CN113767851B

CN113767851B - 一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法

Info

Publication number: CN113767851B
Application number: CN202111243432.1A
Authority: CN
Inventors: 李双云; 付茵茵; 葛文华; 庞彩红; 臧真荣; 高伟; 周继磊
Original assignee: Shandong Academy of Forestry
Current assignee: Shandong Academy of Forestry
Priority date: 2021-10-25
Filing date: 2021-10-25
Publication date: 2024-04-16
Anticipated expiration: 2041-10-25
Also published as: CN113767851A

Abstract

一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，包括如下步骤：步骤一：外植体选择；步骤二：外植体处理；步骤三：初代培养；步骤四：增殖培养；步骤五：生根培养：步骤六：炼苗移栽；步骤七：大田移栽。本发明解决了新品种茎叶不舒展、有效芽苗偏低的问题，利用本技术可使新品种快速繁殖，达到迅速推广的目的；本发明以新品种快繁，进行工厂化育苗为目的，步骤简单，生根率、炼苗成活率均达90％以上，移栽成活率达95％以上，种苗生长健壮。

Description

一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说是一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法。

背景技术

国槐(Sophora japonica L.)，别名家槐、中国槐，属蝶形花亚科、槐属。在我国有着悠久的栽培历史，我国自周代起就在皇宫种植槐树，故槐树又有“宫槐”之称。其适应范围广，寿命长，抗污染能力强，且树姿优美，绿荫厚重，自古就被赋予了高贵、坚挺、豁达的精神寓意。国槐在日本越南也有分布，朝鲜并见有野生，欧洲、美洲各国均有引种，但国外有关国槐树种的研究报道几乎没有。国内目前关于国槐的研究主要集中在催芽、扦插、嫁接，组培，病虫害的防治方面，观赏品种(花色)除了聊红槐以外，尚未有别的研究报道。

山东省处于亚热带和暖温带的过渡地带，是国槐的适生地之一，存有大量的国槐古树。从古树中选择优良无性系，具有获得优良抗逆基因型的良好前景。山东省林业科学研究院自2011年开始，先后从山东、山西等省份收集国槐古树种质1403份。经过近10年的研究，共培育国槐新品种11个。其中，选育的‘姹紫1号’新品种花色艳丽，观赏性高，较普通国槐的花色上有了质的改变，符合国人的审美观点，同时，‘姹紫1号’既耐干旱瘠薄、又耐盐碱，满足当前市场的需求，适宜在我国北方地区推广应用。

新品种培育成功之后，能否快速大批量繁殖该树种的苗木将决定该树种的推广栽培速度。目前，良种繁育一般采用嫁接、扦插、组培等方法。扦插育苗和嫁接育苗繁殖系数低，穗条浪费严重。而新品种来源于古树、受古树生长状况影响，可采集接穗数量有限，且育成时间短，短期内很难大量快速繁殖。鉴于上述原因，新品种采用组织培养方式进行育苗。

国槐是多年生落叶乔木，种内变异较多，基因组庞大，许多性状特性复杂而不稳定，同一树种不同品种之间基因型不同。国内外研究报道，外植体离体培养受到基因型及激素的影响，在相同培养基上不同基因型生长状态存在差异。在20世纪70年代，山东省林业科学研究院就已经开始组培研究。自1999年以来，开展紫花苜蓿、国槐、黄金槐及四倍体刺槐基因工程育种工作，建立了上述植物的组培快繁体系及高频再生体系。然而，受基因型的限制，‘姹紫1号’在原有的培养基上生长较差，虽然诱导的芽数量多，但是有效芽数量少，芽小而不能伸长，丛生芽节间较短，叶片小而不展，茎叶生长速度缓慢，繁殖速度明显降低(见图11)。

