JPH0937666A - エンジュの組織培養法 - Google Patents
エンジュの組織培養法Info
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- JPH0937666A JPH0937666A JP19144795A JP19144795A JPH0937666A JP H0937666 A JPH0937666 A JP H0937666A JP 19144795 A JP19144795 A JP 19144795A JP 19144795 A JP19144795 A JP 19144795A JP H0937666 A JPH0937666 A JP H0937666A
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- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 遺伝形質が均一なエンジュを無菌的に大量に
増殖させるための新規な方法の提供。 【解決手段】 エンジュの実生のいずれかの組織を植物
成長調節物質を含む人工培地で培養することを特徴とす
るエンジュの組織培養法。 【効果】 本発明によれば、カルスを経由することなく
植物の再生を行うので、変異が生ずることが少なく、均
一な植物体を大量に得ることができる。また、子葉から
出発する場合には、新たな遺伝子の導入などにより、新
しい形質を有する植物を大量に得ることができる。
増殖させるための新規な方法の提供。 【解決手段】 エンジュの実生のいずれかの組織を植物
成長調節物質を含む人工培地で培養することを特徴とす
るエンジュの組織培養法。 【効果】 本発明によれば、カルスを経由することなく
植物の再生を行うので、変異が生ずることが少なく、均
一な植物体を大量に得ることができる。また、子葉から
出発する場合には、新たな遺伝子の導入などにより、新
しい形質を有する植物を大量に得ることができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はエンジュ (Sophora
japonica L.)の組織培養による大量増殖法に関するもの
である。
japonica L.)の組織培養による大量増殖法に関するもの
である。
【０００２】
【従来の技術】エンジュは中国原産の落葉高木で、生長
が速く、大気浄化能が高いなどの優れた形質を持ち、日
本では古くから公園樹、庭園樹、街路樹等として植栽さ
れている。また蕾を陰干ししたものは、フラボノイド、
ルチン、トリテルペノイドを含み、止血剤あるいは動脈
硬化の予防薬として利用される。従来、エンジュの繁殖
は主として種子繁殖によって行われており、挿し木は根
ざしはできるが枝ざしは困難とされていた。前者の種子
繁殖は、苗木の遺伝的性質が安定しない欠点があり、ま
た後者の場合、遺伝的に均一な苗木を増殖できるが、大
量に増殖することは難しい。
が速く、大気浄化能が高いなどの優れた形質を持ち、日
本では古くから公園樹、庭園樹、街路樹等として植栽さ
れている。また蕾を陰干ししたものは、フラボノイド、
ルチン、トリテルペノイドを含み、止血剤あるいは動脈
硬化の予防薬として利用される。従来、エンジュの繁殖
は主として種子繁殖によって行われており、挿し木は根
ざしはできるが枝ざしは困難とされていた。前者の種子
繁殖は、苗木の遺伝的性質が安定しない欠点があり、ま
た後者の場合、遺伝的に均一な苗木を増殖できるが、大
量に増殖することは難しい。
【０００３】しかし近年の組織培養の進歩により、カー
ネーション、ランなどの花卉類をはじめ、野菜類など
で、組織培養を用いた大量増殖が広く利用されている。
エンジュの組織培養の例としては、Blanka Civinova &
Z.Sladky (Biologia Plantarum, vol.32, No.6, pp.407
-413, 1990) がエンジュ成木の枝を用いた腋芽培養及び
カルス培養について一部報告を行っている。この報告で
は、培養材料として成木由来の組織を使用している。本
来優良樹のクローン増殖では、培養材料を成木に求める
のが望ましいが、成木由来の組織は実生苗に比較すると
