JP3318037B2 - シラカンバの大量増殖法 - Google Patents
シラカンバの大量増殖法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はシラカンバの大量増殖法
に関する。更に詳細には、シラカンバの根を特定の条件
下にて培養して培養根を得、得られる培養根を特定の条
件下で培養して不定芽を誘導し、誘導された不定芽を発
根させて植物体を再生させるシラカンバの大量増殖法に
関する。
に関する。更に詳細には、シラカンバの根を特定の条件
下にて培養して培養根を得、得られる培養根を特定の条
件下で培養して不定芽を誘導し、誘導された不定芽を発
根させて植物体を再生させるシラカンバの大量増殖法に
関する。
【０００２】
【従来の技術】一般に樹木の増殖には、種子による増殖
方法の他に、挿木、接ぎ木、取り木、株分けなどの栄養
繁殖が行われている。特に、優れた形質を持った樹木の
選抜育種の為には栄養繁殖による増殖は避けて通れな
い。しかし、栄養繁殖のむずかしい樹種が多く、そのう
え優良木一本から採取できる本数にも限界がある。優れ
た形質を持った樹木（苗）を栄養繁殖により大量に得た
い場合には、まず優良木から挿し木、接ぎ木、取り木、
株分け等により増殖用親木を育成し、それからさらにそ
の親木から上記の方法を用いて多数の苗を得るという方
法をとるのが普通であり、これには少なくとも数年から
十数年かかる。そのため近年、植物の組織を無菌的に培
養し再生させる組織培養方法を用いて、小さな植物組織
から大量のクローン苗を短期間に得る方法の開発が望ま
れていた。
方法の他に、挿木、接ぎ木、取り木、株分けなどの栄養
繁殖が行われている。特に、優れた形質を持った樹木の
選抜育種の為には栄養繁殖による増殖は避けて通れな
い。しかし、栄養繁殖のむずかしい樹種が多く、そのう
え優良木一本から採取できる本数にも限界がある。優れ
た形質を持った樹木（苗）を栄養繁殖により大量に得た
い場合には、まず優良木から挿し木、接ぎ木、取り木、
株分け等により増殖用親木を育成し、それからさらにそ
の親木から上記の方法を用いて多数の苗を得るという方
法をとるのが普通であり、これには少なくとも数年から
十数年かかる。そのため近年、植物の組織を無菌的に培
養し再生させる組織培養方法を用いて、小さな植物組織
から大量のクローン苗を短期間に得る方法の開発が望ま
れていた。
【０００３】シラカンバ（Betula platyphylla var. ja
ponica）を始めとするBetula属の組織培養による増殖に
関する研究では、HuhtinenとYahyaogln によるBetula p
ondulaの実生の茎軸から誘導したカルスからの幼植物体
再生の成功が初の報告である〔Huhtinen, O., and Yahy
aoglu, Z. (1974) Silvae Genet. 23:32-34 〕。Huhtin
enはまた、Betula pendulaの 培養によって半数体植物
を得ることにも成功している〔Huhtinen, O. (1978)
“Fourth Intl. Cong. Plant Tissue and Cell Cultur
e”（Ed. Thorpe, T. A. ）pp. 169 Calgary 〕。McCow
nとAmosはBetula platyphylla var. szechuanica の実
生の茎端を培養して得られた幼植物体の節間の培養に成
功している〔McCown, B. and Amos. R.(1979) Inter. P
lant Prop. Soc. 29:387-393〕。斎藤、井出らはシラカ
ンバの茎軸と葉柄の組織からカルスを誘導、増殖させる
ための培養条件をあきらかにしている〔Saito, A. and
Ide, Y.(1985) J. Jpn. For. Soc. 67:373-375〕。しか
し、シラカンバの根から植物体への再分化の成功例はい
まだ知られていない。
ponica）を始めとするBetula属の組織培養による増殖に
関する研究では、HuhtinenとYahyaogln によるBetula p
ondulaの実生の茎軸から誘導したカルスからの幼植物体
再生の成功が初の報告である〔Huhtinen, O., and Yahy
aoglu, Z. (1974) Silvae Genet. 23:32-34 〕。Huhtin
