CN108012930B - 一种黑果枸杞组培不定芽瓶外生根方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种黑果枸杞组培不定芽瓶外生根方法，属于黑果枸杞组培技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将黑果枸杞茎段置于不定芽培养基中培养获得不定芽；2)将在不定芽培养基中获得的不定芽直接炼苗获得带根原基的不定芽；所述炼苗过程中向不定芽培养基中灌加生根粉溶液；3)将所述带根原基的不定芽消毒、IBA溶液浸泡基部后，移栽至基质中培养获得黑果枸杞成苗。所述方法操作简单方便、培养成本低，整个生产成本降低20％以上，更适合黑果枸杞种苗的规模化及工厂化生产和品种选育，为黑果枸杞无性快繁体系的建立及西北地区生态环境建设苗木的提供奠定了良好的基础，具有很好的经济效益、社会效益和生态效益。

Description

一种黑果枸杞组培不定芽瓶外生根方法

技术领域

本发明属于黑果枸杞组培技术领域，具体涉及一种黑果枸杞组培不定芽瓶外生根方法。

背景技术

黑果枸杞(Lyciumruthencium)，属于茄科枸杞属，为多棘刺灌木，多分枝，枝条坚硬，常呈之字形弯曲，白色。黑果枸杞分布于中国青海、宁夏、新疆、甘肃等地及欧洲中亚，属于典型的荒漠植物，对环境条件适应能力极强，具有抗旱、耐寒、耐贫瘠、耐盐碱的特点。

黑果枸杞是重要的经济植物及药食兼用的佳品。其果实可入药，具有增强免疫力、延缓衰老、预防癌症、改善睡眠等功效。目前，黑果枸杞主要以种子繁殖为主，也有大量关于黑果枸杞无性扦插繁殖、组织培养试管苗方面的研究报道，无性扦插繁殖虽然插穗生根后即可成苗，但存在不能扩繁，增殖速度慢的问题；而常规的组织培养繁殖过程中存在培养环节繁多、成苗慢、成本高的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种操作简单方便、增殖和成苗速度快、成活率高、成本低的黑果枸杞组培不定芽瓶外生根方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：一种黑果枸杞组培不定芽瓶外生根方法，包括以下步骤：1)将黑果枸杞茎段置于不定芽培养基中培养获得不定芽；2)将在不定芽培养基中获得的不定芽直接炼苗获得带根原基的不定芽；所述炼苗过程中向不定芽培养基中灌加生根粉溶液；3)将所述带根原基的不定芽消毒、IBA溶液浸泡基部后，移栽至基质中培养获得黑果枸杞成苗；所述步骤1)和步骤2)中的不定芽培养基为包括0.4～0.6mg/L的6-BA；0.08～0.12mg/L的2，4-D；7～13g/L的活性炭、8～12g/L的蔗糖和4～5g/L的琼脂的MS培养基。

优选的，步骤1)中所述培养获得不定芽过程在光照条件下进行；所述光照的强度为1800～2200lx。

优选的，所述光照的时间为10～14h/d。

优选的，步骤1)中所述培养获得不定芽的温度为23～27℃，所述培养获得不定芽的时间为20～35d。

优选的，步骤2)中所述的炼苗过程依次包括室内炼苗和室外炼苗两个阶段。

优选的，所述室内炼苗阶段的温度为18～22℃，湿度为50～60％，时间为5～7d。

优选的，步骤2)中所述生根粉溶液在室内炼苗阶段的第2d灌加；所述灌加生根粉溶液的灌加体积为不定芽培养基体积的0.4～0.6倍；所述生根粉溶液的质量浓度为0.15～0.25％；灌加生根粉溶液后，将所述不定芽置于黑暗条件下培养22～26h。

优选的，所述室内炼苗阶段的第4d将不定芽培养基中灌加的所述生根粉溶液吸出后，向所述不定芽培养基中灌加与灌加的生根粉溶液等体积的蒸馏水。

优选的，所述室外炼苗阶段的温度为24～26℃，湿度为60～70％，时间为2～4d。

优选的，步骤3)中所述的IBA溶液的浓度为1.0～2.0mg/L，所述浸泡时间为15～25min。

本发明的有益效果：本发明提供的一种黑果枸杞组培不定芽瓶外生根方法中不定芽培养基包括6-BA和2,4-D为植物生长调节剂，促进不定芽增殖的同时，促进其生长，得到增殖系数高、生长健壮的不定芽；另外不定芽培养基中还包括较大含量的活性炭，为不定芽生长创造一个黑暗的基部环境；所述不定芽培养基中蔗糖的含量较低，采用半饥饿方式刺激根原基的形成，有利于不定芽的瓶外生根。而且本发明所述方法炼苗过程中灌加生根粉溶液，大大提高了不定芽的瓶外生根率，达到99％以上。

