CN102577817B

CN102577817B - 一种红花石蒜诱导丛生芽的方法

Info

Publication number: CN102577817B
Application number: CN2012100656581A
Authority: CN
Inventors: 常乐; 夏宜平; 陈菁珏; 肖郁绵; 佘琳芳; 吴昀; 张琳
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2012-01-13
Filing date: 2012-01-13
Publication date: 2013-06-12
Anticipated expiration: 2032-01-13
Also published as: CN102577817A

Abstract

本发明公开了一种红花石蒜诱导丛生芽的方法，包括：取红花石蒜的鳞茎扦插于基质中，培育60～90d，获得幼嫩的小鳞茎；小鳞茎经消毒后，接种于液体培养基中进行诱导培养；诱导出芽后，转移到固体培养基中进行增殖培养，获得丛生芽；其中，所述的液体培养基中含有浓度为0.5～1.0mg/L的α-萘乙酸和浓度为3.0～5.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤。本发明以红花石蒜鳞茎扦插培育获得的小鳞茎作为外植体材料，外植体幼嫩且便于大量获得，污染率低；同时，采用液体悬浮培养的诱导培养方式，出芽量大且迅速，一个月后即可获得大量优质的丛生芽。采用本发明，具有出芽时间短、出芽率和增殖率高、小鳞茎生长发育迅速等优点。

Description

一种红花石蒜诱导丛生芽的方法

技术领域

本发明涉及植物快速繁殖技术领域，尤其涉及一种红花石蒜诱导丛生芽的方法。

背景技术

红花石蒜的自然繁殖率相当低，平均每年仅产生1～2个子球。组织培养是红花石蒜快速获得再生小鳞茎的常用途径，也是最终实现大量繁殖的有效方式。与一般繁殖方式相比，组织培养不受季节和空间的限制，繁殖率高，而且高效的离体再生体系也是进一步建立遗传转化体系的基本条件。

尽管有关红花石蒜的离体快繁已有较多报道，但污染和褐化问题严重，成活率低，初代诱芽周期长(出芽时间一般需要30～40天，出芽率一般为60％左右)，且小鳞茎生长发育缓慢(第一年直径增加2.0cm左右)，这些都是红花石蒜组织培养方法难以突破的瓶颈。

发明内容

本发明提供了一种红花石蒜诱导丛生芽的方法，通过扦插培育获得幼嫩的外植体材料，再通过液体悬浮培养，能够诱导红花石蒜快速产生大量优质的丛生芽。

一种红花石蒜诱导丛生芽的方法，包括：

(1)取红花石蒜的鳞茎扦插于基质中，培育60～90d，获得幼嫩的小鳞茎；

(2)小鳞茎经消毒后，接种于液体培养基中进行诱导培养；

(3)诱导出芽后，转移到固体培养基中进行增殖培养，获得丛生芽；

其中，所述的液体培养基中含有浓度为0.5～1.0mg/L的α-萘乙酸和浓度为3.0～5.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤。

步骤(1)中，所述的基质可以由泥炭和珍珠岩混合而成。

优选地，所述的泥炭和珍珠岩的体积比为3∶1～4∶1，疏松通气，最有利于插穗的生长。

通过所述的扦插获得的小鳞茎为幼嫩的一年生小鳞茎，能大量、快速地获得；且小鳞茎含少量或不含内生菌，接种后污染率极低。

步骤(2)中，所述的消毒包括：将小鳞茎洗净，以基盘为中心纵切为2～4块，用70％～80％乙醇浸泡30～60s，接着用重量体积浓度为0.1％～0.2％的升汞浸泡3～5min，最后用蒸馏水冲洗干净。

优选地，所述的液体培养基中还含有浓度为20～40g/L的蔗糖，利于芽生长。

所述诱导培养的培养条件优选为：于24～26℃、转速80～100rpm的恒温摇床中，暗培养30～45d。采用该培养条件能快速诱导出芽。

步骤(3)中，所述固体培养基的配方优选为：蔗糖20～40g/L，琼脂8～10g/L，α-萘乙酸0.5～1.0mg/L，6-苄氨基腺嘌呤3.0～5.0mg/L。

所述增殖培养的培养条件优选为：于24～26℃的恒温培养室中培养90～180d。

本发明提供的上述方法可以用于红花石蒜的组织培养中，具体为：对上述方法获得的丛生芽进行生根培养、移栽等，即可获得红花石蒜的组织培养植株。

本发明方法以红花石蒜鳞茎扦插培育获得的小鳞茎作为外植体材料，外植体幼嫩且便于大量获得，污染率低；同时，采用液体悬浮培养的诱导培养方式，出芽量大且迅速，一个月后即可获得大量优质的丛生芽。采用本发明方法，具有出芽时间短、出芽率和增殖率高、小鳞茎生长发育迅速等优点。

