JP2632631B2 - ワサビの培養法 - Google Patents
ワサビの培養法Info
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- H01M8/12—Fuel cells with solid electrolytes operating at high temperature, e.g. with stabilised ZrO2 electrolyte
- H01M8/1231—Fuel cells with solid electrolytes operating at high temperature, e.g. with stabilised ZrO2 electrolyte with both reactants being gaseous or vaporised
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- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/002—Culture media for tissue culture
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Description
【産業上の利用分野】本発明は組織培養法を利用したワ
サビ種苗の大量生産方法に関する。
サビ種苗の大量生産方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ワサビ(Wasabia japonica)の栽培におい
ては、優良な苗の入手が極めて重要である。従来は実生
法や株分け法によって苗が生産されていたが、大きさ及
び品質の揃った苗を大量に生産することは困難であっ
た。このため、組織培養による無病苗の大量生産法の確
立が望まれていた。この組織培養によるワサビ種苗の生
産法としては、生長点培養法〔後掲文献１）〜６）参
照〕、不定胚法〔文献７）、８）参照〕、花茎培養法
〔文献９）参照〕、カルス培養法〔文献１０）参照〕等
が提案されている。不定胚法では、不定胚形成に１年以
上かかってしまうことや二次胚誘導が困難であるなどの
問題があり実用化されていない。花茎培養法ではウイル
スフリー化が出来ないことから栄養繁殖性の優良品種の
大量増殖には不適である。カルス培養法では、ワサビで
は安定したカルス増殖が難しく、実用化が困難である。
ては、優良な苗の入手が極めて重要である。従来は実生
法や株分け法によって苗が生産されていたが、大きさ及
び品質の揃った苗を大量に生産することは困難であっ
た。このため、組織培養による無病苗の大量生産法の確
立が望まれていた。この組織培養によるワサビ種苗の生
産法としては、生長点培養法〔後掲文献１）〜６）参
照〕、不定胚法〔文献７）、８）参照〕、花茎培養法
〔文献９）参照〕、カルス培養法〔文献１０）参照〕等
が提案されている。不定胚法では、不定胚形成に１年以
上かかってしまうことや二次胚誘導が困難であるなどの
問題があり実用化されていない。花茎培養法ではウイル
スフリー化が出来ないことから栄養繁殖性の優良品種の
大量増殖には不適である。カルス培養法では、ワサビで
は安定したカルス増殖が難しく、実用化が困難である。
【０００３】以上のことから現在は、生長点培養法を中
心に、実用化の研究が進められている。従来、この生長
点培養法においては、ワサビの生長点を寒天培地等の固
体培地上でシュート形成し、次いでマルチプルシュート
化していたため、シュート形成に長い期間が必要であっ
た。例えば、２００μm以下の生長点を置床したときに
芽が動きだすのに数カ月必要であり、また１〜２mmの生
長点が分割できるようになるまでに１１１日かかった例
などが知られており、生長点の培養を開始してから、葉
柄が展開するまでに要する日数をいかに短縮するかが大
きな課題となっていた。
心に、実用化の研究が進められている。従来、この生長
点培養法においては、ワサビの生長点を寒天培地等の固
体培地上でシュート形成し、次いでマルチプルシュート
化していたため、シュート形成に長い期間が必要であっ
た。例えば、２００μm以下の生長点を置床したときに
芽が動きだすのに数カ月必要であり、また１〜２mmの生
長点が分割できるようになるまでに１１１日かかった例
などが知られており、生長点の培養を開始してから、葉
柄が展開するまでに要する日数をいかに短縮するかが大
きな課題となっていた。
