JPH03277219A - バラの組織培養法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はバラの育種法および幼苗の大量増殖に関する。

〔従来の技術および発明が解決すべき課題〕バラの育種
は人工交配によって行われている。

しかし、長年にわたって育種を続けてきた結果、最近作
出された新品種では既存の品種と大差ない改良に止まっ
ており、画期的な新品種を作出するのは困難な状況にあ
る。この問題を解決する方法として、細胞融合、遺伝子
組換え等の方法が考えられる。これらの新技術を用いて
数種の植物で新植物が作出されているが、バラの育種へ
の試みは未だに成功していない。この大きな原因は、こ
れらの新技術はいずれも植物体再分化技術を必要とする
にもかかわらず、バラ属においては未だに植物体再分化
の報告例がないことにある。

また、バラの育苗は挿し木、接ぎ木等の栄養繁殖によっ
て行われているため急速かつ大量に増殖することは困難
である。最近、組織培養によって幼苗を大量に生産する
試みが行われているが、いずれも茎頂組織からの多芽分
枝によって幼苗を得ており、効果的な増殖法とはなり得
ていない。

従って、本発明の目的は上記課題を解決すべきバラの育
種法及びその大量増殖法の提供である。

〔課題を解決するた緬の手段〕

本発明におけるバラの培養方法及びその増殖方法は、以
下の３工程又は４工程からなる。即ち、（１）バラ属植
物組織をカルス誘導用培地で培養し、カルスを誘導する
工程。

（２）誘導カルスを増殖する工程。

（３）該カルスを光照射下、再分化用培地で不定芽また
は不定胚を再分化させる工程。

なお、通常はこの第３工程の後に以下の第４工程が必要
であるが、再分化用培地上でも幼苗まで生育する場合が
あり、この場合には第４工程は省略することができる。

（４）該再分化体を育ててバラの幼苗とする工程。

更に、本発明におけるバラの培養方法及びその増殖方法
を以下に詳細に述べる。

（１）まずバラ属植物の組織の一部を切り取り、殺菌処
理を行った後、カルス誘導用培地で培養してカルスの誘
導を行う。

カルス誘導に用いるバラ組織は、バラの豹、茎頂、茎頂
を含む茎、未熟種子、完熟種子、およびこれらから作製
したプロトプラスト等である。

カルス誘導用培地は基本培地に植物ホルモン、アミノ酸
等を配合したものを用いる。

基本培地は特に限定する必要はなく、通常の植物組織培
養に用いられる培地、例えばムラシゲ−スクーグ、Ｂ５
等の培地を用いればよい。

植物ホルモンとしては例えば２．４−ジクロロフェノキ
シ酢酸（２，４−Ｄ）、２．４．５−トリクロロフェノ
キシ酢酸（２，４・５−Ｔ）、ナフタレン酢１１Ｆ（Ｎ
ＡＡ）等のオーキシン、６−ベンジルアミノプリン（Ｂ
Ａ）、カイネチン、ゼアチン等のサイトカイニンを用い
ることができる。植物ホルモンの添加量は使用する品種
、植物の組織、植物ホルモンの種類によって若干具なる
が、オーキシンは０．００１〜５０ｐｐｍ　、好ましく
は０．０１〜ｌ　Ｉ）ｉ）ｍ添加すればよい。またサイ
トカイニンはＯ〜１０ｐｐｍ添加、好ましくは０．１　
ｐｐｍ以下添加するか無添加でもよい。アミノ酸は添加
してもしなくてもよいが、添加した方がカルス誘導効率
を向上できる。

アミノ酸としてはグルタミン、グルタミン酸、アルバラ
ギン、アスパラギン酸、プロリン等を用いることができ
るが、好ましくはグルタミン１０〜１１０００ｐｐ添加
すればよい。

培養温度は３０℃以下、好ましくは２０〜２７℃て行え
ばよい。

（２）次に、誘導したカルスは必要とする量まで増やす
た約カルス増殖用培地に移植して培養を行う。カルス増
殖用培地としてはカルス誘導用培地でもよいが、品種に
よってはカルスの再分化能が失われる現象が認とられる
ので、これを回避するためカルス誘導用培地のオーキシ
ン濃度を下げ、サイトカイニン濃度は下げるか無添加と
した培地を用いる方が好ましい。尚多くの植物種で、カ
ルスを移植継代培養するにつれて再分化能が低下するこ
とが知られているが、本発明においては２年間以上カル
ス増殖用培地で継代培養を続けてもカルスの再分化能は
保持される。