关于国槐的组培研究报道较少，王帅对国槐下胚轴进行离体培养，分化率和增殖系数分别是50％、5.3，不定芽生根率最高为60％。张先云(国槐离体培养及高效再生体系的优化中国农学通报2010，26(11)：227-230)以国槐枝条为材料，探讨了不同激素组合对国槐无菌芽的产生、愈伤组织的形成、分化、增殖以及生根的影响，生根率最高70.2％，移栽成活率85.7％，且为从组培苗基部愈伤组织生根，愈伤组织上分化出不定根通常表现为不定根与茎连接较疏松，在移栽时易于脱落，不利于幼苗的移栽成活。袁秀云(国槐植株再生技术研究安徽农业科学2007,35(35):11418-11419)生根率只有60％，且接种数量只有10棵。刘桂民(国槐组织培养生根的研究山东林业科技2012(4)：42-44)研究发现，单独使用0.1mg/L的NAA时，生根率为100％，根直接从幼苗基部诱导出，且底部无愈伤组织形成，但诱导出的根颜色呈黑褐色，苗木生长弱；附加IAA0.4mg/L+NAA0.01mg/L的诱导效果最好，其生根率可达80％,平均生根数为2.3，研究止于生根阶段，后续的炼苗移栽未有提及。

在幼芽培养和不定根诱导过程中，外植体的选择及灭菌、培养条件和激素配比等方面不同实验室的结果之间有不同程度的差异，且这些仅限于实验室研究，作为新品种采取组织培养方式进行工厂化育苗体系来说是远远不够的。

发明内容

本发明提供一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，用以解决现有技术中的缺陷。

本发明通过以下技术方案予以实现：

一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，包括如下步骤：

步骤一：外植体选择：选取树冠阳面外围生长健壮、无病虫害、带顶芽、长度为10cm～30cm的当年生嫩枝为外植体，用湿报纸或纱布包裹，外敷塑料薄膜，装入含有冰袋的泡沫盒中冷藏保存，尽快带回组培室消毒灭菌；

步骤二：外植体处理：除去叶片，留下叶柄，用软毛刷蘸取洗洁精溶液轻轻洗去枝条表面的灰尘，流水冲洗1h，将枝条剪切成带顶芽或1～2个腋芽、长2.0cm～3.0cm的茎段，在超净工作台上，先用75％乙醇浸润30s～60s，无菌水冲洗3～4次，带顶芽的茎段用0.1％氯化汞溶液处理6min～8min，带腋芽的茎段用0.1％氯化汞溶液处理10min～12min，无菌水冲洗3～4次，用无菌滤纸吸干表面水分；

步骤三：初代培养：无菌条件下将带顶芽茎段的下端、带腋芽茎段的两端分别去除0.4cm～0.6cm，剪成含有一个顶芽或腋芽的茎段，接种到启动培养基上进行培养，初代培养时间为3～5周，培养条件：昼温度25℃±2℃，夜温度18℃±2℃；光照强度1500Lx～2000Lx，光照时间14h～16h，黑暗时间10h～8h；

步骤四：增殖培养：经诱导形成的不定芽转接到增殖培养基中进行培养，25d～30d继代一次，培养条件：昼温度25℃±2℃，夜温度18℃±2℃；光照强度2500Lx～3000Lx，光照时间14h～16h，黑暗时间10h～8h；

步骤五：生根培养：丛生芽高度达到3cm左右时，从愈伤组织基部切下，接种到生根培养基中诱导生根，培养时间14d～18d，培养条件同增殖培养，余下的愈伤组织切成2～3块，转接到增殖培养基中继续培养；

步骤六：炼苗移栽：不定根刚刚长出不超过1cm时转移至简易温室内炼苗移栽，简易温室内的温度控制在25℃～30℃、相对湿度85％～90％、遮光率50％％，选用直径5cm，高8cm的无纺布营养钵，下部5cm～6cm填充消毒过的移栽基质，上部2cm～3cm填充细沙，放入育苗盘中，育苗盘放入简易炼苗温室，底部用砖垫起，架空摆放，距离地面位置10cm以上，炼苗移栽前1天营养钵浇透水，简易温室内地面用水浇透，在简易温室内，打开组培苗封口膜，用镊子轻轻取出小苗，用清水洗净根部残留的培养基，栽入营养钵，保持根系舒展，轻压生根苗周边细沙，移栽后浇透水，每周喷施一次50％多菌灵可湿性粉剂或70％甲基托布津1000倍液杀菌；用麸皮拌农药撒在育苗盘下方及周围软体动物和昆虫危害，移栽20d～25d后，简易温室选择在阴天或者晴天的傍晚逐渐通风以降低室内湿度、逐渐撤去遮阴网来增强光照，简易温室内温度控制在35℃以下，再继续培养30d～60d，待营养钵中的小苗根系长到营养钵中下部及四周，此时，可移出简易温室，在室外继续炼苗1周，若此时为春夏季，可选择阴天或者晴天的傍晚直接移入大田；若此时为秋季，移入花盆或大号的营养钵内，放入温室或在向阳避风处越冬；

