CN110558172A - 一种草莓脱毒组培苗繁育方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于种苗培育技术领域，公开了一种草莓脱毒组培苗繁育方法，草莓苗移栽、病虫害防治、施肥等田间管理工作，在马铃薯中心网室移栽脱毒苗2000株，在渝北区草莓基地移栽脱毒苗19500株；利用高山低温气候促进草莓花芽分化，加上精细化管理，增施有机肥、生物菌肥，换地防病，合理灌溉等措施，繁育优质壮苗，为冬草莓生产提供优质脱毒原种苗。本发明缩短了脱毒种苗生产周期，降低了生产成本，提高了种苗质量；利用高山低温气候促进草莓花芽分化，加上精细化管理，增施有机肥、生物菌肥，换地防病，合理灌溉等措施，繁育优质壮苗，为冬草莓生产提供优质脱毒原种苗。

Description

一种草莓脱毒组培苗繁育方法

技术领域

本发明属于种苗培育技术领域，尤其涉及一种草莓脱毒组培苗繁育方法。

背景技术

目前，最接近的现有技术：草莓是重要的浆果类果树，果实外观鲜艳，风味独特，营养价值高，用途广，素有“水果皇后”之美誉；其生产周期短、见效快、收益高等特点，在国内外被广泛种植，其栽培面积和产量在世界小浆果生产中一直居于首位。据世界粮农组织(FAO)统计资料显示：2013年全世界草莓栽培面积为542.49万亩，产量达到773.96万吨；其中，我国草莓的种植面积和总产量分别为164.91万亩和299.75万吨，各占世界草莓总面积和总产量的30.40％和38.73％，双双位居世界第一。

我国每年需脱毒原种苗1.6亿株以上，据不完全统计我国脱毒原种苗年生产约0.15亿株，脱毒原种苗的市场缺口达到98％。生产草莓所需的种苗主要通过分株等无性繁殖方式获得，但长时间的自繁自育，导致品种老化、种苗带毒、连作病害等问题突出，其中病毒病导致减产30～80％。目前国内草莓脱毒原种苗主要利用生物技术组培快繁，技术要求难掌握，不易普及，数量受限制，远远不能满足市场需求。此外草莓是无性繁殖，繁育市场混乱，脱毒原种苗、脱毒种苗、普通种苗以及生产苗混淆不清，加之种苗繁育技术落后，导致品种退化，病菌率高，质量差。同时尚未建立草莓脱毒种苗繁育体系，草莓生产中种苗长期依靠外调，种苗成本高，急需发展草莓脱毒种苗繁育体系。

因此培育健壮优质的脱毒种苗，破解制约草莓产业发展瓶颈的对策是普及推广脱毒种苗繁育技术。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)通过无性繁殖方式获得的种苗，由于长时间的自繁自育，导致品种老化、种苗带毒、连作病害等问题突出，其中病毒病导致减产30～80％。

(2)现有利用生物技术组培快繁的技术，要求难掌握，不易普及，数量受限制，远远不能满足市场需求，同时试管苗移栽初期灰霉病发生严重。

(3)现有脱毒原种苗、脱毒种苗、普通种苗以及生产苗混淆不清，加之种苗繁育技术落后，导致品种退化，病菌率高，质量差；同时还存在品种单一、病虫害发生严重、盲目用药等问题。

(4)草莓脱毒种苗生产存在空白，缓解脱毒种苗长期依靠外调，用苗成本高，质量难以保证。

解决上述技术问题的难度及意义：

利用新的草莓脱毒组培苗繁育方法，可实现草莓优质脱毒种苗快速繁育，缩短育苗周期，降低生产成本，填补草莓脱毒种苗生产空白，有效促进草莓脱毒种苗繁育体系建设，缓解了脱毒种苗长期依靠外调，用苗成本高，质量难以保证等问题。通过脱毒种苗及高产栽培技术示范、科技培训、科普宣传等手段，推广优质脱毒种苗，提高种植户技术水平，实现草莓增产提质，提高经济效益，有效带动农民增收致富。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种草莓脱毒组培苗繁育方法。