enはまた、Betula pendulaの 培養によって半数体植物
を得ることにも成功している〔Huhtinen, O. (1978)
“Fourth Intl. Cong. Plant Tissue and Cell Cultur
e”（Ed. Thorpe, T. A. ）pp. 169 Calgary 〕。McCow
nとAmosはBetula platyphylla var. szechuanica の実
生の茎端を培養して得られた幼植物体の節間の培養に成
功している〔McCown, B. and Amos. R.(1979) Inter. P
lant Prop. Soc. 29:387-393〕。斎藤、井出らはシラカ
ンバの茎軸と葉柄の組織からカルスを誘導、増殖させる
ための培養条件をあきらかにしている〔Saito, A. and
Ide, Y.(1985) J. Jpn. For. Soc. 67:373-375〕。しか
し、シラカンバの根から植物体への再分化の成功例はい
まだ知られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明者はシラカンバ
の培養根を用いて、不定芽の誘導を行い植物体への再生
を検討した。その結果、シラカンバの根の効率的な培養
法、並びに培養根からの効率の良い不定芽誘導方法を見
いだし、植物体再生に成功した。従って、本発明の目的
は、シラカンバの根の培養法を提供することにある。本
発明の他の目的は、シラカンバの根からの効率の良い不
定芽誘導法を提供することにある。更に本発明の目的
は、シラカンバの根の効率的な培養法及びシラカンバの
根からの効率の良い不定芽誘導法を組合わせたシラカン
バの大量増殖法を提供することにある。
の培養根を用いて、不定芽の誘導を行い植物体への再生
を検討した。その結果、シラカンバの根の効率的な培養
法、並びに培養根からの効率の良い不定芽誘導方法を見
いだし、植物体再生に成功した。従って、本発明の目的
は、シラカンバの根の培養法を提供することにある。本
発明の他の目的は、シラカンバの根からの効率の良い不
定芽誘導法を提供することにある。更に本発明の目的
は、シラカンバの根の効率的な培養法及びシラカンバの
根からの効率の良い不定芽誘導法を組合わせたシラカン
バの大量増殖法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】第１に本発明は、シラカ
ンバの根を、フェノール性物質生産抑制剤及び／又はフ
ェノール性物質吸着剤を含み且つホルモンを含まない液
体培地にて培養することを特徴とするシラカンバの根の
培養法である。第２に本発明は、シラカンバの根を、サ
イトカイニン類及びオーキシン類を含む固体培地にて培
養してシラカンバの根から不定芽を誘導することを特徴
とするシラカンバの根からの不定芽誘導法である。第３
に本発明は、上記の培養法によりシラカンバの根を培養
し、得られる培養根を上記の不定芽誘導法に付して不定
芽を誘導し、次いで得られる不定芽から発根させて植物
体を再生することを特徴とするシラカンバの大量増殖法
である。
ンバの根を、フェノール性物質生産抑制剤及び／又はフ
ェノール性物質吸着剤を含み且つホルモンを含まない液
体培地にて培養することを特徴とするシラカンバの根の
培養法である。第２に本発明は、シラカンバの根を、サ
イトカイニン類及びオーキシン類を含む固体培地にて培
養してシラカンバの根から不定芽を誘導することを特徴
とするシラカンバの根からの不定芽誘導法である。第３
に本発明は、上記の培養法によりシラカンバの根を培養
し、得られる培養根を上記の不定芽誘導法に付して不定
芽を誘導し、次いで得られる不定芽から発根させて植物
体を再生することを特徴とするシラカンバの大量増殖法
である。
【０００６】以下に本発明の各方法について説明する。 (1) 根培養 本発明では、シラカンバ根をフェノール性物質生産抑制
剤及び／又はフェノール性物質吸着物質を添加した、ホ
ルモンを含まない液体培地にて培養する。培養材料はシ
ラカンバの根である。基本培地として、Ｂ５〔Gamborg,
O. L. et al.(1968) Exp. Cell. Res. 50:151-158〕、
ＩＳ〔Saito, A. and Ide, Y.(1985) J.Jpn. For. Soc.