步骤七：大田移栽：育苗地深耕耙平，整成宽1.5m左右，长20m～30m的畦，按0.4m的行距开沟，开沟深度12cm～15cm，将小苗连同营养钵按照0.2m的株距摆放于沟内，覆土定植，浇透水1次，栽后5d～7d天再浇透水1次，以后浇水根据土壤墒情确定，苗木移栽20d后宜喷施0.1％～0.2％的尿素或磷酸二氢钾水溶液1次，结合浇水，土壤追施复合肥一次，用量25kg/667m²，封冻前浇1次透水，育苗完成。

如上所述的一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，所述的步骤三中的启动培养基包括如下物质：改良MS、琼脂6.0g/L、蔗糖30g/L,所述的启动培养基的pH值为5.8～6.0。

如上所述的一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，所述的步骤四中的增殖培养基包括如下物质：改良MS、6-BA0.5mg/L～1.0mg/L、NAA0.25～0.5mg/L、IBA0.25mg/L～0.5mg/L、琼脂6.0g/L、蔗糖30g/L，所述的增殖培养基的pH为5.8～6.0。

如上所述的一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，所述的步骤五中的生根培养基包括如下物质：1/2改良MS、IBA0.5mg/L～0.8mg/L、NAA0.08～0.1mg/L、琼脂6.0g/L、蔗糖20g/L，所述的生根培养基的pH值为5.8～6.0。

如上所述的一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，所述的改良MS包括常量营养元素、微量营养元素和有机试剂；

如上所述的一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，所述的常量营养元素的组分和其对应的浓度如下：硝酸钾1900mg/L，硝酸铵1650mg/L，七水硫酸镁370mg/L，无水磷酸二氢钾170mg/L，二水氯化钙440mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，七水硫酸亚铁27.8mg/L；

如上所述的一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，所述的微量营养元素的组分和其对应的浓度如下：四水硫酸锰22.3mg/L，硫酸锌8.6mg/L，硼酸6.2mg/L，碘化钾0.83mg/L，钼酸钠0.25mg/L，硫酸铜0.025mg/L，氯化钴0.025mg/L；

如上所述的一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，所述的有机试剂的组分和其对应的浓度如下：盐酸硫胺素10mg/L，烟酸1mg/L，盐酸吡哆醇1mg/L，肌醇100mg/L。

如上所述的一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，所述的步骤六中的移栽基质包括园土、腐殖土、蛭石、珍珠岩，所述的园土、腐殖土、蛭石、珍珠岩的体积比为3:3:1:3。

本发明的优点是：1.本发明解决了新品种茎叶不舒展、有效芽苗偏低的问题，利用本技术可使新品种快速繁殖，达到迅速推广的目的；2.本发明以新品种快繁，进行工厂化育苗为目的，步骤简单，生根率、炼苗成活率均达90％以上，移栽成活率达95％以上，种苗生长健壮；3.本发明中生根培养后，将瓶苗移到温室，省去炼苗驯化的步骤，直接开盖移栽，缩短了培养周期，降低生产成本；4.本发明提供的简易炼苗温室，建造简单、投资少、操作简单、使用灵活、普通农民可轻松掌握炼苗技术；5.本发明提供的简易炼苗温室，已成功用于国槐、刺槐、杨树等树种组培炼苗；6.本发明提供了用于红花国槐新品种‘姹紫1号’工厂化育苗方法的炼苗基质，采用此种育苗基质炼苗，移栽成活率达95％以上；7.本发明选择在不定根刚刚长出不超过1cm时炼苗移栽，可防止不定根过长移栽时易折断，从而影响成活率。8.本发明利用营养钵炼苗，其优点一是移栽时不伤根，不受季节和时间的限制，可随时移栽；二是炼苗成活后，可在营养钵中生长几个月甚至一年的时间，无需移栽，直接出圃销售即可，节约地方，方便管理，降低生产成本。9.本发明育苗盘架空摆放，一是有助于将营养钵内多余的水分控出，防止水分过大烂根；二是减少软体动物和昆虫危害。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明增殖培养示意图；

