CN105993947A - 草莓的脱毒方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了草莓的脱毒方法，是将草莓在35℃下热处理7d后,逐步升温至38℃,在湿度40%～68%、光照度4 000～5 000 Lx条件下热处理35 d后,将长出的新茎茎尖再行组培,即可获得100%的脱毒苗。本发明提供的草莓脱毒方法，具有以下有益效果：一是在短期内加速繁殖草莓优良品种以供商品化生产；二是挽救严重感染病毒的草莓优良品种；三是结合辐射诱变进行草莓品种的改良和选育。

Description

草莓的脱毒方法

技术领域

本发明涉及草莓的脱毒方法。

背景技术

草莓感染的病毒很容易传播给后代。病毒在作物体内逐年积累，就会导致作物产量降低，品质变差。已知草莓能感染62种病毒和类菌质体，因而每年都必须更新母株，脱毒后的母株可以减少更新次数，提高产量并进行连作。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了草莓的脱毒方法。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：草莓的脱毒方法，是将草莓在35℃下热处理7d后,逐步升温至38℃,在湿度40%～68%、光照度4 000～5 000 Lx条件下热处理35 d后,将长出的新茎茎尖再行组培,即可获得100%的脱毒苗。

进一步的，上述的草莓的脱毒方法，具体包括以下步骤：

1）外植体选择：

选择无病虫、品种纯正的健壮植株,栽于盆中,置人工气候箱内40℃处理16 h、35℃处理8 h、变温处理4周，在新生嫩枝上,切取带生长点的茎段3-4 cm为外植体,用流水冲洗干净；

2）茎尖剥离：

将表面清洗过的外植体置于超净工作台上，用70%酒精表面消毒30 s,再用0.1%升汞消毒5-10min并不断搅动,然后用无菌水冲洗3-5次,去鳞片，在解剖镜下用针挑取带1～2个叶原基的茎尖0.2-0.3mm，立即接种于茎尖分化培养基中，茎尖分化培养基组成为MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.05mg/L+蔗糖3%；

3）培养条件：

草莓茎尖培养需温度为23-28℃,光照强度1000-3000 lx,光照12-16 h/d，诱导培养2-3个月,待丛生芽形成后转入增殖培养基；

4）快速增殖：

选取生长正常的试管苗,在增殖培养基上进行增殖，增殖培养基组成为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.04mg/L+蔗糖3%，增殖培养每20-30 d继代1次,总继代次数不超过10次；

5）诱导生根：

选高2-3 cm的小苗转入生根培养基，经过20-30d的生根培养，形成完整植株的组培苗，生根培养基的组成为MS+BA 1.0 mg/L+蔗糖3%；

6）炼苗：

将生根后的试管苗移栽到经过消毒的苗床或装有消毒基质的穴盘，置于由孔径0.42mm的网纱覆盖的网室中,在温度l5-25℃、相对湿度85%-90%的条件下进行炼苗，初期适当遮阳,后期逐渐通风和增加光照，2-3周后移栽苗成活；

7）病毒检测：

用指示植物检测法进行草毒斑驳病毒、草毒皱缩病毒、草毒镶脉病毒和草莓轻黄边病毒的检测，未检测出病毒的样本，即为用于原种苗的繁殖的原原种苗；

8）原种苗的繁殖：

将脱毒原原种苗定植于无土壤线虫、无草莓病源和防虫隔离区内,分株繁殖的第1代植株即为用于生产用苗的繁殖放入脱毒原种苗，脱毒原种苗要接受病毒检测机构的定期病毒检测,病毒感染率不超过5%；

9）脱毒生产用苗繁殖：

将脱毒原种苗定植于无土壤线虫、无草莓病源和防虫隔离区内,分株繁殖后代即为脱毒生产用苗，脱毒生产用苗直接用于草莓生产，脱毒生产用苗需接受病毒检测机构的定期病毒检测,病毒感染率不超过20%。

本发明提供的草莓脱毒方法，具有以下有益效果：一是在短期内加速繁殖草莓优良品种以供商品化生产；二是挽救严重感染病毒的草莓优良品种；三是结合辐射诱变进行草莓品种的改良和选育。

具体实施方式

实施例1：

草莓的脱毒方法，是将草莓在35℃下热处理7d后,逐步升温至38℃,在湿度40%～68%、光照度4 000～5 000 Lx条件下热处理35 d后,将长出的新茎茎尖再行组培,即可获得100%的脱毒苗。

具体包括以下步骤：

1）外植体选择：

选择无病虫、品种纯正的健壮植株,栽于盆中,置人工气候箱内40℃处理16 h、35℃处理8 h、变温处理4周，在新生嫩枝上,切取带生长点的茎段3-4 cm为外植体,用流水冲洗干净；

2）茎尖剥离：

将表面清洗过的外植体置于超净工作台上，用70%酒精表面消毒30 s,再用0.1%升汞消毒5-10min并不断搅动,然后用无菌水冲洗3-5次,去鳞片，在解剖镜下用针挑取带1～2个叶原基的茎尖0.2-0.3mm，立即接种于茎尖分化培养基中，茎尖分化培养基组成为MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.05mg/L+蔗糖3%；

