CN105165610A - 一种百日草脱毒种苗的高效扩繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，包括以下步骤：1）百日草脱毒苗前处理；2）不定芽的诱导；3）切割不定芽继代增殖；4）炼苗；5）水培生根处理；6）水培壮苗；7）移栽。本发明的高效扩繁方法解决了百日草脱毒苗扩繁过程中效率低下、易再次污染的问题，不仅能在短时间内扩繁出大量优良百日草脱毒种苗，而且还避免了百日草分株繁殖和种子繁殖所带来的品种退化问题，而且操作简单、易于工厂化推广，具有较高的生产实用价值。

Description

一种百日草脱毒种苗的高效扩繁方法

技术领域

本发明涉及一种百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，具体涉及一种能够在短时间内扩繁出大量优良百日草脱毒种苗的扩繁方法，属于园艺栽培技术领域。

背景技术

百日草，菊科，百日草属，原产北美、墨西哥及南美等地，因节节升高，花越开越繁茂，获诸多美名，如状元红、火球花、百日菊、步步高等。百日草喜温暖，不耐寒，耐干旱，宜阳光充足，在长日照条件下舌状花增多。百日草花期长，花量大，每株自初花至霜冻开30-40朵。优良品种多为千层瓣，花色极其丰富，为夏秋季花坛常用花卉，百日草花姿十分优美，色彩鲜艳多变，深受人们喜爱，为阿拉伯联合酋长国国花。墨西哥是百日草的原始产地，对百日草的育种研究也居世界之首，不断向各国推出新品种，成为墨西哥花卉出口的支柱产业。百日草在我国南北方也广泛栽培，有“庶民之花”的美称，为绿化主栽品种之一。

目前我国已成为世界上最大的花卉种子潜在消费市场，草花种子每年的销售量都以20%的增幅上升。百日草虽然在我国各大中城市普遍栽培，但百日草种子几乎被美国公司所控制，种子依赖国外进口，且价格昂贵，而进口种子为F1代，后代易出现形、色分离的情况，而采用分株繁殖每株每年仅可分出5-6个新株，无法满足产业化生产的要求，并且一直用分株繁殖，容易使病毒逐代积累，从而造成百日草品种退化严重。

组织培养技术是目前百日草商品化生产的主要繁殖方式，既可在短期内生产优良种苗，也可用于生产脱毒苗，防止种质退化。2近年来，国内外相继展开了对百日草组织培养和快速繁殖的研究，百日草采用离体培养方法进行快繁，短期内就可得到大量整齐的种苗。然而，目前百日草脱毒之后的快繁方法存在诱导率较低、诱导苗质量差且多弱苗、幼苗增殖效率低、苗移栽成活率低等问题，严重制约了百日草种苗工厂化、规模化生产。因此，建立健全简单经济的百日草脱毒种苗扩繁技术，对促进百日草脱毒种苗工厂化、规模化生产，对百日草优良品种的推广具有广阔的市场前景。

发明内容

为解决目前百日草脱毒苗扩繁方法存在的诱导率较低、诱导苗质量差且多弱苗、幼苗增殖效率低、苗移栽成活率低等问题，本发明提供了一种百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，通过建立健全了培养程序、培养条件和培养组分的配比，提高了诱导苗的质量和增殖效率、移栽成活率，从而建立了高品质和高数量快繁体系。

本发明的目的是通过以下技术方案解决的：

一种百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：该方法步骤如下：

1）百日草脱毒苗前处理：将百日草脱毒苗清洗干净并表面消毒，在无菌条件下切取叶柄和花托，移入装有配制好的不定芽诱导培养基广口瓶中；

2）不定芽的诱导：将接种有脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，诱导出不定芽；

3）切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将不定芽切下，移入装有增殖培养基的广口瓶中培养，得到大量百日草幼苗；

4）炼苗：逐步采用增强培养光照、降低培养温度的方法进行炼苗；

5）水培生根处理：将炼苗后的脱毒试管苗从广口瓶中取出，保留原有根系，再将组培苗栽于水培盘中的栽培板上，水培盘中加入生根营养液；

6）水培壮苗：生根培养7天后，倒掉生根营养液，加入壮苗营养液；

7）移栽：将脱毒苗移栽到消过毒的基质上，置于室外自然光下生长。

该方法的详细步骤如下：

1）百日草脱毒苗前处理：

将百日草脱毒苗先用自来水反复冲洗，用毛刷蘸取洗洁精洗一遍后接着用超纯水冲洗干净，用70%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗两次，0.1%升汞内加数滴吐温20溶液浸泡5min，用无菌水冲洗4-5次，滤纸吸干，将百日草脱毒苗的叶柄和花托移入装有不定芽诱导培养基的广口瓶中；