本发明所述方法省去试管苗瓶内壮苗与生根环节，不定芽增殖后直接进入炼苗生根，成苗速度快，整个培养过程缩短至50d左右；同时也避免了带根试管苗炼苗时从培养基中取出栽入炼苗基质前清洗根部培养基和清洗过程中对根系及根苗造成的损伤；所述方法操作简单方便、培养成本低，整个生产成本降低20％以上，更适合黑果枸杞种苗的规模化及工厂化生产和品种选育，为黑果枸杞无性快繁体系的建立及西北地区生态环境建设苗木的提供奠定了良好的基础，具有很好的经济效益、社会效益和生态效益。

具体实施方式

本发明提供了一种黑果枸杞组培不定芽瓶外生根方法，包括以下步骤：1)将黑果枸杞茎段置于不定芽培养基中培养获得不定芽；2)将在不定芽培养基中获得的不定芽直接炼苗获得带根原基的不定芽；所述炼苗过程中向不定芽培养基中灌加生根粉溶液；3)将所述带根原基的不定芽消毒、IBA溶液浸泡基部后，移栽至基质中培养获得黑果枸杞成苗；步骤1)中所述的不定芽培养基为包括0.4～0.6mg/L的6-BA；0.08～0.012mg/L的2，4-D；7～13g/L的活性炭、8～12g/L的蔗糖和4～5g/L的琼脂的MS培养基。

在本发明中所述黑果枸杞茎段来源于灭菌处理过的黑果枸杞枝条，所述灭菌处理的方法采用本领域常规的组培组织灭菌方法即可，无其他特殊要求。在本发明中，所述灭菌后优选的在无菌环境中将所述黑果枸杞枝条的两端2～3cm剪除。具体在本发明实施过程中，所述无菌环境由超净工作台提供，在本发明中，剪除枝条两端的目的一是破除茎尖顶端优势，以利于不定芽增殖；二是在灭菌的过程中，枝条另外一端切口处往往有灭菌试剂的残留，接种后容易造成培养基污染，剪除后降低培养基污染风险。在本发明中，剪除枝条的两端后，优选的将枝条上着生的叶片从叶柄基部全部剪除，然后将枝条剪成长0.3～0.6cm的茎段获得黑果枸杞茎段。

本发明在获得黑果枸杞茎段后，将所述黑果枸杞茎段置于不定芽培养基中培养获得不定芽。在本发明中所述不定芽培养基为包括0.4～0.6mg/L的6-BA、0.08～0.12mg/L的2,4-D、7～13g/L的活性炭、8～12g/L的蔗糖和4～5g/L的琼脂的MS培养基，优选的为包括0.5mg/L的6-BA、0.1mg/L的2.4-D、10g/L的活性炭、10g/L的蔗糖和4.5g/L的琼脂的MS培养基。在本发明中所述不定芽培养基中的6-BA和2,4-D为植物生长调节剂，作用为促进不定芽增殖，并促进不定芽生长，得到增殖系数高，生长健壮的不定芽；所述不定芽培养基中活性炭的作用是为不定芽生长创造一个黑暗的基部环境；所述不定芽培养基中包括较低含量的蔗糖，目的是采用半饥饿方式刺激根原基的形成，有利于不定芽的瓶外生根。

在本发明中，所述MS培养基采用本领域常规的MS培养基即可，在本发明具体实施过程中，所述MS培养基包括大量元素、微量元素、铁盐和有机成分；所述大量元素优选的包括硝酸钾3000.00mg/L、氯化钙150.0mg/L、硫酸镁500.00mg/L、磷酸二氢钾150.00mg/L、硫酸铵134.00mg/L、硫酸锰10.0mg/L；所述微量元素优选的包括硼酸3.0mg/L、硫酸锌2.0mg/L、碘化钾0.75mg/L、硫酸铜0.025mg/L、钼酸钠0.25mg/L；所述铁盐优选的为Fe₂·EDTA10.00mg/L；所述有机成分优选的包括肌醇100mg/L、烟酸1.0mg/L、盐酸吡哆醇1.0mg/L、盐酸硫胺素10.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L。

