CN111789027B - 以靓竹鞭芽为外植体同时高效获得丛芽以及生根苗的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种以靓竹鞭芽为外植体同时高效获得丛芽以及生根苗的方法，属于植物组织培养技术领域。该方法采用两年生靓竹容器苗中生长健壮植株的竹鞭侧芽为外植体，经不同消毒时间的处理，筛选出最佳灭菌时间；后将无菌外植体接种在诱导培养基上诱导丛芽；然后经增殖培养基，能同时诱导大量靓竹丛芽以及生根苗产生。本发明方法填补了靓竹组织培养丛苗快速繁殖的空白，以鞭芽为外植体的靓竹丛芽生长更快且分蘖出的芽数量较多，在丛芽增殖的同时获得生根苗，缩短了靓竹的快繁时间，使靓竹的组培效率大大提高。为靓竹的园林栽种、大面积绿化奠定了迅速且充足供应的基础，为靓竹的工厂化大规模生产也提供了可行的方案。

Description

以靓竹鞭芽为外植体同时高效获得丛芽以及生根苗的方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种以靓竹鞭芽为外植体同时高效获得丛芽以及生根苗的方法。
背景技术
靓竹(Sasaella glabra f.albostriata Muroi)，北美箭竹族赤竹亚族支笹属植物，是优良地被类彩叶观赏竹种之一，引自日本，是一种混生竹(耿伯介，1996)。竹株矮小，秆高50-80cm，粗2-2.5mm，节间长12cm，叶片绿色具黄白色纵条纹，株间密集，分蘖力强，色彩优美，经常作为观赏竹种被人们所认识。随着人们生活水平和文化水平的提高，竹子的观赏价值及美学价值也被逐渐提高，其重要性愈加突出。由于竹类植物开花间隔期长，很少开花结实，且竹类植物花粉萌发率普遍较低，因此种子获取十分困难。目前竹子繁殖主要以移竹、竹蔸、埋鞭、埋秆、埋节等传统方法为主，这些方法具有消耗母竹多、种苗运输不便、劳动强度大、繁殖系数低等缺点，尤其对资源稀少的珍贵观赏竹种来说，传统的繁殖方法受到了较大限制，难以快速规模化发展资源。针对这些问题，随着对竹类研究的深化，人们开始研究竹类植物新的繁殖方法，其中最直观有效的就是竹类组织培养获得再生植株。
国内有关竹子的组织培养最早开始于20世纪90年代，此后，关于竹类植物组织培养的研究日益增多，竹子的快繁技术受到愈来愈多的重视。目前对竹子以芽繁芽途径大多数均采用秆茎段的方式，而关于通过以靓竹鞭芽为外植体繁芽的报道未见。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明所要解决的技术问题在于提供一种以靓竹鞭芽为外植体同时高效获得丛芽以及生根苗的方法。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：
以靓竹鞭芽为外植体同时高效获得丛芽以及生根苗的方法，包括靓竹外植体的准备、无菌体系的建立、丛芽诱导及丛芽增殖以及生根苗获得等步骤，具体步骤如下：
(1)以靓竹两年生容器苗中生长健壮植株的竹鞭侧芽作为外植体材料，将采集的外植体进行预处理后备用；
(2)在无菌操作台上，处理好的外植体经消毒剂灭菌处理后，无菌水冲洗数次，再用次氯酸钠消毒，无菌水冲洗数次；
(3)接种在基本培养基上，基本培养基为MS+3mg/L 6-BA；
(4)15d后将无菌的靓竹外植体接种到诱导培养基上进行丛芽诱导，两周后丛芽形成；其中，诱导培养基为MS+3-4mg/L 6-BA+0.3-0.5mg/L KT+0.5-1mg/L NAA；
(5)将丛芽转接到增殖培养基上培养60天，至大量丛芽以及生根苗形成；其中，增殖培养基为MS+4-4.5mg/L 6-BA+0.5-1mg/L KT+0.2-0.5mg/L TDZ。
进一步的，步骤(1)中，预处理方法为：先将容器苗竹鞭剪成1-1.5cm的带芽鞭段，用洗洁精洗净，流水下冲洗3-4h，然后用吐温80浸泡10min，流水下冲洗0.5-1h。
进一步的，步骤(2)中，处理好的外植体经70％酒精处理45-60s，无菌水冲洗3-5次，再用5％次氯酸钠消毒12-20min，无菌水冲洗3-5次。
进一步的，步骤(2)中，处理好的外植体经70％酒精处理45s，无菌水冲洗3-5次，再用5％次氯酸钠消毒15min，无菌水冲洗3-5次。
进一步的，步骤(5)中，在丛芽增殖的过程中，使用一种培养基MS+4-4.5mg/L6-BA+0.5-1mg/L KT+0.2-0.5mg/L TDZ进行培养，可同时得到丛芽和生根苗。
进一步的，基本培养基、诱导培养基、增殖培养基中还含有30g/L蔗糖，2.25g/L植物凝胶。
进一步的，步骤(3)、(4)、(5)中的培养条件为温度25±1℃，光周期为14h/黑暗10h，培养物表面的光照强度为30001x。
有益效果：相比于现有技术，本发明的优点为：
本申请填补了靓竹组织培养丛苗快速繁殖的空白，以鞭芽为外植体材料，结合不同生长调节剂的组合，设计出适合靓竹丛生芽诱导的培养基，完成靓竹丛生芽的诱导及增殖仅为12周左右。对鞭芽进行进行快速繁殖，是最快的繁殖途径，也是效率最高的方法，有效解决了靓竹繁殖困难，克服了传统的母株移栽效率低、运输成本高等缺点，且不受季节的限制，为靓竹的快速繁殖奠定了坚实的基础，对于实现靓竹工厂化生产具有重要的意义，为靓竹大面积的推广和利用，充分发挥其观赏性提供了快速且充足供应的有效途径，是一种方便、快捷和有效的靓竹再生植株培养方法。
附图说明
图1是靓竹的外植体材料图；
图2是处理后靓竹带芽鞭段图；
图3是靓竹在诱导培养基上两周后的生长情况图；
图4是靓竹在增殖培养基上15d后的生长情况图；
图5是靓竹增殖培养基上增殖30d后的生长情况图；
图6是靓竹在增殖培养基上生长60d后的丛芽及生根图；
图7是靓竹在增殖培养基上生长60d后生根苗产生图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。以下所述仅为本发明较好的实施例，仅仅用于描述本发明，不能理解为对本发明的范围的限制。应当指出的是，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
一种以靓竹鞭芽为外植体同时高效获得丛芽以及生根苗的方法，包括以下步骤：
(1)外植体的选择：如图1所示，选取靓竹两年生容器苗中生长健壮植株的竹鞭侧芽作为外植体材料；将容器苗鞭段剪成1-1.5cm的带芽鞭段，用洗洁精洗净，流水下冲洗3-4h，然后用吐温80浸泡10min，流水下冲洗0.5-1h。
(2)无菌体系的建立：外植体消毒及灭菌的处理为70％酒精45s，无菌水冲洗3-5次，5％次氯酸钠15min，无菌水冲洗3-5次。通过以上消毒方法处理后的靓竹鞭芽接种后，无菌率最高，芽诱导成活率高(表1)。
表1不同消毒剂处理不同时间对竹鞭侧芽培养的影响
Figure BDA0002577069830000031
Figure BDA0002577069830000041
(3)将无菌的靓竹外植体接种在基本培养基上，基本培养基组成为：MS+3mg/L 6-BA；
(4)靓竹丛生芽的诱导：15d后将靓竹外植体接种到丛芽诱导培养基上诱导，两周后芽生长至2-3厘米，如图3所示，获得单芽；其中，丛芽诱导培养基为MS+3-4mg/L 6-BA+0.3-0.5mg/L KT+0.5-1mg/L NAA；
(5)靓竹丛生芽的增殖：将丛生芽转接到增殖培养基MS+4-4.5mg/L 6-BA+0.5-1mg/L KT+0.2-0.5mg/L TDZ上培养，至大量丛芽以及生根苗形成；图4为增殖15d后的丛芽，图5为增殖30d后的芽丛，图6为60d后，大量丛芽产生；图7为60d后生根苗产生；
以上所有使用的培养基，蔗糖含量为30g/L，植物凝胶含量为2.25g/L，在灭菌前将pH调到5.8，灭菌条件为121℃，20min。以上所有培养操作的培养条件均为：温度25±1℃，光周期为14h/黑暗10h，培养物表面的光照强度约为30001x。
对比例
除以下技术参数外，其余同实施例1。
选取靓竹两年生容器苗中生长健壮植株的秆侧芽作为外植体材料，不同消毒剂处理不同时间对秆侧芽培养的影响如表2所示，不同外植体获得丛芽及生根苗的比率如表3所示。
表2不同消毒剂处理不同时间对秆侧芽培养的影响
处理 70％乙醇(s) 5％NaClO(min) 污染率(％) 死亡率(％) 成活率(％)
1 45 12 16.6 14.3 69.1
2 45 15 8.7 16.4 74.9
3 45 20 6.5 26.7 66.8
4 60 12 9.8 16.9 73.3
5 60 15 7.5 19.8 72.7
6 60 20 5.4 28.7 65.9
表3不同外植体获得丛芽及生根苗的比率
Figure BDA0002577069830000042
Figure BDA0002577069830000051

