CN103155868B - 樱桃砧木zy-1组培快速育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种樱桃砧木ZY-1组培快速育苗方法，它包括以下步骤：(1)取一年生樱桃砧木ZY-1幼树顶芽或侧芽接种在诱导培养基上培养，所述培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g，琼脂粉5g，6-苄氨基嘌呤0.2～0.3mg，吲哚丁酸0.1～0.2mg；(2)接种到增殖培养基上培养，所述培养基为在1升MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g，琼脂粉5g，6-苄氨基嘌呤0.4～0.5mg，吲哚丁酸0.2～0.3mg；(3)接入生根培养基中培养，所述培养基为在1升1/3MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g，琼脂粉5g，吲哚丁酸0.4～0.5mg；(4)炼苗与移栽。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体是一种通过植物组织培养技术繁殖樱桃砧木ZY-1的方法。
背景技术
大樱桃砧木对大樱桃产业化发展具有很重要的影响，既影响其早果性、丰产性、果实大小、果实品质等生长发育习性，也影响其抗逆性和树体寿命，生产中出现的如流胶、园相不整等问题都与砧木品种有关。而大樱桃砧木ZY-1，其自身根系发达，萌芽率、成枝率增色高，分枝角度大，树势中庸，具有亲和力强、结果早、丰产、抗病性强、适应广等优良特性，具有很高的栽培推广应用价值。
采用植物组织培养方法可以在短期内快速繁殖多种植物，不仅繁殖速率极高，且因为是无性繁殖，可以保持原繁殖母株的优良性状，近年来在生产上应用越来越广泛。植物组织培养方法是利用植物细胞的全能性，即组成植物体的每一个细胞都具有发育成为一个完整植株的潜在能力，采取植物体上的单个细胞、细胞团、分生组织或器官的一部分，通过人工配置不同营养成分和激素的培养基来培养并调控其发育，使这些细胞、组织等形成千万个小植株并且保持了母本植株的全部优良性状，这种方法可以在短时间内获得大量的组培苗，并能在人工控制的车间内一年四季进行，因而可以实现种苗繁殖的工厂化生产，在较小的面积内进行大规模生产，无需占用大量土地。
ZY-1樱桃砧木组培苗生根困难，移栽成活率低使其一直无法实现大规模工厂化生产，至今国内外尚未见到利用组织培养方法进行大规模生产ZY-1樱桃砧木苗的报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种樱桃砧木ZY-1组培快速育苗方法。
本发明的技术方案是：一种樱桃砧木ZY-1组培快速育苗方法，它包括以下步骤：(1)取一年生樱桃砧木ZY-1幼树顶芽或侧芽，消毒后接种在诱导培养基上培养，所述诱导培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比 制成：白砂糖30g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.2～0.3mg吲哚丁酸0.1～0.2mg，培养条件：温度23±1℃，光强2000～2500Lx、时间16小时/天；(2)取步骤(1)中生长芽丛茎尖接种到增殖培养基上培养，所述的增殖培养基为在1升MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.4～0.5mg吲哚丁酸0.2～0.3mg，培养条件：温度25±2℃，光强2500～3000Lx、时间16小时/天；(3)将步骤(2)中幼苗切下，接入生根培养基中培养，所述的生根培养基为在1升1/3MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g琼脂粉5g吲哚丁酸0.4～0.5mg，培养条件：温度25±2℃，光强2500～3000Lx、时间24h/d；(4)炼苗培养和移栽包括如下环节：闭瓶锻炼、开瓶锻炼、移栽到蛭石基质、移栽到由森林土、细砂、腐熟有机肥组成的营养土中。