【０００４】（参考文献） １）堀秀隆,"植物バイオテクノロジー",p118〜123,東京
化学同人発行 (1986) ２）細木ら,"農業及び園芸"，61 (8),p85〜86 (1986) ３）"静岡農試資料"，第1657号,p5 (1984) ４）"静岡農試資料"，第1687号,p112 (1985) ５）松本理,"近畿中国農研",73,p22〜27 (1987) ６）松本理,"今月の農業",10月号,p18〜21 (1987) ７）古谷ら,"植物組織培養”,p82〜86 (1988) ８）末松ら,"昭和62年度園芸学会東海支部研究発表要
旨",7 ９）松本ら"昭和62年度春季園芸学会発表要旨",p332〜3
33 10）特開昭５３-８６３３３号公報 11）大塚寿男,"農業及び園芸"，63 (1),p185〜189 (198
8)
化学同人発行 (1986) ２）細木ら,"農業及び園芸"，61 (8),p85〜86 (1986) ３）"静岡農試資料"，第1657号,p5 (1984) ４）"静岡農試資料"，第1687号,p112 (1985) ５）松本理,"近畿中国農研",73,p22〜27 (1987) ６）松本理,"今月の農業",10月号,p18〜21 (1987) ７）古谷ら,"植物組織培養”,p82〜86 (1988) ８）末松ら,"昭和62年度園芸学会東海支部研究発表要
旨",7 ９）松本ら"昭和62年度春季園芸学会発表要旨",p332〜3
33 10）特開昭５３-８６３３３号公報 11）大塚寿男,"農業及び園芸"，63 (1),p185〜189 (198
8)
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記課題を
解決したもので、本発明の目的は、ワサビの生長点組織
から種苗生産を迅速に行なうためのワサビの培養法を提
供することにある。
解決したもので、本発明の目的は、ワサビの生長点組織
から種苗生産を迅速に行なうためのワサビの培養法を提
供することにある。
【０００６】
【０００７】本発明は、学名Wasabia japonicaに属する
ワサビであればいずれでも適用でき、特に、真妻系、達
麿系、半原系等と称されているものに好適である。この
ワサビの生長点は頂芽及び側芽等いずれからのものでも
用いることができる。頂芽及び側芽は、次亜塩素酸ナト
リウムやエタノールなどの殺菌剤を適当に組み合せて殺
菌した後、クリーンベンチ内で無菌的に摘出されること
が好ましい。摘出する生長点の大きさは、親株がウイル
スフリーである場合はできるだけ大きい方が生長点の生
存率が高いので好ましい。しかし圃場等で栽培されたワ
サビを親株とする場合は、ウイルスに感染しているおそ
れがあるので、生長点はできるだけ小さく摘出するほう
が良い。生存率とウイルス除去率をと考慮すると生長点
の大きさは０.１mm〜０.５mmが適当であるが、小さく摘
出しても必ずしもウイルスが除去できるわけではないの
で、その後ウイルス検定を行うとよい。
ワサビであればいずれでも適用でき、特に、真妻系、達
麿系、半原系等と称されているものに好適である。この
ワサビの生長点は頂芽及び側芽等いずれからのものでも
用いることができる。頂芽及び側芽は、次亜塩素酸ナト
リウムやエタノールなどの殺菌剤を適当に組み合せて殺
菌した後、クリーンベンチ内で無菌的に摘出されること
が好ましい。摘出する生長点の大きさは、親株がウイル
スフリーである場合はできるだけ大きい方が生長点の生
存率が高いので好ましい。しかし圃場等で栽培されたワ
サビを親株とする場合は、ウイルスに感染しているおそ
れがあるので、生長点はできるだけ小さく摘出するほう
が良い。生存率とウイルス除去率をと考慮すると生長点
の大きさは０.１mm〜０.５mmが適当であるが、小さく摘
出しても必ずしもウイルスが除去できるわけではないの
で、その後ウイルス検定を行うとよい。
【０００８】〔液体培地での培養〕上記のようにして摘
出した生長点は、液体培地中で培養することにより迅速
にシュートを形成させることができる。用いられる液体
培地の成分は、通常植物の組織培養に用いられる培地と
同じ組成の培地を用いることができる。例えば、基本培
地としては、ＭＳ培地、ＬＳ培地、ホワイトの培地、Ｂ
5培地等及びこれらの改変培地が、また生長調節物質と
して、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、インドール-３-酢酸
（ＩＡＡ）等のオーキシン、ベンジルアデニン（ＢＡ
Ｐ）やカイネチン（ＫＩＮ）等のサイトカイニン、ジベ