67:282-284 〕、ＷＰＭ〔Lloyd, G. et al.(1981) In
t. PlantProp. Soc. 30:421-427 〕、ＢＴＭ〔Chalupa,
V.(1984) Biologia Plnt.(Praha)26:374-377 〕の植物
組織培養用培地いずれでも可能であるが好ましくはＢ５
培地を用い、０．５−３．０％、好ましくは１％濃度の
ショ糖もしくはブドウ糖を添加するのが好ましい。一般
に、木本植物は培養時にフェノール性物質を生産し、培
地中に蓄積するため、組織が褐変し、成長が非常に遅く
なる。そのため、根の培養時には、ビタミンＣ，ポリビ
ニールピロリドン（ＰＶＰ）、ジヒドロキシナフタレ
ン、アデニン、グルタミンなどのフェノール性物質生産
抑制剤及び／又は活性炭などのフェノール性物質吸着剤
を１０ｐｐｍから３０００ｐｐｍ、好ましくは５０−２
００ｐｐｍになるように添加する。培養は三角フラコス
を用い、暗条件で、２０℃から３０℃好ましくは２５℃
±２℃の温度下、５０〜１００ｒｐｍ好ましくは６０か
ら７０ｒｐｍで振とう培養する。以上のような条件で、
シラカンバ根を継代的に効率的に増殖させることが可能
である。
剤及び／又はフェノール性物質吸着物質を添加した、ホ
ルモンを含まない液体培地にて培養する。培養材料はシ
ラカンバの根である。基本培地として、Ｂ５〔Gamborg,
O. L. et al.(1968) Exp. Cell. Res. 50:151-158〕、
ＩＳ〔Saito, A. and Ide, Y.(1985) J.Jpn. For. Soc.
67:282-284 〕、ＷＰＭ〔Lloyd, G. et al.(1981) In
t. PlantProp. Soc. 30:421-427 〕、ＢＴＭ〔Chalupa,
V.(1984) Biologia Plnt.(Praha)26:374-377 〕の植物
組織培養用培地いずれでも可能であるが好ましくはＢ５
培地を用い、０．５−３．０％、好ましくは１％濃度の
ショ糖もしくはブドウ糖を添加するのが好ましい。一般
に、木本植物は培養時にフェノール性物質を生産し、培
地中に蓄積するため、組織が褐変し、成長が非常に遅く
なる。そのため、根の培養時には、ビタミンＣ，ポリビ
ニールピロリドン（ＰＶＰ）、ジヒドロキシナフタレ
ン、アデニン、グルタミンなどのフェノール性物質生産
抑制剤及び／又は活性炭などのフェノール性物質吸着剤
を１０ｐｐｍから３０００ｐｐｍ、好ましくは５０−２
００ｐｐｍになるように添加する。培養は三角フラコス
を用い、暗条件で、２０℃から３０℃好ましくは２５℃
±２℃の温度下、５０〜１００ｒｐｍ好ましくは６０か
ら７０ｒｐｍで振とう培養する。以上のような条件で、
シラカンバ根を継代的に効率的に増殖させることが可能
である。
【０００７】(2) 根からの不定芽誘導 このようにして培養して得られるシラカンバ根を植物ホ
ルモン（サイトカイニン類及びオーキシン類）を添加し
た固体培地に移植し、不定芽の誘導を行う。勿論、他の
方法によって培養して得られる根を用いてもよい。不定
芽誘導の手順は、まず例えばＢ５液体培地で培養した根
を例えば０．５ｃｍ〜１ｃｍの長さに切り、不定芽誘導
培地上に移植する。この不定芽誘導培地としてはＢ５、
ＩＳ、ＷＰＭ、ＢＴＭいずれでもよく、好ましくはＩＳ
培地を用いる。植物ホルモンであるサイトカイニン類と
して、例えばベンジルアデニン（ＢＡ）０．０１〜２．
０ｐｐｍ、好ましくは０．１〜１．２ｐｐｍを添加す
る。オーキシン類として、例えばナフタレン酢酸（ＮＡ
Ａ）０．００１〜０．１ｐｐｍ、好ましくは０．０１〜
０．０１ｐｐｍを添加する。不定芽誘導培地に添加する
サイトカイニン類としてＢＡの代わりに４−ＰＵ（Ｎ−
（２−クロロ−４−ピリジル）−Ｎ′−フェニルウレ
ア）を用いてもよく、その場合、濃度は０．０１−２．
０ｐｐｍであり、好ましくは０．４−１．２ｐｐｍであ
る。オーキシン類としてはＮＡＡの代わりにインドール
