CN108243961B - 一种五岭龙胆种子再生体系建立及快速繁育方法 - Google Patents

一种五岭龙胆种子再生体系建立及快速繁育方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种五岭龙胆种子再生体系建立及快速繁育方法，解决现有技术中五岭龙胆野生资源少，药用价值好，自然繁衍能力、传播扩散能力不强，自然更新困难、优良种苗稀缺等问题，采集饱满成熟度为80‑90%未开裂的五岭龙胆蒴果，放入保鲜袋包好，带回实验室后去除蒴果周围的杂质，用洗涤剂漂洗干净以及进行消毒处理后，用消毒滤纸吸干表面水分，用手术刀纵切果实,镊子夹取种子，将种子均匀接种到培养基上。经芽诱导培养、芽增殖培养；诱导无根苗生根，生根率可达100%，幼苗移栽湿度应保持在75％～85％，避免阳光直射，成活率可达99%以上；成苗移植后成活率高，节约了大量成本，幼苗健壮挺拔，长势良好，整齐一致。

Description

一种五岭龙胆种子再生体系建立及快速繁育方法
技术领域
本发明属于植物繁殖领域，具体涉及一种五岭龙胆种子再生体系建立及快速繁育方法。
背景技术
五岭龙胆（Gentiana davidii）又称落地荷花、歇地龙胆、鲤鱼胆、矮杆鲤鱼胆，龙胆科龙胆属多年生草本植物，高10-20厘米。叶对生，矩圆状披针形或线状披针形，长2.5-4厘米，宽0.5-1厘米，钝尖，基部变狭连合，营养枝的叶莲座状。花数朵簇生茎顶端，头状，基部被茎上部的3-5叶所包围；花萼漏斗状，裂片不等大，条状披针形；花冠漏斗状，紫色，裂片卵形，子房椭圆形，具柄。蒴果，种子灰褐色，近圆形，表面蜂窝状。生于山坡草丛、山坡路旁、林缘、林下，海拔350-2500米。产湖南、江西、安徽、浙江、福建、广东、广西。具有清热解毒，利尿，明目。用于化脓性骨髓炎，尿路感染，结膜炎；外用治疖痈。
发明内容
本发明的目的在于提供一种五岭龙胆种子再生体系建立及快速繁育方法，解决现有技术中五岭龙胆野生资源少，药用价值好，自然繁衍能力、传播扩散能力不强，自然更新困难、优良种苗稀缺等问题。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种五岭龙胆种子再生体系建立及快速繁育方法，包括如下步骤：
1）材料选取与消毒：采摘当年80-90%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲0.5-1h，双蒸水冲荡2-3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理10-13min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲3-4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后，待用；
2）诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：接种后5-8d在无灯光条件下培养，无灯光培养结束后光照强度调整为1000～1500lx，培养时间15-20d，培养室温度为23±2℃，光照时间5h/d，得到诱导芽植株；
3）增殖培养：将经上述诱导培养，所得到的生长良好的芽植株切成茎段长1.0-1.5cm，接种在增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度1500～2000lx，增殖培养时间20-30d，得到增殖培养的幼苗；
4）诱导生根：将增殖培养出来带有叶2-3片，株高3-4cm无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间10h/d，光照强度1500-2000lx，诱导生根时间15-20d，得到诱导生根的幼苗，生根率可达100%；
5）试管苗培养完成：当诱导生根培养试管苗生长至高5-6cm，根3-5条，叶5片，叶长2-3cm时完成五岭龙胆种子诱导萌发及快速微繁殖培养；
6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗5-7天后，打开瓶盖炼苗1-2天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出培养植株，洗去附着在根系的残留培养基，移入蛭石和腐殖土的质量比1:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在15-30℃，湿度应保持在75％-85％，避免阳光直射；2-3周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗。
所述芽诱导培养基为N6+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.3mg/LNAA+20g/L蔗糖+5.5g/L琼脂粉+1.0 g·L-1活性炭；pH值为5.8。
所述增殖培养基为N6+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+5.5g/L 琼脂粉+1.0g·L-1活性炭；pH值为5.8。
所述生根培养基为1/2N6+1.0mg/L IBA+0.1mg/L NAA+25g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉+1.5g·L-1活性炭；pH值为5.8。
本发明的优点在于：
现有技术相比，本发明所具有的优点和有益效果是明显的，1、体系建立材料的选择：采集饱满成熟度为80-90%未开裂的五岭龙胆蒴果；2、正确的消毒时间和材料的处理方法；3、准确合理的培养基成分构成；4、合理的光照时间光照强度的设置，提高了诱导无根苗生根率，生根率可达100%，成活率可达99%以上；成苗移植后成活率高，病虫害少，节约了大量成本，幼苗健壮挺拔，长势良好，整齐一致。
附图说明
图1是种子经诱导培养后的芽植株。
图2增殖培养。
图3增殖培养生长情况。
图4壮苗培养。
图5是经诱导生根培养的幼苗。
图6植株生根情况。