在本发明具体实施过程中，所述MS培养基的配制方法优选的为：将大量元素，微量元素、铁盐、有机成分分别制作成试剂母液；本发明对所述母液的浓度没有限定，优选的为10～20倍浓缩液；在配制不定芽培养基时，将上述母液按照比例混合稀释即得到MS培养基。

在本发明具体实施过程中，优选的将所述不定芽培养基置于培养瓶中，所述培养瓶中不定芽培养基的体积优选的为100ml/瓶；本发明中，每个培养瓶中优选的培养2～4个茎段；所述茎段优选的平放于培养瓶中的不定芽培养基上。在本发明中所述培养获得不定芽的过程，优选将所述培养瓶封口，避免污染。

在本发明中，所述培养获得不定芽过程优选的在光照条件下进行；所述光照的强度优选的为1800～2200lx，更优选的为1900～2100lx，最优选的为2000lx；在本发明中，所述光照的时间优选为10～14h/d，更优选的为12h/d；在本发明中，所述培养获得不定芽过程的温度优选的为23～27℃，更优选的为25℃；所述培养获得不定芽的时间优选的为20～35d，更优选的为25～30d。在本发明中，所述培养18～23d后，茎段切口处有大量突起，之后在生长激素与细胞分裂激素的双重作用下，这些不定芽生长健壮，27～32d可长至2～3cm，增殖可达20～30倍。

本发明在获得不定芽后，将在不定芽培养基中获得的不定芽直接炼苗，获得带根原基的不定芽；所述炼苗过程中向不定芽培养基中灌加生根粉溶液。在本发明中所述炼苗优选依次包括室内炼苗和室外炼苗两个阶段；所述室内炼苗阶段的温度优选的为18～22℃，更优选的为20℃；所述室内炼苗阶段的湿度优选的为50～60％，更优选的为52～58％；所述室内炼苗阶段的时间优选的为5～7d，更优选的为6d。在本发明具体实施过程中，将获得的不定芽置于室内自然光照下进行室内炼苗。本发明在炼苗阶段不定芽培养基包括上述交代的不定芽培养基中的各个组分，还包括灌加的生根粉溶液，利于不定芽生成根原基。

本发明优选在所述室内炼苗的第2d，向所述不定芽培养基中灌加生根粉溶液；所述灌加生根粉溶液的体积优选的为不定芽培养基体积的0.4～0.6倍，更优选的为0.5倍；具体的为每瓶灌加50ml；所述灌加生根粉溶液的质量浓度优选的为0.15～0.25％，更优选的为0.2％，所述生根粉溶液优选的为ABT生根粉溶液。

本发明在灌加生根粉溶液后，优选的使用无菌玻璃棒将不定芽培养基划破，使灌加的生根粉溶液充分渗透入不定芽基部，促进根原基的生成。本发明在灌加生根粉溶液后，优选的将所述培养瓶封口，置于黑暗条件下培养不定芽22～26h。本发明在不定芽黑暗培养后，也就是室内炼苗阶段的第3天将所述不定芽置于自然光照条件下炼苗，优选的将所述培养瓶的1/2瓶口敞开，使不定芽逐步适应开放环境。

本发明在所述室内炼苗阶段的第4d优选的将不定芽培养基中灌加的生根粉溶液吸出后，向所述不定芽培养基中灌加等体积的蒸馏水；在本发明中优选的使用无菌医用针管吸出所述生根粉溶液，本发明在灌加等体积的蒸馏水后，优选的将所述培养瓶的瓶口全部敞开，继续炼苗2～3d后，结束室内炼苗阶段。

本发明在所述室内炼苗阶段结束后，进行所述室外炼苗阶段。在本发明中所述室外炼苗阶段的温度优选为24～26℃，更优选为25℃；所述室外炼苗阶段的湿度优选为60～70％，更优选为63～67％；所述室外炼苗阶段的时间优选为2～4d，更优选为3d。在本发明中所述室外炼苗阶段优选的在小拱棚中进行。本发明在不定芽炼苗过程中采用室内与室外相结合的炼苗方法，室内采用低温低湿而室外炼苗采用高温高湿的处理，炼苗后获得带根原基的不定芽，所述带根原基的不定芽没有发生萎蔫现象。

