CN108849500A - 一种莲胚拯救及后代快速生长发育的培养基和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种莲胚拯救及后代快速生长发育的培养基和方法，属于植物组培快繁技术领域。本发明的培养基包括胚拯救培养基和生根培养基，所述胚拯救培养基为MS+2,4‑D 2.0mg/L+6‑BA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L+VC 80mg/L，所述生根培养基为MS+NAA 2.0mg/L+6‑BA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L。将需要进行胚拯救的莲种子预处理后依次接种于本发明胚拯救培养基和生根培养基进行诱导培养，即可使其生长并长出根系。本发明解决了未成熟莲子无法通过常规方法进行生长、繁殖的问题，在短期内可实现组培苗健康快速繁殖生长。本发明操作简便，易普及，可实现规模化生产。

Description

一种莲胚拯救及后代快速生长发育的培养基和方法
技术领域
本发明涉及植物组培快繁技术领域，尤其是涉及到一种莲胚拯救及后代快速生长发育的培养基和方法。
背景技术
莲兼具食用和观赏功能，具有极大的经济价值。莲既可无性繁殖也可有性繁殖。在有性繁殖时，莲子需完全自然成熟，表皮呈褐色，经过自然脱水，其水分含量大幅度下降，体积较先前变小。如果莲子未成熟，胚就无法自然地发芽生长。大量的花莲品种无法在自然条件下获得成熟莲子。此外，在进行莲的杂交育种时，有些杂交组合也很难得到成熟莲子。因此，急需一种有效的技术手段去拯救幼胚，保障其正常发育生长，从而为莲的遗传育种及种子繁育提供技术支撑。
植物组织培养是目前进行胚拯救并促进幼苗快速生长发育的一种有效的技术手段。通过在培养基中添加适当、适量的植物激素来促进胚成熟，进而促进其快速生长发育，获得成活植株。
因此，目前急需采用组织培养的手段，摸索出进行莲胚拯救的培养基和方法，建立莲的一种能够高效、快速的胚拯救技术体系，使得不能正常结籽的莲也可以获得后代植株。
发明内容
为了解决未成熟莲子无法通过常规方法进行有性繁殖的问题，本发明提供一种莲胚拯救及后代快速生长发育的培养基及方法，以达到从未成熟莲子获得健康后代植株的目的。
本发明提供的一种莲胚拯救及后代快速生长发育的培养基，包括胚拯救培养基和生根培养基。其中，所述胚拯救培养基含有如下含量的成分：2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)2.0mg/L、6-苄基腺嘌呤(6-BA)0.5mg/L、6-糖基氨基嘌呤(KT)1.0mg/L、抗坏血酸(VC)80mg/L；所述生根培养基包含如下含量的成分：萘乙酸(NAA)2.0mg/L、6-BA 0.5mg/L、KT 1.0mg/L。
优选的，所述胚拯救培养基和生根培养基均以MS培养基为基本培养基。
优选的，所述胚拯救培养基和生根培养基的pH值均为5.8。
优选的，所述胚拯救培养基和生根培养基还含有蔗糖30g/L、植物凝胶1.16g/L，使得培养基呈现半固体状态。
本发明提供的一种莲胚拯救及后代快速生长发育的方法，包括如下步骤：将需要进行胚拯救的莲种子预处理后接种于上述胚拯救培养基上进行诱导培养至发育出丛生芽，再转移至上述生根培养基进行诱导培养，使其生长并长出根系，成为完整试管苗。
所述方法中，将莲种子进行预处理的方法优选为：将幼果期的去壳莲子或受精8-10天的莲蓬用洗洁精水浸泡，水洗，再先后用酒精、升汞水溶液消毒，无菌水洗，取幼果期莲子胚乳中的莲幼胚或受精8-10天的莲蓬中的子房作为外植体备用；进一步优选为：将幼果期的去壳莲子或受精8-10天的莲蓬用洗洁精水浸泡3-10分钟，流水冲洗干净，75％酒精消毒5-8分钟，0.05％升汞浸泡消毒6-8分钟，无菌水洗5-8次，取幼果期莲子胚乳中的莲幼胚或受精8-10天的莲蓬中的子房作为外植体备用。
所述方法中，两次进行诱导培养的条件优选均为：温度28℃，光强1500-1800lux、光照12-14h/d，三周后长出根系成为完整试管苗。
相较于传统育种方法，本发明具有以下优点和有益效果：
(1)使用所述培养基可以帮助莲幼胚发育成熟，从而获得那些无法在自然状态下发育成熟的莲胚芽。
(2)拯救成活的胚芽可在使用所述培养基上分生出大量的丛生芽，并且进一步形成再生植株，在短期内可以获得大量繁殖的莲胚拯救后代，生产周期短、繁殖系数高，极大地节约了人力物力以及时间成本。
(3)所述莲胚拯救及后代快速生长发育的方法操作简单，易普及，可实现规模化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，在此所描述的实施例只是本发明实施方式的一部分，本领域的普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例也都属于本发明的保护范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1
胚拯救培养基的配制：往MS液体培养基中加入2.0mg/L的2,4-D，0.5mg/L的6-BA，1.0mg/L的KT，80mg/L的VC，30g/L的蔗糖，1.16g/L的植物凝胶，调节pH为5.8，灭菌备用。
生根培养基的配制：往MS液体培养基中加入2.0mg/L的NAA，0.5mg/L的6-BA，1.0mg/L的KT，30g/L的蔗糖，1.16g/L的植物凝胶，调节pH为5.8，灭菌备用。
调整上述培养基中2,4-D、6-BA、KT、VC或NAA的含量，配制成相应的对照培养基，为了便于比较，各培养基表示如下：
本发明胚拯救培养基：MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L+VC 80mg/L，
胚拯救培养基对照1：MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L+VC 80mg/L，
胚拯救培养基对照2：MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 0.2mg/L+KT 1.0mg/L+VC 80mg/L，
胚拯救培养基对照3：MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+VC 80mg/L，