酪酸（ＩＢＡ）、インドール酢酸（ＩＡＡ）を用いても
よく、その場合、濃度は０．００１−０．１ｐｐｍ好ま
しくは０．０１−０．０４ｐｐｍである。培養濃度は２
０〜３０℃好ましくは２５±１℃、照明は２０００−３
０００Ｌｕｘの照度を１日当たり６〜２０時間、好まし
くは１２〜１６時間連続照射する。不定芽の誘導時間は
約１週間程度であり、上記の条件にて高効率で再分化体
が取得できる。本発明では植物ホルモンとしてジベレリ
ン（ＧＡ3 ）無添加の条件にて不定芽を誘導するのが望
ましく、ＧＡ3 を添加した場合には組織根からの直接的
な不定芽誘導率は低下する。ＧＡ3 を添加した場合は、
直接的に不定芽を誘導するのは困難であり、その場には
根からカルスを経由して不定芽を誘導できる。
ルモン（サイトカイニン類及びオーキシン類）を添加し
た固体培地に移植し、不定芽の誘導を行う。勿論、他の
方法によって培養して得られる根を用いてもよい。不定
芽誘導の手順は、まず例えばＢ５液体培地で培養した根
を例えば０．５ｃｍ〜１ｃｍの長さに切り、不定芽誘導
培地上に移植する。この不定芽誘導培地としてはＢ５、
ＩＳ、ＷＰＭ、ＢＴＭいずれでもよく、好ましくはＩＳ
培地を用いる。植物ホルモンであるサイトカイニン類と
して、例えばベンジルアデニン（ＢＡ）０．０１〜２．
０ｐｐｍ、好ましくは０．１〜１．２ｐｐｍを添加す
る。オーキシン類として、例えばナフタレン酢酸（ＮＡ
Ａ）０．００１〜０．１ｐｐｍ、好ましくは０．０１〜
０．０１ｐｐｍを添加する。不定芽誘導培地に添加する
サイトカイニン類としてＢＡの代わりに４−ＰＵ（Ｎ−
（２−クロロ−４−ピリジル）−Ｎ′−フェニルウレ
ア）を用いてもよく、その場合、濃度は０．０１−２．
０ｐｐｍであり、好ましくは０．４−１．２ｐｐｍであ
る。オーキシン類としてはＮＡＡの代わりにインドール
酪酸（ＩＢＡ）、インドール酢酸（ＩＡＡ）を用いても
よく、その場合、濃度は０．００１−０．１ｐｐｍ好ま
しくは０．０１−０．０４ｐｐｍである。培養濃度は２
０〜３０℃好ましくは２５±１℃、照明は２０００−３
０００Ｌｕｘの照度を１日当たり６〜２０時間、好まし
くは１２〜１６時間連続照射する。不定芽の誘導時間は
約１週間程度であり、上記の条件にて高効率で再分化体
が取得できる。本発明では植物ホルモンとしてジベレリ
ン（ＧＡ3 ）無添加の条件にて不定芽を誘導するのが望
ましく、ＧＡ3 を添加した場合には組織根からの直接的
な不定芽誘導率は低下する。ＧＡ3 を添加した場合は、
直接的に不定芽を誘導するのは困難であり、その場には
根からカルスを経由して不定芽を誘導できる。
【０００８】(3) 発根 発根に際しては、誘導した不定芽を発根培地に移植す
る。発根培地としてはＢＴＭ，ＭＳ〔Murashige, T. et
al.(1962) Physiol. 15:473-497〕，ＩＳ，ＷＰＭの植
物組織培養用培地いずれでも可能であるが、好ましくは
ＭＳ培地を用い、植物ホルモンとしてオーキシン類を添
加する。添加するオーキシン類としてはＮＡＡ，ＩＢＡ
が好ましく、ＮＡＡでは０．００１−０．１ｐｐｍ、好
ましくは０．０１−０．０５ｐｐｍの濃度で用いる。Ｉ
ＢＡでは０．０１−１．０ｐｐｍ，好ましくは０．１−
０．５ｐｐｍの濃度で用いる。ＮＡＡ，ＩＢＡの両者又
はいずれか一方を添加することにより好ましく発根させ
ることが出来る。培養温度は２０〜３０℃、好ましくは
２５±１℃、照明は２０００〜３０００Ｌｕｘの照度を
１日当たり６〜２０時間、好ましくは１２〜１６時間連
続照射する。不定芽より発根し植物体に再生した固体は
形態的に正常であり、充分に茎葉を展開し発根したもの
を、バーミキュライト：パーライトを混合した人工土に
移植し、外環境に順化させ栽培することが可能である。
る。発根培地としてはＢＴＭ，ＭＳ〔Murashige, T. et
al.(1962) Physiol. 15:473-497〕，ＩＳ，ＷＰＭの植
物組織培養用培地いずれでも可能であるが、好ましくは
ＭＳ培地を用い、植物ホルモンとしてオーキシン類を添
