CN105104203A - 一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，包括以下步骤：1）非洲菊脱毒苗前处理；2）不定芽的诱导；3）切割不定芽继代增殖；4）炼苗；5）水培生根处理；6）水培壮苗；7）移栽。本发明的高效扩繁方法解决了非洲菊脱毒苗扩繁过程中效率低下、易再次污染的问题，不仅能在短时间内扩繁出大量优良非洲菊脱毒种苗，而且还避免了非洲菊分株繁殖和种子繁殖所带来的品种退化问题，而且操作简单、易于工厂化推广，具有较高的生产实用价值。

Description

一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法

技术领域

本发明涉及一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，具体涉及一种能够在短时间内扩繁出大量优良非洲菊脱毒种苗的扩繁方法，属于花卉种植技术领域。

背景技术

非洲菊（GerberajamesoniiBolus）别名扶郎花、太阳花，为菊科多年生草本植物，原产于南非德瓦士兰地区，后引入英国，现在世界各地广泛栽培。非洲菊性喜冬季温暖，夏季凉爽的气候，花朵大、清秀挺拔、飘洒俊逸、花色艳而不妖、丽若云霞、娇媚高雅、爽心悦目，给人以潇洒柔和、恬淡宁静之感。非洲菊常用来切花插瓶，若配以肾藏、文竹等绿色观叶植物，更令人神往心醉，非洲菊也很适宜用作盆栽观赏，是点缀案头、橱窗、装饰客厅的佳品，观赏价值较高，在设施条件下能四季供花，现已跻身世界市场畅销切花之列，是国内外名贵的鲜花品种，是世界著名的五大切花之一，以其独特的魅力风靡全球。

随着人们生活水平的提高，我国无论对非洲菊鲜切花，还是非洲菊优良品种种苗的需求日益增加。据统计，我国自上世纪90年代以来曾大量从荷兰引种栽培以来，全国非洲菊种植规模从2006年的3.27万亩增加到2015年的10.1万亩，非洲菊已成为国内很多地区发展花卉产业的“入门”产品。然而，我国对非洲菊优良品种选育工作比较滞后，具有自主知识产权的优良品种极少，品质高的良种非洲菊品种的研发为国外垄断技术，国内花卉公司的非洲菊良种原生种的种子和种苗几乎全部从国外引进，成本非常高。同时，由于气候条件、栽培技术的限制，普遍出现品质退化现象，优良种性严重退化甚至丧失，失去了栽培利用价值，不得不从生产中逐步淘汰。

非洲菊为异花传粉植物，自交不孕，其种子后代必然会发生变异，变异类型普遍表现为花梗变细，变软，花形变小，切花价值大大降低。非洲菊种子寿命极短，发芽率低，其发芽率几乎不到30%，而且，采用种子繁殖，营养生长期长，开花迟。非洲菊常用分株繁殖，但每株每年仅可分出5-6个新株，无法满足产业化生产的要求，并且一直用分株繁殖，容易使病毒逐代积累，从而造成非洲菊品种退化严重。除了分株繁殖，造成非洲菊品种退化的原因还包括：栽培环境如光照、水分、温度、营养不适宜非洲菊生长发育，土壤板结和盐渍化；连作土地的病原菌大量积累并复合浸染等，导致品种失去原有的典型性；在非洲菊组织培养过程中，培养温度、增殖芽的继代代数以及激素浓度等因素都可能造成非洲菊种苗发生无性变异。非洲菊品种退化通常表现为花朵变小、过渡色多、花型紊乱、双秆现象、株高参差不齐、生活力下降、抗性和产量降低等。

组织培养技术是目前非洲菊商品化生产的主要繁殖方式，既可在短期内生产优良种苗，也可用于生产脱毒苗，防止种质退化。20世纪70年代后，国内外相继展开了对非洲菊组织培养和快速繁殖的研究，非洲菊采用离体培养方法进行快繁，短期内就可得到大量整齐的种苗。然而，目前非洲菊脱毒之后的快繁方法存在诱导率较低、诱导苗质量差且多弱苗、幼苗增殖效率低、苗移栽成活率低等问题，严重制约了非洲菊种苗工厂化、规模化生产。因此，建立健全简单经济的非洲菊脱毒种苗扩繁技术，对促进非洲菊脱毒种苗工厂化、规模化生产，对非洲菊优良品种的推广具有广阔的市场前景。

发明内容

为解决目前非洲菊脱毒苗扩繁方法存在的诱导率较低、诱导苗质量差且多弱苗、幼苗增殖效率低、苗移栽成活率低等问题，本发明提供了一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，通过建立健全了培养程序、培养条件和培养组分的配比，提高了诱导苗的质量和增殖效率、移栽成活率，从而建立了高品质和高数量快繁体系。

