CN103688852B - 一种大樱桃吉塞拉快速繁育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种大樱桃吉塞拉快速繁育方法,通过1)、外植体获取及脱毒;2)、外植体诱导培养;3)、丛生芽培养;4)、生根培养;5)、炼苗;6)、大田培育,将实验室克隆技术与大棚训练方法技术结合繁殖吉赛拉砧木,解决了以往繁殖速度慢,且砧木品种差的问题,繁育速度相比扦插繁育提高30倍以上,技术先进,节省时间,一年可繁育10——100万株生产苗木,有很高的推广价值和应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及樱桃栽培领域,特别涉及大樱桃吉塞拉快速繁育方法。
背景技术
大樱桃原产于欧洲,为优良的乔木水果果树品种,因大樱桃具有果实成熟期早、果粒大、色泽绚丽、口感好、经济效益高等诸多特点,而且营养物种丰富,保健功能强,深受消费者喜爱。中国属引种栽培国家,发展速度很快。同时大樱桃又是嫁接栽培的果树品种,生产栽培过程中,砧木品种选用十分重要。因为砧木决定树势、树龄、抗性、适应性,也影响丰产性能、果实品质和花果时间等。针对不能用种子繁殖的多倍体植物,目前采用常规扦插繁殖的缺点主要表现为:
1、技术不稳定。
2、扦插的材料来源少,材料不能达到理想的繁育目的。
3、繁殖技术为常规方法,不能与现代先进的科学技术接轨。
繁殖速度慢,不能满足产业化发展的需要。
“吉塞拉”是由德国育成的三倍体优良矮化砧木品种。具有使树体矮化开张、早花早果、早熟和丰产、稳产、抗旱、抗寒、固地性好,对土壤适应范围广等诸多优点。在目前,中国大樱桃产业化大发展的背景下,良种砧木远跟不上生产需要,市场苗木极为混乱,不良砧木品种会给产业持续发展带来许多负面效应,到目前许多地区已经出现了树体不健康(病害严重)、死树、不结果或果实品质差等现象,而且良种繁育技术不够先进,
综上,之前生产中砧木繁殖多以种子繁殖求得效益和速度,对砧木质量的重要问题重视不够,所以砧木品种不优、混乱。吉塞拉是大樱桃的优良砧木品种,但为3倍体生物,没有种子,所以大量快速繁殖有难度。有扦插繁殖技术应用,但繁殖速度较慢,远不能满足生产需要。
发明内容
为解决上述现有技术存在的问题,本发明提出一种大樱桃吉塞拉快速繁育方法,通过实验室克隆技术与大棚训练方法技术结合,繁育速度相比扦插繁育提高30倍以上,技术先进,节省时间,一年可繁育10——100万株生产苗木,有很高的推广价值和应用价值。
为达到上述目的,本发明的技术方案为:
一种大樱桃吉塞拉快速繁育方法,包括如下步骤:
1)、外植体获取及脱毒
外植体要通过材料脱毒、杀菌消毒后获取无菌茎尖;
2)、外植体诱导培养
外植体诱导培养基:MS+6-BA0.5mg/L+ZT0.4mg/L+IBA0.1mg/L,对“吉塞拉”外植体诱导培养30d,获得新生芽体。
3)、丛生芽增殖培养
选择用MS为基本培养基,用4种激素6-BA(6-苄氨基嘌呤)、ZT(玉米素)、KT(激动素)、IBA(吲哚丁酸)组合,对“吉塞拉”外植体诱导培养25d;可明显提高丛生芽增殖系数(达到11)。
4)、生根培养
采用:1/4MS+6-BA0.3mg/L+IBA0.5mg/L培养基,黑暗处理15d进行生根培养,生根效果达到5根/株左右。
5)、炼苗技术
炼苗基质及配方选用:草粪:园土=1:1配比,在大棚对炼苗环境(温度、湿度)全程控制7d.炼苗温度保持在18℃~26℃之间,炼苗湿度保持在80%。成活率达90%以上;
6)、大田培育
通过炼苗成活的幼苗在移入大田,在自然环境中培育2——3月。