图7移栽种植。
具体实施方式
实施例1
1）材料选取与消毒：采摘当年85%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲1h，双蒸水冲荡3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理12min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后，待用；
2）诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：接种后7d在无灯光条件下培养，无灯光培养结束后光照强度调整为1200lx，培养时间18d，培养室温度为23±2℃，光照时间5h/d，得到诱导芽植株；
3）增殖培养：将经上述诱导培养，所得到的生长良好的芽植株切成茎段长1.5cm，接种在增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度1800lx，增殖培养时间25d，得到增殖培养的幼苗；
4）诱导生根：将增殖培养出来带有叶3片，株高4cm无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间10h/d，光照强度2000lx，诱导生根时间20d，得到诱导生根的幼苗；生根率可达100%；
5）试管苗培养完成：当诱导生根培养试管苗生长至高6cm，根5条，叶5片，叶长3cm时完成五岭龙胆种子诱导萌发及快速微繁殖培养；
6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗6天后，打开瓶盖炼苗2天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出培养植株，洗去附着在根系的残留培养基，移入蛭石和腐殖土的质量比1:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在25℃，湿度应保持在80％，避免阳光直射； 3周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗。
所述芽诱导培养基为N6+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.3mg/LNAA+20g/L蔗糖+5.5g/L琼脂粉+1.0 g·L-1活性炭；pH值为5.8。
所述增殖培养基为N6+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+5.5g/L 琼脂粉+1.0g·L-1活性炭；pH值为5.8。
所述生根培养基为1/2N6+1.0mg/L IBA+0.1mg/L NAA+25g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉+1.5g·L-1活性炭；pH值为5.8。
成活率可达100%。
实施例2
1）材料选取与消毒：采摘当年80%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲0.5h，双蒸水冲荡2次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理10min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲3遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后，待用；
2）诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：接种后5d在无灯光条件下培养，无灯光培养结束后光照强度调整为1000lx，培养时间15d，培养室温度为23±2℃，光照时间5h/d，得到诱导芽植株；
3）增殖培养：将经上述诱导培养，所得到的生长良好的芽植株切成茎段长1.0cm，接种在增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度1500lx，增殖培养时间20d，得到增殖培养的幼苗；
4）诱导生根：将增殖培养出来带有叶2片，株高3cm无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间10h/d，光照强度1500lx，诱导生根时间15d，得到诱导生根的幼苗；生根率可达100%；
5）试管苗培养完成：当诱导生根培养试管苗生长至高5cm，根3条，叶5片，叶长2cm时完成五岭龙胆种子诱导萌发及快速微繁殖培养；
6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗5天后，打开瓶盖炼苗1天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出培养植株，洗去附着在根系的残留培养基，移入蛭石和腐殖土的质量比1:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在15℃，湿度应保持在75％，避免阳光直射；2周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗。
所述芽诱导培养基为N6+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.3mg/LNAA+20g/L蔗糖+5.5g/L琼脂粉+1.0 g·L-1活性炭；pH值为5.8。
所述增殖培养基为N6+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+5.5g/L 琼脂粉+1.0g·L-1活性炭；pH值为5.8。
所述生根培养基为1/2N6+1.0mg/L IBA+0.1mg/L NAA+25g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉+1.5g·L-1活性炭；pH值为5.8。
成活率可达99%。
