CN104585036B - 一种北美海棠高原之火腋芽的组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种北美海棠高原之火腋芽的组培快繁方法，以高原之火海棠的春季嫩枝上的腋芽为外植体，经过消毒和接种后，在初代培养基上培养至腋芽萌发后，将外植体转到增殖培养基上进行增殖培养，当丛芽长至2-3cm时转接到生根培养基上进行诱导生根，形成完整植株，小苗经炼苗、驯化、移栽成活后获得扩繁苗。该快繁方法采用组织培养技术对高原之火海棠的腋芽进行诱导，建立腋芽再生植株的离体快繁技术体系，既能保持优良的品种，又能大规模的提供苗木，同时该方法的增殖率在340%以上，小苗生根率达65%以上，成活率在80%以上，可加快高原之火北美海棠的繁殖速度和规模，具有很好的实用性。
Description
技术领域
本发明涉及海棠组培技术领域，具体涉及一种北美海棠高原之火腋芽的组培快繁方法。
背景技术
北美海棠高原之火系从北美洲引进的蔷薇科苹果属落叶小乔木，新叶亮酒红色，成熟叶呈橄榄绿色，深秋叶由棕绿向酒红渐变。4月下旬花开，花期两周左右，花蕾红色，花瓣深紫红色。果实呈灯笼形，紫红色、垂悬，秋季明亮的红果可挂果至次年一月份，结果量大。该品种具有较强的抗病性、抗旱性和耐寒性，种植范围广，既可作盆花，也可做行道树，是集观花、观果、观叶于一体的优良精品树种之一。由于高原之火系从国外引进，种子较少，现大部分通过嫁接和扦插繁殖，但由于受季节、接穗和插条数量的限制，不能进行大规模的繁殖，因而限制了该品种的推广栽培。
发明内容
发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明提出一种北美海棠高原之火腋芽的组培快繁方法，采用组织培养的方法对高原之火海棠的腋芽进行诱导，建立腋芽再生植株的离体快繁技术体系，既能保持优良的品种，又能大规模的提供苗木，摆脱季节的限制，对高原之火海棠优良品种的推广和应用提供技术支持。
技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：
一种北美海棠高原之火腋芽的组培快繁方法，包括以下步骤：
1）4月份选取高原之火海棠母株上的嫩枝条，进行去污、消毒处理，备用；
2）将嫩枝条切成带有1个腋芽的茎段，接种在初代培养基上进行培养；培养室温度为25±2℃，光照时间14h，光照强度55μmolm–2s–1；初代培养5d后，腋芽开始萌动，20d后，腋芽抽长并开始产生从生芽；所述初代培养基为：MT+1.0mg/LBA+0.2mg/LIBA或1/2MS+1.5mg/LBA+0.2mg/LIBA，培养基中含3%蔗糖、0.54%琼脂，pH5.8；
3）从培养20d后的从生芽中，剪取1.0-2.0cm的单芽转接入增殖培养基中，培养25d后，出现大量的丛生芽；增殖培养基为：1/2MS+0.5~1.0mg/LBA+0.5~1.0mg/LIBA，培养基中含3%蔗糖、0.54%琼脂，pH5.8；
4）剪取长度为2-3cm的丛生芽接种到生根培养基中，20d后开始生根，培养40d后，形成健壮的再生植株；生根培养基为：1/4MS+1.0mg/LIBA或1/2MS+1.0mg/LIBA+0.15%活性炭；培养基中含3%蔗糖、0.54%琼脂，pH5.8；
5）待生根的小苗长至5~6cm、根5~6条时将小苗进行驯化移栽，成活后获得扩繁苗。
步骤1）中的去污为：4月份选取高原之火海棠母株上长5cm的嫩枝条，用肥皂水浸泡10min，并用软毛刷刷去表面污渍，再用流水冲洗2h后，获得外植体备用；
步骤1）中的消毒为：在超净工作台上先用75%酒精对外植体浸泡30s后，用无菌水冲洗3~4次，再用0.1%升汞消毒9min，期间不断搅拌，再用无菌水清洗4-5次，无菌滤纸吸干表面水分待用。
步骤5）中的驯化移栽为：驯化时将瓶盖拧松在温室中放置1d，然后打开瓶盖继续放置1-2d，将小苗从瓶中取出洗去根部培养基，移入装有基质的容器中，小苗上部用带孔透明的塑料薄膜遮盖，7d后去除。
步骤5）中，移栽所用的基质为蛭石：有机土：林下土=1:1:1，基质要求用800倍多菌灵药液拌合以防止病虫害；移栽后每隔2d浇一次水，一周浇一次1/4Haogland营养液或其他肥料。
有益效果：与现有技术相比，本发明的北美海棠高原之火腋芽的快繁方法，采用组织培养的方法对高原之火海棠的腋芽进行诱导，建立腋芽再生植株的离体快繁技术体系，既能保持优良的品种，又能大规模的提供苗木，同时该方法的增殖率在340%，小苗生根率达65%以上，成活率在80%以上，有效解决扦插和嫁接受季节限制、繁殖系数低，成活率低的问题，可加快高原之火北美海棠的繁殖速度和规模，对高原之火海棠优良品种的推广和应用提供技术支持，具有很好的实用性。
附图说明
图1是腋芽诱导过程图；
图2是腋芽的增殖图；
图3是丛生芽的增殖图；
图4是生根苗图；
图5是组培扩繁苗图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种高原之火海棠组织培养的快速繁殖方法，包括以下步骤：