本发明是这样实现的，一种草莓脱毒组培苗繁育方法，所述草莓脱毒组培苗繁育方法包括以下步骤：

第一步，草莓苗移栽、病虫害防治、施肥等田间管理工作，在马铃薯中心网室移栽脱毒苗2000株，在渝北区草莓基地移栽脱毒苗19500株；

第二步，利用高山低温气候促进草莓花芽分化，加上精细化管理，增施有机肥、生物菌肥，换地防病，合理灌溉等措施，繁育优质壮苗，为冬草莓生产提供优质脱毒原种苗。

进一步，所述草莓脱毒组培苗繁育方法脱毒草莓苗病毒检测，对红颜、隋珠、京藏香三个品种进行采样，病毒检测。

进一步，所述草莓脱毒组培苗繁育方法4月初将红颜、隋珠、王妃3个优良品种的脱毒原原种苗3000苗移栽到武隆区仙女山镇海拔1300米以上的高山地区进行扩繁。

进一步，所述草莓脱毒组培苗繁育方法具体还包括以下步骤：

(1)茎尖剥离及接种

取草莓新生匍匐茎顶端长约2㎝的茎尖，清洗消毒后，用无菌刀片切取0.2㎜～0.5㎜大小的茎尖组织，接种在分化培养基上(MS+6-BA0.5mg/L)，在(23±2)℃、光照强度2400lx、每天光照14～16h的培养室中培养2个月。

(2)分化培养

待茎尖分化成带有叶原基的小芽后，将小芽转移到新鲜的分化培养基上继续培养；当小芽长出叶片后，将带有叶片的小芽转移到成苗培养基上(MS+6-BA0.3mg/L)，大约培养2个月后分化成成苗丛；从苗丛上剪取叶片进行病毒检测，淘汰感染病毒的苗丛，保留无病毒苗丛。

(3)生根和炼苗

从脱毒苗丛上剪取株高在2㎝以上的试管苗，将试管苗基部的小芽切除，然后接种在生根培养基中(1/2MS+IB0.04mg/L)，进行生根培养30～40d后，将培养容器置于100目纱网的练苗室中，炼苗1周。

炼苗后，用镊子从培养容器中取出生根的试管苗，洗去试管苗根部附着的培养基，然后移栽入盛有营养基质的穴盘中，浇透水；营养基质配置方法：将草炭、蛭石、细土、有机肥按(体积)5:2:2:1的比例混合，按1㎏/m³加入氮磷钾(20～5～10)复合肥，混匀，过筛，高温蒸汽消毒后备用。

在穴盘上方搭建小拱棚，用塑料薄膜覆盖，初期适当遮阳，后期逐渐通风和增加光照；温度控制在15℃～25℃，空气相对湿度控制在85～90％；喷施多粘类芽孢杆菌生物菌肥2～3次；移栽6周后撤除薄膜，移栽大约8周后试管苗发育成可以定植的脱毒原原种苗；对脱毒原原种苗进行1次病毒抽样检测，要求感染率不超过5％为合格。

(4)脱毒原原种苗保存

将脱毒原原种苗定植在盛有营养基质的栽种容器中；容器长1米、宽60㎝、高40㎝；每个容器定植1株脱毒原原种苗；在开花结果期，观察脱毒原原种苗的植物学性状和生物学性状是否发生变异，淘汰有变异的植株；每年春季对脱毒原原种苗进行1次病毒检测，淘汰感染病毒的植株。

进一步，所述脱毒试管苗高山越夏扩繁具体包括以下步骤：

将前期组培生产的原原种穴盘苗运到高山地区进行扩繁，生产脱毒原种苗，利用高山低温气候促进草莓花芽分化，加上精细化管理，增施有机肥、生物菌肥，换地防病，合理灌溉等措施，繁育优质壮苗。

(1)育苗地选择

选择海拔1000米以上，地势平坦、土质疏松、有机质含量高、排灌方便、光照充足，无土壤线虫及草莓病源且3年内未种植过草莓的地块作为脱毒种苗的繁育苗圃；注意轮作，每2年更换一次育苗地。