Claims (3)

1.以靓竹鞭芽为外植体同时高效获得丛芽以及生根苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以靓竹两年生容器苗中生长健壮植株的竹鞭侧芽作为外植体材料，先将容器苗竹鞭剪成1-1.5cm的带芽鞭段，用洗洁精洗净，流水下冲洗3-4h，然后用吐温80浸泡10min，流水下冲洗0.5-1h；
(2)在无菌操作台上，处理好的外植体经70％酒精处理45s，无菌水冲洗3-5次，再用5％次氯酸钠消毒15min，无菌水冲洗3-5次；
(3)接种在基本培养基上，基本培养基为MS+3mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+2.25g/L植物凝胶；
(4)15d后将无菌的靓竹外植体接种到诱导培养基上进行丛芽诱导，两周后丛芽形成；其中，诱导培养基为MS+3-4mg/L 6-BA+0.3-0.5mg/L KT+0.5-1mg/L NAA+30g/L蔗糖+2.25g/L植物凝胶；
(5)将丛芽转接到增殖培养基上培养60天，至大量丛芽以及生根苗形成；其中，增殖培养基为MS+4-4.5mg/L 6-BA+0.5-1mg/L KT+0.2-0.5mg/L TDZ+30g/L蔗糖+2.25g/L植物凝胶。
2.根据权利要求1所述的以靓竹鞭芽为外植体同时高效获得丛芽以及生根苗的方法，其特征在于，步骤(5)中，在丛芽增殖的过程中，使用一种培养基MS+4-4.5mg/L 6-BA+0.5-1mg/L KT+0.2-0.5mg/L TDZ进行培养，可同时得到丛芽和生根苗。
3.根据权利要求1所述的以靓竹鞭芽为外植体同时高效获得丛芽以及生根苗的方法，其特征在于，步骤(3)、(4)、(5)中的培养条件为温度25±1℃，光周期为14h/黑暗10h，培养物表面的光照强度为30001x。
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