JP2967968B2 - シネラリア植物の種苗生産方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の技術分野】本発明は、シネラリア植物の種苗を
大量生産することが可能なシネラリア植物の種苗生産方
法に関する。

【０００２】

【発明の技術的背景】シネラリア植物は、種子繁殖性の
植物であり、従来ではシネラリア固体間での交配により
品種改良した種子が園芸用に市販されていた。しかしな
がら、このような種子繁殖による品種生産にあっては、
種子を播種して得られた植物体が、親株と同一の遺伝形
質を発現するとは限らず、特に花色が固定化された園芸
品種を安定生産することが困難であるという品質上の問
題があった。

【０００３】そこで、花色が固定化した品種を安定供給
するために、従来よりシネラリア属植物の組織を培養
し、この培養組織から分化した同一遺伝形質を有する種
苗を得る組織培養法を適用した品種生産が試みられてい
る。

【０００４】例えば、このようなシネラリア植物の組織
培養方法としては、シネラリアの生長点を、植物ホルモ
ンとしてカイネチンおよびインドール酢酸を含む培地で
培養して不定芽を形成させ、この不定芽を植物ホルモン
としてナフタレン酢酸を含む培地で培養・発根させて幼
苗を得る方法〔ホートサイエンス(HORTSCIENCE) 、第21
巻、第１号、第139 〜140 頁（1986年) 〕が提案されて
いる。

【０００５】しかしながら、この方法では、生長点から
形成させた不定芽が、次の工程においてすべて正常に発
根するわけではなく、また発根した場合にあっても完全
な幼苗にならない場合があるため、生産効率が著しく低
く、実用的なシネラリア植物の種苗生産方法とはいいが
たいという問題があった。

【０００６】このように、シネラリア植物では、組織培
養方法にあっても、同一形質を有する種苗を大量生産す
ることは未だ成功してしない。したがって、同一遺伝形
質を有するシネラリア植物を固定化し、大量に生産し得
る方法の開発が望まれている。

【０００７】

【発明の目的】本発明は、このような従来技術に伴う問
題点を解決しようとするものであり、花色などの遺伝形
質が固定化され、品質が均一なシネラリア植物の種苗を
大量に生産し得る方法を提供することを目的としてい
る。

【０００８】

【発明の概要】本発明に係るシネラリア植物の種苗生産
方法は、シネラリア植物の組織片を、植物ホルモンとし
てオーキシン類であるナフタレン酢酸と、サイトカイニ
ン類とを含むカルス形成用固体培地上で培養してカルス
を形成させるカルス形成工程（Ａ）、得られたカルス
を、植物ホルモンを含まない不定芽形成用培地に移植
し、光照射下で培養してカルスから不定芽を分化させる
不定芽形成工程（Ｂ）、および得られた不定芽を採取
し、ナフタレン酸を含む発根用培地で光照射下で培養し
て発根させ、幼苗とする発根工程（Ｃ）を含むことを特
徴としている。

【０００９】本発明に係るシネラリア植物の種苗生産方
法は、前記発根工程（Ｃ）にて前記不定芽を分離した後
のカルスを、前記不定芽形成工程（Ｂ）に戻して再利用
するカルス再利用工程（Ｃ’）を含んでいてもよい。

【００１０】

【発明の具体的説明】以下、本発明に係るシネラリアの
種苗生産方法を、さらに具体的に説明する。本発明に係
るシネラリア植物の種苗生産方法は、シネラリア植物の
組織片から特定の固体培地上にてカルスを形成させるカ
ルス形成工程（Ａ）と、得られたカルスを特定培地で、
特定条件下で培養してカルスから不定芽を分化・形成さ
せる不定芽形成工程（Ｂ）と、得られた不定芽をカルス
から分離・採取し、それを特定培地上で、特定条件で培
養して不定芽から発根させ、幼苗を得る発根工程（Ｃ）
とを含んでいる。

【００１１】以下、これら工程（Ａ）、（Ｂ）および
（Ｃ）を、詳細に説明する。カルス形成工程（Ａ） 本発明のカルス形成工程（Ａ）では、シラネリア植物の
植物体から得られた組織片を原材料とし、この組織片を
特定固体培地（カルス形成用固体培地）上で培養してカ
ルスを生産する。