本发明在获得带根原基的不定芽后，将所述带根原基的不定芽消毒、IBA溶液浸泡基部后，移栽至基质中培养获得黑果枸杞成苗。在本发明中，优选的将炼苗结束后的带根原基的不定芽从培养瓶中取出，进行消毒。所述消毒前优选的将所述带根原基的不定芽置于水中清洗基部的培养基。所述清洗结束后，优选的将所述带根原基的不定芽整齐摆放于托盘中；所述消毒优选的采用消毒液喷施消毒；所述消毒液优选的为多菌灵，所述多菌灵的质量浓度优选的为20％。在本发明具体实施过程中，将所述质量浓度为20％的多菌灵置于喷壶中，对带根原基的不定芽进行喷施消毒，喷施多菌灵后，静置10～20min。

本发明在消毒后，将所述带根原基的不定芽置于IBA溶液中浸泡基部，本发明中，所述的IBA溶液的浓度优选的为1.0～2.0mg/L，更优选的为1.2～1.8mg/L，所述浸泡时间优选的为15～25min，更优选的为20min。

本发明在所述浸泡结束后，将浸泡过的带根原基的不定芽取出，移栽至基质中培养获得黑果枸杞成苗。在本发明中所述基质优选的包括泥炭土、河沙和锯末，在本发明中所述锯末优选的为过200目筛的锯末；所述基质中泥炭土、河沙和锯末的体积比优选的为2：1：1。在本发明中所述基质优选的经过消毒处理后的基质。在本发明中，所述消毒处理优选的采用高锰酸钾溶液进行，所述高锰酸钾溶液的质量浓度优选的为0.5％；在本发明具体实施过程中，优选的将高锰酸钾溶液喷洒至基质中进行消毒处理，本发明在所述消毒处理后，优选的将所述消毒处理后的基质放置在太阳光下暴晒2d以使基质消毒更加彻底。

在本发明中，所述基质消毒后，优选的将所述基质铺成厚度10～20cm的苗床，本发明对所述苗床的宽度和长度没有特殊限定。本发明在获得苗床后，优选的在所述苗床上铺设黑色塑料薄膜，所述黑色塑料薄膜利于不定芽吸收更多的光照，具有保温保湿的作用，另一方面，所述黑色塑料薄膜为不定芽生根创造黑暗的环境，有利于根系发育。

本发明在移栽前，优选的用玻璃棒或与玻璃棒粗细相当得其他工具在苗床的黑色塑料薄膜上打孔。所述带根原基的不定芽移栽的过程具体的为：将所述所述带根原基的不定芽放入欲先打好的小孔中，每孔放一株带根原基的不定芽，埋深优选的为2～4cm，更优选的为3cm；本发明埋好带根原基的不定芽之后，整平周围的基质，用大拇指和食指按压使基质和不定芽充分接触；在本发明中所述移栽的株行距优选的为15×15cm。

本发明在移栽后，优选的在苗床上部搭建小拱棚或用双层遮荫网遮荫，本发明所述移栽后优选的进行喷水保持湿度；具体的在本发明实施过程中，优选的在移栽后7d内，每天喷洒水分，保持苗床湿度为58～62％；7d后每隔1d喷水，保持苗床湿度为48～52％。本发明在移栽后20～22d停止喷水，并拆除小拱棚遮阴网。

本发明中所述移栽后的田间管理采用常规的水肥及病虫害防治等田间管理即可。本发明在移栽后25～35d，不定芽基部长出大量长为3～4cm的根系，上部茎秆长高5～8cm，出现5～6片新叶，获得黑果枸杞成苗。

下面结合实施例对本发明提供的黑果枸杞组培不定芽瓶外生根方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

1.茎段增殖培养不定芽

将经过灭菌处理完成的茎段接种于不同激素组合的培养基中，其中活性炭5g/L、蔗糖30g/L时，不同激素配比的培养基中不定芽生长及增殖倍数有较大差异。如表1所示，单独采用MS培养基时，不定芽不增殖；当6-BA浓度为0.3mg/L、2，4-D浓度为0.1～0.5时，不定芽最大增殖倍数为10.43，6-BA浓度为1.0mg/L、2，4-D浓度为0.1～0.5时，不定芽最大增殖倍数为10.25，两者差异较小，而当6-BA浓度为0.5mg/L、2，4-D浓度为0.1～0.5mg/L时，不定芽最大增殖倍数为18.21，且6-BA在该浓度下，2，4-D的三种处理不定芽增殖倍数均大于6-BA其它浓度时的增殖效果，因此6-BA浓度为0.3mg/L、2，4-D浓度为0.1mg/L是最适于不定芽增殖培养的激素组合。