优选的，所述诱导培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.2mg吲哚丁酸0.1mg；所述的增殖培养基为在1升MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.5mg吲哚丁酸0.2mg；所述的生根培养基为在1升1/3MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g琼脂粉5g吲哚丁酸0.5mg。
针对培养基组成及其配比与无菌系建立、扩繁继代培养、生根培养等阶段培养效果的关系或影响，发明人做了实验研究，为了进一步阐述本发明，将实验数据和研究结果分述如下：
1、激素对瓶苗增殖的影响
在MS基本培养基中加入不同浓度的6-BA(6-苄氨基嘌呤)和IBA(吲哚丁酸)配制成相应的增殖培养基，每种培养基接50株，置于温度25±2℃、光强2500～3000Lx的培养室中，时间16h/d进行增殖培养，一个月后统计实验结果(见表1)。
表1不同浓度6-BA(6-苄氨基嘌呤)和IBA(吲哚丁酸)对瓶苗增殖的影响
注：扩繁系数为新增殖瓶苗的平均数。
| 培养基号 | 6-BA(mg/L) | IBA(mg/L) | 扩繁系数 |
| 1 | 0.4 | 0.2 | 4.7 |
| 2 | 0.4 | 0.3 | 4.4 |
| 3 | 0.5 | 0.2 | 5.8 |
| 4 | 0.5 | 0.3 | 5.5 |
实验结论：表1结果表明当6-BA(6-苄氨基嘌呤)浓度为0.5mg/L、IBA(吲哚丁酸)浓度为0.2mg/L时瓶苗扩繁系数最高且组培苗生长健壮，叶色浓绿。
2、激素对生根的影响
在1/3MS中加入不同浓度的IBA(吲哚丁酸)配制成相应的生根培养基。每种培养基接50株，置于温度23℃，光强2500Lx，时间24小时/天进行生根培养，一个月后统计实验结果(见表2)。
表2不同浓度IBA(吲哚丁酸)对瓶苗生根的影响
| 培养基号 | IBA(mg/L) | 生根株数 | 生根率(％) |
| 1 | 0.3 | 36 | 72.0 |
| 2 | 0.4 | 39 | 78.0 |
| 3 | 0.5 | 41 | 82.0 |
| 4 | 0.6 | 43 | 86.0 |
实验结论：表2结果表明当IBA(吲哚丁酸)浓度为0.5mg/L时瓶苗生根率达82.0％，且根洁白、粗壮、整齐；当IBA(吲哚丁酸)浓度为0.6mg/L时虽然生根率有所提高，但是根色发黄，且根的发育呈现畸形。
本发明的有益效果是，本发明采用了适合于ZY-1樱桃砧木快速繁殖的增殖培养基和生根培养基，增殖和生根效果好，使ZY-1樱桃砧木得生根率达到82％以上，而且根系粗壮整齐，同时组培苗生长健壮，叶色浓绿，有效地节约了人力物力，移栽成活率可达85％，为工厂化生产奠定了基础。本发明栽培方法具有简便易行、简化了程序、提高了工效、降低了成本等优点，适用于ZY-1樱桃砧木的快速繁殖。
具体实施方式
实施例1
一种樱桃砧木ZY-1组培快速育苗方法，它包括以下步骤：
(1)组培苗的制备
从苗圃选取一年生ZY-1樱桃砧木优良单株的顶芽或侧芽，流水冲洗干净，滤纸吸干，在超净工作台上将取下的顶芽或侧芽在75％酒精中浸泡10秒，无菌水冲洗3次，然后置入0.1％HgCl2消毒3分钟，用无菌滤纸吸干，切成1个芽的茎段，作为外植体插入诱导培养基中进行诱导培养，该诱导培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：
白砂糖30g
琼脂粉 5g
6-苄氨基嘌呤 0.2mg