图2是本发明生根培养示意图；

图3是本发明简易温室的示意图；

图4是本发明喷水装置喷水降温的示意图；

图5是本发明容器苗架摆放示意图；

图6是本发明容器苗室外炼苗示意图；

图7是本发明温室越冬培养示意图；

图8是本发明移栽到大田示意图；

图9定植于日照试验林场的红花国槐新品种‘姹紫1号’示意图；

图10定植于日照试验林场的红花国槐新品种‘姹紫1号’花朵示意图；

图11是红花国槐新品种‘姹紫1号’在现有培养基上芽小，叶片不舒展情况的示意图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

1.外植体选择

选取树冠阳面外围生长健壮、无病虫害、带顶芽的当年生嫩枝(长度10cm～30cm)为外植体。用湿报纸或纱布包裹，外敷塑料薄膜，装入含有冰袋的泡沫盒中冷藏保存，尽快带回组培室消毒灭菌。

2.外植体处理

除去叶片，留下叶柄，用软毛刷蘸取洗洁精溶液轻轻洗去枝条表面的灰尘，流水冲洗1h，将枝条剪切成带顶芽或1～2个腋芽、长2.0cm～3.0cm的茎段。在超净工作台上，先用75％乙醇浸润30s～60s，无菌水冲洗3～4次。带顶芽的茎段用0.1％氯化汞溶液处理6min m～8min，带腋芽的茎段用0.1％氯化汞溶液处理10min～12min。无菌水冲洗3～4次，用无菌滤纸吸干表面水分。

3.初代培养

无菌条件下将带顶芽茎段的下端、带腋芽茎段的两端分别去除0.5cm左右，剪成含有一个顶芽或腋芽的茎段。接种到启动培养基(改良MS、琼脂6.0g/L、蔗糖30g/L,pH值5.8～6.0)上进行培养。初代培养时间为3～5周。培养条件：昼温度25℃±2℃，夜温度18℃±2℃；光照强度1500Lx～2000Lx，光照时间14h～16h，黑暗时间10h～8h。

4.增殖培养

经诱导形成的不定芽转接到增殖培养基(改良MS、6-BA0.5mg/L～1.0mg/L、NAA0.25～0.5mg/L、IBA0.25mg/L～0.5mg/L、琼脂6.0g/L、蔗糖30g/L，pH 5.8～6.0)中进行培养，25d～30d继代一次。培养条件：昼温度25℃±2℃，夜温度18℃±2℃；光照强度2500Lx～3000Lx，光照时间14h～16h，黑暗时间10h～8h。

5.生根培养

丛生芽高度达到3cm左右时，从愈伤组织基部切下(一定用锋利的刀片，切面光滑无毛刺)，接种到生根培养基(1/2改良MS、IBA0.5 mg/L～0.8mg/L、NAA 0.08～0.1mg/L、琼脂6.0g/L、蔗糖20g/L，pH值5.8～6.0，1/2MS是指MS全量减半)中诱导生根，培养时间14d～18d，培养条件同增殖培养。余下的愈伤组织切成2～3块，转接到增殖培养基中继续培养。

6.炼苗移栽

不定根刚刚长出即可转移至温室炼苗移栽。温室内的温度控制在25℃～30℃、相对湿度85％～90％、遮光率50％％。

移栽基质由以下重量份原料制成：园土、腐殖土、蛭石、珍珠岩体积比为3:3:1:3。

无纺布育苗容器选择及填装：选用直径5cm，高8cm的无纺布营养钵，下部5cm～6cm填充消毒过的移栽基质，上部2cm～3cm填充细沙。放入育苗盘中。育苗盘放入简易炼苗温室，底部用砖垫起，架空摆放，距离地面位置10cm以上。炼苗移栽前1天营养钵浇透水，简易温室内地面用水浇透。

在简易温室内，打开组培苗封口膜，用镊子轻轻取出小苗，用清水洗净根部残留的培养基，栽入营养钵，保持根系舒展，轻压生根苗周边细沙。移栽后浇透水。每周喷施一次50％多菌灵可湿性粉剂或70％甲基托布津1000倍液杀菌；用麸皮拌农药撒在育苗盘下方及周围防治蜗牛、蛞蝓等软体动物和蝼蛄、鼠妇、地老虎等昆虫危害。