进一步,所述步骤1)外植体获取及脱毒的具体操作为:①脱毒:将盆栽苗放入热处理箱内,进行变温处理,开始处理时温度为30-32℃,然后每隔1d提高1℃,直至37~38℃,稳定处理6周。②杀菌消毒:取1.5-2.0cm长新梢,用自来水冲洗10~12h,然后在超净工作台上用70%酒精浸泡材料30s,用0.1%升汞浸泡8~12min,并不时轻轻搅动;加入适量吐温-倾去升汞-用无菌水冲洗8~10次后,用无菌纱布吸干水分;③外植体获取:在无菌室解剖镜下,切取0.3mm左右茎尖接种至培养基培养。
进一步,所述步骤2)中培养环境条件为:清洁环境,培养温度22-28℃,光照时间8-14h/d,光照强度1000-3000Lx。
进一步,所述步骤3)中培养基配方及具体浓度为:Ms+6-BA0.5mg/L+ZT0.2mg/L+KT0.2mg/L+IBA0.1mg/L。
进一步,所述步骤5)中炼苗基质也可为草炭土:蛭石:珍珠岩=6:3:1混合配比或草粪:园土=1:1配比。
进一步,所述步骤5)中温度炼苗温度在18℃~26℃之间;
进一步,所述步骤5)中湿度控制方法为:试管苗移栽后的前三天湿度控制在90%以上,每天白天用喷雾喷头隔1小时喷一次水,喷洒过程中只喷叶面,不喷根部和营养土,连续三天,幼苗健康,叶子变绿,此后每天喷水两次,如此连续一周,一周后每隔两天喷洒一次稀薄营养液,隔五天喷洒一次1000倍的多菌灵液,经过一个多月的精心管理后幼苗便可健康生长。
相对于现有技术,本发明的有益效果为:通过实验室克隆技术与大棚训练方法技术结合繁殖吉赛拉砧木,解决了以往繁殖速度慢,且砧木品种差的问题,繁育速度相比扦插繁育提高30倍以上,技术先进,节省时间,一年可繁育10——50万株甚至更多的生产苗木,有很高的推广价值和应用价值。
如,2010年4月,我们成功获取12瓶“吉赛拉5号”外植体,并诱导丛生芽56个,同年研究筛选优化条件(培养基)和各环节技术,到年底(2010.12),实验室培育芽苗约1万株。
2011年在快繁技术体系研究成熟的情况下,基于约1万株芽苗,从2012.2——9月份,开始丛生芽增殖培养,继代增殖扩繁9代,获得有效新生芽约53万个,因受实验室条件限制,无法进行再扩大,从8月份进入生根培养、大棚炼苗和扩繁的大循环过程。到2013.4月份,共从大棚连续移入大田的试管苗达到21.2万株。如果实验室培养面积宽敞,各环节操作不相碍,出苗量会成倍性大大增加。
附图说明
图1为本发明流程图。
具体实施方式
下面结合附图及具体实施方式对本发明做进一步详细描述:
一种大樱桃吉塞拉快速繁育方法,包括如下步骤:
1)、外植体获取及脱毒
外植体要通过材料脱毒、杀菌消毒后获取无菌茎尖;
2)、外植体诱导培养
外植体诱导培养基:用4种激素6-BA(6-苄氨基嘌呤)、ZT(玉米素)、KT(激动素)、IBA(吲哚丁酸)组合,MS+6-BA0.5mg/L+ZT0.4mg/L+IBA0.1mg/L,对“吉塞拉”外植体诱导培养30d,获得新生芽体。
3)、丛生芽增殖培养
选择用MS为基本培养基,用4种激素6-BA(6-苄氨基嘌呤)、ZT(玉米素)、KT(激动素)、IBA(吲哚丁酸)组合,最佳优化培养基:Ms+6-BA0.5mg/L+ZT0.2mg/L+KT0.2mg/L+IBA0.1mg/L,对“吉塞拉”外植体诱导培养25d,可明显提高丛生芽增殖系数(达到11)。
4)、生根培养
采用优化组合培养基:1/4MS+6-BA0.3mg/L+IBA0.5mg/L培养基,黑暗处理15d进行生根培养,生根效果达到5根/株左右。
5)、炼苗技术
炼苗基质及配方选用:草粪:园土=1:1配比,在大棚对炼苗环境(温度、湿度)全程控制7d.炼苗温度保持在18℃~26℃之间,炼苗湿度保持在80%。成活率达90%以上;
6)、大田培育
通过炼苗成活的幼苗在移入大田,在自然环境中培育2——3月。