【００１２】シネラリア（Cineraria）は、サワギク属
の植物であり、本明細書において、シラネリア植物と
は、サワギク属に属するすべての品種を含んでいる。本
工程（Ａ）で原材料として用いられるこのようなシネラ
リア植物の組織片は、例えばこの植物体の花茎、葉柄、
葉身、茎頂、葯、根などの部位から分離・採取すること
ができる。

【００１３】組織片は、例えば、このような植物体の各
部位を切除し、常法により減菌処理を施した後、無菌条
件下で所望の大きさ、例えば花茎組織片を原料とする場
合は、直径１ｍｍ〜２０ｍｍ、好ましくは３ｍｍ〜５ｍ
ｍの小片に切断して調製される。

【００１４】植物体から切除した部位の減菌処理は、通
常では薬剤処理であり、７０％エタノールの他、適当な
濃度の次亜塩素酸ナトリウム溶液の単独、あるいはこれ
らを組み合わせて行うことができる。

【００１５】さらに具体的には、植物体から得た切除部
位は、例えば、これらを７０％エタノール溶液に１０秒
間、次いで有効塩素濃度０．１〜５％、好ましくは０．
５％の次亜塩素酸ナトリウム溶液に２〜３０分間、好ま
しくは１５分間浸漬して殺菌処理することができる。こ
のようにして殺菌処理された切除部位は、その表面に付
着した次亜塩素酸ナトリウムなどの減菌剤を減菌水など
で洗浄した後、上述したように所望の大きさの小片に切
断し、組織片とされる。

【００１６】本発明のカルス形成工程（Ａ）では、この
ようにして得られた組織片を特定の植物ホルモンを含有
する固体培地上にて培養してカルスを形成させる。この
ようなカルス形成用固体培地は、基本液体培地に、炭素
源と特定植物ホルモンとを加え、ｐＨを調製し、さらに
ゲル化剤を加えて固化することによって調製することが
できる。

【００１７】固体培地の調製に用いられる基本液体培地
は、植物の育成に必要な窒素、リン、カリウム、マグネ
シウム、カルシウム、マンガン、銅、亜鉛、ホウ素、モ
リブデンおよび鉄などの元素を含む無機塩が含まれた水
溶液であり、従来より植物体の培養に広く用いられたい
ずれであってもよい。具体的には、例えば、ムラシゲ・
スクーグ培地、ガンボルグのＢ５培地（以下「Ｂ５培
地」という）、ホワイト培地、ニッチ−ニッチ培地、Ｎ
６培地などの組織培養用培地が挙げられ、特にＢ５培地
が好ましい。これら培地は、例えば、竹内、中島、古谷
著の「新植物組織培養」第３８６〜３９１頁（１９７９
年、朝倉書店発行）に記載されている。

【００１８】培地に添加される炭素源としては、ショ
糖、ブドウ糖、果糖などの糖類などを挙げることがで
き、このうちショ糖が好ましい。これらの炭素源の濃度
は糖類の種類によって適宜選択されるが、例えば１０〜
６０ｇ／リットル、好ましくは３０ｇ／リットルで用い
ればよい。

【００１９】また、本発明のカルス形成工程（Ａ）で
は、培地に加えられる植物ホルモンとして、オーキシン
類としてのナフタレン酢酸（以下「ＮＡＡ」という）と
サイトカイニン類とが組み合わせて用いられる。本工程
（Ａ）でＮＡＡと組み合わせて用いられるサイトカイニ
ン類としては、具体的には、ベンジルアデニン（以下
「ＢＡ」という）、カイネチン（以下「ＫＩＮ」とい
う）、ゼアチン、イソペンテニルアデニン、リボシルゼ
アチンおよびビフェニルウレアなどを挙げることができ
る。

【００２０】このような組み合わせの植物ホルモンを含
む固体培地をカルス形成用培地に用いることにより、効
率よくカルスを形成させることができる。カルス形成用
培地に、オーキシン類として、例えば、ＮＡＡ以外の2,
4-ＰＡ、インドール酢酸を使用した場合、次の不定芽形
成工程（Ｂ）において、得られたカルスから不定芽が形
成されない。

【００２１】このようなＮＡＡおよびサイトカイニン類
は、用いられるサイトカイニン類の種類に応じて、適宜
その添加量を選択して用いられる。例えば、ＮＡＡとＢ
Ａとを組み合わせて用いる場合、ＮＡＡは、０．１ｍｇ
／リットル〜１０ｍｇ／リットル、好ましくは０．５ｍ
ｇ／リットル〜５ｍｇ／リットルの量で用いられ、ＢＡ
は、０．０１ｍｇ／リットル〜１０ｍｇ／リットル、好
ましくは０．１ｍｇ／リットル〜１ｍｇ／リットルの量
で用いられる。