2）不定芽的诱导：

为防百日草脱毒苗在生产过程中被病毒再浸染，培养室先经过消毒，消毒剂选用40%甲醛10ml/m³、高锰酸钾5g/m³，对整个培养室进行熏蒸2小时，熏蒸后，再采用75%乙醇擦拭培养架进行表面消毒，然后将接种有百日草脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，培养室温度控制为26±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1500-2000Lx，光周期控制为光14h/暗10h，25-30天诱导出不定芽；

3）切割不定芽继代增殖：

在无菌条件下将诱导2-3cm的不定芽从外植体上完整的切下，转接到装有增殖培养基的广口瓶中，培养室温度控制为24±1℃、光照强度控制为1500-2000Lx、光周期控制为光12h/暗12h下培养，培养15-25天后可得到大量百日草幼苗；

4）炼苗：

筛选5-8cm的百日草脱毒试管苗，转移到光照强度为2500-3500lx的条件下，3-5天后，将培养温度降低为20-22℃，再过3-5天，打开广口瓶封口，继续炼苗3-5天；

5）水培生根处理：

为减少转接对脱毒试管苗根系带来的伤害，转接前向广口瓶内加入少量水，并用镊子轻轻搅动培养基，以免把苗子倒出时损伤根，试管苗倒出后洗净根上的培养基，移栽到装有生根培养液的水培盘中的栽培板上，栽培密度1000-1200苗/m²，株距2-3cm，行距2-3cm，水培器皿用盆底长×宽=44×32cm，盆高=15cm的塑料盆作为栽培盆，每盆放2L营养液，并有定植孔间距为2cm-3cm的栽培板漂浮在营养液上，将脱毒苗上方搭上一层透明的塑料薄膜，使其处于温度22-25℃、湿度≥90%、光照强度为2000-3000lx的清洁的温室内环境生长；

6）水培壮苗：

生根培养7天后，脱毒苗根系基本发育完全，此时，撤掉塑料薄膜，倒掉生根营养液，给幼苗浇施壮苗营养液；

7）移栽：

当百日草脱毒苗长到12-15cm时，移栽到消过毒的基质上，移栽密度为行距15cm、株距10cm，塑料薄膜覆盖保湿，10-15天后逐步除去薄膜，置于室外自然光下生长。

百日草品种选为芳菲1号、芳菲2号和芳菲3号。

步骤1）和2）中的不定芽诱导培养基的配方为：MS+0.5mg/LKT+1.5mg/L6-BA+0.4mg/LGA+0.3g/LCH+3%蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.8。

步骤3）中的增殖培养基配方为：MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+3%蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.8。

步骤5）和6）中的生根培养液配方为：500mg/LKNO₃，500mg/LNH₄NO₃，92.5mg/LMgSO₄·7H₂O，173mg/LCa(NO₃)₂·4H₂O，150mg/LKH₂PO₄，32mg/LKCl，17mg/LMnSO₄·7H₂O，19mg/LNa₂-EDTA，14mg/LFeSO₄·7H₂O，2.2mg/LMnSO₄·4H₂O，0.8mg/LZnSO₄·7H₂O，0.8mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成生根营养液。

步骤5）和6）中的生根培养液的另一种可选配方为：950mg/LKNO₃，825mg/LNH₄NO₃，85mg/LKH₂PO₄，220mg/LCaCl₂·2H₂O，185mg/LMgSO₄·7H₂O，19mg/LNa₂-EDTA，14mg/LFeSO₄·7H₂O，11mg/LMnSO₄·4H₂O，0.4mg/LKI，3.1mg/LH₃BO₃，4.3mg/LZnSO₄·7H₂O，0.125mg/LNa₂MoO₄，0.0125mg/LCuSO₄，0.0125mg/LCoCl₂·6H₂O，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成生根营养液。

步骤6）中的壮苗营养液配方为：850mg/LKNO₃，750mg/LNH₄NO₃，165mg/LMgSO₄·7H₂O，75mg/LKH₂PO₄，200mg/LCaCl₂·2H₂O，20mg/LNa₂-EDTA，15mg/LFeSO₄·7H₂O，10.5mg/LMnSO₄·4H₂O，4.25mg/LZnSO₄·7H₂O，3.0mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，0.12mg/LNa₂M_OO₄·2H₂0，0.012mg/LCoC1₂·6H₂O，0.012mg/LCuSO₄·5H₂O，0.4mg/LKI，30mg/L肌醇，0.5mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成壮苗营养液。