一般的に反応性が劣っており、また均一な材料が入手し
にくいため、データのバラツキが生じやすいなどの問題
点がある。さらに完全な殺菌が困難で、植物を無菌的に
再生することが容易でないことが懸念される。
ネーション、ランなどの花卉類をはじめ、野菜類など
で、組織培養を用いた大量増殖が広く利用されている。
エンジュの組織培養の例としては、Blanka Civinova &
Z.Sladky (Biologia Plantarum, vol.32, No.6, pp.407
-413, 1990) がエンジュ成木の枝を用いた腋芽培養及び
カルス培養について一部報告を行っている。この報告で
は、培養材料として成木由来の組織を使用している。本
来優良樹のクローン増殖では、培養材料を成木に求める
のが望ましいが、成木由来の組織は実生苗に比較すると
一般的に反応性が劣っており、また均一な材料が入手し
にくいため、データのバラツキが生じやすいなどの問題
点がある。さらに完全な殺菌が困難で、植物を無菌的に
再生することが容易でないことが懸念される。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、カル
スを経由することなく、形質の均一なエンジュを大量に
繁殖させるための方法を提供しようとするものである。
スを経由することなく、形質の均一なエンジュを大量に
繁殖させるための方法を提供しようとするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
め、本発明はエンジュの実生由来の組織を植物成長調節
物質を含む人工培地で培養することを特徴とするエンジ
ュの組織培養法を提供する。好ましい態様においては、
実生の組織としては頂芽と腋芽、又は子葉が好ましく、
特に子葉が好ましい。本発明によれば、これらの組織か
ら出発して植物体を再生させることができる。
め、本発明はエンジュの実生由来の組織を植物成長調節
物質を含む人工培地で培養することを特徴とするエンジ
ュの組織培養法を提供する。好ましい態様においては、
実生の組織としては頂芽と腋芽、又は子葉が好ましく、
特に子葉が好ましい。本発明によれば、これらの組織か
ら出発して植物体を再生させることができる。
【０００６】
【発明の実施の態様】本発明はエンジュの実生の組織を
培養し、カルスを経由することなく再生することにより
遺伝形質の均一な植物を大量に再生することができる。
培養し、カルスを経由することなく再生することにより
遺伝形質の均一な植物を大量に再生することができる。
【０００７】実生の形成と組織の調製 本発明において実生とは、エンジュの種子を発芽させて
得られる、長さがおよそ１０cm以下の幼木をいう。その
およその形状は図１に示す通りであり、これは頂芽・腋
芽（１）、上胚軸（２）、子葉着生部（３）、子葉
（４）、及び下胚軸（５）に分けることができる。これ
らの組織の内頂芽・腋芽、及び子葉が特に好ましい。実
生の頂部に頂芽が存在し、その下に１〜数本の腋芽が存
在する。本発明において「頂芽及び腋芽」とは頂芽と１
〜少数個、例えば１〜２個の腋芽とを切り出したもので
あり、頂部からおよそ１．５〜２cmの位置を切断するこ
とにより得られる。子葉は、そのつけ根の部分を切断す
ることにより得られる。
得られる、長さがおよそ１０cm以下の幼木をいう。その
およその形状は図１に示す通りであり、これは頂芽・腋
芽（１）、上胚軸（２）、子葉着生部（３）、子葉
（４）、及び下胚軸（５）に分けることができる。これ
らの組織の内頂芽・腋芽、及び子葉が特に好ましい。実
生の頂部に頂芽が存在し、その下に１〜数本の腋芽が存
在する。本発明において「頂芽及び腋芽」とは頂芽と１
〜少数個、例えば１〜２個の腋芽とを切り出したもので
あり、頂部からおよそ１．５〜２cmの位置を切断するこ
とにより得られる。子葉は、そのつけ根の部分を切断す
ることにより得られる。
【０００８】実生は例えば次のようにして得られる。種
子を、７０％エタノールで１〜２分間、次に有効塩素量
１〜２％の次亜塩素酸ナトリウム（Ｔｗｅｅｎ−２０を
数滴添加）で１５分間、種子の表面を滅菌し、滅菌水で
５回洗浄する。次に滅菌水へ２日間浸漬して吸水させ、
種皮を剥して発芽用培地に置床する。発芽用培地には１