レリン等が好適に用いられる。生長調製物質は、通常使
用される１０-6mg/l〜１０2mg/l程度の濃度で用られ
る。
出した生長点は、液体培地中で培養することにより迅速
にシュートを形成させることができる。用いられる液体
培地の成分は、通常植物の組織培養に用いられる培地と
同じ組成の培地を用いることができる。例えば、基本培
地としては、ＭＳ培地、ＬＳ培地、ホワイトの培地、Ｂ
5培地等及びこれらの改変培地が、また生長調節物質と
して、ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、インドール-３-酢酸
（ＩＡＡ）等のオーキシン、ベンジルアデニン（ＢＡ
Ｐ）やカイネチン（ＫＩＮ）等のサイトカイニン、ジベ
レリン等が好適に用いられる。生長調製物質は、通常使
用される１０-6mg/l〜１０2mg/l程度の濃度で用られ
る。
【０００９】上記培地に生長点を植え込み培養する。培
養は、静置培養でも、振とう培養でも可能である。振と
う培養は、水平回転培養、垂直回転培養、水平往復培養
が用いられる。回転数はあまり速くなくてよく、例え
ば、垂直回転培養では２回転／分程度でよい。この培養
においては、２００ルクス〜１００００ルクス程度の光
を照射することが好ましい。培養温度は、８℃〜２５
℃、望ましくは、２０℃以下がよい。
養は、静置培養でも、振とう培養でも可能である。振と
う培養は、水平回転培養、垂直回転培養、水平往復培養
が用いられる。回転数はあまり速くなくてよく、例え
ば、垂直回転培養では２回転／分程度でよい。この培養
においては、２００ルクス〜１００００ルクス程度の光
を照射することが好ましい。培養温度は、８℃〜２５
℃、望ましくは、２０℃以下がよい。
【００１０】〔固体培地での培養〕上記のように培養し
た生長点は、早ければ培養３週間〜４週間後、平均でも
２カ月後にはシュートを形成する。このシュートはこの
まま液体培地中で培養しても、ほとんど増殖せず、水浸
状や奇形を呈してするものが出てくる。しかし、形成さ
れたシュートをすみやかに固体培地に移すことにより、
シュートはマルチプルシュート化し、以後順調に増殖さ
せることが可能となる。固体培地に移すタイミングは、
シュートが５mm〜１ｃm程度に生長した時が好ましい。
固体培地の成分は、上記のシュート形成に用いた培地と
同じ組成のものを用いることができる。培地の固化に
は、寒天やジェランガム等のゲル化剤を用いると好適で
ある。この培養においても、２００ルクス〜１００００
ルクス程度の光を照射することが好ましく、培養温度
は、８℃〜２５℃、望ましくは、２０℃以下がよい。
た生長点は、早ければ培養３週間〜４週間後、平均でも
２カ月後にはシュートを形成する。このシュートはこの
まま液体培地中で培養しても、ほとんど増殖せず、水浸
状や奇形を呈してするものが出てくる。しかし、形成さ
れたシュートをすみやかに固体培地に移すことにより、
シュートはマルチプルシュート化し、以後順調に増殖さ
せることが可能となる。固体培地に移すタイミングは、
シュートが５mm〜１ｃm程度に生長した時が好ましい。
固体培地の成分は、上記のシュート形成に用いた培地と
同じ組成のものを用いることができる。培地の固化に
は、寒天やジェランガム等のゲル化剤を用いると好適で
ある。この培養においても、２００ルクス〜１００００
ルクス程度の光を照射することが好ましく、培養温度
は、８℃〜２５℃、望ましくは、２０℃以下がよい。
【００１１】〔苗 化〕以上の様な工程で、極めて迅速
に増殖させたワサビシュートは、公知の手段により、順
次発根、馴化、育苗することにより種苗とすることがで
きる。
に増殖させたワサビシュートは、公知の手段により、順
次発根、馴化、育苗することにより種苗とすることがで
きる。
【００１２】
（実施例）生長点摘出 伊豆産の“真妻”を用いて行った。真妻根茎から大きさ
約１cm3に側芽を切りとり、７０％エタノールですすい
だ後、１００倍希釈の塩化ベンザルコニウム液に５分間
浸漬し、次いで５倍希釈のピューラックス液に５分間浸
漬した後、滅菌水ですすいだ。このようにして殺菌した
側芽をクリーンベンチ内で、実体顕微鏡のもとに約０.
２mmの大きさに摘出した。
約１cm3に側芽を切りとり、７０％エタノールですすい
だ後、１００倍希釈の塩化ベンザルコニウム液に５分間
浸漬し、次いで５倍希釈のピューラックス液に５分間浸
漬した後、滅菌水ですすいだ。このようにして殺菌した
側芽をクリーンベンチ内で、実体顕微鏡のもとに約０.