(2)整地施肥

配合整地，每667㎡施入腐熟的有机肥1000㎏，深翻、平整土地，耕匀耙细后做畦，畦宽1m～1.2m；于畦中间位置培土做窝，窝距60㎝～80㎝，定植前每窝施入氮磷钾(20-5-10)复合肥5g。

(3)定植

选择健壮、无病虫害的脱毒原种苗或脱毒原原种苗作为母株，外观形态要求矮壮、茎粗，根系完整，新根多；在春季气温达到10℃以上时，单行定植于畦中间，株距60㎝～80㎝，每亩1000株；栽植时使根系朝四方自然伸展，栽植深度以“上不埋心，下不露根”为宜。

(4)田间管理

夏季注意预防高温干旱，提前修建蓄水池保证水源充足，采取桔梗覆盖、搭遮阳网等措施保墒降温；进入旺盛生长期(匍匐茎发生期)，追施1～2次氮磷钾(20-5-10)复合肥，每亩每次用量控制在5～8千克，切忌高氮。

摘除花序；定植后，及时摘除母株上的花蕾花序，并经常摘除老叶、病叶。

匍匐茎整理；匍匐茎要保持一定间距，匍匐茎大量发生时，将相互靠近的匍匐茎拉开使其分布均匀；同时用土把匍匐茎上发生的不定根茎节段压稳，使不定根及时扎入土中。

(5)病毒检测

委托病毒检测机构定期对繁殖的脱毒种苗进行病毒抽样检测，要求病毒感染率不超过20％方为合格。

综上所述，本发明的优点及积极效果为：

本发明依托“脱毒草莓二级良种繁育技术”成果，通过“组培脱毒+高山越夏扩繁”进行草莓优质脱毒种苗快速繁育，缩短育苗周期，降低生产成本，提高种苗质量，填补草莓脱毒种苗生产空白，为草莓生产提供优质脱毒种苗，有效促进草莓脱毒种苗繁育体系建设，缓解脱毒种苗长期依靠外调，用苗成本高，质量难以保证等问题。通过脱毒种苗及高产栽培技术示范、科技培训、科普宣传等手段，推广优质脱毒种苗，提高草莓产量、品质及种植户技术水平，示范带动草莓脱毒育苗产业发展，实现草莓增产提质，提高经济效益，有效带动农民增收致富。

本发明实现脱毒种苗快繁技术集成。集成一套包括组培配方优化，穴盘苗基质配比，苗圃肥、水、温、光、病害管理，高山大田扩繁栽培及田间管理技术在内的优质脱毒种苗繁育技术。通过施用枯草芽孢杆菌生物菌肥，有效解决试管苗移栽初期灰霉病发生严重的问题，且幼苗生长健壮，有效提高存活率和种苗质量。通过高山越夏扩繁，避开低海拔地区夏季高温干旱的不利气候影响，利用高山低温气候促进草莓花芽分化，加上精细化管理，平衡施肥，增施有机肥、生物菌肥，换地防病，合理灌溉，病虫害防控，匍匐茎管理等措施，提高繁殖系数，繁育优质脱毒壮苗，为冬草莓生产提供优质脱毒原种苗。

实施生产的红颜、隋珠原种苗定价为0.8元/株，与市场价1-1.2元相比，本发明每株可降低用苗成本0.2-0.4元，按每亩栽种8000株计算，可节省用苗成本1600元-3200元/亩。草莓平均亩产量原来仅830公斤，通过使用脱毒种苗，可增产200公斤/亩以上。按批发价20元/公斤计算，可增收4000元/亩，按采摘价50元/公斤计算，可增收10000元/亩，增产增收效益显著。使用脱毒种苗可大大减轻病虫害发生率，减少经济损失，节约用药等病虫害管理成本。

通过推广应用本发明的脱毒种苗技术，可有效降低白粉病、灰霉病、病毒病、螨类等病虫害发生率，大幅减少农药使用量，实现无公害生产，减少环境污染，提高果品质量安全，有利于食品安全和生态安全，让消费者吃上放心优质的草莓，具有良好的社会效益和生态效益。