【００２２】また、固体培地には、所望により、さらに
各種ビタミン類、アミノ酸、その他天然物などを加えて
もよい。このようなビタミン類としては、グリシン、塩
酸チアミン、塩酸ピリドキシン、ニコチン酸および塩酸
システインなどを挙げることができ、これらは単独ある
いは任意の組み合わせで、適宜濃度を調節して用いられ
る。

【００２３】このような炭素源、特定植物ホルモンおよ
びその他添加物などを加えた液体培地の固化に用いられ
るゲル化剤としては、寒天、アガロース、ゲルライト
（ゲランガム）などを挙げることができ、特にゲルライ
トが好ましい。

【００２４】このようなゲル化剤は、種類によってその
使用量を適宜選択して用いられるが、例えば、０．１ｇ
／リットル〜１０ｇ／リットル、好ましくは２ｇ／リッ
トル〜５ｇ／リットル、さらに好ましくは３ｇ／リット
ルの量で用いられることが好ましい。

【００２５】固体培地は、上記炭素源および植物ホルモ
ンと、所望によるビタミンなどの添加物とを基本液体培
地に添加し、これを所望のｐＨ、具体的には、ｐＨ４〜
７、好ましくはｐＨ５．８に調節した後、さらに上記ゲ
ル化剤を加えて固化することによって調製される。

【００２６】このようにして得られた固体培地は、オー
トクレーブなどにより減菌して用いることが望ましい。
本発明のカルス形成工程（Ａ）では、このようなカルス
形成用固体培地上にシネラリア植物の組織切片を置床
し、これを培養することによって組織片からカスルを形
成している。なお、ここで形成されるカルスは、細胞が
密に集合した固い細胞集合塊である。

【００２７】組織片の培養は、暗黒下で行なっても、光
照射下で行なってもよいが、カルス形成促進のために
は、光照射下での培養が好ましい。光照射下で組織片の
培養を行なう場合、光照射時間は、１日に５時間〜２４
時間、好ましくは１６時間であり、照度は、５００ルク
ス〜１００００ルクス、好ましくは４０００ルクスであ
る。

【００２８】また、培養温度は、通常１５℃〜３０℃、
好ましくは２５℃であり、培養期間は、３０日間毎に同
一組成の固体培地に継代して、３０〜９０日間、好まし
くは６０日間である。不定芽形成工程（Ｂ） 本発明の不定芽形成工程（Ｂ）では、上記カルス形成工
程（Ａ）で得られたカルスを、特定の培地（不定芽形成
用培地）にて、光照射下で培養して不定芽を形成させ
る。

【００２９】このような不定芽形成用培地は、基本液体
培地に、炭素源および所望によりビタミン類、アミノ酸
などの添加物を加えるとともに、植物ホルモンを加えな
い培地である。不定芽形成用培地は、液体培地であって
も、液体培地にゲル化剤を加えて固化した固体培地であ
ってもよい。

【００３０】不定芽形成用培地の調製に用い得る基本液
体培地としては、上記カルス形成用固体培地の調製に用
いられる基本液体培地を挙げることができる。

【００３１】不定芽形成用培地に用いられる炭素源、ビ
タミン類、アミノ酸、その他の添加物など、およびこれ
らの濃度は、上記カルス形成用培地の場合と同様であ
る。不定芽形成用培地は、液体培地である場合には、上
記炭素源および所望による添加物とを液体培地に添加
し、これを所望のｐＨ、具体的には、ｐＨ４〜７、好ま
しくはｐＨ５．８に調節して得ることができる。また、
固体培地である場合には、上記ｐＨを調節した液体培地
に、さらに上記ゲル化剤を加えて固化することによって
調製される。

【００３２】このようにして得られた不定芽形成用培地
は、オートクレーブなどにより減菌して用いることが望
ましい。本発明の不定芽形成工程（Ｂ）では、このよう
な不定芽形成用培地に、上記カルス形成工程（Ａ）で得
られたカルスを、そのまま、あるいは２〜８個に分割し
て移植し、これを特定条件、即ち光照射下で培養するこ
とによって、カルスから不定芽を形成する。