加する。添加するオーキシン類としてはＮＡＡ，ＩＢＡ
が好ましく、ＮＡＡでは０．００１−０．１ｐｐｍ、好
ましくは０．０１−０．０５ｐｐｍの濃度で用いる。Ｉ
ＢＡでは０．０１−１．０ｐｐｍ，好ましくは０．１−
０．５ｐｐｍの濃度で用いる。ＮＡＡ，ＩＢＡの両者又
はいずれか一方を添加することにより好ましく発根させ
ることが出来る。培養温度は２０〜３０℃、好ましくは
２５±１℃、照明は２０００〜３０００Ｌｕｘの照度を
１日当たり６〜２０時間、好ましくは１２〜１６時間連
続照射する。不定芽より発根し植物体に再生した固体は
形態的に正常であり、充分に茎葉を展開し発根したもの
を、バーミキュライト：パーライトを混合した人工土に
移植し、外環境に順化させ栽培することが可能である。
【０００９】
【発明の効果】一般にシラカンバは植物体の茎、葉の一
部を材料として、組織培養により増殖させることは可能
であるが、本発明の利点は、根を継代培養することによ
り、いつでも大量の出発材料が入手でき、しかも上記の
方法により大量にしかも短期間に再生体が得られること
にある。本発明方法を用いる事により、優良形質を有し
たシラカンバのクローン増殖、大量生産が可能となる。
また本発明による再分化方法は、有用遺伝子を導入した
シラカンバの植物体を作出するうえで重要な技術といえ
る。つまり、有用遺伝子を導入した形質転換植物を作製
する場合、形質転換細胞からの植物体への再生が可能で
あることが必要であるが、一般に樹木では、細胞レベル
からの再生が困難である場合が多く、形質転換植物の研
究が草木類に比べ遅れている。しかし、本発明方法を用
いれば、木本植物であるシラカンバ形質転換細胞を一度
根に誘導してから、容易にに再分化体を得る事が可能で
ある。また、例えばアクロバクテリウム・リゾゲネスを
利用したシラカンバの形質転換植物（わい性植物等）を
作出する場合、毛状根からの再分化が問題となるが、本
発明方法を用いれば効率的に再分化体が得られるため、
育種等の研究にも応用が可能である。
部を材料として、組織培養により増殖させることは可能
であるが、本発明の利点は、根を継代培養することによ
り、いつでも大量の出発材料が入手でき、しかも上記の
方法により大量にしかも短期間に再生体が得られること
にある。本発明方法を用いる事により、優良形質を有し
たシラカンバのクローン増殖、大量生産が可能となる。
また本発明による再分化方法は、有用遺伝子を導入した
シラカンバの植物体を作出するうえで重要な技術といえ
る。つまり、有用遺伝子を導入した形質転換植物を作製
する場合、形質転換細胞からの植物体への再生が可能で
あることが必要であるが、一般に樹木では、細胞レベル
からの再生が困難である場合が多く、形質転換植物の研
究が草木類に比べ遅れている。しかし、本発明方法を用
いれば、木本植物であるシラカンバ形質転換細胞を一度
根に誘導してから、容易にに再分化体を得る事が可能で
ある。また、例えばアクロバクテリウム・リゾゲネスを
利用したシラカンバの形質転換植物（わい性植物等）を
作出する場合、毛状根からの再分化が問題となるが、本
発明方法を用いれば効率的に再分化体が得られるため、
育種等の研究にも応用が可能である。
【００１０】
【実施例】以下、実施例を挙げ、本発明を更に詳細に説
明する。 実施例１根の培養 無菌のシラカンバから１ｃｍ長さの根を採取し、以下の
条件に従って培養を行った。培地はショ糖２％を含む、
ｐＨ％５．８に調整したＢ５，ＷＰＭ，ＩＳ液体培地を
３００ｍｌ三角フラコスに７５ｍｌ分注したものを用い
た。培地にはフェノール性物質生産抑制物質としてポリ
ビニルピロリドン（ＰＶＰ）を０，５０，１００ｐｐｍ
の３段階濃度に添加したものを暗所にて振とう培養し
た。培養２週間及び４週間後、根の伸長を調査した。結
果を表１に示す。
明する。 実施例１根の培養 無菌のシラカンバから１ｃｍ長さの根を採取し、以下の
条件に従って培養を行った。培地はショ糖２％を含む、
ｐＨ％５．８に調整したＢ５，ＷＰＭ，ＩＳ液体培地を