实施例3
1）材料选取与消毒：采摘当年90%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲1h，双蒸水冲荡2-3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理13min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后，待用；
2）诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：接种后8d在无灯光条件下培养，无灯光培养结束后光照强度调整为1500lx，培养时间20d，培养室温度为23±2℃，光照时间5h/d，得到诱导芽植株；
3）增殖培养：将经上述诱导培养，所得到的生长良好的芽植株切成茎段长1.5cm，接种在增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度2000lx，增殖培养时间30d，得到增殖培养的幼苗；
4）诱导生根：将增殖培养出来带有叶3片，株高4cm无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间10h/d，光照强度2000lx，诱导生根时间20d，得到诱导生根的幼苗；生根率可达100%；
5）试管苗培养完成：当诱导生根培养试管苗生长至高6cm，根5条，叶5片，叶长3cm时完成五岭龙胆种子诱导萌发及快速微繁殖培养；
6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗7天后，打开瓶盖炼苗2天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出培养植株，洗去附着在根系的残留培养基，移入蛭石和腐殖土的质量比1:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在30℃，湿度应保持在85％，避免阳光直射；3周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗。
所述芽诱导培养基为N6+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.3mg/LNAA+20g/L蔗糖+5.5g/L琼脂粉+1.0 g·L-1活性炭；pH值为5.8。
所述增殖培养基为N6+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+5.5g/L 琼脂粉+1.0g·L-1活性炭；pH值为5.8。
所述生根培养基为1/2N6+1.0mg/L IBA+0.1mg/L NAA+25g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉+1.5g·L-1活性炭；pH值为5.8。
成活率可达100%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (1)

1.一种五岭龙胆种子再生体系建立及快速繁育方法，其特征在于：包括如下步骤：
1）材料选取与消毒：采摘当年80-90%成熟荚果用洗涤剂漂洗干净，再置于流水中冲洗20分钟；种子消毒处理：将荚果进行清洗，置饱和漂白粉上清液中浸泡15min，并用软毛刷刷洗荚果外部，冲洗干净后，自来水下滴冲0.5-1h，双蒸水冲荡2-3次，置超净工作台内用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞处理10-13min，将汞液倒入废汞瓶，无菌水冲3-4遍后，用消毒滤纸吸干表面水分后，待用；
2）诱导培养：取饱满经消毒处理后的荚果用枪状镊夹住荚果，手术刀顺着荚果垂直方向剖开，取出荚果内种子，分别接种于经高温、高压灭菌的芽诱导培养基中；培养条件：接种后5-8d在无灯光条件下培养，无灯光培养结束后光照强度调整为1000～1500lx，培养室温度为23±2℃，光照时间5h/d，培养时间15-20d，得到诱导芽植株；
3）增殖培养：将经上述诱导培养，所得到的生长良好的芽植株切成茎段长1.0-1.5cm，接种在增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度1500～2000lx，增殖培养时间20-30d，得到增殖培养的幼苗；
4）诱导生根：将增殖培养出来带有叶2-3片，株高3-4cm无根幼苗单株切下，转移到生根培养基中；光照时间10h/d，光照强度1500-2000lx，诱导生根时间15-20d，得到诱导生根的幼苗；
5）试管苗培养完成：当诱导生根培养试管苗生长至高5-6cm，根3-5条，叶5片，叶长2-3cm时完成五岭龙胆种子诱导萌发及快速微繁殖培养；
6）将完成生根培养试管瓶苗放在自然光下炼苗5-7天后，打开瓶盖炼苗1-2天，以增强试管苗对室外环境的适应能力；然后从培养瓶中取出培养植株，洗去附着在根系的残留培养基，移入蛭石和腐殖土的质量比1:2混合的基质中，保湿遮阴，温度控制在15-30℃，湿度应保持在75％-85％，避免阳光直射；2-3周后植株适应能力逐渐增强，获得自然生长健壮完整种苗；
所述芽诱导培养基为N6+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.3mg/LNAA+20g/L蔗糖+5.5g/L琼脂粉+1.0 g·L-1活性炭； pH值为5.8；
所述增殖培养基为N6+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+5.5g/L 琼脂粉+1.0g·L-1活性炭； pH值为5.8；
所述生根培养基为1/2N6+1.0mg/L IBA+0.1mg/L NAA+25g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉+1.5g·L-1活性炭； pH值为5.8。
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