附图说明

图1为本发明对比例1以双鳞片作外植体，培养40d时的出芽情况；

图2为本发明对比例1以双鳞片作外植体，培养160d时的出芽情况；

图3为本发明实施例1鳞茎扦插3个月后获得的幼嫩小鳞茎；

图4为本发明实施例1小鳞茎经液体培养一个月再转至固体培养基后160d时的出芽情况。

具体实施方式

实施例1

(1)于春夏季取成熟红花石蒜的鳞茎(平均周径13.40cm，平均鲜重34.89g，平均鳞片数15层)，以基盘为中心按照“十”字形进行四分切割，获得的鳞茎块置于基质(泥炭和珍珠岩的体积比为3∶1)中进行扦插；90d后每个鳞茎块产生1～6个直径约1.0cm的小鳞茎，可作外植体材料。

(2)将扦插获得的幼嫩小鳞茎去根、去残留的母鳞片，洗净，切去鳞茎上部1/2的部分；再以基盘为中心“十”字形纵切为4块，用70％乙醇浸泡30s，接着用重量体积浓度为0.1％的升汞浸泡5min，最后用蒸馏水冲洗干净。

(3)经消毒后的材料无菌接种到液体培养基中，置于25℃、转速100rpm的恒温摇床中，暗培养；一个月后产生较多丛生芽，叶片迅速伸长，出芽率高达85.7％，增殖率可达231％；

其中，液体培养基的配方为：蔗糖30g/L，α-萘乙酸0.5mg/L，6-苄氨基腺嘌呤5.0mg/L。

(4)将材料转至固体培养基继续培养；培养160d时腋芽数最多可达10个；

其中，固体培养基的配方为：蔗糖30g/L，琼脂8g/L，α-萘乙酸0.5mg/L，6-苄氨基腺嘌呤5.0mg/L。

对比例1常规双鳞片法组织培养红花石蒜

(1)将鳞茎去除褐色皮膜、去根，用洗涤剂清洗；切除鳞茎上部2/3的部分，以鳞茎基盘为中心十字纵切，再用流水冲洗30min；用70％乙醇浸泡30s，接着用重量体积浓度为0.1％的升汞浸泡10min，最后用蒸馏水冲洗干净。

(2)消毒后去掉鳞茎块最外层鳞片，并将材料边缘部分切除，再将鳞茎块由外层向内层分切获得若干个带基盘的双鳞片，接种至蔗糖30g/L，琼脂8g/L，α-萘乙酸0.5mg/L，6-苄氨基腺嘌呤5.0mg/L的固体培养基，于25℃恒温培养室培养160天。

Claims

1.一种红花石蒜诱导丛生芽的方法，包括：

（1）取红花石蒜的鳞茎扦插于基质中，培育60～90d，获得幼嫩的小鳞茎；

（2）小鳞茎经消毒后，接种于液体培养基中进行诱导培养；

（3）诱导出芽后，转移到固体培养基中进行增殖培养，获得丛生芽；

其中，所述的液体培养基中含有浓度为0.5～1.0mg/L的α-萘乙酸、浓度为3.0～5.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和浓度为20～40g/L的蔗糖；

所述诱导培养的培养条件为：于24～26℃、转速80～100rpm的恒温摇床中，暗培养30～45d；

所述固体培养基的配方为：蔗糖20～40g/L，琼脂8～10g/L，α-萘乙酸0.5～1.0mg/L，6-苄氨基腺嘌呤3.0～5.0mg/L；

所述增殖培养的培养条件为：于24～26℃的恒温培养室中培养90～180d。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述的基质由泥炭和珍珠岩混合而成。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的泥炭和珍珠岩的体积比为3:1～4:1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述的消毒包括：将小鳞茎洗净，以基盘为中心纵切为2～4块，用70%～80%乙醇浸泡30～60s，接着用重量体积浓度为0.1%～0.2%的升汞浸泡3～5min，最后用蒸馏水冲洗干净。