进一步,所述步骤1)外植体获取及脱毒的具体操作为:①脱毒:将盆栽苗放入热处理箱内,进行变温处理,开始处理时温度为30-32℃,然后每隔1d提高1℃,直至37~38℃,稳定处理6周。②杀菌消毒:取1.5-2.0cm长新梢,用自来水冲洗10~12h,然后在超净工作台上用70%酒精浸泡材料30s,用0.1%升汞浸泡8~12min,并不时轻轻搅动;加入适量吐温-倾去升汞-用无菌水冲洗8~10次后,用无菌纱布吸干水分;③外植体获取:在解剖镜下,切取0.3mm左右茎尖接种至培养基培养。
进一步,所述步骤2)中培养环境条件为:清洁环境,培养温度22-28℃,光照时间8-14h/d,光照强度1000-3000Lx。
进一步,所述步骤3)中培养基配方及具体浓度为:Ms+6-BA0.5mg/L+ZT0.2mg/L+KT0.2mg/L+IBA0.1mg/L。
进一步,所述步骤4)中培养基配方及具体浓度为:1/4MS+6-BA0.3mg/L+IBA0.5mg/L培养基,黑暗处理10d进行生根培养。
进一步,所述步骤5)中炼苗基质也可为草炭土:蛭石:珍珠岩=6:3:1混合配比或草粪:园土=1:1配比。
进一步,所述步骤5)中温度炼苗温度在18℃~26℃之间;
进一步,所述步骤5)中湿度控制方法为:试管苗移栽后的前三天湿度控制在90%以上,每天白天用喷雾喷头隔1小时喷一次水,喷洒过程中只喷叶面,不喷根部和营养土,连续三天,幼苗健康,叶子变绿,此后每天喷水两次,如此连续一周,一周后每隔两天喷洒一次稀薄营养液,隔五天喷洒一次1000倍的多菌灵液,经过一个多月的精心管理后幼苗便可健康生长。
如图1所示,一种大樱桃吉塞拉快速繁育方法,其步骤为:
1、外植体获取及脱毒
外植体要通过材料脱毒、杀菌消毒等过程后获取茎尖等无菌材料。①脱毒:将盆栽苗放入热处理箱内,进行变温处理,开始处理时温度为30-32℃,然后每隔1d提高1℃,直至37~38℃,稳定处理6周。②杀菌消毒:取1.5-2.0cm长新梢,用自来水冲洗10~12h,然后在超净工作台上用70%酒精浸泡材料30s,用0.1%升汞浸泡8~12min,并不时轻轻搅动。加入适量吐温-倾去升汞-用无菌水冲洗8~10次后,用无菌纱布吸干水分。③外植体获取:在解剖镜下,切取0.3mm左右茎尖接种至培养基培养。
2、外植体诱导培养
外植体诱导培养基:外植体诱导培养基:用4种激素6-BA(6-苄氨基嘌呤)、ZT(玉米素)、KT(激动素)、IBA(吲哚丁酸)组合,即:MS+6-BA0.5mg/L+ZT0.4mg/L+IBA0.1mg/L,对“吉塞拉”外植体诱导培养30d,获得新生芽体。
培养环境条件:培养温度22-28℃,光照时间8-14h/d,光照强度1000-3000Lx。培养室保持清洁卫生,发现污染及时清除,以防蔓延和相互传染。
3、丛生芽培养技术
择用MS为基本培养基,用4种激素6-BA(6-苄氨基嘌呤)、ZT(玉米素)、KT(激动素)、IBA(吲哚丁酸)组合,最佳优化培养基:Ms+6-BA0.5mg/L+ZT0.2mg/L+KT0.2mg/L+IBA0.1mg/L,对“吉塞拉”外植体诱导培养25d,可明显提高丛生芽增殖系数(达到11)。
4、生根培养技术
采用优化组合培养基:1/4MS+6-BA0.3mg/L+IBA0.5mg/L培养基,黑暗处理15d进行生根培养,生根效果达到5根/株左右。
5、炼苗技术
“吉赛拉”炼苗基质,最佳配方是1/2草粪+1/2园土。炼苗效果成活率达到90.2%,而且生长速度快,植株粗壮,叶片浓绿。另外,用草炭土:蛭石:珍珠岩=6:3:1混合配方,炼苗成活率可达88%,而生长速度较快,植株粗壮,叶片浓绿。
另外试管苗移栽后的前三天必须控制好温湿度,湿度应控制在90%以上,每天白天用喷雾喷头隔1小时喷一次水,喷洒过程中只喷叶面,不喷根部和营养土,这样连续三天,幼苗健康,叶子变绿,此后每天喷水两次,如此连续一周。一周后每隔两天喷洒一次稀薄营养液,隔五天喷洒一次1000倍的多菌灵液,经过一个多月的精心管理后幼苗便可健康生长。炼苗温度一般应保持在15℃~28℃之间,最佳温度炼苗温度在15℃~25℃之间。