【００３３】光照射時間は、１日に５時間〜２４時間、
好ましくは１６時間であり、照度は、１０００ルクス〜
１００００ルクス、好ましくは４０００ルクスである。
このような光照射条件下で、通常１５℃〜３０℃、好ま
しくは２５℃の温度で、３０日間毎に継代して、３０〜
６０日間、好ましくは６０日間培養することにより、カ
ルス上に不定芽が分化・形成される。発根工程（Ｃ） 本発明の発根工程（Ｃ）では、上記不定芽形成工程
（Ｂ）で分化・形成された不定芽を、メスなどを用いて
カルスから切除して分離・採取し、特定の培地（発根培
地）にて、光照射下で培養して不定芽から発根させ、幼
苗を生産する。

【００３４】このような発根培地は、基本液体培地に特
定の植物ホルモンおよび炭素源と、所望によりビタミン
類、アミノ酸などの添加物とを加え、ゲル化剤を加えて
固化した固体培地である。

【００３５】発根培地の調製に用いられる基本液体培地
としては、上記カルス形成用固体培地の調製に用いられ
る基本液体培地を挙げることができる。また、本発明の
発根工程（Ｃ）で発根培地に加えられる植物ホルモン
は、ＮＡＡであり、通常、０．０１ｍｇ／リットル〜１
ｍｇ／リットル、好ましくは０．０１ｍｇ／リットルの
量で用いられる。

【００３６】発根培地に用いられる炭素源、および所望
により加えるビタミン類、アミノ酸などの添加物および
これらの濃度は、上記カルス形成用培地の場合と同様で
ある。

【００３７】発根培地は、上記炭素源および植物ホルモ
ンと、所望によりビタミン類などの添加物とを基本液体
培地に添加し、これを所望のｐＨ、具体的にはｐＨ４〜
７、好ましくはｐＨ５．８に調節した後、さらに上記ゲ
ル化剤を加えて固化することによって調製される。

【００３８】このようにして得られた発根培地は、オー
トクレーブなどにより減菌して用いることが望ましい。
本発明の発根工程（Ｃ）では、このようにして調製され
た発根培地上に、上記不定芽形成工程（Ｂ）で得られた
不定芽を、メスなどでカルスから分離して移植し、これ
を特定条件、即ち光照射下で培養することによって、不
定芽から発根させて幼苗を生産する。

【００３９】光照射時間は、１日に５時間〜２４時間、
好ましくは１６時間であり、照度は、１０００ルクス〜
１００００ルクス、好ましくは４０００ルクスである。
このような光照射条件下で、通常１５℃〜３０℃、好ま
しくは２５℃の温度で、通常１５〜６０日間、好ましく
は３０日間培養を行なうことにより、不定芽が発根し、
幼苗が得られる。

【００４０】以上説明した本発明に係るシネラリア植物
の種苗生産方法によれば、上述した工程（Ａ）、（Ｂ）
および（Ｃ）を順次行なうことにより、原料であるシラ
ネリア植物の組織片から、遺伝形質が統一された複数の
幼苗を効率よく生産することができる。

【００４１】また、本発明に係るシネラリア植物の種苗
生産方法は、発根工程（Ｃ）の不定芽分離・採集時に不
定芽から分離されたカルスを再利用するカルス再利用工
程（Ｃ’）を含んでいてもよく、以下この工程（Ｃ）を
詳細に説明する。カルス再利用工程（Ｃ’） 本発明のカルス再利用工程（Ｃ’）では、上記発根工程
（Ｃ）において、カルス上に分化・形成した不定芽を分
離した後のカルスを、再度不定芽形成工程（Ｂ）に戻し
てカルスとして再利用している。

【００４２】このようにして再利用した不定芽分離後の
カルスからは、工程（Ｂ）に戻すことにより、再度不定
芽が分化・形成される。このようにして得た不定芽は、
上記発根工程（Ｃ）にて、発根させて幼苗とすることが
できる。このようなカルス再利用工程（Ｃ’）によるカ
ルスの再利用は、２〜１０回の範囲で行なうことができ
る。

【００４３】以上説明した本発明に係るシネラリア植物
の種苗生産方法で得られた幼苗（種苗）は、順化した
後、土壌を詰めたポットに移植し、栽培・育成して開花
させると、花色などの発現形質が均一な植物体であっ
た。