／２ＭＳ培地（ショ糖１．５％、ジェランガム０．２５
％、pH５．８）を用い、２６℃、１６時間日長の条件で
発芽させる。
子を、７０％エタノールで１〜２分間、次に有効塩素量
１〜２％の次亜塩素酸ナトリウム（Ｔｗｅｅｎ−２０を
数滴添加）で１５分間、種子の表面を滅菌し、滅菌水で
５回洗浄する。次に滅菌水へ２日間浸漬して吸水させ、
種皮を剥して発芽用培地に置床する。発芽用培地には１
／２ＭＳ培地（ショ糖１．５％、ジェランガム０．２５
％、pH５．８）を用い、２６℃、１６時間日長の条件で
発芽させる。
【０００９】培地 本発明に使用する培地は、植物の組織培養に一般に用い
られる培地を広く用いることができる。例えば、ムラシ
ゲ・スクーグの培地（ＭＳ培地）、Woody plant medium
（ＷＰＭ培地）、ガンボーグのＢ５培地、ホワイトの培
地(White培地）、あるいはこれらの培地の組成を改変し
た培地などである。これら従来公知の培地の組成に関し
ては、例えば「木本植物の増殖と育種」ｐ２６５〜２６
６、農業図書、１９８９年に記載されている。
られる培地を広く用いることができる。例えば、ムラシ
ゲ・スクーグの培地（ＭＳ培地）、Woody plant medium
（ＷＰＭ培地）、ガンボーグのＢ５培地、ホワイトの培
地(White培地）、あるいはこれらの培地の組成を改変し
た培地などである。これら従来公知の培地の組成に関し
ては、例えば「木本植物の増殖と育種」ｐ２６５〜２６
６、農業図書、１９８９年に記載されている。
【００１０】培地の糖類としてはショ糖を使用し、その
濃度は１〜３％が好ましい。また、培地に加える植物ホ
ルモンとしては、オーキシン系植物ホルモンとしてイン
ドール−３−酢酸（ＩＡＡ）、ナフタレン酢酸（ＮＡ
Ａ）、インドール−３−酪酸（ＩＢＡ）、２，４−ジク
ロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）等、サイトカイニン
系植物ホルモンとしてベンジルアミノプリン（ＢＡ
Ｐ）、カイネチン等を例示できる。これらは単独で使用
することができるが、組み合わせて使用することもでき
る。また、固体培地を調整するときのゲル化剤としては
寒天、ジェランガム等を例示でき、これらの濃度は通常
寒天０．８％、又はジェランガム０．２５％で使用す
る。
濃度は１〜３％が好ましい。また、培地に加える植物ホ
ルモンとしては、オーキシン系植物ホルモンとしてイン
ドール−３−酢酸（ＩＡＡ）、ナフタレン酢酸（ＮＡ
Ａ）、インドール−３−酪酸（ＩＢＡ）、２，４−ジク
ロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）等、サイトカイニン
系植物ホルモンとしてベンジルアミノプリン（ＢＡ
Ｐ）、カイネチン等を例示できる。これらは単独で使用
することができるが、組み合わせて使用することもでき
る。また、固体培地を調整するときのゲル化剤としては
寒天、ジェランガム等を例示でき、これらの濃度は通常
寒天０．８％、又はジェランガム０．２５％で使用す
る。
【００１１】不定芽の誘導 不定芽の誘導には、ＮＡＡとＢＡＰを組み合わせた植物
ホルモン及びショ糖を添加したＭＳ固体培地で、エンジ
ュの子葉片を培養する。培養条件は温度２４〜２６℃、
照度３０００lxで明期１６時間、暗期８時間を与え培養
する。子葉片植付け後、約３〜４週間後に不定芽が誘導
される。
ホルモン及びショ糖を添加したＭＳ固体培地で、エンジ
ュの子葉片を培養する。培養条件は温度２４〜２６℃、
照度３０００lxで明期１６時間、暗期８時間を与え培養
する。子葉片植付け後、約３〜４週間後に不定芽が誘導
される。
【００１２】シュートの伸長 ＢＡＰ及びショ糖を添加したＭＳ固体培地に、上記によ
って誘導された不定芽、エンジュの実生より切り出され
た頂芽及び腋芽を植え付ける。培養条件は不定芽誘導時
と同様である。移植後３〜５日でシュートが伸長し始
め、約３週間後には２〜３cmの長さのシュートが得られ
る。
って誘導された不定芽、エンジュの実生より切り出され
た頂芽及び腋芽を植え付ける。培養条件は不定芽誘導時
と同様である。移植後３〜５日でシュートが伸長し始
め、約３週間後には２〜３cmの長さのシュートが得られ