附图说明

图1是本发明实施例提供的草莓脱毒组培苗繁育方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种草莓脱毒组培苗繁育方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。

如图1所示，本发明实施例提供的草莓脱毒组培苗繁育方法包括以下步骤：

S101：草莓苗移栽、病虫害防治、施肥等田间管理工作，在马铃薯中心网室移栽脱毒苗2000株，在渝北区草莓基地移栽脱毒苗19500株；

S102：利用高山低温气候促进草莓花芽分化，加上精细化管理，增施有机肥、生物菌肥，换地防病，合理灌溉等措施，繁育优质壮苗，为冬草莓生产提供优质脱毒原种苗。

本发明实施例提供的草莓脱毒组培苗繁育方法具体还包括：

(1)茎尖剥离及接种

取草莓新生匍匐茎顶端长约2㎝的茎尖，清洗消毒后，用无菌刀片切取0.2㎜～0.5㎜大小的茎尖组织，接种在分化培养基上(MS+6-BA0.5mg/L)，在(23±2)℃、光照强度2400lx、每天光照14～16h的培养室中培养2个月。

(2)分化培养

待茎尖分化成带有叶原基的小芽后，将小芽转移到新鲜的分化培养基上继续培养。当小芽长出叶片后，将带有叶片的小芽转移到成苗培养基上(MS+6-BA0.3mg/L)，大约培养2个月后分化成成苗丛。从苗丛上剪取叶片进行病毒检测，淘汰感染病毒的苗丛，保留无病毒苗丛。

(3)生根和炼苗

从脱毒苗丛上剪取株高在2㎝以上的试管苗，将试管苗基部的小芽切除，然后接种在生根培养基中(1/2MS+IB0.04mg/L)，进行生根培养30～40d后，将培养容器置于100目纱网的练苗室中，炼苗1周。

炼苗后，用镊子从培养容器中取出生根的试管苗，洗去试管苗根部附着的培养基，然后移栽入盛有营养基质的穴盘中，浇透水。营养基质配置方法：将草炭、蛭石、细土、有机肥按(体积)5:2:2:1的比例混合，按1㎏/m³加入氮磷钾(20～5～10)复合肥，混匀，过筛，高温蒸汽消毒后备用。

在穴盘上方搭建小拱棚，用塑料薄膜覆盖，初期适当遮阳，后期逐渐通风和增加光照。温度控制在15℃～25℃，空气相对湿度控制在85～90％。喷施多粘类芽孢杆菌生物菌肥2～3次，可有效促进植株健康生长，增强抗病性，提高成活率。移栽6周后撤除薄膜，移栽大约8周后试管苗发育成可以定植的脱毒原原种苗。对脱毒原原种苗进行1次病毒抽样检测，要求感染率不超过5％为合格。

(4)脱毒原原种苗保存

将脱毒原原种苗定植在盛有营养基质的栽种容器中。容器长1米、宽60㎝、高40㎝。每个容器定植1株脱毒原原种苗。在开花结果期，观察脱毒原原种苗的植物学性状和生物学性状是否发生变异，淘汰有变异的植株。每年春季对脱毒原原种苗进行1次病毒检测，淘汰感染病毒的植株。

本发明实施例提供的脱毒试管苗高山越夏扩繁具体包括：

将前期组培生产的原原种穴盘苗运到高山地区进行扩繁，生产脱毒原种苗，利用高山低温气候促进草莓花芽分化，加上精细化管理，增施有机肥、生物菌肥，换地防病，合理灌溉等措施，繁育优质壮苗。

(1)育苗地选择

选择海拔1000米以上，地势平坦、土质疏松、有机质含量高、排灌方便、光照充足，无土壤线虫及草莓病源且3年内未种植过草莓的地块作为脱毒种苗的繁育苗圃。注意轮作，每2年更换一次育苗地，可减少病害积累，提高种苗质量。