胚拯救培养基对照4：MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L+VC 40mg/L，
胚拯救培养基对照5：MS+2,4-D 4.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L+VC 80mg/L，
胚拯救培养基对照6：MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 1.0mg/L+KT 1.0mg/L+VC 80mg/L，
胚拯救培养基对照7：MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 2.0mg/L+VC 80mg/L，
胚拯救培养基对照8：MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L+VC 160mg/L；
本发明生根培养基：MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L，
生根培养基对照1：MS+NAA 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L，
生根培养基对照2：MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0.2mg/L+KT 1.0mg/L，
生根培养基对照3：MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L，
生根培养基对照4：MS+NAA 4.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L，
生根培养基对照5：MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 1.0mg/L+KT 1.0mg/L，
生根培养基对照6：MS+NAA 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+KT 2.0mg/L。
实施例2
(1)莲胚拯救后代种子预处理为：将未成熟的幼果期去壳莲子用洗洁精水浸泡10分钟，流水冲洗干净，75％酒精消毒5分钟，0.05％升汞浸泡消毒8分钟，无菌水洗5次，取胚乳中的莲幼胚作为外植体备用。
(2)将预处理后得到的外植体接种于胚拯救培养基中进行诱导培养，培养条件为：温度28℃，光强1500lux、光照12h/d。
(3)两周之后待幼胚成活并发育出丛生芽后，将其转移到生根培养基中进行诱导培养，培养条件为：温度28℃，光强1800lux、光照14h/d，一周后长出根系成为完整试管苗。
使用本发明胚拯救培养基及不同对照培养基的丛生芽生长情况见表1。
表1莲胚丛生芽结果
使用本发明胚拯救培养基培养至发育出丛生芽后，再使用本发明生根培养基及不同对照培养基进行培养，生根情况见表2。
表2莲胚生根结果
实施例3
(1)莲胚拯救后代种子预处理为：将受精8-10天的莲蓬用洗洁精水浸泡3分钟，流水冲洗干净，75％酒精消毒5分钟，0.05％升汞浸泡消毒8分钟，无菌水洗5次，取莲蓬中的子房作为外植体备用。
(2)将预处理后得到的外植体接种于胚拯救培养基中进行诱导培养，培养条件为：温度28℃，光强1500lux、光照12h/d。
(3)两周之后待幼胚成活并发育出丛生芽后，将其转移到生根培养基中进行诱导培养，培养条件为：温度28℃，光强1800lux、光照12h/d，一周后长出根系成为完整试管苗。
使用本发明胚拯救培养基及不同对照培养基的丛生芽情况见表3。
表3莲胚丛生芽结果
使用本发明胚拯救培养基培养至发育出丛生芽后，再使用本发明生根培养基及不同对照培养基进行培养，生根情况见表4。
表4莲胚生根结果
上述结果表明，本发明的培养基在莲胚的胚成活率、丛生芽数、生根率、生根数以及试管苗移栽成活率方面得到极大幅度的提高，与其他培养基对照相比有着明显的优势。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种莲胚拯救及后代快速生长发育的培养基，其特征在于：包括胚拯救培养基和生根培养基；
所述胚拯救培养基含有如下含量的成分：2,4-二氯苯氧乙酸2.0mg/L、6-苄基腺嘌呤0.5mg/L、6-糖基氨基嘌呤1.0mg/L、抗坏血酸80mg/L；
所述生根培养基包含如下含量的成分：萘乙酸2.0mg/L、6-苄基腺嘌呤0.5mg/L、6-糖基氨基嘌呤1.0mg/L。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述胚拯救培养基和生根培养基均以MS培养基为基本培养基。
3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述胚拯救培养基和生根培养基的pH值均为5.8。
4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述胚拯救培养基和生根培养基还含有蔗糖30g/L、植物凝胶1.16g/L。
5.一种莲胚拯救及后代快速生长发育的方法，其特征在于：将需要进行胚拯救的莲种子预处理后接种于权利要求1中所述的胚拯救培养基上进行诱导培养至发育出丛生芽，再转移至权利要求1中所述的生根培养基进行诱导培养，使其生长并长出根系，成为完整试管苗。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：将莲种子进行预处理的方法为：将幼果期的去壳莲子或受精8-10天的莲蓬用洗洁精水浸泡，水洗，再先后用酒精、升汞水溶液消毒，无菌水洗，取幼果期莲子胚乳中的莲幼胚或受精8-10天的莲蓬中的子房作为外植体备用。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：将莲种子进行预处理的方法为：将幼果期的去壳莲子或受精8-10天的莲蓬用洗洁精水浸泡3-10分钟，流水冲洗干净，75％酒精消毒5-8分钟，0.05％升汞浸泡消毒6-8分钟，无菌水洗5-8次，取幼果期莲子胚乳中的莲幼胚或受精8-10天的莲蓬中的子房作为外植体备用。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：进行诱导培养的条件为：温度28℃，光强1500-1800lux、光照12-14h/d。
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