【００４４】

【発明の効果】以上説明したように、本発明に係るシネ
ラリア植物の種苗生産方法によれば、植物の組織片を、
植物ホルモンとしてオーキシン類であるＮＡＡと、サイ
トカイニン類とを含むカルス形成用固体培地上で培養し
てカルスを形成させ、得られたカルスを、植物ホルモン
を含まない不定芽形成用培地に移植し、光照射下で培養
してカルスから不定芽を分化させ、次いで得られた不定
芽をＮＡＡを含む発根用培地で光照射下で培養して発根
させて幼苗としているため、花色などの遺伝形質が均一
な種苗を効率よく大量生産することが可能である。

【００４５】以下、実施例により、本発明をさらに具体
的に説明するが、本発明は以下の実施例により限定して
解釈されるものではない。

【００４６】

【実施例１】カルス形成工程（Ａ） シネラリア（Senecio cruentus DC.）の花茎を、７０％
エタノール溶液に１０秒間、次いで１０％の次亜塩素酸
ナトリウム溶液に１５分間浸漬して殺菌処理した後、滅
菌水で３回洗浄した。減菌処理した花茎をメスで直径５
ｍｍに切断して小片とし、これらを試験組織片として用
いた。

【００４７】所定の無機成分組成を有するＢ５培地に、
ＢＡ０．１ｍｇ／リットル、ＮＡＡ０．１ｍｇ／リット
ル、ショ糖３０ｇ／リットル、ゲルライト３ｇ／リット
ルを添加し、シャーレに導入し固化させて固体培地（ｐ
Ｈ５．８）を調製した。

【００４８】試験組織片を、上記固体培地上に置床し、
温度２５℃、１日当り４０００ルクスの明期１６時間お
よび暗期８時間からなる光照射（明）下にて、６０日間
（３０日目に同一組成の固体培地に継代）培養し、組織
片の周辺にカルスを形成させた。

【００４９】下記式にしたがって、組織片１個あたりの
カルス誘導率（％）を求めた。結果を表１に示す。

【００５０】

【数１】

【００５１】不定芽形成工程（Ｂ） 上記工程（Ａ）で得たカルスを、所定の無機成分組成を
有するＢ５培地に、ショ糖３０ｇ／リットル、さらにゲ
ルライト３ｇ／リットルを加えてシャーレに導入し固化
させた固形培地（ｐＨ５．８）に置床した。

【００５２】カルスを、置床後、温度２５℃、１日当り
４０００ルクスの明期１６時間および暗期８時間からな
る光照射（明）下にて、６０日間（３０日目に同一組成
の固体培地に継代）培養し、カルスから不定芽を分化・
形成させた。このようなカルス培養によって、生長点を
有する正常な不定芽が形成された。

【００５３】下記式にしたがって、カルス１個あたりの
不定芽形成率（％）を求めた。結果を表１に示す。

【００５４】

【数２】

【００５５】発根工程（Ｃ） 上記工程（Ｂ）で得た不定芽をメスで切除・分離し、所
定の無機成分組成を有するＢ５培地に、ショ糖３０ｇ／
リットル、ＮＡＡ０．１ｍｇ／リットルを加え、さらに
ゲルライト３ｇ／リットルを加えてシャーレに導入し固
化させた固形培地（ｐＨ５．８）に置床した。

【００５６】置床された不定芽を、温度２５℃、１日当
り４０００ルクスの明期１６時間および暗期８時間から
なる光照射（明）下にて、３０日間培養し、不定芽から
発根させて幼苗を得た。

【００５７】下記式にしたがって、発根率（％）を求め
た。結果を表１に示す。

【００５８】

【数３】

【００５９】

【実施例２〜１７】カルス形成工程（Ａ）において、培
地に加える植物ホルモンを、表１に示される組成とした
以外は、実施例１と同様にして、工程（Ａ）、（Ｂ）お
よび（Ｃ）を行なった。

【００６０】各工程（Ａ）〜（Ｃ）で得られたカルス誘
導率、不定芽形成率および発根率を、表１に示す。

【００６１】

【実施例１８】カルス形成工程（Ａ）において、培養を
暗黒条件（１日当たり暗期２４時間）下で行なう以外
は、実施例１と同様にして、工程（Ａ）、（Ｂ）および
（Ｃ）を行なった。

