JPS5914725A - 植物の増殖材料の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は無菌組織培養において栄養ミクロ増殖による植
物の増殖材料の製造法に関する。

ある種の植物、特に２年生および多年生植物、低木、装
飾用植物および屋内植物の栄養増殖は幾つかの利点全も
つ。従って、完全な植物の生長は、根付いた苗条からの
方が播かれた種子からよシも一層迅速であり、栄養増殖
はまた簡単でもある。

しかしこの方法の主な利点は、与えられた個体から栄養
法によシ得た子孫が発生掌上は同一の性質を有する単一
の個体と見做しうるという事実に帰する・このことは、
貴重な性質を有する固体、例えば、高アルカロイド含量
會もつ薬用植物、高い収穫量ｔもつ耐霜性の果樹低木の
場合に、特に非常に重要であシ、このような個体の増殖
は顕著な栄養増殖の０通常の園芸法によれば、増殖させ
ようとする植物の頂端の苗条または他の若枝を切シ取シ
、望むならば水中で発根させた後、温室の鉢Ｋまたは開
放された空気中で植える。ある種の植物の場合には、根
糸または塊茎の分割によって栄養子孫？得ることができ
る。しかし、上記の手順を用いることにより、単一個体
から得られる子孫の数にはどちらかと云えば限度がある
。

価値の尚い植物（例えば、薬用植物）の場合には、上記
の理由のため、器官培養または特に苗条培養金倉めて無
菌組織培養へと習慣が転換した。

上記の方法（ミクロ増殖とも呼ばれる）の進行において
、消毒された植物の醒条から公知の方法によって苗条培
養がつくられ、そしてこのようにして得られた苗条は寒
天で凝固させた栄養培地の中にあるいは上に置かれ、こ
こで更に生長または分枝が起こる。固体栄養培地は、表
題の植物種に対して選ばれかつ試験された植物ホルモン
の組み合わせ全任意に含みらる。植物の細胞、組織およ
び器官全培養する方法は特に下記参考文献に記述されて
いる： ”　Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ
　ａｓｐｅｃｔｓ　ｏｆ　ＰｌａｎｔＣｅｌｌ、　Ｔｉ
５ｓｕｅ　ａｎｄ　Ｏｒｇａｎ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ”；ラ
イネルト（Ｒｅｉｎｅｒｔ）およびバヤー（Ｂａｊ　ａ
ｊ　）逼；出版社スフ０リンゲル・ベルラーグ（Ｓｐｒ
ｉｎｇｅｒ　Ｖｅｒｌａｇ）　、ベルＩＪ　７−　ハイ
デルベルグ−ニューヨーク、１９７７゜得られた苗条お
よび若枝葡分離し、発根感せそして植える（望むならば
温室内で適応後）。上記方法によれば、単一の植物から
得られる実生の数音有利な程度まで増加させうるが、あ
らゆる植物種の場合にはそうでない。

本発明の目的は上記方法を一層効果的にし、かつ幾つか
の植物種に対しても経済的に実行可能にすることである
。

本発明は次の認識に基づいているニ ーもし植物がその下方の極あるいはこの部分に生じた根
葡通してだけでなくその全表面を通して栄養分を摂取す
るならば、生長はよシ強くそしてよシ好都合である。

一発根誘発の場合、ホルモン含有固体栄養培地は、それ
が植物の切面と直接接触するので便利であるかもしれな
い。しかし苗条誘発を増進しかつ苗条の生長を高める物
質はこれらがその効果を発揮する部位からむしろ遠い。

これら物質は、もしそれらが根から吸収されるのでなく
苗条に直接着くならば一層有利な働きを及はしうるであ
ろう。

上記の二つの仕事を解決するため、水に溶かした植物栄
養（例えば、微量元素）を、農業で一般に用いられる葉
面施肥と同様に、噴霧によシ植物の表面上に施用するこ
とは明らかであろう。しかし無菌技術の条件下では、噴
霧を達成することはできず、まして達成される効果はご
く一時的なものに過ぎないであろうという事実はいうま
でもない。

もし固体栄養培地で栽培した苗条培養を液体栄らず、そ
の上一層分枝するようＫなシかつよシ多く苗条全形成す
るということが驚くべきことにここに発見された。この
認識は、根の上にあるあらゆる地上の植物部分は空気で
囲まれている場合に同化と呼吸に適応するので特に驚く
べきことである。従って、水草のように水槽で栽培され
た苗条の栄養増殖性がある量の次数だけ増加するという
ことは予知できなかったであろう。