本发明的目的是通过以下技术方案解决的：

一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：该方法步骤如下：

1）非洲菊脱毒苗前处理：将非洲菊脱毒苗清洗干净并表面消毒，在无菌条件下切取叶柄和花托，移入装有配制好的不定芽诱导培养基广口瓶中；

2）不定芽的诱导：将接种有脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，诱导出不定芽；

3）切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将不定芽切下，移入装有增殖培养基的广口瓶中培养，得到大量非洲菊幼苗；

4）炼苗：逐步采用增强培养光照、降低培养温度的方法进行炼苗；

5）水培生根处理：将炼苗后的脱毒试管苗从广口瓶中取出，保留原有根系，再将组培苗栽于水培盘中的栽培板上，水培盘中加入生根营养液；

6）水培壮苗：生根培养7天后，倒掉生根营养液，加入壮苗营养液；

7）移栽：将脱毒苗移栽到消过毒的基质上，置于室外自然光下生长。

该方法的详细步骤如下：

1）非洲菊脱毒苗前处理：

将非洲菊脱毒苗先用自来水反复冲洗，用毛刷蘸取洗洁精洗一遍后接着用超纯水冲洗干净，用70%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗两次，0.1%升汞内加数滴吐温20溶液浸泡5min，用无菌水冲洗4-5次，滤纸吸干，将非洲菊脱毒苗的叶柄和花托移入装有不定芽诱导培养基的广口瓶中；

2）不定芽的诱导：

为防非洲菊脱毒苗在生产过程中被病毒再浸染，培养室先经过消毒，消毒剂选用40%甲醛10ml/m³、高锰酸钾5g/m³，对整个培养室进行熏蒸2小时，熏蒸后，再采用75%乙醇擦拭培养架进行表面消毒，然后将接种有非洲菊脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，培养室温度控制为26±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1600-2000Lx，光周期控制为光14h/暗10h，25-30天诱导出不定芽；

3）切割不定芽继代增殖：

在无菌条件下将诱导2-3cm的不定芽从外植体上完整的切下，转接到装有增殖培养基的广口瓶中，培养室温度控制为24±1℃、光照强度控制为1600-2000Lx、光周期控制为光12h/暗12h下培养，培养15-25天后可得到大量非洲菊幼苗；

4）炼苗：

筛选5-8cm的非洲菊脱毒试管苗，转移到光照强度为2500-3500lx的条件下，3-5天后，将培养温度降低为20-22℃，再过3-5天，打开广口瓶封口，继续炼苗3-5天；

5）水培生根处理：

为减少转接对脱毒试管苗根系带来的伤害，转接前向广口瓶内加入少量水，并用镊子轻轻搅动培养基，以免把苗子倒出时损伤根，试管苗倒出后洗净根上的培养基，移栽到装有生根培养液的水培盘中的栽培板上，栽培密度1000-1200苗/m²，株距2-3cm，行距2-3cm，水培器皿用盆底长×宽=44×32cm，盆高=15cm的塑料盆作为栽培盆，每盆放2L营养液，并有定植孔间距为2cm-3cm的栽培板漂浮在营养液上，将脱毒苗上方搭上一层透明的塑料薄膜，使其处于温度22-25℃、湿度≥90%、光照强度为2000-3000lx的清洁的温室内环境生长；

6）水培壮苗：

生根培养7天后，脱毒苗根系基本发育完全，此时，撤掉塑料薄膜，倒掉生根营养液，给幼苗浇施壮苗营养液；

7）移栽：

当非洲菊脱毒苗长到12-15cm时，移栽到消过毒的基质上，移栽密度为行距15cm、株距10cm，塑料薄膜覆盖保湿，10-15天后逐步除去薄膜，置于室外自然光下生长。

非洲菊品种选为阳光海岸或玲珑。

步骤1）和2）中的不定芽诱导培养基的配方为：MS+0.1mg/L2,4-D+0.2mg/LNAA+0.3mg/LIBA+0.3g/LCH+3%蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。

步骤3）中的增殖培养基配方为：MS+3.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+0.5mg/LGA+2.5mg/L氯化胆碱+4%蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。

步骤5）和6）中的生根培养液配方为：500mg/LKNO₃，500mg/LNH₄NO₃，92.5mg/LMgSO₄·7H₂O，173mg/LCa(NO₃)₂·4H₂O，150mg/LKH₂PO₄，32mg/LKCl，17mg/LMnSO₄·7H₂O，19mg/LNa₂-EDTA，14mg/LFeSO₄·7H₂O，2.2mg/LMnSO₄·4H₂O，0.8mg/LZnSO₄·7H₂O，0.8mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成生根营养液。