（３）増殖したカルスは再分化用培地に移植してカルス
を再分化させる。再分化用培地はカルスからの再分化が
不定芽を経るか不定胚を経るかによって異なる。

まず不定芽を経る場合であるが、カルス増殖用培地より
もオーキシン濃度を低く、サイトカイニン濃度を高くし
た培地がよく、オーキシンは無添加でもよい。

次に、不定胚を経る場合であるが、カルス増殖用培地よ
りもオーキシン濃度、サイトカイニン濃度とも低くした
培地がよく、植物ホルモン無添加培地でもよい。

このような再分化培地にカルスを移植し３０℃以下、好
ましくは２０〜２７℃の温度条件下、５００〜１０００
０ルクスの光を照射して培養を行うことによって再分化
させる。

なお、通常はこの第３工程の後に以下の第４工程が必要
であるが、再分化用培地上でも幼苗まで生育する場合が
あり、この場合には第４工程は省略することができる。

（４）再分化した不定芽および不定胚は苗化培地に移植
して幼苗まで育成する。苗化培地としては植物組織培養
に通常用いられる培地を植物ホルモン無添加で用いれば
よい。不定芽から幼苗を育成する場合には発根しないこ
ともあるが、この場合には基本培地にオーキシンを０．
０１〜１　ｐＩ’）ＩＴＩ添加した培地で発根させる。

温度、光照射条件は前工程と同様である。

このようにして得た幼苗は土壌に移植することによって
通常の栽培に供することができる。

尚、本発明に用いられる培地は固体培地、液体培地のい
ずれを用いてもよい。

〔実施例〕

以下に、本発明を実施例に基づき更に詳細に説明する。

実施例１ バラの栽培品種オレンジメーアンディナの茎の先端部分
を切り取り、これを７０％エタノール水溶液に１分間浸
漬し、次いでＴｗｅｅｎ２０　（アトラス社製、商品名
）を添加した０、５％次亜塩素酸す）　ＩＪウム水溶液
に１０分間浸漬して殺菌処理を行った。この表面殺菌し
た切片は滅菌水で洗浄した後、実体顕微鏡下に移し、葉
原基数枚を含む茎頂組織を０．５〜ｌ　ａｍの大きさに
切り取り、カルス誘導用培地に置床した。カルス誘導用
培地としては、２．４−Ｄｌｐｐｍ、グルタミン１１０
０ｐｐを添加したムラシゲ−スクーグ（以下、ＭＳと略
す）の培地を用いた。その後２５℃、３０００ルクス光
照下で９０日間培養してカルスを誘導した。

誘導したカルスは２　、４−Ｄ　０．０１〜０．　ｌｐ
ｐｍ。

グルタミン１１０００ｐｐを添加したＭＳ培地で３０日
毎に継代培養して増殖した。

増殖したカルスはＢＡｏ、ｌｐｐｍを添加したＭＳ培地
に移植すると３０日間の培養で多数の不定芽を得た。

これらの不定芽は植物ホルモン無添加のＭＳ培地に移植
することによって幼苗まで育成した。

これらの幼苗を土壌に移植し常法に従って栽培したとこ
ろ、正常なバラ苗が得られた。

実施例２ バラの原種Ｒｏｓａ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｍｉｎｉｍ
ａの開花前の蕾を用い、実施例１と同様の殺菌処理を行
った後、これらの蕾を切り開き、実体顕微鏡下、蕾内部
に含まれている豹を摘出してカルス誘導用培地に置床し
た。カルス誘導用培地としては２，４．５−Ｔ　Ｏ，ｌ
ｐｐｍ　、　ＢＡ　　Ｏ，ｌｐｐｍ　、グルタミン１１
００ｐｐを添加したＭＳ培地を用いた。その後２５℃、
暗黒下にて９０日間培養してカルスを誘導した。

誘導したカルスは２．４−Ｄ　Ｏ，ｌｐｐｍ　、グルタ
ミン１１０００ｐｐを添加したＭＳ培地で３０日間培養
して増殖した。

増殖したカルスは２．４−　Ｄ　０．０１ｐｐｍ　、グ
ルタミン１１０００ｐｐを添加したＭＳ培地に移植し２
５℃、３０００ルクス光照射下培養すると多数の不定胚
を得た。これらの不定胚は植物ホルモン無添加のＭＳ培
地に移植することによって幼苗まで育成した。

〔発明の効果〕

本発明における方法を用いれば、バラのカルスから植物
体を再分化させ幼苗まで育成することができる。従って
、従来の交配による育種法に替わる細胞融合、遺伝子組
換え等の方法に必須である植物体再分化技術を提供し、
これら新技術を用いたバラの育種及びその大量増殖が可
能である。

また、気象、地質、病害虫等の環境要因に左右されず、
親と同一形質の植物の大量増殖が可能となる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、バラ属植物の組織を培養し、脱分化させカルスを誘
   導、増殖した後、該カルスから不定芽または不定胚を分
   化誘導し植物体を再生することを特徴とするバラの組織
   培養法及びその増殖法。