步骤7）中的消过毒的基质成分为等体积比例的草炭、珍珠岩、蛭石。

本发明的有益效果：

（1）本发明消毒方法简单、有效，外植体消毒效果好，外植体的污染率降低为5%以下；

（2）本发明解决了现有技术诱导率较低、增殖效率低的缺点，不定芽诱导率比平均水平提高30%左右；不定芽增殖效率比平均水平提高30%左右；最终扩繁效率提高了70%左右；

（3）本发明解决了现有技术种苗质量差、弱苗多的缺点，获得的种苗质量高，弱苗或死苗率降低到仅有1%左右；

（4）本发明苗移栽成活率比现有技术大大提高，移栽成活率达到99%以上。

附图说明

图1是芳菲2号不定芽诱导的结果图；

图2是芳菲2号不定芽增殖的结果图；

图3是本技术路线离体快繁获得大量优质芳菲2号种苗的结果图。

具体实施方式

以下实施例结合附图进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。

实施例1

本实施例的百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，实验品种选为芳菲2号，实施时间为2014年-2015年，芳菲2号脱毒苗前处理、植株再生及炼苗在连云港市振兴花卉园进行，组培苗移栽在连云港市东辛农场花卉试验基地内进行，详细步骤如下：

1）芳菲2号脱毒苗前处理：

将芳菲2号脱毒苗先用自来水反复冲洗，用毛刷蘸取洗洁精洗一遍后接着用超纯水冲洗干净，用70%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗两次，0.1%升汞内加数滴吐温20溶液浸泡5min，用无菌水冲洗4-5次，滤纸吸干，将芳菲2号脱毒苗的叶柄和花托移入装有不定芽诱导培养基（配方为：MS+0.5mg/LKT+1.5mg/L6-BA+0.4mg/LGA+0.3g/LCH+3%蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.8）的广口瓶中，为对比本发明不定芽诱导培养基的效果，同时选择了另外一种不定芽诱导培养基，培养基配方分别为：MS+0.2mg/LKT+2.0mg/LBA+0.5mg/LGA+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，pH为5.8（对比文件来自于曹彤彤等《百日草组织培养技术的研究》）

2）芳菲2号不定芽的诱导：

为防脱毒苗在生产过程中被病毒再浸染，培养室先经过消毒，消毒剂选用40%甲醛10ml/m³、高锰酸钾5g/m³，对整个培养室进行熏蒸2小时，熏蒸后，再采用75%乙醇擦拭培养架进行表面消毒，然后将接种有芳菲2号脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，培养室温度控制为26±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1800Lx，光周期控制为光14h/暗10h，培养26天后观察到诱导出了不定芽，如图1，统计不定芽诱导率，本发明芳菲2号不定芽诱导率达到74.4%，显著高于对比例53.2%的不定芽诱导率；

3）切割不定芽继代增殖：

在无菌条件下将诱导2-3cm的不定芽从外植体上完整的切下，转接到装有增殖培养基（培养基配方为：MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+3%蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.8）的广口瓶中，为对比本发明增殖培养基的效果，同时选择了另一种增殖培养基，培养基配方为：MS+1.0mg/L6-BA+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，pH为5.8（对比文件来自于曹彤彤等《百日草组织培养技术的研究》），培养室温度控制为24±1℃、光照强度控制为1800Lx、光周期控制为光12h/暗12h下培养，培养20天左右得到大量芳菲2号幼苗，如图2，统计两种培养基配方对芳菲2号增值效率的影响，结果发现本发明不定芽增殖倍数达到11.3，而对比例为8.1；