る。
【００１３】シュートの発根 オーキシン類及び糖類例えばショ糖を添加したＭＳ固体
培地に、上記によって伸長したシュートを植え付ける。
培養条件は不定芽誘導及びシュート伸長時の条件と同様
である。移植後、早いもので約２週間程度で発根が認め
られる。この後２〜３週間で順化を行えるような状態に
まで根が発達する。この発根個体を従来知られている方
法によって順化することにより、健全な苗を得ることが
できる。
培地に、上記によって伸長したシュートを植え付ける。
培養条件は不定芽誘導及びシュート伸長時の条件と同様
である。移植後、早いもので約２週間程度で発根が認め
られる。この後２〜３週間で順化を行えるような状態に
まで根が発達する。この発根個体を従来知られている方
法によって順化することにより、健全な苗を得ることが
できる。
【００１４】
【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。実施例１ ．子葉片からの不定芽誘導 エンジュの完熟種子を熱湯処理後、７０％エタノールに
１〜２分間浸漬した。この後４倍に希釈したアンチホル
ミン液に２０分間浸漬し（このうち５分間は脱気処理を
行う）、アンチホルミン液を取り替えてさらに２０分間
浸漬することにより表面殺菌を行った。この後滅菌水で
よく洗浄し、一昼夜吸水させて剥皮した後、発芽培地上
に置床した。２４〜２６℃、１６時間明期、８時間暗期
の条件下で７〜１０日間培養し、約５〜６cmに伸長した
実生を使用した。
るが、本発明はこれらに限定されるものではない。実施例１ ．子葉片からの不定芽誘導 エンジュの完熟種子を熱湯処理後、７０％エタノールに
１〜２分間浸漬した。この後４倍に希釈したアンチホル
ミン液に２０分間浸漬し（このうち５分間は脱気処理を
行う）、アンチホルミン液を取り替えてさらに２０分間
浸漬することにより表面殺菌を行った。この後滅菌水で
よく洗浄し、一昼夜吸水させて剥皮した後、発芽培地上
に置床した。２４〜２６℃、１６時間明期、８時間暗期
の条件下で７〜１０日間培養し、約５〜６cmに伸長した
実生を使用した。
【００１５】なお、上記の発芽培地として、ＭＳ培地を
１／２に希釈し、これにショ糖１．５％、ジェランガム
０．２５％を添加した固体培地を使用した。実生から子
葉片を切り出し、不定芽誘導培地上に置床し、約２カ月
間培養した。培養条件は種子の発芽時と同様である。こ
の結果を表１に示す。不定芽誘導率はＮＡＡ １μＭと
ＢＡＰ ５０μＭを組み合わせて添加した培地で最も高
かった（９２．７％）。また子葉片あたりの不定芽数も
最も多くなった（６．４個）。上記不定芽誘導培地とし
て、ＭＳ培地にショ糖３％、ジェランガム０．２５％、
ＮＡＡ １μＭ又は１０μＭとＢＡＰ １〜１００μＭ
を組み合わせて添加した固体培地を使用した。結果を次
の表１に示す。
１／２に希釈し、これにショ糖１．５％、ジェランガム
０．２５％を添加した固体培地を使用した。実生から子
葉片を切り出し、不定芽誘導培地上に置床し、約２カ月
間培養した。培養条件は種子の発芽時と同様である。こ
の結果を表１に示す。不定芽誘導率はＮＡＡ １μＭと
ＢＡＰ ５０μＭを組み合わせて添加した培地で最も高
かった（９２．７％）。また子葉片あたりの不定芽数も
最も多くなった（６．４個）。上記不定芽誘導培地とし
て、ＭＳ培地にショ糖３％、ジェランガム０．２５％、
ＮＡＡ １μＭ又は１０μＭとＢＡＰ １〜１００μＭ
を組み合わせて添加した固体培地を使用した。結果を次
の表１に示す。
【００１６】
【表１】 以上の通り、ＮＡＡ濃度１〜１０μＭであり、且つＢＡ
Ｐ濃度１０〜１００μＭ、特におよそ５０μＭにおい
て、多数の不定芽が得られた。
Ｐ濃度１０〜１００μＭ、特におよそ５０μＭにおい
て、多数の不定芽が得られた。
【００１７】シュートの伸長、発根及び順化 上記のように誘導された不定芽、並びに実生から切り出
した頂芽及び腋芽をシュート伸長培地（ＭＳ培地にショ
糖３％、ジェランガム０．２５％、ＢＡＰ １μＭを添
加した固体培地）に置床し、発芽時及び不定芽誘導時と
同様の培養条件で約３週間培養した。約２〜３cm程度に
伸長したシュートを発根培地（ＭＳ培地にショ糖１〜２
％、ジェランガム０．２５％、ＩＡＡ ０〜１０μＭを