步骤5）和6）中的生根培养液的另一种可选配方为：950mg/LKNO₃，825mg/LNH₄NO₃，85mg/LKH₂PO₄，220mg/LCaCl₂·2H₂O，185mg/LMgSO₄·7H₂O，19mg/LNa₂-EDTA，14mg/LFeSO₄·7H₂O，11mg/LMnSO₄·4H₂O，0.4mg/LKI，3.1mg/LH₃BO₃，4.3mg/LZnSO₄·7H₂O，0.125mg/LNa₂MoO₄，0.0125mg/LCuSO₄，0.0125mg/LCoCl₂·6H₂O，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成生根营养液。

步骤6）中的壮苗营养液配方为：850mg/LKNO₃，750mg/LNH₄NO₃，165mg/LMgSO₄·7H₂O，75mg/LKH₂PO₄，200mg/LCaCl₂·2H₂O，20mg/LNa₂-EDTA，15mg/LFeSO₄·7H₂O，10.5mg/LMnSO₄·4H₂O，4.25mg/LZnSO₄·7H₂O，3.0mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，0.12mg/LNa₂M_OO₄·2H₂0，0.012mg/LCoC1₂·6H₂O，0.012mg/LCuSO₄·5H₂O，0.4mg/LKI，30mg/L肌醇，0.5mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成壮苗营养液。

步骤7）中的消过毒的基质成分为等体积比例的草炭、珍珠岩、蛭石。

本发明的有益效果：

（1）本发明消毒方法简单、有效，外植体消毒效果好，外植体的污染率降低为5%以下；

（2）本发明解决了现有技术诱导率较低、增殖效率低的缺点，不定芽诱导率比平均水平提高30%左右；不定芽增殖效率比平均水平提高30%左右；最终扩繁效率提高了70%左右；

（3）本发明解决了现有技术种苗质量差、弱苗多的缺点，获得的种苗质量高，弱苗或死苗率降低到仅有1%左右；

（4）本发明苗移栽成活率比现有技术大大提高，移栽成活率达到99%左右。

附图说明

图1是阳光海岸不定芽诱导的结果图；

图2是阳光海岸不定芽增殖的结果图；

图3是阳光海岸温室内生根培养的结果图；

图4是本技术路线离体快繁获得大量优质种苗的结果图。

具体实施方式

以下实施例结合附图进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。

实施例1

本实施例的非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，实施时间为2014年-2015年，非洲菊脱毒苗前处理、植株再生及炼苗在连云港市振兴花卉园进行，组培苗移栽在连云港市东辛农场花卉试验基地内进行，详细步骤如下：

1）非洲菊脱毒苗前处理：

取材非洲菊品种阳光海岸的脱毒苗，先用自来水反复冲洗，用毛刷蘸取洗洁精洗一遍后接着用超纯水冲洗干净，用70%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗两次，0.1%升汞内加数滴吐温20溶液浸泡5min，用无菌水冲洗5次，滤纸吸干，将阳光海岸脱毒苗的叶柄和花托移入装有不定芽诱导培养基（不定芽诱导培养基的配方为：MS+0.1mg/L2,4-D+0.2mg/LNAA+0.3mg/LIBA+0.3g/LCH+3%蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8）的广口瓶中，为对比本发明不定芽诱导培养基的效果，同时选择了另3种不定芽诱导培养基，培养基配方分别为：MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH为5.8（对比文件来自于席梦利等《非洲菊的离体培养及其快速繁殖》）、MS+10mg/L6-BA+0.1mg/LIAA+30%蔗糖+5.5g/L琼脂（对比文件来自于石文山等《非洲菊的离体培养和快速繁殖技术研究》）、MS+2.0mg/L6-BA+0.2mg/LIAA+30%蔗糖+5.5g/L琼脂（对比文件来自于石文山等《非洲菊的离体培养和快速繁殖技术研究》）；

2）不定芽的诱导：

为防脱毒苗在生产过程中被病毒再浸染，培养室先经过消毒，消毒剂选用40%甲醛10ml/m³、高锰酸钾5g/m³，对整个培养室进行熏蒸2小时，熏蒸后，再采用75%乙醇擦拭培养架进行表面消毒，然后将接种有阳光海岸脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，培养室温度采用空调控制为26℃，以荧光灯为光源，光照强度采用1800Lx，光周期控制为光14h/暗10h，光培养27天左右后，观察到各培养基中诱导出大量的不定芽，如附图1，统计不定芽诱导率，本发明阳光海岸不定芽诱导率达到77.5%，显著高于其他3个平均60%左右的不定芽诱导率，不定芽诱导率统计结果如表1；