3）培养条件：

草莓茎尖培养需温度为23-28℃,光照强度1000-3000 lx,光照12-16 h/d，诱导培养2-3个月,待丛生芽形成后转入增殖培养基；

4）快速增殖：

选取生长正常的试管苗,在增殖培养基上进行增殖，增殖培养基组成为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.04mg/L+蔗糖3%，增殖培养每20-30 d继代1次,总继代次数不超过10次；

5）诱导生根：

选高2-3 cm的小苗转入生根培养基，经过20-30d的生根培养，形成完整植株的组培苗，生根培养基的组成为MS+BA 1.0 mg/L+蔗糖3%；

6）炼苗：

将生根后的试管苗移栽到经过消毒的苗床或装有消毒基质的穴盘，置于由孔径0.42mm的网纱覆盖的网室中,在温度l5-25℃、相对湿度85%-90%的条件下进行炼苗，初期适当遮阳,后期逐渐通风和增加光照，2-3周后移栽苗成活；

7）病毒检测：

用指示植物检测法进行草毒斑驳病毒、草毒皱缩病毒、草毒镶脉病毒和草莓轻黄边病毒的检测，未检测出病毒的样本，即为用于原种苗的繁殖的原原种苗；

8）原种苗的繁殖：

将脱毒原原种苗定植于无土壤线虫、无草莓病源和防虫隔离区内,分株繁殖的第1代植株即为用于生产用苗的繁殖放入脱毒原种苗，脱毒原种苗要接受病毒检测机构的定期病毒检测,病毒感染率不超过5%；

9）脱毒生产用苗繁殖：

将脱毒原种苗定植于无土壤线虫、无草莓病源和防虫隔离区内,分株繁殖后代即为脱毒生产用苗，脱毒生产用苗直接用于草莓生产，脱毒生产用苗需接受病毒检测机构的定期病毒检测,病毒感染率不超过20%。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.草莓的脱毒方法，其特征在于，是将草莓在35℃下热处理7d后,逐步升温至38℃,在湿度40%～68%、光照度4 000～5 000 Lx条件下热处理35 d后,将长出的新茎茎尖再行组培,即可获得100%的脱毒苗。

2.根据权利要求1所述的草莓的脱毒方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1）外植体选择：

选择无病虫、品种纯正的健壮植株,栽于盆中,置人工气候箱内40℃处理16 h、35℃处理8 h、变温处理4周，在新生嫩枝上,切取带生长点的茎段3-4 cm为外植体,用流水冲洗干净；

2）茎尖剥离：

将表面清洗过的外植体置于超净工作台上，用70%酒精表面消毒30 s,再用0.1%升汞消毒5-10min并不断搅动,然后用无菌水冲洗3-5次,去鳞片，在解剖镜下用针挑取带1～2个叶原基的茎尖0.2-0.3mm，立即接种于茎尖分化培养基中，茎尖分化培养基组成为MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.05mg/L+蔗糖3%；

3）培养条件：

草莓茎尖培养需温度为23-28℃,光照强度1000-3000 lx,光照12-16 h/d，诱导培养2-3个月,待丛生芽形成后转入增殖培养基；

4）快速增殖：

选取生长正常的试管苗,在增殖培养基上进行增殖，增殖培养基组成为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.04mg/L+蔗糖3%，增殖培养每20-30 d继代1次,总继代次数不超过10次；

5）诱导生根：

选高2-3 cm的小苗转入生根培养基，经过20-30d的生根培养，形成完整植株的组培苗，生根培养基的组成为MS+BA 1.0 mg/L+蔗糖3%；

6）炼苗：

将生根后的试管苗移栽到经过消毒的苗床或装有消毒基质的穴盘，置于由孔径0.42mm的网纱覆盖的网室中,在温度l5-25℃、相对湿度85%-90%的条件下进行炼苗，初期适当遮阳,后期逐渐通风和增加光照，2-3周后移栽苗成活；

7）病毒检测：

用指示植物检测法进行草毒斑驳病毒、草毒皱缩病毒、草毒镶脉病毒和草莓轻黄边病毒的检测，未检测出病毒的样本，即为用于原种苗的繁殖的原原种苗；

8）原种苗的繁殖：

将脱毒原原种苗定植于无土壤线虫、无草莓病源和防虫隔离区内,分株繁殖的第1代植株即为用于生产用苗的繁殖放入脱毒原种苗，脱毒原种苗要接受病毒检测机构的定期病毒检测,病毒感染率不超过5%；

9）脱毒生产用苗繁殖：

将脱毒原种苗定植于无土壤线虫、无草莓病源和防虫隔离区内,分株繁殖后代即为脱毒生产用苗，脱毒生产用苗直接用于草莓生产，脱毒生产用苗需接受病毒检测机构的定期病毒检测,病毒感染率不超过20%。