添加した）に移植し、さらに約２カ月間培養した。この
結果、表２に示す様に、実生から切り出した頂芽及び腋
芽由来シュートの発根率はショ糖１％、ＩＡＡ １０μ
Ｍを添加した培地で最大６４．３％であった。また不定
芽由来シュートも同様に発根が確認された。
した頂芽及び腋芽をシュート伸長培地（ＭＳ培地にショ
糖３％、ジェランガム０．２５％、ＢＡＰ １μＭを添
加した固体培地）に置床し、発芽時及び不定芽誘導時と
同様の培養条件で約３週間培養した。約２〜３cm程度に
伸長したシュートを発根培地（ＭＳ培地にショ糖１〜２
％、ジェランガム０．２５％、ＩＡＡ ０〜１０μＭを
添加した）に移植し、さらに約２カ月間培養した。この
結果、表２に示す様に、実生から切り出した頂芽及び腋
芽由来シュートの発根率はショ糖１％、ＩＡＡ １０μ
Ｍを添加した培地で最大６４．３％であった。また不定
芽由来シュートも同様に発根が確認された。
【００１８】発根したシュート（幼植物体）は、常法に
従って無菌培養容器内の固体培地からバーミキュライト
入りポットに移植し、湿度が下がらない様に上部をサラ
ンラップで覆い、温室内で約１カ月間栽培した。約１カ
月後にサランラップを完全に取り去り栽培した結果、健
全個体が得られた。この結果を表２に示す。
従って無菌培養容器内の固体培地からバーミキュライト
入りポットに移植し、湿度が下がらない様に上部をサラ
ンラップで覆い、温室内で約１カ月間栽培した。約１カ
月後にサランラップを完全に取り去り栽培した結果、健
全個体が得られた。この結果を表２に示す。
【００１９】
【表２】 この表から明らかな通り、ショ糖濃度１〜２％、ＩＡＡ
濃度０〜１０μＭにおいて発根が認められ、植物の再生
が可能であった。
濃度０〜１０μＭにおいて発根が認められ、植物の再生
が可能であった。
【００２０】
【発明の効果】本発明によって、根ざし（挿し木）しか
クローン増殖ができなかったエンジュにおいて、カルス
を経由することなく植物を再生することによって、同一
の遺伝形質を有する優良な個体をその形質を変異させる
ことなく、効率的に大量に増殖することが可能となっ
た。また子葉片からの不定芽誘導方法は、パーティクル
ガン法やアグロバクテリウム法などによる遺伝子導入系
への利用を可能とした。
クローン増殖ができなかったエンジュにおいて、カルス
を経由することなく植物を再生することによって、同一
の遺伝形質を有する優良な個体をその形質を変異させる
ことなく、効率的に大量に増殖することが可能となっ
た。また子葉片からの不定芽誘導方法は、パーティクル
ガン法やアグロバクテリウム法などによる遺伝子導入系
への利用を可能とした。
【図１】図１はエンジュの実生の形態及びそれを構成す
る各組織を示す模式図である。
る各組織を示す模式図である。
Claims (4)
- 【請求項１】 エンジュ(Sophora japonica L.) の実生
の組織を植物成長調節物質を含む人工培地でカルスを経
由しないで培養することを特徴とするエンジュの組織培
養方法。 - 【請求項２】 実生の子葉、又は頂芽と腋芽を、植物成
長調節物質を含む人工培地で培養しシュートを伸長さ
せ、得られたシュートを濃度１〜２％のショ糖を含む人
工培地において植物体を再生させることを特徴とする請
求項１記載のエンジュの組織培養方法。 - 【請求項３】 植物成長調節物質を含む人工培地で子葉
片より誘導した不定芽を、植物成長調節物質を含む人工
培地で培養しシュートを伸長させ、得られたシュートを
濃度１〜２％のショ糖を含む人工培地において植物体を
再生させることを特徴とする請求項１記載のエンジュの
組織培養方法。 - 【請求項４】 ＮＡＡ及びＢＡＰを含む人工培地で子葉
片より誘導した不定芽を、ＢＡＰを含む人工培地で培養
しシュートを伸長させ、得られたシュートを濃度１〜２
％のショ糖及びＩＡＡを含む人工培地において植物体を
再生させることを特徴とする請求項１記載のエンジュの