简易炼苗温室由水井、简易温室、遮阴网及喷水装置组成(图3)，图中由上而下依次为遮阴网、喷水装置、简易温室。其原理是利用井水的温度给炼苗温室降温。遮阴网与喷水装置距离30-50cm，喷水装置喷头距离温室顶端距离为80-100cm。温室内设有温度传感器与外部电机相连，传感器温度设定范围在27℃～30℃。当温室内温度达到30℃时，触发喷水装置，开始喷水(图4)，温室内温度随之降低，待温室内温度降至27℃时，触发装置关闭，停止喷水。降温的水流到附近的蓄水池中，另作他用。温室内外的水相互独立，互不影响。

简易炼苗温室的使用方法：

温室内场地清理干净，用方砖铺地，封闭温室，在使用前7～10天进行杀菌消毒工作。具体使用方法：每立方米用25％百菌清1克，锯末8克混匀，点燃熏烟。时间宜在晚上7点钟进行，熏烟密闭24小时。设施棚架、育苗盘、工具等用75％酒精喷洒3遍。炼苗前1天，育苗盘摆放整齐，营养钵浇透水备用。地面灌水，直至温室内相对湿度达到90％停止，关闭好温室。

温室内打开组培苗瓶盖，用镊子轻轻取出小苗，清水洗净根部残留的培养基，栽入营养钵，保持根系舒展，轻压生根苗周边细沙，移栽后浇透水1次。温室内始终保持相对湿度在85％-90％，若相对湿度低于85％，用水灌地面，直至湿度达到90％。

简易炼苗温室的优点：

1.建造简单、投资少、操作简单、使用灵活、普通农民可轻松掌握炼苗技术。

2.研发简易炼苗温室，炼苗成活率达95％以上。

3.简易炼苗温室所用材料可连续多年使用，大大降低了生产成本。

4.育苗盘架空摆放，一是有助于将营养钵内多余的水分控出，防止水分过大烂根；二是减少软体动物和昆虫危害。

移栽20d～25d后，简易温室选择在阴天或者晴天的傍晚逐渐通风以降低室内湿度、逐渐撤去遮阴网来增强光照，简易温室内温度控制在35℃以下，再继续培养30d～60d，待营养钵中的小苗根系长到营养钵中下部及四周，此时，可移出简易温室，在室外继续炼苗1周。若此时为春夏季，可选择阴天或者晴天的傍晚直接移入大田；若此时为秋季，移入花盆或大号的营养钵内，放入温室或在向阳避风处越冬。

7.大田移栽

育苗地深耕耙平，整成宽1.5m左右，长20m～30m的畦，按0.4m的行距开沟，开沟深度12cm～15cm。将小苗连同营养钵按照0.2m的株距摆放于沟内，覆土定植，浇透水1次。

栽后5d～7d天再浇透水1次，以后浇水根据土壤墒情确定。苗木移栽20d后宜喷施0.1％～0.2％的尿素或磷酸二氢钾水溶液1次。结合浇水，土壤追施复合肥一次，用量25kg/667m2。封冻前浇1次透水。

实施例

1.外植体选择

5月中下旬，选择晴天的上午，山东省林业科学研究院寿光盐碱地试验站(位于寿光市羊口镇卧铺村)国槐种质资源圃内，剪取‘姹紫1号’树冠阳面生长健壮、无病虫害、带顶芽的当年生嫩枝(长度10cm～30cm)，用湿报纸包裹，外敷塑料薄膜，装入含有冰袋的泡沫盒中冷藏保存，带回组培室。

2.外植体处理

山东省林业科学研究院(位于济南市文化东路42号)组培室内除去叶片，留下叶柄，用软毛刷蘸取洗洁精溶液轻轻洗去枝条表面的灰尘，流水冲洗1h，将枝条剪切成带顶芽或1～2个腋芽、长2.0cm～3.0cm的茎段。在超净工作台上，茎段放入灭菌的空瓶中，倒入75％乙醇浸润30s，无菌水冲洗3次。带顶芽的茎段用0.1％氯化汞溶液处理6min，带腋芽的茎段10min，无菌水冲洗4次，用无菌滤纸吸干表面水分。