4）炼苗：

筛选5-8cm的芳菲2号脱毒试管苗，转移到光照强度为3000lx的条件下，5天后，将培养温度降低为21±1℃，再过5天，打开广口瓶封口，继续炼苗5天；

5）水培生根处理：

为减少转接对脱毒试管苗根系带来的伤害，转接前向广口瓶内加入少量水，并用镊子轻轻搅动培养基，以免把苗子倒出时损伤根，试管苗倒出后洗净根上的培养基，移栽到装有生根培养液（培养液配方为：500mg/LKNO₃，500mg/LNH₄NO₃，92.5mg/LMgSO₄·7H₂O，173mg/LCa(NO₃)₂·4H₂O，150mg/LKH₂PO₄，32mg/LKCl，17mg/LMnSO₄·7H₂O，19mg/LNa₂-EDTA，14mg/LFeSO₄·7H₂O，2.2mg/LMnSO₄·4H₂O，0.8mg/LZnSO₄·7H₂O，0.8mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成生根营养液）的水培盘中的栽培板上，栽培密度1200苗/m²，株距2.5cm，行距2.5cm，水培器皿用盆底长×宽=44×32cm，盆高=15cm的塑料盆作为栽培盆，每盆放2L营养液，并有定植孔间距为2cm-3cm的栽培板漂浮在营养液上，将脱毒苗上方搭上一层透明的塑料薄膜，使其处于温度24℃、湿度≥90%、光照强度为2500lx的清洁的温室内环境生长；

6）水培壮苗：

生根培养7天后，脱毒苗根系基本发育完全，此时，撤掉塑料薄膜，倒掉生根营养液，给幼苗浇施壮苗营养液（营养液配方为：850mg/LKNO₃，750mg/LNH₄NO₃，165mg/LMgSO₄·7H₂O，75mg/LKH₂PO₄，200mg/LCaCl₂·2H₂O，20mg/LNa₂-EDTA，15mg/LFeSO₄·7H₂O，10.5mg/LMnSO₄·4H₂O，4.25mg/LZnSO₄·7H₂O，3.0mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，0.12mg/LNa₂M_OO₄·2H₂0，0.012mg/LCoC1₂·6H₂O，0.012mg/LCuSO₄·5H₂O，0.4mg/LKI，30mg/L肌醇，0.5mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成壮苗营养液）；

7）移栽：

当百日草脱毒苗长到12-15cm时，移栽到消过毒的等体积比例的草炭、珍珠岩、蛭石的基质上，移栽密度为行距15cm、株距10cm，塑料薄膜覆盖保湿，12天后逐步除去薄膜，置于室外自然光下生长，获得生长活力强的芳菲2号种苗，如图3，统计移栽成活率达99%以上。

由实施例可见本发明效果显著：（1）在步骤2）中，统计不定芽诱导率，对芳菲2号不定芽诱导率达到74.4%，显著高于对比例53.2%的不定芽诱导率；统计步骤3）中不定芽增殖效率，本发明的不定芽增殖倍数达到11.3，显著高于对比例8.1的增殖倍数；最终扩繁效率提高了近一倍；（2）获得的种苗质量高、无病虫害，弱苗或死苗率在1%以下；（3）苗移栽成活率比现有技术大大提高，移栽成活率达到约99%。

本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内容作出替换或变型，但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的，这些替换或变型均在本发明要求保护的权利范围内。

Claims (9)

1.一种百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：该方法步骤如下：

1）百日草脱毒苗前处理：将百日草脱毒苗清洗干净并表面消毒，在无菌条件下切取叶柄和花托，移入装有配制好的不定芽诱导培养基广口瓶中；

2）不定芽的诱导：将接种有脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，诱导出不定芽；

3）切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将不定芽切下，移入装有增殖培养基的广口瓶中培养，得到大量百日草幼苗；

4）炼苗：逐步采用增强培养光照、降低培养温度的方法进行炼苗；

5）水培生根处理：将炼苗后的脱毒试管苗从广口瓶中取出，保留原有根系，再将组培苗栽于水培盘中的栽培板上，水培盘中加入生根营养液；

6）水培壮苗：生根培养7天后，倒掉生根营养液，加入壮苗营养液；

7）移栽：将脱毒苗移栽到消过毒的基质上，置于室外自然光下生长。

2.根据权利要求1所述的百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：该方法的详细步骤如下：

1）百日草脱毒苗前处理：

将百日草脱毒苗先用自来水反复冲洗，用毛刷蘸取洗洁精洗一遍后接着用超纯水冲洗干净，用70%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗两次，0.1%升汞内加数滴吐温20溶液浸泡5min，用无菌水冲洗4-5次，滤纸吸干，将百日草脱毒苗的叶柄和花托移入装有不定芽诱导培养基的广口瓶中；

2）不定芽的诱导：

为防百日草脱毒苗在生产过程中被病毒再浸染，培养室先经过消毒，消毒剂选用40%甲醛10ml/m³、高锰酸钾5g/m³，对整个培养室进行熏蒸2小时，熏蒸后，再采用75%乙醇擦拭培养架进行表面消毒，然后将接种有百日草脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，培养室温度控制为26±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1500-2000Lx，光周期控制为光14h/暗10h，25-30天诱导出不定芽；