吲哚丁酸 0.1mg
(2)增殖培养
当步骤(1)中芽长至1.5cm，有3片真叶时，将苗转入增殖培养基中，置于温度23℃、光强2500Lx培养室中，时间16小时/天培养一个月进行快速繁殖使芽苗增殖，该增殖培养基为在1升基本培养基中加入下述原料及其配比制成：
白砂糖 30g
琼脂粉 5g
6-苄氨基嘌呤 0.4mg
吲哚丁酸 0.2mg
(3)生根培养
将步骤(2)中2.0cm左右生长健壮的幼苗切下接入生根培养基中，置于温度23℃，光强2500Lx，时间24小时/天进行生根培养，所用的生根培养基为在1升1/3MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成：
白砂糖 30g
琼脂粉 5g
吲哚丁酸 0.4mg
(4)炼苗移栽
将步骤(3)中生根的瓶苗，放入温度为20℃，湿度为75％的温室内，温室中炼苗5天，然后打开封口膜，在培养瓶内灌入0.5cm高的凉水，炼苗5天，洗去根部残留的培养基，然后在500mg/L的50％多菌灵可湿性粉剂溶液中浸蘸以下，再移入无菌蛭石介质中，置于温室内搭建的小拱棚内，保持棚内温度18℃，相对湿度90％以上，一周后在小拱棚棚膜上划小口透气，15天后逐渐揭膜通风，在此期间喷洒1000倍多菌灵溶液喷淋苗木，待苗木明显生长时，将苗木单株移入基质为森林土∶细砂∶腐熟有机肥1∶1∶0.5的营养基质中，移入温室外遮阴棚中，使苗木逐渐适应露地生长环境，等小苗在营养钵中长到10cm左右，根系带土移入大田，栽培管理参照大田育苗方法。
实施例2
一种樱桃砧木ZY-1组培快速育苗方法，它包括以下步骤：
(1)组培苗的制备
从苗圃选取一年生ZY-1樱桃砧木优良单株的顶芽或侧芽，流水冲洗干净，滤纸吸干，在超净工作台上将取下的顶芽或侧芽在75％酒精中浸泡30秒，无菌水冲洗4次，然后置入0.1％HgCl2消毒5分钟，用无菌滤纸吸干，切成2个芽的茎段，作为外植体插入诱导培养基中进行诱导培养，该诱导培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：
白砂糖 30g
琼脂粉 5g
6-苄氨基嘌呤 0.3mg
吲哚丁酸 0.2mg
(2)增殖培养
当步骤(1)中芽长至3cm，有5片真叶时，将苗转入增殖培养基中，置于温度27℃、光强3000Lx培养室中，光照时间16小时/天培养一个月进行快速繁殖使芽苗增殖，该增殖培养基为在1升基本培养基中加入下述原料及其配比制成：
白砂糖 30g
琼脂粉 5g
6-苄氨基嘌呤 0.5mg
吲哚丁酸 0.3mg
(3)生根培养
将步骤(2)中2.0cm左右生长健壮的幼苗切下接入生根培养基中，置于温度27℃、光强3000Lx、光照时间24小时/天进行生根培养，所用的生根培养基为在1升1/3MS基本培养基中加入下述的原料及其配比制成：
白砂糖 30g
琼脂粉 5g
吲哚丁酸 0.5mg
(4)炼苗移栽
将步骤(3)中生根的瓶苗，放入温度为25℃，湿度为90％的温室内，温室中炼苗7天，然后打开封口膜，在培养瓶内灌入0.5cm高的凉水，炼苗10天，洗去根部残留的培养基，然后在500mg/L的50％多菌灵可湿性粉剂溶液中浸蘸以下，再移入无菌蛭石介质中，置于温室内搭建的小拱棚内，保持棚内温度28℃，相对湿度90％以上，一周后在小拱棚棚膜上划小口透气，15天后逐渐揭膜通风，在此期间喷洒1000倍多菌灵溶液喷淋苗木，待苗木明显生长时，将苗木单株移入基质为森林土∶细砂∶腐熟有机肥1∶1∶0.5的营养基质中，移入温室外遮阴棚中，使苗木逐渐适应露地生长环境，等小苗在营养钵中长到10cm左右，根 系带土移入大田，栽培管理参照大田育苗方法。
实施例3
一种樱桃砧木ZY-1组培快速育苗方法，它包括以下步骤：
(1)组培苗的制备