(2)整地施肥

配合整地，每667㎡施入腐熟的有机肥1000㎏，深翻、平整土地，耕匀耙细后做畦，畦宽1m～1.2m。于畦中间位置培土做窝，窝距60㎝～80㎝，定植前每窝施入氮磷钾(20-5-10)复合肥5g左右。

(3)定植

选择健壮、无病虫害的脱毒原种苗或脱毒原原种苗作为母株，外观形态要求矮壮、茎粗，根系完整，新根多。在春季气温达到10℃以上时，单行定植于畦中间，株距60㎝～80㎝，每亩1000株左右。栽植时使根系朝四方自然伸展，栽植深度以“上不埋心，下不露根”为宜。

(4)田间管理

夏季注意预防高温干旱，提前修建蓄水池保证水源充足，可采取桔梗覆盖、搭遮阳网等措施保墒降温。进入旺盛生长期(匍匐茎发生期)，追施1～2次氮磷钾(20-5-10)复合肥，每亩每次用量控制在5～8千克，切忌高氮。

摘除花序。定植后，及时摘除母株上的花蕾花序，使养分集中，促进母株的营养生长及抽生匍匐茎。并经常摘除老叶、病叶，利于植株通风、透光，促进母株和子苗健壮生长。

匍匐茎整理。匍匐茎要保持一定间距，匍匐茎大量发生时，将相互靠近的匍匐茎拉开使其分布均匀，防止交叉或重叠在一起。同时可用土把匍匐茎上发生的不定根茎节段压稳，使不定根及时扎入土中。

(5)病毒检测

委托病毒检测机构定期对繁殖的脱毒种苗进行病毒抽样检测，要求病毒感染率不超过20％方为合格。

下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述。

实施例1

本发明利用重庆市农业技术推广总站所属重庆市薯类脱毒种苗快繁中心原有组培室、网室等设施设备，累计生产红颜、隋珠、王妃、京藏香等优良品种草莓脱毒组培苗达3.6万株；建设脱毒草莓炼苗圃1个300平方米；在武隆区仙女山镇建立高山越夏繁育基地1个，面积15亩，生产草莓原种苗100万株；在渝北区兴隆镇建设高产栽培技术示范基地1个，面积20亩，辐射带动200亩。

实施例2

本发明实施例进行红颜、隋珠2个品种的脱毒种苗快速育苗，缩短脱毒种苗生产周期，降低生产成本，提高种苗质量；生产了红颜、隋珠脱毒草莓试管苗4000苗；在武隆基地种植脱毒原原种苗3000苗；在武隆区仙女山镇草莓越夏繁殖基地生产脱毒草莓种苗4万多苗。在渝北区兴隆镇建设高产栽培技术示范基地1个，面积20亩，辐射带动200亩。指导基地开展草莓苗移栽、病虫害防治、施肥等田间管理工作，在马铃薯中心网室移栽脱毒苗2000株，在渝北区草莓基地移栽脱毒苗19500株。开展脱毒草莓苗病毒检测工作，到武隆、彭水草莓育苗基地对红颜、隋珠、京藏香三个品种进行采样，并委托西南大学植保学院进行病毒检测。

实施例3

本发明实施例进行草莓脱毒组培苗繁育，生产红颜、隋珠、王妃草莓脱毒试管苗3000苗。4月初将红颜、隋珠、王妃3个优良品种的脱毒原原种苗3000苗移栽到武隆区仙女山镇海拔1300米以上的高山地区进行扩繁，以避开重庆低海拔地区夏季高温干旱的不利气候，利用高山低温气候促进草莓花芽分化，加上精细化管理，增施有机肥、生物菌肥，换地防病，合理灌溉等措施，繁育优质壮苗，为冬草莓生产提供优质脱毒原种苗。基地扩繁脱毒草莓苗5亩。

实施例4

本发明实施例通过调研筛选出栽培面积较广，种苗需求量较大的优良草莓品种1-2个，要求具有早熟(12月上市)、高产(1000公斤以上)、抗病(抗白粉病)、优质(果型好、甜度适宜、硬度高)的品种特性。