6、大田培育
通过炼苗成活的幼苗在2——3月移入大田进行培育,培育条件为自然环境。
以上所述,仅为本发明的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何不经过创造性劳动想到的变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此,本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。
Claims (6)
1.一种大樱桃吉塞拉快速繁育方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)、外植体获取及脱毒:
外植体要通过材料脱毒、杀菌消毒后获取无菌茎尖;
2)、外植体诱导培养:
外植体诱导培养基:用MS+6-BA0.5mg/L+ZT0.4mg/L+IBA0.1mg/L,对“吉塞拉”外植体诱导培养30d,获得新生芽体;
3)、丛生芽增殖培养:
选择用MS为基本培养基,用4种激素6-BA(6-苄氨基嘌呤)、ZT(玉米素)、KT(激动素)、IBA(吲哚丁酸)组合,对“吉塞拉”外植体增殖培养25d;
所述培养基的具体浓度为:MS+6-BA0.5mg/L;ZT0.2mg/L;KT0.2mg/L;IBA0.1mg/L;
4)、生根培养:
采用:1/4MS+6-BA0.3mg/L+IBA0.5mg/L培养基,黑暗处理15d进行生根培养,生根效果达到5根/株左右;
5)、炼苗技术
炼苗基质及配方选用草粪∶园土=1∶1配比,在大棚对炼苗环境全程控制7d;炼苗温度保持在18℃~26℃之间,炼苗湿度保持在80%,成活率达90%以上;
6)、大田培育
通过炼苗成活的幼苗再移入大田,在自然环境中培育2-3月。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤1)外植体获取及脱毒的具体操作为:①脱毒:将盆栽苗放入热处理箱内,进行变温处理,开始处理时温度为30-32℃,然后每隔1d提高1℃,直至37~38℃,稳定处理6周,②杀菌消毒:取1.5-2.0cm长新梢,用自来水冲洗10~12h,然后在超净工作台上用70%酒精浸泡材料30s,用0.1%升汞浸泡8~12min,并不时轻轻搅动;加入适量吐温、倾去升汞、用无菌水冲洗8~10次后,用无菌纱布吸干水分;③外植体获取:在解剖镜下,切取0.3mm左右茎尖接种至培养基培养。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤2)中培养环境条件为:清洁环境,培养温度22-28℃,光照时间8-14h/d,光照强度1000-3000Lx。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤5)中炼苗基质为草炭土∶蛭石∶珍珠岩=6∶3∶1混合配比。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤5)中温度炼苗温度在15℃~25℃。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤5)中湿度控制方法为:试管苗移栽后的前三天湿度控制在90%以上,每天白天用喷雾喷头隔1小时喷一次水,喷洒过程中只喷叶面,不喷根部和营养土,连续三天,幼苗健康,叶子变绿,此后每天喷水两次,如此连续一周,一周后每隔两天喷洒一次稀薄营养液,隔五天喷洒一次1000倍的多菌灵液,经过一个多月的精心管理后幼苗便可健康生长。
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