1）外植体的选择和预处理：4月份选取高原之火海棠母株上长5cm左右的嫩枝条，用肥皂水浸泡10min，并用软毛刷刷去表面污渍，再用流水冲洗2h后备用。
2）外植体的消毒：在超净工作台上先用75%酒精对外植体浸泡30s后，用无菌水冲洗3次，再用0.1%升汞消毒9min，期间不断搅拌，再用无菌水清洗4次，无菌滤纸吸干表面水分待用。
3）初代培养：外植体经消毒处理后切成约2cm带有1个腋芽的茎段，接种在初代培养基上进行培养（图1）。培养室温度为25±2℃，光照时间14h，光照强度55μmolm–2s–1。初代培养基为：MT+1.0mg/LBA+0.2mg/LIBA，培养基中含3%蔗糖、0.54%琼脂，pH5.8左右。初代培养5d后，腋芽开始萌动，20d后，腋芽抽长并开始产生丛生芽（图2）。
4）继代与增殖培养：将初代培养基上培养20d后的丛生芽中，剪取1.0-2.0cm的单芽转接入增殖培养基中，培养室温度为25±2℃，光照时间14h，光照强度55μmolm–2s–1。25d后，出现大量的丛生芽（图3），丛芽数达10.0个，增殖率在340%左右。增殖培养基为：1/2MS+0.5mg/LBA+0.5mg/LIBA，培养基中含3%蔗糖、0.54%琼脂，pH5.8左右。
5）生根培养：剪取长度为2-3cm左右的芽苗接种到生根培养基中，20d后开始生根，培养40d后，形成健壮的再生植株（图4）；生根培养基为：1/4MS+1.0mg/LIBA；培养基中含3%蔗糖、0.54g/L琼脂，pH5.8左右。再生植株生根率达65%以上。
6）驯化移栽：待生根的再生植株长至5~6cm，根5~6条时将小苗进行驯化移栽。驯化时将瓶盖拧松在温室中放置1d，然后打开瓶盖继续放置1d，将小苗从瓶中取出洗去根部培养基，移入装有基质的无纺布容器中，小苗上部用带孔透明的塑料薄膜遮盖，7d后去除。移栽所用的基质为蛭石：有机土：林下土=1:1:1，基质要求用800倍多菌灵药液拌合以防止病虫害。移栽后保持70%左右湿度，适当通风，每隔2d浇一次水，一周浇一次1/4Haogland营养液或其他肥料，成活率在80%以上。
（7）移栽成活后进行常规管理，获得扩繁苗（图5）。
实施例2
一种高原之火海棠组织培养的快速繁殖方法，包括以下步骤：
1）外植体的选择和预处理：4月份选取高原之火海棠母株上长5cm左右的嫩枝条，用肥皂水浸泡10min，并用软毛刷刷去表面污渍，再用流水冲洗2h后备用。
2）外植体的消毒：在超净工作台上先用75%酒精对外植体浸泡30s后，用无菌水冲洗4次，再用0.1%升汞消毒9min，期间不断搅拌，再用无菌水清洗5次，无菌滤纸吸干表面水分待用。
3）初代培养：外植体经消毒处理后切成约2cm带有1个腋芽的茎段，接种在初代培养基上进行培养（图1）。培养室温度为25±2℃，光照时间14h，光照强度55μmolm–2s–1。初代培养基为：1/2MS+1.5mg/LBA+0.2mg/LIBA，培养基中含3%蔗糖、0.54%琼脂，pH5.8左右。初代培养6d后，腋芽开始萌动，18d后，腋芽抽长并开始产生丛生芽。
4）继代与增殖培养：将初代培养基上培养的丛生芽中，剪取1.0-2.0cm的单芽转接入增殖培养基中，培养室温度为25±2℃，光照时间14h，光照强度55μmolm–2s–1。25d后，出现大量的丛生芽，丛芽数达10个以上，增殖率在350%左右。增殖培养基为：1/2MS+1.0mg/LBA+1.0mg/LIBA，培养基中含3%蔗糖、0.54%琼脂，pH5.8左右。
5）生根培养：剪取长度为2-3cm左右的芽苗接种到生根培养基中，20d后开始生根，培养40d后，形成健壮的再生植株；生根培养基为：1/2MS+1.0mg/LIBA+0.15%活性炭；培养基中含3%蔗糖、0.54%琼脂，pH5.8左右。再生植株生根率达70%以上。
6）驯化移栽：待生根的再生植株长至5~6cm，根5~6条时将小苗进行驯化移栽。驯化时将瓶盖拧松在温室中放置1d，然后打开瓶盖继续放置2d，将小苗从瓶中取出洗去根部培养基，移入装有基质的无纺布容器中，小苗上部用带孔透明的塑料薄膜遮盖，7d后去除。移栽所用的基质为蛭石：有机土：林下土=1:1:1，基质要求用800倍多菌灵药液拌合以防止病虫害。移栽后保持70%左右湿度，适当通风，每隔2d浇一次水，一周浇一次1/4Haogland营养液或其他肥料，成活率在85%以上。
（7）移栽成活后进行常规管理，获得扩繁苗。
Claims (5)
1.一种北美海棠高原之火腋芽的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）4月份选取高原之火海棠母株上的嫩枝条，进行去污、消毒处理，备用；
2）将嫩枝条切成带有1个腋芽的茎段，接种在初代培养基上进行培养；培养室温度为25±2℃，光照时间14h，光照强度55μmolm–2s–1；初代培养5d后，腋芽开始萌动，20d后，腋芽抽长并开始产生丛生芽；所述初代培养基为：MT+1.0mg/LBA+0.2mg/LIBA或1/2MS+1.5mg/LBA+0.2mg/LIBA，培养基中含3%蔗糖、0.54%琼脂，pH5.8；