３００ｍｌ三角フラコスに７５ｍｌ分注したものを用い
た。培地にはフェノール性物質生産抑制物質としてポリ
ビニルピロリドン（ＰＶＰ）を０，５０，１００ｐｐｍ
の３段階濃度に添加したものを暗所にて振とう培養し
た。培養２週間及び４週間後、根の伸長を調査した。結
果を表１に示す。
【表１】 各培地で根の伸び率 ──────────────────────────────────── 根の伸び率 培 地 ───────────────────────── ２週間目 ４週間目 ──────────────────────────────────── IS １．３０ １．８５ B5 ３．１７ ５．５０ WPM ２．３８ ５．１０ IS＋PVP50ppm １．６０ １．６０ IS＋PVP100ppm １．９０ ２．２０ B5＋PVP50ppm ３．１３ ５．８０ B5＋PVP100ppm ３．６３ ７．００ WPM ＋PVP50ppm ２．１０ ５．００ WPM ＋PVP100ppm ２．８３ ６．１５ ──────────────────────────────────── 表１に示す結果から明らかなように、ＩＳ，Ｂ５，ＷＰ
Ｍ培地に培養すると、根の伸長が認められたが、Ｂ５培
地がよりよい効果があった。また、ＰＶＰの添加により
根の伸長が明らかによくなった。
Ｍ培地に培養すると、根の伸長が認められたが、Ｂ５培
地がよりよい効果があった。また、ＰＶＰの添加により
根の伸長が明らかによくなった。
【００１１】また、Ｂ５液体倍地を３００ｍｌ三角フラ
コスに７５ｍｌ分注したものを用いた。ショ糖を０，
０．５％，１．０％，２．０％，３．０％，５．０％の
六段階濃度に添加して暗所で振とう培養する。培養１週
間目及び２週間目後根の伸び率を調査した。結果を表２
に示す。
コスに７５ｍｌ分注したものを用いた。ショ糖を０，
０．５％，１．０％，２．０％，３．０％，５．０％の
六段階濃度に添加して暗所で振とう培養する。培養１週
間目及び２週間目後根の伸び率を調査した。結果を表２
に示す。
【表２】 各ショ糖濃度で根の伸び率 ──────────────────────────────────── 根の伸び率 ショ糖濃度（Ｂ５培地） ─────────────────────── １週間目 ２週間目 ──────────────────────────────────── ０ １．０ １．０ ０．５％ １．５ １．５ １．０％ ２．５ ４．０ ２．０％ ２．２ ３．５ ３．０％ １．３ ３．５ ５．０％ １．０ １．３ ──────────────────────────────────── 表２に示す結果から明らかなように、ショ糖濃度はＢ５
培地では１．０％が最も増殖率が良い。
培地では１．０％が最も増殖率が良い。
【００１２】実施例２不定芽の誘導 実施例１より得られた根から約０．５ｃｍの根組織を採
取し、以下の条件に従って培養を行った。基本培地はＩ
Ｓ固体培地をシャーレに３０ｍｌ分注したものを用い
た。サイトカイニンとしてＢＡを０，０．１，０．８，
１．２，１．６ｐｐｍの５段階濃度、オーキシンとして
はＮＡＡを０，０．００１，０．００３，０．０１，
０．０３，０．１ｐｐｍの６段階濃度に添加したもの
を、明所（３０００ルックス，１６時間照明）にて培養
し１ヶ月後の不定芽形成率を調査した。結果を表３に示
す。
取し、以下の条件に従って培養を行った。基本培地はＩ
Ｓ固体培地をシャーレに３０ｍｌ分注したものを用い
た。サイトカイニンとしてＢＡを０，０．１，０．８，
１．２，１．６ｐｐｍの５段階濃度、オーキシンとして
はＮＡＡを０，０．００１，０．００３，０．０１，
０．０３，０．１ｐｐｍの６段階濃度に添加したもの
を、明所（３０００ルックス，１６時間照明）にて培養
し１ヶ月後の不定芽形成率を調査した。結果を表３に示
す。