建立草莓脱毒种苗二级良繁体系。对筛选出的1-2个优质品种建立脱毒快繁体系，通过茎尖剥离和病毒检测获得草莓脱毒试管苗(一级)，组培快繁脱毒组培苗3万株；建立草莓脱毒种苗越夏繁育基地15亩，繁殖原种种苗100万株以上，能满足渝北区草莓种植户生产需要。

开展草莓优质高产栽培技术集成示范。示范面积20亩，辐射带动200亩；草莓亩产达1000公斤以上，较我市草莓平均亩产830公斤增产20％以上。

实施例5：试验及试用规模

草莓茎尖剥离、脱毒苗扩繁试验：依托重庆市马铃薯工程技术研究中心现有设施设备，开展草莓茎尖剥离和脱毒苗扩繁培养基配方优化试验。

草莓脱毒种苗越夏快繁技术试验：试验面积1亩，开展密度、水肥、病虫害防治等试验，集成草莓脱毒种苗越夏快繁技术1个。

组织草莓优质高产栽培技术培训2次，培训基层技术人员10人次，生产大户和农户40人次；组织科普宣传1次。

为进一步推动项目优质脱毒种苗及配套高产优质栽培技术在生产中大面积推广应用，通过田间现场观摩培训和发放技术资料等方式，对种苗繁育基地、高产技术核心示范片技术骨干和种植大户进行技术培训，以点带面，提高技术人员专业技能和果农的田间栽培科学管理水平，推动当地及周边地区草莓产业的健康快速发展。项目执行期内，在武隆区开展技术培训2次，培训农技人员、种植大户及农户58人次。在渝北区开展技术培训1次，培训农户及种植大户26人次，累计示范带动推广种植草莓脱毒种苗200亩，新增产值504万元。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种草莓脱毒组培苗繁育方法，其特征在于，所述草莓脱毒组培苗繁育方法包括以下步骤：

第一步，草莓苗移栽、病虫害防治、施肥等田间管理工作，在马铃薯中心网室移栽脱毒苗2000株，在渝北区草莓基地移栽脱毒苗19500株；

第二步，利用高山低温气候促进草莓花芽分化，加上精细化管理，增施有机肥、生物菌肥，换地防病，合理灌溉等措施，繁育优质壮苗，为冬草莓生产提供优质脱毒原种苗。

2.如权利要求1所述的草莓脱毒组培苗繁育方法，其特征在于，所述草莓脱毒组培苗繁育方法脱毒草莓苗病毒检测，对红颜、隋珠、京藏香三个品种进行采样，病毒检测；所述生物菌肥为枯草芽孢杆菌生物菌肥。

3.如权利要求1所述的草莓脱毒组培苗繁育方法，其特征在于，所述草莓脱毒组培苗繁育方法4月初将红颜、隋珠、王妃3个优良品种的脱毒原原种苗3000苗移栽到武隆区仙女山镇海拔1300米以上的高山地区进行扩繁。

4.如权利要求1所述的草莓脱毒组培苗繁育方法，其特征在于，所述草莓脱毒组培苗繁育方法还包括：

取优良草莓品种的新生匍匐茎顶端为外植体，经消毒后进行茎尖剥离，将茎尖放入诱导培养基中诱导出小芽，将小芽放入分化培养基中分化出苗丛，经病毒检测后不带病毒的小苗进行生根培养后移栽，同时开展脱毒原原种苗保存工作。

5.如权利要求4所述的草莓脱毒组培苗繁育方法，其特征在于，所述草莓脱毒组培苗繁育方法具体包括以下步骤：

(1)茎尖剥离及接种

取草莓新生匍匐茎顶端长2㎝的茎尖，清洗消毒后，用无菌刀片切取0.2㎜～0.5㎜大小的茎尖组织，接种在分化培养基MS+6-BA0.5mg/L上，在23℃±2℃、光照强度2400lx、每天光照14～16h的培养室中培养2个月；