本発明によると、無菌組織培養におけるミクロ増殖によ
シ植物の増殖材料を製造する方法が提供される。本発明
方法は、 （イ）植物の無菌醒条切シ穂全適当なフラスコ中に置か
れた固体栄養培地中に植え、生長調節剤全任意に含む適
当な栄養培地でフラスコを満し、苗条全前記浸没系で生
長させ、その後 （ロ）　このようにして得られた幾つかの側芽および苗
条金倉む分枝培養全切片に切ｐ、公知の方法によシ頂端
苗条全根付かせそしてこれ全適応後植え、そして苗条培
養の下方および中央部分からつくられた切＃）稼業工程
（イ）に従って更に栽培し、そして頂端の苗条が望む数
に達するまで工程（イ）と（ロ）葡繰返すことからなる
。

固体栄養培地は、なるべくは寒天を用いることによシ凝
固させる。固体栄養培地は苗条培養に基本栄養全維管束
ヶ通して供給する。固体栄養培養はまた苗条盆自然の状
態に従い垂直に位置させることをも確実にする。

液体栄養溶液は代用栄養物を用いる苗条培養の直接給源
に対して役立つ。鉱物質塩、糖およびビタミン類からな
る無ホルモン栄養溶液で浸没した培養は６０〜１０ｏ％
だけ濃密なそして（または）長い苗条を生成する。

液体栄養溶液へまた植物ホルモンを添加できる◎この目
的に対して、例えばオーキシオン、シトキニンおヨヒシ
ベレリン全使用できる。シトキニンの群から、６−ベン
ジルアミノ−プリン（６−ベ培養中で生長し始める。上
記生長は、もし生長調節剤全基本栄養培地へ加えたとし
たときょシも１００〜５００％だけ強い。シトキニンを
含む液体栄養培地で没した培地においては、出芽および
苗条形成が苗条の完全な表面上でまた新しく出現ツリー
形金有するが、一方栄養培地から育った頂端苗条は側の
苗条全僅かに生ずるか、あるいは全く生じないことさえ
ある。前記頂端苗条奮ある方法で切ｐ取り発根させる。

前記頂端機から栽培された植物は完全に正常である。

液体表面下にある培養の部分は、種々な発達段階にある
多数の芽および側苗条奮有する。更に、切シ稼業得るた
めに、この部分全無菌条件下で切片１ｃ切る。切シ穂は
上記無ホルモン固体栄養培地（液体栄養溶液で浸没）で
得られ、この方法全型む頂端苗条の数に達するまで繰返
す。

浸没培養を通常よｐ長時問題間するか、あるいはこれｔ
中断せずに照明することが好ましい。これは、多分液体
の表面の下では、地上植物の同化と呼吸（光吸収、気体
は水に溶けるなど）が変わるという事実によるのであろ
う。

本発明に関するこれ以上の詳細は下記の例に見出される
ことになるが、これら例は単に例示として役立つだけで
あって保護の範囲全前記例に限定するのではない。

例１ 増殖 「リサーチ・インステイチュート・フォア・メディカル
０ゾランツ（”’Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ
ｅ　ｆｏｒＭｅｄｉｃａｌ　Ｐｌａｎｔｓ”）」のアム
ソニア・タペルナエモンターナ収集品の植物から、タベ
ルソニン１２．２６％全含有する樹齢１０〜１５年の植
物全還ぶ。この植物から４月１ｃ２０葉期の長さ２５〜
３０ｍの苗条を切フ取る。取扱いｔよシ答易にするため
に、これら苗条を長さ約１０ｍの短片に切シ、次にこれ
ら金泥れている水道水で約１時間洗浄する。次に葉を約
四分の−に刈シ込み、このようにして得た苗条片ｔ１絶
えず振シまぜながら３％次亜塩素酸ナトリウム溶液中で
１５分間消毒する。消毒した材料全オートクレーブ中で
滅菌した蒸留水中に置き、絶えず振シまぜながらそこに
１０分間保つ。後者の処理および以下の工程は無菌の薬
局接種ボックス中無菌条件下で行なう。苗条全無菌水か
ら取多出し、熱的に滅菌したペトリ皿中で小力で、最下
方の葉の下の苗条が長さ約１百となるように２〜３葉の
片に切る。このようにしてつくられた切シ穂を、下記の
組成：ＮＨ４Ｎｏ３１６５０ダ／１ ｘＮｏ３１９００ｍ９／　１ ＣａＣｕ５　・２Ｈ２０４４０ｍ９　／　１Ｍｇ５０　
・７Ｈ２０３７０ｎｒｙ　／　１ｌＫＨ２Ｐ０．　　　
　　　　　１７０　ｍｙ／　１Ｎａ２ＥＤＴＡ　　　　
　　　　　３７．２１ｎ９．／　ｌＦｅＳＯ４・７Ｈ２
０２７，８’％’　／　１Ｈ３ＢＯ３６，２＃Ｉ９　／
　ｌ ＭｎＳＯ４・７Ｈ２０２２，３ｎ１９／　ｌＺｎＳＯ４
・７Ｈ２０−８−６１ｎ９／　ｌＫＩ　　　　　　　　
　　　　　Ｏ，８３ｍ９／　ｌＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２
００−２５’Ｑ　／　ｌＣｕＳＯ４・５Ｈ２００，０２
５”９／　ｌＣｄ２Ｊｌ−２・６Ｈ２００−０２５ｍ１
ｉｉ’　／　ｌシ：１ｍ　　　　　　　　３００００７
Ｖ／ｌ寒天　　　　　　　　１００００７Ｖ＃’ニコチ
ン酸　　　　　　　　０．５ｍ９／ｌビリドキシー−Ｈ
ｃｚ　　　　　　Ｏ，５１ｎ９／　１３チアミンＨｃＪ
、０　、１■／ｌ を有する修正ムラシブ−スクーグ（Ｍｕｒａｓｉｇｅ　
−８ｋｏｏｇ　）　栄養培地１０　Ｑｍ（Ｈ含む２００
ｍガラスフラスコに植える。