組織培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19144795A JPH0937666A (ja) | 1995-07-27 | 1995-07-27 | エンジュの組織培養法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19144795A JPH0937666A (ja) | 1995-07-27 | 1995-07-27 | エンジュの組織培養法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0937666A true JPH0937666A (ja) | 1997-02-10 |
Family
ID=16274783
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19144795A Pending JPH0937666A (ja) | 1995-07-27 | 1995-07-27 | エンジュの組織培養法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0937666A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102499083A (zh) * | 2011-10-25 | 2012-06-20 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种广豆根组培苗叶柄的生根方法 |
| CN102715090A (zh) * | 2012-07-11 | 2012-10-10 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种广豆根组培种苗工厂化生产方法 |
| CN104770298A (zh) * | 2015-04-13 | 2015-07-15 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种山豆根毛状根的诱导方法 |
| CN105210854A (zh) * | 2015-10-29 | 2016-01-06 | 山东省林业科学研究院 | 一种国槐人工授粉的方法 |
| CN113767851A (zh) * | 2021-10-25 | 2021-12-10 | 山东省林业科学研究院 | 一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法 |
-
1995
- 1995-07-27 JP JP19144795A patent/JPH0937666A/ja active Pending
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102499083A (zh) * | 2011-10-25 | 2012-06-20 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种广豆根组培苗叶柄的生根方法 |
| CN102715090A (zh) * | 2012-07-11 | 2012-10-10 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种广豆根组培种苗工厂化生产方法 |
| CN104770298A (zh) * | 2015-04-13 | 2015-07-15 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种山豆根毛状根的诱导方法 |
| CN105210854A (zh) * | 2015-10-29 | 2016-01-06 | 山东省林业科学研究院 | 一种国槐人工授粉的方法 |
| CN113767851A (zh) * | 2021-10-25 | 2021-12-10 | 山东省林业科学研究院 | 一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法 |
| CN113767851B (zh) * | 2021-10-25 | 2024-04-16 | 山东省林业科学研究院 | 一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法 |
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