3.初代培养

4.增殖培养

经诱导形成的不定芽转接到增殖培养基(改良MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+IBA0.25mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖30g/L，pH 5.8～6.0)中进行培养，25d～30d继代一次。培养条件：昼温度25℃±2℃，夜温度18℃±2℃；光照强度2500Lx～3000Lx，光照时间14h～16h，黑暗时间10h～8h。

5.生根培养

丛生芽高度达到3cm左右时，从愈伤组织基部切下(一定用锋利的刀片，切面光滑无毛刺)，接种到生根培养基(1/2改良MS+IBA 0.6mg/L+NAA 0.1mg/L+琼脂6.0g/L+蔗糖20g/L，pH值5.8～6.0，1/2MS是指MS全量减半)中诱导生根，培养时间15d，培养条件同增殖培养。余下的愈伤组织切成2～3块，转接到增殖培养基中继续培养。

6.炼苗移栽

不定根刚刚长出不超过0.5cm，转移至山东省林业科学研究院试验苗圃(位于济南市工业北路163号)温室炼苗移栽。温室内的温度控制在25℃～30℃、相对湿度85％～90％、遮光率50％％。

无纺布育苗容器选择及填装：直径5cm，高8cm的无纺布营养钵(下部5cm填充消毒过的移栽基质，上部3cm填充细沙),放入育苗盘中。育苗盘放入简易炼苗温室，底部用砖垫起，架空摆放，距离地面位置10cm以上。炼苗移栽前1天营养钵浇透水，简易温室内地面用水浇透。

移栽20d后，观察移栽的小苗有新根长出，选择在阴天或者晴天的傍晚逐渐通风以降低室内湿度、逐渐撤去遮阴网来增强光照，简易温室内温度控制在35℃以下，再继续培养30d～60d，待营养钵中的小苗根系长到营养钵中下部及四周(肉眼可看到)，此时，可移出简易温室，在室外继续炼苗1周后移入大点的营养钵中，放入温室越冬。

7.大田移栽

春天，山东省林业科学研究院试验苗圃(位于济南市工业北路163号)育苗地深耕耙平，整成宽1.5m左右，长20m～30m的畦，按0.4m的行距开沟，开沟深度12cm～15cm。将小苗连同营养钵按照0.2m的株距摆放于沟内，覆土定植，浇透水1次。栽后7d天再浇透水1次，以后浇水根据土壤墒情确定。5月中旬，喷施磷酸二氢钾水溶液1次。6月初，结合浇水，土壤追施复合肥一次，用量25kg/667m2。冬季封冻前浇1次透水。

翌年春起苗移至山东省林业科学研究院日照试验林场(位于日照市东港区南湖镇北袁家庄村)定植。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims

1.一种用于红花国槐新品种‘姹紫1号’的工厂化育苗方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤一：外植体选择：晴天的上午，选取树冠阳面外围生长健壮、无病虫害、带顶芽、长度为10cm~30cm的当年生嫩枝为外植体，用湿报纸或纱布包裹，外敷塑料薄膜，装入含有冰袋的泡沫盒中冷藏保存，尽快带回组培室消毒灭菌；

步骤二：外植体处理：除去叶片，留下叶柄，用软毛刷蘸取洗洁精溶液轻轻洗去枝条表面的灰尘，流水冲洗1h，将枝条剪切成带顶芽、长2.0cm~3.0cm的茎段，在超净工作台上，先用75％乙醇浸润30s~60s，无菌水冲洗3~4次，带顶芽的茎段用0.1％氯化汞溶液处理6min~8min，无菌水冲洗3~4次，用无菌滤纸吸干表面水分；

步骤三：初代培养：无菌条件下将带顶芽茎段下端去除0.4cm~0.6cm，剪成含有一个顶芽的茎段，接种到启动培养基上进行培养，初代培养时间为3~5周，培养条件：昼温度25℃±2℃，夜温度18℃±2℃；光照强度1500Lx~2000Lx，光照时间14h~16h，黑暗时间10h~8h；

步骤四：增殖培养：经诱导形成的不定芽转接到增殖培养基中进行培养，25d~30d继代一次，培养条件：昼温度25℃±2℃，夜温度18℃±2℃；光照强度2500Lx~3000Lx，光照时间14h~16h，黑暗时间10h~8h；