3）切割不定芽继代增殖：

在无菌条件下将诱导2-3cm的不定芽从外植体上完整的切下，转接到装有增殖培养基的广口瓶中，培养室温度控制为24±1℃、光照强度控制为1500-2000Lx、光周期控制为光12h/暗12h下培养，培养15-25天后可得到大量百日草幼苗；

4）炼苗：

筛选5-8cm的百日草脱毒试管苗，转移到光照强度为2500-3500lx的条件下，3-5天后，将培养温度降低为20-22℃，再过3-5天，打开广口瓶封口，继续炼苗3-5天；

5）水培生根处理：

为减少转接对脱毒试管苗根系带来的伤害，转接前向广口瓶内加入少量水，并用镊子轻轻搅动培养基，以免把苗子倒出时损伤根，试管苗倒出后洗净根上的培养基，移栽到装有生根培养液的水培盘中的栽培板上，栽培密度1000-1200苗/m²，株距2-3cm，行距2-3cm，水培器皿用盆底长×宽=44×32cm，盆高=15cm的塑料盆作为栽培盆，每盆放2L营养液，并有定植孔间距为2cm-3cm的栽培板漂浮在营养液上，将脱毒苗上方搭上一层透明的塑料薄膜，使其处于温度22-25℃、湿度≥90%、光照强度为2000-3000lx的清洁的温室内环境生长；

6）水培壮苗：

生根培养7天后，脱毒苗根系基本发育完全，此时，撤掉塑料薄膜，倒掉生根营养液，给幼苗浇施壮苗营养液；

7）移栽：

当百日草脱毒苗长到12-15cm时，移栽到消过毒的基质上，移栽密度为行距15cm、株距10cm，塑料薄膜覆盖保湿，10-15天后逐步除去薄膜，置于室外自然光下生长。

3.根据权利要求1或2所述的百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：百日草品种选为芳菲1号、芳菲2号和芳菲3号。

4.根据权利要求1或2所述的百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤1）和2）中的不定芽诱导培养基的配方为：MS+0.5mg/LKT+1.5mg/L6-BA+0.4mg/LGA+0.3g/LCH+3%蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.8。

5.根据权利要求1或2所述的百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤3）中的增殖培养基配方为：MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+3%蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.8。

6.根据权利要求1或2所述的百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤5）和6）中的生根培养液配方为：500mg/LKNO₃，500mg/LNH₄NO₃，92.5mg/LMgSO₄·7H₂O，173mg/LCa(NO₃)₂·4H₂O，150mg/LKH₂PO₄，32mg/LKCl，17mg/LMnSO₄·7H₂O，19mg/LNa₂-EDTA，14mg/LFeSO₄·7H₂O，2.2mg/LMnSO₄·4H₂O，0.8mg/LZnSO₄·7H₂O，0.8mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成生根营养液。

7.根据权利要求1或2所述的百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤5）和6）中的生根培养液的另一种可选配方为：950mg/LKNO₃，825mg/LNH₄NO₃，85mg/LKH₂PO₄，220mg/LCaCl₂·2H₂O，185mg/LMgSO₄·7H₂O，19mg/LNa₂-EDTA，14mg/LFeSO₄·7H₂O，11mg/LMnSO₄·4H₂O，0.4mg/LKI，3.1mg/LH₃BO₃，4.3mg/LZnSO₄·7H₂O，0.125mg/LNa₂MoO₄，0.0125mg/LCuSO₄，0.0125mg/LCoCl₂·6H₂O，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成生根营养液。

8.根据权利要求1或2所述的百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤6）中的壮苗营养液配方为：850mg/LKNO₃，750mg/LNH₄NO₃，165mg/LMgSO₄·7H₂O，75mg/LKH₂PO₄，200mg/LCaCl₂·2H₂O，20mg/LNa₂-EDTA，15mg/LFeSO₄·7H₂O，10.5mg/LMnSO₄·4H₂O，4.25mg/LZnSO₄·7H₂O，3.0mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，0.12mg/LNa₂M_OO₄·2H₂0，0.012mg/LCoC1₂·6H₂O，0.012mg/LCuSO₄·5H₂O，0.4mg/LKI，30mg/L肌醇，0.5mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成壮苗营养液。

9.根据权利要求1或2所述的百日草脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤7）中的消过毒的基质成分为等体积比例的草炭、珍珠岩、蛭石。