【表３】 各ホルモン濃度で不定芽の形成率（％） ──────────────────────────────────── オーキシン（ＮＡＡ） サイトカイニン（ＢＡ）濃度（ｐｐｍ） 濃度（ｐｐｍ） ──────────────────────── ０ ０．４ ０．８ １．２ １．６ ──────────────────────────────────── ０ ０ − − − − ０．００１ − ０ ０ ０ ０ ０．００３ − ０ １７ ０ ０ ０．０１ − ０ ３３ ２７ ９ ０．０３ − ０ ５０ １０ １５ ０．１ − ０ ０ ０ ０ ──────────────────────────────────── 表３に示す結果から明らかなように、ＢＡ０．８−１．
２ｐｐｍ，ＮＡＡ０．００３−０．０３ｐｐｍの濃度で
不定芽の誘導が可能であり、更に、ＢＡ０．８ｐｐｍ，
ＮＡＡ０．０３ｐｐｍでの培養で最高の不定芽形成率を
示した。
２ｐｐｍ，ＮＡＡ０．００３−０．０３ｐｐｍの濃度で
不定芽の誘導が可能であり、更に、ＢＡ０．８ｐｐｍ，
ＮＡＡ０．０３ｐｐｍでの培養で最高の不定芽形成率を
示した。
【００１３】更に、ＧＡ3 添加による、不定芽形成率を
ＧＡ3 濃度０．５ｐｐｍに固定しＢＡ０．８，１．２ｐ
ｐｍ、ＮＡＡ０．００３，０．０１，０．０３ｐｐｍに
変化させ調査した。結果を表４に示した。
ＧＡ3 濃度０．５ｐｐｍに固定しＢＡ０．８，１．２ｐ
ｐｍ、ＮＡＡ０．００３，０．０１，０．０３ｐｐｍに
変化させ調査した。結果を表４に示した。
【表４】 ＧＡ3 添加による再分化率の変化 ──────────────────────────────────── ホルモン濃度（ｐｐｍ） 不定芽形成率（％） Ｎｏ ＢＡ ＮＡＡ ＧＡ3 カルス 根 ──────────────────────────────────── １ 0.8 0.003 0.5 33 0 ２ 0.8 0.01 0.5 17 0 ３ 0.8 0.03 0.5 33 0 ４ 1.2 0.003 0.5 63 0 ５ 1.2 0.01 0.5 20 0 ６ 1.2 0.03 0.5 33 0 ──────────────────────────────────── カルス：カルスを経由した再分化率 根：根からの直接不定芽への再分化率（カルスを経由し
ない） 表４に示した結果から明らかなように、ＧＡ3 を添加し
た場合、根から不定芽への直接誘導は不可能であるが、
カルスを経由する事により不定芽を誘導する事ができる
ことが明かとなった。
ない） 表４に示した結果から明らかなように、ＧＡ3 を添加し
た場合、根から不定芽への直接誘導は不可能であるが、
カルスを経由する事により不定芽を誘導する事ができる
ことが明かとなった。
【００１４】実施例３発根 実施例２で誘導した不定芽をＮＡＡ０．０２ｐｐｍ，Ｉ
ＢＡ０．５ｐｐｍを含むＭＳ培地に移し、実施例２と同
じ温度、照度条件で培養した。培養２週間後に不定芽か
ら根が誘導された。この再生したシラカンバ幼植物体を
バーミキュライド：パーライド（ｌ／ｌ ｖ／ｖ）の人
工土に移植し温室にて栽培した結果、正常な植物が得ら
れた。
ＢＡ０．５ｐｐｍを含むＭＳ培地に移し、実施例２と同
じ温度、照度条件で培養した。培養２週間後に不定芽か
ら根が誘導された。この再生したシラカンバ幼植物体を
バーミキュライド：パーライド（ｌ／ｌ ｖ／ｖ）の人
工土に移植し温室にて栽培した結果、正常な植物が得ら
れた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平４−4828（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−94921（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A01H 4/00 ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (5)
- 【請求項１】 シラカンバの根を、フェノール性物質生
産抑制剤及び／又はフェノール性物質吸着剤を含み且つ
ホルモンを含まない液体培地にて培養することを特徴と