ティー・ムラシデ、エフ・スクーグ：タバコ組織培養に
関して迅速な発育と生物検定のための改良培地。Ｐｈｙ
ｓｉｏｌ、　Ｐｌａｎｔａｒｕｍ　１５　ｒ　４７３−
４９７（１９６２）。

植えるときは、切シ穂がその下方の葉と同じ位深く栄養
培地中に浸るように注意すべきである。

これら切シ穂は、人工照明時期（明かるさ１０　、００
０ルクス）と暗い時期と全それぞれ１６時間および８時
間の順序で交番させることにより２０〜２５６Ｃの温度
で栽培する。１週間後、切シ穂の軸に芽が現われ、そし
てこれらは更！ｃ２週間以内に１０〜１２葉期（長さ約
７ｃｒｎ）の苗条に育つ。

前記の無菌側苗条に′ｆＪＪ＃：）穂から分離し、２〜
４葉の片に切る。このようにしてつくらｆｌた切シ穂奮
、切シ穂が栄養培地中に十分深く（約１ｃｍ）突き刺さ
るように、上記組成を有する栄養培地中に植える。この
目的のため、切シ穂？苗条の最下方の葉の下の茎の長さ
が少なくとも１αとなるべきように切断、する。

その後、上記組成？有するがしかし寒天？含まずそして
１　ｒｎｙ　／　ｌの６−ベンジルアミノ−プリンで完
成させた液体栄養培地５０ｍ１全２００ｍ１ガラスフラ
スコに入れた切ジ穏の上に注ぐ・切シ穂？絶え間の逐い
人工照明（８０００ルクス）下で　・２０〜２５℃に保
つ。

切シ穂のあらゆる軸から芽が出た。前記の芽は６〜４週
間以内に５〜１０ｃｒｎの長さに達し、芽および苗条が
新しく生じた苗条の軸から発芽するという主要な特有の
特徴金示した。最も強い苗条は液体栄養培地から、従っ
て空気中にあった（即ち、液の表面上）苗条の部分上に
軸上に芽生え、側芽はよシ小さい程度に現われるか、ま
たは全く現われなかった。次に苗条培養全、５〜７葉期
頂端苗条１０取シそして下、方および中央の部分７５〜
１０個の芽あるいは２〜４枚の葉？もつ片に切ることに
よシ切片に切る。頂端の葉全上記組成全有する固体栄養
培地に植え、ここで切シ穂から強い根が２週間以内に生
え、その切シ穂は土に植えることができる。

下方および中央の部分からつくられた切シ穂も上記組成
全有する固体栄養培地中に植える。その後１ダの６−ペ
ンシルアミノ−プリン金倉む液体栄養培地全種えた切シ
穂上に注ぎ、培養を絶え間のない人工照明（８０００ル
クス）下２０〜２５℃で２〜４週間栽培する。この期間
中に、既に存在する小さい苗条および出芽した芽が更に
生長し、新しい苗条が古い若枝と新しい若枝の上に現わ
れた。苗条培養の頂端の苗条を発達の適当な時期に切片
に切シ、これら切片から根付いた植物ケ育てることがで
きた。下方および中央の部分から、分枝、の反覆によシ
苗条材料の集団が得られる。

この過程の系統的繰返しによシ、一つの単−ｍ条から数
百万本の根付いた植物全１年という期間以内に得ること
ができた。

例２ 野生タラボン植物′（アルテミシア・ドラクンクルス）
から６月ｖｃ菌条１０取る（その長さは約１０ｃｒｎで
あった）。苗条を流れている水道水で約２時間洗浄し、
次に６％次亜塩素酸ナトリウム溶液中で約１０分間消毒
する。消毒から取シ出した苗条を無菌蒸留水中に約２０
分間置き、それからこれら全無菌条件下で２〜４葉の片
（長さ約５　ｔ、ｍ　）に切シ、例１による栄養培地中
に植える。その後、例１による液体栄養培地８０穂上に
注ぐ。