【００６２】各工程（Ａ）〜（Ｃ）で得られたカルス誘
導率、不定芽形成率および発根率を、表１に示す。

【００６３】

【実施例１９〜２１】カルス形成工程（Ａ）において、
培地に加える植物ホルモンを、表１に示される組成とし
た以外は、実施例１８と同様にして、工程（Ａ）、
（Ｂ）および（Ｃ）を行なった。

【００６４】各工程（Ａ）〜（Ｃ）で得られたカルス誘
導率、不定芽形成率および発根率を、表１に示す。

【００６５】

【実施例２２】カルス形成工程（Ａ） シネラリア（Senecio cruentus DC.）の花茎から、実施
例１の工程（Ａ）と同様にして得られた組織片を、所定
の無機成分組成を有するＢ５培地に、ＮＡＡ５．０ｍｇ
／リットル、ＢＡ０．５ｍｇ／リットル、ショ糖３０ｇ
／リットル、ゲルライト３ｇ／リットルを添加し、シャ
ーレに導入して固化させて得た固体培地（ｐＨ５．８）
上に、１００片置床した。

【００６６】置床した組織片を、実施例１の工程（Ａ）
と同様にして６０日間培養し、組織片の周辺にカルスを
形成させた。各組織片の周辺からカルスが誘導され、１
００個のカルスを得ることができた。不定芽形成工程（Ｂ） 上記工程（Ａ）で得た１００個のカルスを、所定の無機
成分組成を有するＢ５培地に、ショ糖３０ｇ／リットル
を加え、さらにゲルライト３ｇ／リットルを加えてシャ
ーレに導入し固化させた固形培地（ｐＨ５．８）に置床
した。

【００６７】置床後のカルスを、実施例１の工程（Ｂ）
と同様にして、６０日間培養し、カルスから不定芽を分
化・形成させた。このようなカルス培養によって、生長
点を有する正常な不定芽が１７１３本形成された。発根工程（Ｃ） 上記工程（Ｂ）で得た不定芽をメスで切除・分離し、実
施例１の工程（Ｃ）と同様にして３０日間培養し、不定
芽から発根させたところ、１７１３本の幼苗を得た。カルス再利用工程（Ｃ’） 上記工程（Ｃ）において、不定芽を切除されたカルス
を、再度不定芽形成工程（Ｂ）に戻し、不定芽を形成さ
せた。得られた不定芽は、上記工程（Ｃ）にて発根させ
て幼苗とした。

【００６８】またこの際不定芽を切除されたカルスは、
カルス再利用工程（Ｃ’）により、工程（Ｂ）に戻して
再度再利用できた。即ち、このような再利用工程
（Ｃ’）を、７回通過させることにより、シラネリア組
織片１００片から、１年間で、１１８２８本の幼苗を得
ることができた。

【００６９】

【比較例１】ＢＡ培地に加える植物ホルモンを、表１に
示す濃度のＢＡ単独とし、カルス形成用固体培地を調製
した以外は、実施例１と同様にして、カルス形成工程
（Ａ）を行なったところ、全くカルスが形成されなかっ
た。

【００７０】

【表１】

【００７１】

【表２】

【００７２】

【表３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 Ｈｏｒｓｔ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｐｆｌａｍｚｅｎｐｈｙｓｉｏ ｌ．Ｂｄ．99．Ｓ．ｐ．183−185 （1980) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) A01H 4/00 ＪＯＩＳ，ＢＩＯＳＩＳ

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】シネラリア植物の組織片を、植物ホルモン
   としてオーキシン類であるナフタレン酢酸と、サイトカ
   イニン類とを含むカルス形成用固体培地上で培養してカ
   ルスを形成させるカルス形成工程（Ａ）、 得られたカルスを、植物ホルモンを含まない不定芽形成
   用培地に移植し、光照射下で培養してカルスから不定芽
   を分化させる不定芽形成工程（Ｂ）、および 得られた不定芽をカルスから分離・採取し、ナフタレン
   酢酸を含む発根用培地で光照射下で培養して発根させ、
   幼苗とする発根工程（Ｃ）を含むことを特徴とするシラ
   ネリア植物の種苗生産方法。
2. 【請求項２】前記発根工程（Ｃ）にて前記不定芽を分離
   した後のカルスを、前記不定芽形成工程（Ｂ）に戻して
   再利用するカルス再利用工程（Ｃ’）を含むことを特徴
   とする請求項１に記載のシネラリア植物の種苗生産方
   法。