表1不同培养基配方处理条件下茎段增殖培养不定芽的效果

在培养基中添加6-BA0.5mg/L，2，4-D 0.1mg/L，进一步优化培养基中活性炭与蔗糖额的浓度，分别添加活性炭1g/L、5g/L、10g/L，蔗糖10g/L、20g/L、30g/L，培养30d后增殖情况如表2所示，不同活性炭浓度与同一蔗糖浓度组合、以及同一活性炭浓度与不同蔗糖浓度组合时，茎段增殖效果均不同，通过优化培养，茎段增殖倍数最大为活性炭10g/L与蔗糖10g/L的处理，30d后增殖倍数可达27.51。

表2活性炭与蔗糖优化培养

2、不定芽炼苗

采用室内与室外相结合的炼苗方法，首先将增殖培养30d左右的试管苗连同瓶子移放于自然光照能正常照射的房间内1d，室温保持21℃，湿度55％。第2d打开瓶盖，倒入0.2％的ABT生根粉溶液50ml，并用玻璃棒将培养基划破，使生根粉溶液充分渗透入不定芽基部，封口并在黑暗条件下放置24h，之后转为自然光照并打开1/2瓶盖炼苗1d，第4d打开瓶盖，用医用针管吸出瓶中残留的生根粉溶液，灌入50ml无菌水后完全打开瓶盖，室温20℃、湿度55％条件下放置2d，之后转入小拱棚中在温度25℃、湿度60～70％条件下放置3d，即完成了黑果枸杞不定芽的炼苗，炼苗后没有发生萎蔫现象。

3、不定芽移栽前处理

将完成炼苗的黑果枸杞无根不定芽用镊子从试管中轻轻夹取，用自来水清洗干净不定芽基部残留的培养基后整齐摆放于托盘中，用喷壶喷洒20％多菌灵消毒放置约15min。

移栽前分别将完成消毒的不定芽基部放入浓度1.0～3.0mg/L的ABT生根粉、IAA(吲哚乙酸)、IBA(吲哚丁酸)、NAA(萘乙酸)溶液中浸泡15min，自来水中浸泡作为对照，取出后直接移栽，移栽30d后不同处理下不定芽生长状况如表3。

表3不同激素处理的生长效果

如表3，采用自来水浸泡后的不定芽不生根，移栽30d后萎蔫死亡，采用ABT生根粉、IAA处理不定芽时，30d后生长量和成活率均随处理溶液浓度的增大而增大，成活率最大为浓度3.0mg/L的ABT生根粉处理时，成活率为68.22％。而采用IBA和NAA处理不定芽后，30d后不定芽生长量和成活率均随处理溶液浓度的增大而逐渐减小，其中成活率最大值为采用IBA浓度为1.0mg/L的处理，此时不定芽成活率为85.11％，其次为采用浓度为2.0mg/L的IBA进行处理，不定芽成活率为80.72％。因此，可将浓度为1～2％的IBA溶液作为黑果枸杞不定芽浸泡处理的方案。

表4IBA浸泡时间优化处理

由于在上阶段中，浓度为1～2％的IBA溶液适宜浸泡黑果枸杞不定芽生根，因此，在本阶段对其不同浓度浸泡时间进行进一步优化处理，结果如表4，IBA为1.0、1.5、2.0的三种浓度处理时，均在浸泡时间为20min时不定芽成活率较大，三种浓度处理20min时成活率分别为93.43％、97.51％、95.25，其它时间浸泡时不同浓度处理成活率均在70～85％之间。

4、移栽基质和苗床准备

(1)基质准备：选择单独使用泥炭土、河沙、锯末或其中的两种按不同的体积比混合作为栽培基质，混合后均碰洒5％的高锰酸钾溶液进行基质消毒，消毒后在太阳下晾晒2d后铺成厚度15cm左右的苗床，之后可进行移栽，苗床宽度及长度均不限。

表5不同基质按不同体积比混合时不定芽生长情况

注：****表示生长很好；***表示生长好，**表示生长一般，*表示生长较差；

不同基质按不同体积比混合时不定芽生长情况如表5所示，单独使用河沙、锯末作为移栽基质时，不定芽生长状况均一般，且移栽后浇水间隔时间较短，均为7d左右，对水资源浪费严重，而单独使用泥炭土时，生长状况较好，且移栽后浇灌间隔天数较长，为9d；将两种基质按照不同的体积比混合配比时，采用体积为2份的泥炭土时不定芽均生长很好，且浇水浇水间隔天数均在13d左右，节约水资源的同时，也避免使用过多的人力投资。