生長調節剤を含まない液体栄養培地の影響下で、苗条培
養の活発な発育が始まった。生長速度は液体栄養培地を
添加せずに栽培した苗条培養の生長速度よシ約２〜５倍
大きかった。この栽培は２０〜２５℃において絶え間な
い人工照明（８００，０ルクス）下に行なう。１００ｍ
１の栄養培地？含む２００−フラスコ中で栽培した組織
培養はフラスコ空間全完全に覆った。８〜１５ｃＷ１の
長さの苗条の厚さは２〜３ｍｍ、に達し、これらはふく
れ上が９そして比較的分枝が少ない。

組織培養を２〜４葉の切片に切ると、これらはそれぞれ
発根およびそれ以上の苗条形成に適する。

根付きに最も好ましい方法によれば、苗条切シ稼業例１
で述べたのと同じ組成金有するがしかし１ｍｌ／ｌの２
．４−ジクロロ−フェノキシ−酢酸金倉む栄養培地に２
４〜９６時間植える。次に苗条全生長調節剤會含まない
栄養培地に置き、各切シ穂から約５〜１０本の根（長さ
２〜５ｃｒｎ）が２週間以内に育った。植樹の目的に対
しては、根付いた植物全それ以上液体栄養培地を加える
ことなく育てる。もし多量に苗条形成を望むならば、液
体栄養培地？再び加える。このようにして、根の形成に
加えて、豊富な苗条の発育も得られ、このことは植物の
大量生産？可能にする。この方法全系統的に繰）返すと
、約ｉ　ｏ　ｏ、ｏ　ｏ　ｏ本の根付いた植物７１年と
いう期間以内につくることができる。

例６ 温室で育てたカタランタス・ロゼウス植物から長さ１０
〜１５ｃｎ１の側苗条金切り取シ、これ金泥れている水
道水で４時間洗浄し、１％次亜塩素酸ナトリウム溶液で
２５分間消毒し、無菌蒸留水中で２回各回１５分すすぐ
。２〜４葉に切った苗条切シ穂奮例１による固体栄養培
地に植え、２５〜２８℃に保つ。照明期間（人工光、明
るさ１０，０００ルクス）と暗い期間と？それぞれ１６
時間および８時間の順序で交番させる。頂端の切シ穂は
更に育ったが、一般に分枝しなかった。他方側苗条から
得た切り穂上には一般に二つの側苗条が出芽した。５〜
４週間後側苗条が生じ、育った頂端苗条全切片に切９、
例ＩＫよツガラスフラスコ中の固体栄養培地に植え、各
フラスコ［５０ｍＡ’の液体栄養培地を注入する。ネ養
培地の組成は例ｉＶｃよる無寒天培地ｄ相当するが、た
だし溶液は１ｍ９／１のイネチン會含む・溶液で満した
フラスコ中に生じた側苗条は浸没させずに固体栄養培地
上の対照培養で得られたそれよりも２〜６倍濃い。

苗条の発育は得られた苗条の接木工程の増加と比例して
一層活発になった。頂端苗条の発根も改良された。単一
の頂端苗条からこの方法を系統的に反覆すると１００，
０００本の頂端苗条が１年、の期間以内に得ることがで
きる。

代理人　浅　村　　　皓 ＝１４Ｆ

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　無菌組織培養におけるミクロ増殖による植物
   の増殖材料の製造法において、 （ハ）植物の無菌苗条切υ穂會適当なフラスコ中に置か
   れた固体栄養培地に植え、フラスコを任意に生長調節剤
   を含む適当な栄養培地で満し、苗条全前記浸没系で発育
   させ、その後、 （ロ）多くの側芽および苗条全台むこのようにして得ら
   れた分枝培養全切片に切シ、頂端苗条を公知の方法によ
   ）根付かせ、そしてこれ全適応後植え、そして苗条培養
   の下方および中央部分からつくられた切り穂を工程（イ
   ）に従って更に栽培に付し、そして頂端の苗条が望む数
   に達するまで工程（イ）および（ロ）を繰返すこと全特
   徴とする。上記方法。
2. （２）無ホルモン栄養培地全寒天で凝固させることから
   なる。第１項記載の方法。
3. （３）　　シトキニン、なるべくは６−ベンジル−アミ
   ノ−プリンを生長調節剤として含む栄養培地を用いるこ
   とからなる。第１項または第２項記載の方することから
   なる。第１項から第６項までのいずれか１項に記載の方
   法。