去离子水中，白糖搅拌至溶解，琼脂搅拌至混匀，加入步骤4)所得溶液中；

6)活性炭加入步骤5)所得溶液中，搅拌至混匀；

7)将步骤6)所得溶液定容至10升，调节pH值至5.4～5.8；分装于组培瓶中，122℃、0.12MPa下高压蒸汽灭菌25分钟，冷却凝固后即得。

将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，90天后收获合格的铁皮石斛种苗，叶片数达4片以上，茎最粗处约为0.4～0.5cm，每丛苗(三株一丛)2cm长以上的根6条以上，每株苗平均克重为0.811g，显示出良好的壮苗生根效果。

实施例5

1)按配置10升所述铁皮石斛培养基计，称取花宝一号40000mg、柠檬酸2000mg、肌醇2000mg、维生素B12000mg、磷酸二氢钾3000mg、蛋白胨50000mg、马铃薯600000mg、香蕉600000mg、白糖180000mg、琼脂70000mg、活性炭15000mg；

2)将花宝一号、柠檬酸、肌醇、维生素B1、磷酸二氢钾及蛋白胨在室温下加入2升水中，搅拌至溶解；

3)马铃薯用2升水煮熟后搅碎，连同溶剂一并加入步骤2)所得溶液中；

4)香蕉搅碎后加入步骤3)所得溶液中；

5)白糖、琼脂在室温下加入3升水中，白糖搅拌至溶解，琼脂搅拌至混匀，加入步骤4)所得溶液中；

6)活性炭加入步骤5)所得溶液中，搅拌至混匀；

7)将步骤6)所得溶液定容至10升，调节pH值至5.4～5.8；分装于组培瓶中，122℃、0.12MPa下高压蒸汽灭菌25分钟，冷却凝固后即得。

将铁皮石斛小苗接入所得的培养基中进行培养，90天后收获合格的铁皮石斛种苗，叶片数达5片以上，茎最粗处约为0.35～0.4cm，每丛苗(三株一丛)2cm长以上的根5条以上，每株苗平均克重为0.797g，显示出良好的壮苗生根效果。

以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (4)

1.一种铁皮石斛培养基，其特征在于：每升培养基由以下组分制成：

花宝一号：3000～4000mg；柠檬酸：50～200mg；肌醇：15～25mg；维生素B1：15～25mg；磷酸二氢钾：50～200mg；蛋白胨：1500～2500mg；马铃薯：50000～100000mg；香蕉：50000～100000mg；白糖：20000～30000mg；琼脂：6000～7000mg；活性炭：1000～2000mg。

2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛培养基，其特征在于：每升培养基由以下组分制成：

花宝一号：3500mg；柠檬酸：50～200mg；肌醇：20mg；维生素B1：20mg；磷酸二氢钾：50～200mg；蛋白胨：2000mg；马铃薯：70000mg；香蕉：70000mg；白糖：30000mg；琼脂：6500mg；活性炭：1000mg。

3.一种权利要求1所述的铁皮石斛培养基的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)按配置10升所述铁皮石斛培养基计，称取各组分；

2)将花宝一号、柠檬酸、肌醇、维生素B1、磷酸二氢钾及蛋白胨在室温下加入2升溶剂中，搅拌至溶解；

3)马铃薯用2升溶剂煮熟后搅碎，连同溶剂一并加入步骤2)所得溶液中；

4)香蕉搅碎后加入步骤3)所得溶液中；

5)白糖、琼脂在室温下加入3升溶剂中，白糖搅拌至溶解，琼脂搅拌至混匀，加入步骤4)所得溶液中；

6)活性炭加入步骤5)所得溶液中，搅拌至混匀；

7)将步骤6)所得溶液定容至10升，调节pH值至5.4～5.8；分装于组培瓶中，高压蒸汽灭菌20～30分钟，冷却凝固后即得。

4.根据权利要求3所述的铁皮石斛培养基的制备方法，其特征在于：所述溶剂为去离子水。