CN115152634A - 一种小秦艽组织培养繁育方法 - Google Patents
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Abstract
一种小秦艽组织培养繁育方法，包括如下步骤：(1)取小秦艽种子作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽。采用本发明所述的培养方法得到的小秦艽丛生芽增殖系数达到15‑25倍，可在短时间内提供成活率高的小秦艽优质种苗，有效解决小秦艽的规模化育苗问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种小秦艽组织培养繁育方法。
背景技术
小秦艽，拉丁名Gentiana dahurica Fisch.，又称达乌里秦艽，为龙胆科龙胆属植物，是我国重要的传统中药之一。主产于我国西北、华北大部。其干燥根入药，主要成分为龙胆苦苷，是治疗结核病、黄疸、荨麻疹、风湿性关节炎等症的主药之一，具有重要的开发应用价值。随着小秦艽药理药效的深入研究及临床应用量的增加，大量的野生资源被掠夺性采挖，而小秦艽一般通过种子进行繁殖，但在初步的种苗繁育工作中发现，小秦艽的种子繁殖存在发芽率低、发芽不整齐、种苗质量不稳定等问题，严重制约了小秦艽的规范化种植和生产。采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高小秦艽种苗的繁殖速度和质量，实现小秦艽优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种小秦艽组织培养繁育方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良小秦艽种苗、满足生产需要。
本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种小秦艽组织培养繁育方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取小秦艽饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
本发明的突出优点在于：
(1)采用生物技术对小秦艽进行组织培养快速繁殖，通过小秦艽丛生芽的繁殖，在短时间内可培育出大量适合栽培种植的小秦艽幼苗，保障小秦艽种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
(2)采用本发明所述的培养方法得到的小秦艽丛生芽增殖系数达到15-25倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
实施例1
本发明所述的小秦艽的组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取小秦艽饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生长倍率为7.0倍，丛生芽增殖系数为15.5。
实施例2
本发明所述的小秦艽的组织培养快速繁殖方法的另一个实例，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取小秦艽饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生长倍率为18.1倍，丛生芽增殖系数为20.5。
实施例3
本发明所述的小秦艽的组织培养快速繁殖方法的再一个实例，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取小秦艽饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，生长倍率为15.8倍，丛生芽增殖系数为19.2。
实施例4
本发明所述的小秦艽的组织培养快速繁殖方法的又一个实例，包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取小秦艽饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
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Claims (4)
1.一种小秦艽组织培养繁育方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
(1)外植体的选择与消毒：取小秦艽饱满果实，剥去果皮后取出种子作为外植体，作为外植体，依次用2％(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加入2-3滴吐温-20的100毫升0.1％(v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到无菌外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；
(2)外植体初代诱导获得无菌试管苗：将步骤(1)得到的无菌外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养45天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加0.5-2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
2.根据权利要求1所述的小秦艽组织培养繁育方法，其特征在于：步骤(3)所述MS繁殖培养基中添加1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
3.根据权利要求1所述的小秦艽组织培养繁育方法，其特征在于：步骤(3)所述MS繁殖培养基中添加1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
4.根据权利要求1所述的小秦艽组织培养繁育方法，其特征在于：步骤(3)所述MS繁殖培养基中添加2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
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