するシラカンバの根の培養法。 - 【請求項２】 液体培地に０．５〜３％濃度のショ糖又
はブドウ糖を添加する請求項１の培養法。 - 【請求項３】 シラカンバの根を、サイトカイニン類及
びオーキシン類を含む固体培地にて培養してシラカンバ
の根から不定芽を誘導することを特徴とするシラカンバ
の根からの不定芽誘導法。 - 【請求項４】 固体培地がシベレリンを含まない請求項
３の誘導法。 - 【請求項５】 シラカンバの根を請求項１の培養法によ
り培養し、得られる培養根から請求項３の誘導法により
不定芽を誘導し、次いで得られる不定芽から発根させて
植物体を再生することを特徴とするシラカンバの大量増
殖法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09297293A JP3318037B2 (ja) | 1993-04-20 | 1993-04-20 | シラカンバの大量増殖法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09297293A JP3318037B2 (ja) | 1993-04-20 | 1993-04-20 | シラカンバの大量増殖法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06303868A JPH06303868A (ja) | 1994-11-01 |
| JP3318037B2 true JP3318037B2 (ja) | 2002-08-26 |
Family
ID=14069327
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP09297293A Expired - Fee Related JP3318037B2 (ja) | 1993-04-20 | 1993-04-20 | シラカンバの大量増殖法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3318037B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104186311A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-12-10 | 浙江农林大学 | 一种组织培养装置及光皮桦微型扦插快繁方法 |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2781964B2 (ja) * | 1995-05-08 | 1998-07-30 | 山下 幸則 | ビャクダンの不定胚形成法及びその二次増殖法 |
| CN103430849B (zh) * | 2013-08-24 | 2015-08-26 | 东北林业大学 | 一种利用温度处理提高白桦丛生苗总三萜、齐墩果酸和黄酮含量的方法 |
| CN106171996B (zh) * | 2016-07-21 | 2018-02-09 | 辽宁大学 | 一种野生白桦的快速繁殖方法 |
| CN114836468B (zh) * | 2022-05-25 | 2023-07-28 | 东北林业大学 | 一种白桦根转基因方法 |
-
1993
- 1993-04-20 JP JP09297293A patent/JP3318037B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104186311A (zh) * | 2014-07-31 | 2014-12-10 | 浙江农林大学 | 一种组织培养装置及光皮桦微型扦插快繁方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06303868A (ja) | 1994-11-01 |
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