从苗圃选取一年生ZY-1樱桃砧木优良单株的顶芽或侧芽，流水冲洗干净，滤纸吸干，在超净工作台上将取下的顶芽或侧芽在75％酒精中浸泡20秒，无菌水冲洗3次，然后置入0.1％HgCl2消毒4分钟，用无菌滤纸吸干，切成2个芽的茎段，作为外植体插入诱导培养基中进行诱导培养，该诱导培养基与实施例1相同。
(2)增殖培养
当步骤(1)中芽长至2cm，有4片真叶时，将苗转入增殖培养基中，置于温度25℃、光强2800Lx培养室中，时间16小时/天培养一个月进行快速繁殖使芽苗增殖，该增殖培养基为在1升基本培养基中加入下述原料及其配比制成：
白砂糖 30g
琼脂粉 5g
6-苄氨基嘌呤 0.5mg
吲哚丁酸 0.2mg
(3)生根培养
将步骤(2)中2.0cm左右生长健壮的幼苗切下接入生根培养基中，置于温度25℃，光强2700Lx，时间24小时/天进行生根培养，该生根培养基与实施例2相同。
(4)炼苗移栽
将步骤(3)中生根的瓶苗，放入温度为23℃，湿度为83％的温室内，温室中炼苗6天，然后打开封口膜，在培养瓶内灌入0.5cm高的凉水，炼苗8天，洗去根部残留的培养基，然后在500mg/L的50％多菌灵可湿性粉剂溶液中浸蘸以下，再移入无菌蛭石介质中，置于温室内搭建的小拱棚内，保持棚内温度23℃，相对湿度90％以上，一周后在小拱棚棚膜上划小口透气，15天后逐渐揭膜通风， 在此期间喷洒1000倍多菌灵溶液喷淋苗木，待苗木明显生长时，将苗木单株移入基质为森林土∶细砂∶腐熟有机肥1∶1∶0.5的营养基质中，移入温室外遮阴棚中，使苗木逐渐适应露地生长环境，等小苗在营养钵中长到10cm左右，根系带土移入大田，栽培管理参照大田育苗方法。
Claims (2)
1.一种樱桃砧木ZY-1组培快速育苗方法，其特征在于，它包括以下步骤：(1)取一年生樱桃砧木ZY-1幼树顶芽或侧芽，消毒后接种在诱导培养基上培养，所述诱导培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g 琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.2～0.3mg 吲哚丁酸0.1～0.2mg，培养条件：温度23±1℃，光强2000～2500Lx、时间16小时/天；(2)取步骤(1)中生长芽丛茎尖接种到增殖培养基上培养，所述的增殖培养基为在1升MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g 琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.4～0.5mg 吲哚丁酸0.2～0.3mg，培养条件：温度25±2℃，光强2500～3000Lx、时间16小时/天；(3)将步骤(2)中幼苗切下，接入生根培养基中培养，所述的生根培养基为在1升1/3MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g 琼脂粉5g 吲哚丁酸0.4～0.5mg，培养条件：温度25±2℃，光强2500～3000Lx、时间24小时/天；(4)炼苗培养和移栽包括如下环节：闭瓶锻炼、开瓶锻炼、移栽到蛭石基质、移栽到由森林土、细砂、腐熟有机肥组成的营养土中。
2.根据权利要求1所述的樱桃砧木ZY-1组培快速育苗方法，其特征在于，所述诱导培养基为在1升1/2MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g 琼脂粉5g 6-苄氨基嘌呤0.2mg 吲哚丁酸0.1mg；所述的增殖培养基为在1升MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g 琼脂粉5g6-苄氨基嘌呤0.5mg 吲哚丁酸0.2mg；所述的生根培养基为在1升1/3MS基本培养基中加入下述原料及其配比制成：白砂糖30g 琼脂粉5g 吲哚丁酸0.5mg。
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