3）从培养20d后的丛生芽中，剪取1.0-2.0cm的单芽转接入增殖培养基中，培养25d后，出现大量的丛生芽；增殖培养基为：1/2MS+0.5~1.0mg/LBA+0.5~1.0mg/LIBA，培养基中含3%蔗糖、0.54%琼脂，pH5.8；
4）剪取长度为2-3cm的丛生芽接种到生根培养基中，20d后开始生根，培养40d后，形成健壮的再生植株；生根培养基为：1/4MS+1.0mg/LIBA或1/2MS+1.0mg/LIBA+0.15%活性炭；培养基中含3%蔗糖、0.54%琼脂，pH5.8；
5）待生根的小苗长至5~6cm、根5~6条时将小苗进行驯化移栽，成活后获得扩繁苗。
2.根据权利要求1所述的北美海棠高原之火腋芽的组培快繁方法，其特征在于：步骤1）中的去污为：4月份选取高原之火海棠母株上长5cm的嫩枝条，用肥皂水浸泡10min，并用软毛刷刷去表面污渍，再用流水冲洗2h后，获得外植体备用。
3.根据权利要求2所述的北美海棠高原之火腋芽的组培快繁方法，其特征在于：步骤1）中的消毒为：在超净工作台上先用75%酒精对外植体浸泡30s后，用无菌水冲洗3~4次，再用0.1%升汞消毒9min，期间不断搅拌，再用无菌水清洗4-5次，无菌滤纸吸干表面水分待用。
4.根据权利要求1所述的北美海棠高原之火腋芽的组培快繁方法，其特征在于：步骤5）中的驯化移栽为：驯化时将瓶盖拧松在温室中放置1d，然后打开瓶盖继续放置1-2d，将小苗从瓶中取出洗去根部培养基，移入装有基质的容器中，小苗上部用带孔透明的塑料薄膜遮盖，7d后去除。
5.根据权利要求1或4所述的北美海棠高原之火腋芽的组培快繁方法，其特征在于：移栽所用的基质为蛭石：有机土：林下土=1:1:1，基质要求用800倍多菌灵药液拌合以防止病虫害；移栽后每隔2d浇一次水，一周浇一次1/4Haogland营养液。
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Legal Events
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Application publication date: 20150506 Assignee: NANJING LVZHOU PECAN CO.,LTD. Assignor: Nanjing Forestry University Contract record no.: 2018320000222 Denomination of invention: Tissue culture rapid-propagation method of fire axillary bud of North American crabapple tableland Granted publication date: 20160525 License type: Common License Record date: 20181022 |
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Application publication date: 20150506 Assignee: Yangzhou little apple gardening Co.,Ltd. Assignor: Nanjing Forestry University Contract record no.: 2019320000037 Denomination of invention: Tissue culture rapid-propagation method of fire axillary bud of North American crabapple tableland Granted publication date: 20160525 License type: Common License Record date: 20190319 |
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Effective date of registration: 20190919 Address after: 211200 Kangju Road, Baima Town, Lishui District, Nanjing City, Jiangsu Province, 2-2 Patentee after: Jiangsu Qinghao Landscape Horticulture Co.,Ltd. Address before: Nanjing City, Jiangsu province 210037 Longpan Road No. 159 Patentee before: Nanjing Forestry University |
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Granted publication date: 20160525 |