表6不同基质配比优化处理时生根效果

根据表5中基质混合时不定芽生长状况及浇灌情况，做进一步优化处理，即固定泥炭土占2份的体积，将泥炭土、河沙、锯末三种基质按照不同的体积比例混合，并在苗床上做铺设不同颜色的塑料膜或不铺设塑料膜处理，观察不定芽生根效果及移栽后浇灌天数情况。

表6中的优化处理大大提高了黑果枸杞不定芽生根率，三种基质按照2：1：1、2：2：1、2：1：2三中不同的体积比混合时，铺设黑色塑料膜时的生根率分别为98.23％、88.21％、85.17％，且移栽后平均浇灌间隔天数均在20d以上。铺设透明塑料膜时，三种基质比例处理时不定芽生根率均大于75％，平均浇灌间隔天数均在20d左右；不铺设塑料膜时，移栽后需要经常浇水，且不定芽生根率较低。

5、移栽及后期管理

在苗床上按株行距10×10cm用玻璃棒或玻璃棒粗细的棍子在塑料膜上打孔，之后把已生根的不定芽放入小孔中，每孔放一株，埋深约为3cm，之后刨平不定芽周围基质，用大拇指和食指按压使基质和不定芽充分接触。

移栽后在苗床上部搭建小拱棚或用双层遮荫网遮荫，7d内，每天碰洒少量水分，保持苗床湿度约60％；7d后每隔1d喷少量水，保持苗床湿度约50％左右，喷水7次后停止并拆除小拱棚，采用常规的水肥及病虫害防治等田间管理即可。30d左右，刨开基质，不定芽基部长出大量长约3～4cm的根系，上部茎秆长高6cm左右，出现5～6片新叶，达到黑果枸杞试管苗瓶外生根的目的。

由上述实施例可知，本发明提供的一种黑果枸杞组培不定芽瓶外生根方法不定芽的增殖倍数高达27.51倍，不定芽成活率高达97.51％，生根率高达98.23％；所述方法操作简单方便、培养成本低，整个生产成本降低20％以上，更适合黑果枸杞种苗的规模化及工厂化生产和品种选育，为黑果枸杞无性快繁体系的建立及西北地区生态环境建设苗木的提供奠定了良好的基础，具有很好的经济效益、社会效益和生态效益。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种黑果枸杞组培不定芽瓶外生根方法，包括以下步骤：

1)将黑果枸杞茎段置于不定芽培养基中培养，获得不定芽；

2)将在不定芽培养基中获得的不定芽直接炼苗，获得带根原基的不定芽；所述炼苗过程中向不定芽培养基中灌加生根粉溶液；

3)将所述带根原基的不定芽消毒、用浓度为1～2mg/L的IBA溶液浸泡基部20min后，移栽至基质中培养，获得黑果枸杞成苗；

所述步骤1)和步骤2)中的不定芽培养基为包括0.4～0.6mg/L的6-BA、0.08～0.12mg/L的2,4-D、7～13g/L的活性炭、8～12g/L的蔗糖和4～5g/L的琼脂的MS培养基；

步骤2)中所述的炼苗依次包括室内炼苗和室外炼苗两个阶段；

步骤2)中所述生根粉溶液在室内炼苗的第2d灌加；所述灌加生根粉溶液为灌加0.2％的ABT生根粉溶液50ml；灌加生根粉溶液后，将所述不定芽置于黑暗条件下培养22～26h。

2.根据权利要求1所述的瓶外生根方法，其特征在于，步骤1)中所述培养在光照条件下进行；所述光照的强度为1800～2200lx。

3.根据权利要求2所述的瓶外生根方法，其特征在于，所述光照的时间为10～14h/d。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的瓶外生根方法，其特征在于，步骤1)中所述培养的温度为23～27℃，所述培养的时间为20～35d。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述室内炼苗的温度为18～22℃，湿度为50～60％，时间为5～7d。

6.根据权利要求1所述的瓶外生根方法，其特征在于，所述室内炼苗的第4d将所述灌加的生根粉溶液吸出，向所述不定芽培养基中灌加与灌加的生根粉溶液等体积的蒸馏水。

7.根据权利要求1所述的瓶外生根方法，其特征在于，所述室外炼苗的温度为24～26℃，湿度为60～70％，时间为2～4d。

8.根据权利要求1所述的瓶外生根方法，其特征在于，步骤3)中所述的IBA溶液的浓度为1.0～2.0mg/L，所述浸泡时间为15～25min。