２mmの大きさに摘出した。
【００１３】液体培地での培養 ショ糖２０g/l及びＢＡＰ０.０２mg/lを含むガンボーグ
Ｂ5培地組成からなる液体培地１０mlを試験管に入れ、
上記で摘出した生長点を試験管１本あたり１個植えつ
け、これを４本用意した。培養は垂直回転培養器（２回
転／分）を用い、約８０００ルクスの光の照射下に、１
８℃の温度で行なった。培養開始から２０日目で、シュ
ートが形成されはじめ、３５日目で全ての生長点から約
１cmのシュートが形成された。４個が約１cmのシュート
を形成するまでの平均日数は３０日であった。
Ｂ5培地組成からなる液体培地１０mlを試験管に入れ、
上記で摘出した生長点を試験管１本あたり１個植えつ
け、これを４本用意した。培養は垂直回転培養器（２回
転／分）を用い、約８０００ルクスの光の照射下に、１
８℃の温度で行なった。培養開始から２０日目で、シュ
ートが形成されはじめ、３５日目で全ての生長点から約
１cmのシュートが形成された。４個が約１cmのシュート
を形成するまでの平均日数は３０日であった。
【００１４】固体培地での培養 ショ糖２０g/l及びＢＡＰ１mg/lを含む１／２強度のＭ
Ｓ培地１０mlを試験管に入れ、これを４g/lの割合のジ
ェランガムで固化させた培地で上記シュートを培養し
た。約５０００ルクスの光の照射下に、１８℃の温度で
培養した。このシュートはマルチプルシュート化し、２
〜３倍／分割の増殖速度で増殖させることができた。
Ｓ培地１０mlを試験管に入れ、これを４g/lの割合のジ
ェランガムで固化させた培地で上記シュートを培養し
た。約５０００ルクスの光の照射下に、１８℃の温度で
培養した。このシュートはマルチプルシュート化し、２
〜３倍／分割の増殖速度で増殖させることができた。
【００１５】（比較例）ショ糖２０g/l及びＢＡＰ０.０
２mg/lを含むガンボーグＢ5培地１０mlを試験管に入
れ、これを４g/lの割合のジェランガムで固化させた培
地１本につき、上記実施例の生長点摘出に記載した方法
と同じ方法で得た生長点１個を植えつけたものを６本用
意した。これを約８０００ルクスの光の照射下に、１８
℃の温度で、静置培養した。培養開始から２０日目でシ
ュートの形成がはじまったが、３５日目に約１cmのシュ
ート形成が認められたものは２個にすぎなかった。６個
が約１cmのシュートを形成するまでの平均日数は５４日
であった。
２mg/lを含むガンボーグＢ5培地１０mlを試験管に入
れ、これを４g/lの割合のジェランガムで固化させた培
地１本につき、上記実施例の生長点摘出に記載した方法
と同じ方法で得た生長点１個を植えつけたものを６本用
意した。これを約８０００ルクスの光の照射下に、１８
℃の温度で、静置培養した。培養開始から２０日目でシ
ュートの形成がはじまったが、３５日目に約１cmのシュ
ート形成が認められたものは２個にすぎなかった。６個
が約１cmのシュートを形成するまでの平均日数は５４日
であった。
【００１６】
【発明の効果】以上説明したように、従来、長期間かか
ってしまうことが問題となっていたワサビ生長点からの
シュート形成とそれに続くマルチプルシュート化を液体
培養と固体培養を組み合せることにより極めて短期間に
行なうことが可能となった。このことによりワサビの優
良品種種苗の迅速な大量増殖が可能となった。
ってしまうことが問題となっていたワサビ生長点からの
シュート形成とそれに続くマルチプルシュート化を液体
培養と固体培養を組み合せることにより極めて短期間に
行なうことが可能となった。このことによりワサビの優
良品種種苗の迅速な大量増殖が可能となった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 姫野 好道 埼玉県戸田市新曽南三丁目17番35号 日 本鉱業株式会社内 (56)参考文献 特開 昭61−115147（ＪＰ，Ａ)
Claims (1)
- 【請求項１】ワサビの生長点組織を液体培地中で培養し
てシュートを形成させた後、そのシュートを固体培地上
で培養してマルチプルシュート化して増殖させることを
特徴とするワサビの培養法。 【０００１】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4238819A JP2632631B2 (ja) | 1992-08-17 | 1992-08-17 | ワサビの培養法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4238819A JP2632631B2 (ja) | 1992-08-17 | 1992-08-17 | ワサビの培養法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0662694A JPH0662694A (ja) | 1994-03-08 |
| JP2632631B2 true JP2632631B2 (ja) | 1997-07-23 |
Family
ID=17035754
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4238819A Expired - Lifetime JP2632631B2 (ja) | 1992-08-17 | 1992-08-17 | ワサビの培養法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2632631B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1084141C (zh) * | 1998-08-05 | 2002-05-08 | 南京农业大学 | 山葵种苗的繁殖方法 |
-
1992
- 1992-08-17 JP JP4238819A patent/JP2632631B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0662694A (ja) | 1994-03-08 |
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