(2)分化培养

待茎尖分化成带有叶原基的小芽后，将小芽转移到新鲜的分化培养基上继续培养；当小芽长出叶片后，将带有叶片的小芽转移到成苗培养基MS+6-BA0.3mg/L上，大约培养2个月后分化成成苗丛；从苗丛上剪取叶片进行病毒检测，淘汰感染病毒的苗丛，保留无病毒苗丛；

(3)生根和炼苗

从脱毒苗丛上剪取株高在2㎝以上的试管苗，将试管苗基部的小芽切除，然后接种在生根培养基1/2MS+IB0.04mg/L中，进行生根培养30～40d后，将培养容器置于100目纱网的练苗室中，炼苗1周；

炼苗后，用镊子从培养容器中取出生根的试管苗，洗去试管苗根部附着的培养基，然后移栽入盛有营养基质的穴盘中，浇透水；营养基质配置方法：将草炭、蛭石、细土、有机肥按体积5:2:2:1的比例混合，按1㎏/m³加入氮磷钾20～5～10复合肥，混匀，过筛，高温蒸汽消毒后备用；

在穴盘上方搭建小拱棚，用塑料薄膜覆盖，初期适当遮阳，后期逐渐通风和增加光照；温度控制在15℃～25℃，空气相对湿度控制在85～90％；喷施多粘类芽孢杆菌生物菌肥2～3次；移栽6周后撤除薄膜，移栽8周后试管苗发育成定植的脱毒原原种苗；对脱毒原原种苗进行1次病毒抽样检测，要求感染率不超过5％为合格；

(4)脱毒原原种苗保存

将脱毒原原种苗定植在盛有营养基质的栽种容器中；容器长1米、宽60㎝、高40㎝；每个容器定植1株脱毒原原种苗；在开花结果期，观察脱毒原原种苗的植物学性状和生物学性状是否发生变异，淘汰有变异的植株；每年春季对脱毒原原种苗进行1次病毒检测，淘汰感染病毒的植株。

6.如权利要求3所述的草莓脱毒组培苗繁育方法，其特征在于，所述脱毒试管苗高山越夏扩繁具体包括以下步骤：

将前期组培生产的原原种穴盘苗运到高山地区进行扩繁，生产脱毒原种苗，利用高山低温气候促进草莓花芽分化，加上精细化管理，增施有机肥、生物菌肥，换地防病，合理灌溉措施，繁育优质壮苗；

(1)育苗地选择

选择海拔1000米以上，地势平坦、土质疏松、有机质含量高、排灌方便、光照充足，无土壤线虫及草莓病源且3年内未种植过草莓的地块作为脱毒种苗的繁育苗圃；每2年更换一次育苗地；

(2)整地施肥

配合整地，每667㎡施入腐熟的有机肥1000㎏，深翻、平整土地，耕匀耙细后做畦，畦宽1m～1.2m；于畦中间位置培土做窝，窝距60㎝～80㎝，定植前每窝施入氮磷钾20-5-10复合肥5g；

(3)定植

选择健壮、无病虫害的脱毒原种苗或脱毒原原种苗作为母株，外观形态要求矮壮、茎粗，根系完整，新根多；在春季气温达到10℃以上时，单行定植于畦中间，株距60㎝～80㎝，每亩1000株；栽植时使根系朝四方自然伸展，栽植深度上不埋心，下不露根；

(4)田间管理

夏季注意预防高温干旱，提前修建蓄水池保证水源充足，采取桔梗覆盖、搭遮阳网措施保墒降温；进入旺盛生长期，追施1～2次氮磷钾20-5-10复合肥，每亩每次用量控制在5～8千克，切忌高氮；

摘除花序；定植后，及时摘除母株上的花蕾花序，并经常摘除老叶、病叶；

匍匐茎整理；匍匐茎要保持间距，匍匐茎大量发生时，将相互靠近的匍匐茎拉开使其分布均匀；同时用土把匍匐茎上发生的不定根茎节段压稳，使不定根及时扎入土中；

(5)病毒检测

委托病毒检测机构定期对繁殖的脱毒种苗进行病毒抽样检测，要求病毒感染率不超过20％为合格。