步骤五：生根培养：丛生芽高度达到3cm左右时，从愈伤组织基部切下，接种到生根培养基中诱导生根，培养时间14d~18d，培养条件同增殖培养，余下的愈伤组织切成2~3块，转接到增殖培养基中继续培养；

步骤六：炼苗移栽：不定根刚刚长出不超过1cm时转移至简易温室内炼苗移栽，简易温室内的温度控制在25℃~30℃、相对湿度85％~90％、遮光率50％％，选用直径5cm，高8cm的无纺布营养钵，下部5cm~6cm填充消毒过的移栽基质，上部2cm~3cm填充细沙，放入育苗盘中，育苗盘放入简易炼苗温室，底部用砖垫起，架空摆放，距离地面位置10cm以上，炼苗移栽前1天营养钵浇透水，简易温室内地面用水浇透，在简易温室内，打开组培苗封口膜，用镊子轻轻取出小苗，用清水洗净根部残留的培养基，栽入营养钵，保持根系舒展，轻压生根苗周边细沙，移栽后浇透水，每周喷施一次50％多菌灵可湿性粉剂或70％甲基托布津1000倍液杀菌；用麸皮拌农药撒在育苗盘下方及周围防治软体动物和昆虫危害，移栽20d~25d后，简易温室选择在阴天或者晴天的傍晚逐渐通风以降低室内湿度、逐渐撤去遮阴网来增强光照，简易温室内温度控制在35℃以下，再继续培养30d~60d，待营养钵中的小苗根系长到营养钵中下部及四周，此时，可移出简易温室，在室外继续炼苗1周，若此时为春夏季，可选择阴天或者晴天的傍晚直接移入大田；若此时为秋季，移入花盆或大号的营养钵，放入温室或在向阳避风处越冬；

步骤七：大田移栽：育苗地深耕耙平，整成宽1.5m左右，长20m~30m的畦，按0.4m的行距开沟，开沟深度12cm~15cm，将小苗连同营养钵按照0.2m的株距摆放于沟内，覆土定植，浇透水1次，栽后5d~7d天再浇透水1次，以后浇水根据土壤墒情确定，苗木移栽20d后宜喷施0.1％~0.2％的尿素或磷酸二氢钾水溶液1次，结合浇水，土壤追施复合肥一次，用量25kg/667m²，封冻前浇1次透水，育苗完成；

所述的步骤三中的启动培养基包括如下物质：改良MS、琼脂6.0g/L、蔗糖30g/L，所述的启动培养基的pH值为5.8~6.0；

所述的步骤四中的增殖培养基包括如下物质：改良MS、6-BA 0.5mg/L~1.0mg/L、NAA0.25~0.5mg/L、IBA 0.25mg/L~0.5mg/L、琼脂6.0g/L、蔗糖30g/L，所述的增殖培养基的pH为5.8~6.0；

所述的步骤五中的生根培养基包括如下物质：1/2改良MS、IBA 0.5mg/L~0.8mg/L、NAA0.08~0.1mg/L、琼脂6.0g/L、蔗糖20g/L，所述的生根培养基的pH值为5.8~6.0；

所述的改良MS包括常量营养元素、微量营养元素和有机试剂；

所述的常量营养元素的组分和其对应的浓度如下：硝酸钾1900mg/L，硝酸铵1650mg/L，七水硫酸镁370mg/L，无水磷酸二氢钾170mg/L，二水氯化钙440mg/L，乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L，七水硫酸亚铁27.8mg/L；

所述的微量营养元素的组分和其对应的浓度如下：四水硫酸锰22.3mg/L，硫酸锌8.6mg/L，硼酸6.2mg/L，碘化钾0.83mg/L，钼酸钠0.25mg/L，硫酸铜0.025mg/L，氯化钴0.025mg/L；

所述的有机试剂的组分和其对应的浓度如下：盐酸硫胺素10mg/L，烟酸1mg/L，盐酸吡哆醇1mg/L，肌醇100mg/L；

所述的步骤六中的移栽基质包括园土、腐殖土、蛭石、珍珠岩，所述的园土、腐殖土、蛭石、珍珠岩的体积比为3:3:1:3。