3）切割不定芽继代增殖：

在无菌条件下将诱导2-3cm的阳光海岸不定芽从外植体上完整的切下，转接到装有增殖培养基（增殖培养基配方为：MS+3.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+0.5mg/LGA+2.5mg/L氯化胆碱+4%蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8）的广口瓶中，为对比本发明增殖培养基的效果，同时选择了另4种增殖培养基，培养基配方分别为：MS+0.3mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH为5.8（对比文件来自于席梦利等《非洲菊的离体培养及其快速繁殖》）、MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH为5.8（对比文件来自于席梦利等《非洲菊的离体培养及其快速繁殖》）、MS+0.3mg/L6-BA+0.1mg/LPP333+0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂，pH为5.8（对比文件来自于席梦利等《非洲菊的离体培养及其快速繁殖》）、MS+0.5mg/L6-BA+0.25mg/LIAA+30%蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.8（对比文件来自于石文山等《非洲菊的离体培养和快速繁殖技术研究》）。培养室温度用空调调节为24℃、光照强度调节为1800Lx、光周期控制为光12h/暗12h下培养，培养20天左右后得到大量阳光海岸幼苗，如附图2，反复将形成的丛生芽切成单芽，接种到增殖培养基上进行增殖培养，非洲菊快速大量地增殖，本发明培养基对阳光海岸增值倍数达到5.28，显著高于其他4.2左右的增殖倍数，各培养基对阳光海岸增值倍数如表2所示；

4）炼苗：

筛选5-8cm的非洲菊脱毒试管苗，转移到光照强度为3000lx的另一培养室中，4天后，将培养温度降低为21℃，再过4天，打开广口瓶封口，继续炼苗4天；

5）水培生根处理：

为减少转接对脱毒试管苗根系带来的伤害，转接前向广口瓶内加入少量水，并用镊子轻轻搅动培养基，以免把苗子倒出时损伤根，试管苗倒出后洗净根上的培养基，移栽到装有生根培养液（生根培养液配方为：500mg/LKNO₃，500mg/LNH₄NO₃，92.5mg/LMgSO₄·7H₂O，173mg/LCa(NO₃)₂·4H₂O，150mg/LKH₂PO₄，32mg/LKCl，17mg/LMnSO₄·7H₂O，19mg/LNa₂-EDTA，14mg/LFeSO₄·7H₂O，2.2mg/LMnSO₄·4H₂O，0.8mg/LZnSO₄·7H₂O，0.8mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成生根营养液）的水培盘中的栽培板上，栽培密度1100苗/m²，株距2.5cm，行距2.5cm，水培器皿用盆底长×宽=44×32cm，盆高=15cm的塑料盆作为栽培盆，每盆放2L营养液，并有定植孔间距为2.5cm的栽培板漂浮在营养液上，将脱毒苗上方搭上一层透明的塑料薄膜，使其处于温度23.5℃、湿度约90%、光照强度为2500lx的清洁的温室内环境生长，如图3。为对比本发明生根培养液和培养方式的效果，从非洲菊再生植株的文献中找到另3种培养方法，分别来源于专利申请号为201410611434.5、201510110528.9、201510149499.7的3种非洲菊生根培养方法，本发明与其他生根培养对阳光海岸种苗质量的影响如表3；

6）水培壮苗：

生根培养15天后，脱毒苗根系基本发育完全，获得根长为1.2-2.2cm的非洲菊幼苗，生根率达到100%。此时，撤掉塑料薄膜，倒掉生根营养液，给幼苗浇施壮苗营养液（壮苗营养液配方为：850mg/LKNO₃，750mg/LNH₄NO₃，165mg/LMgSO₄·7H₂O，75mg/LKH₂PO₄，200mg/LCaCl₂·2H₂O，20mg/LNa₂-EDTA，15mg/LFeSO₄·7H₂O，10.5mg/LMnSO₄·4H₂O，4.25mg/LZnSO₄·7H₂O，3.0mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，0.12mg/LNa₂M_OO₄·2H₂0，0.012mg/LCoC1₂·6H₂O，0.012mg/LCuSO₄·5H₂O，0.4mg/LKI，30mg/L肌醇，0.5mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成壮苗营养液）；

7）移栽：

当非洲菊脱毒苗长到12-15cm时，移栽到消过毒的基质（成分为等体积比例的草炭、珍珠岩、蛭石）上，移栽密度为行距15cm、株距10cm，塑料薄膜覆盖保湿，该幼苗移栽成活率达到99.1%，12天后逐步除去薄膜，置于室外自然光下生长，生长55天后，苗高达到10cm以上，符合非洲菊种苗出圃销售的要求，如图4。

实施例2

本实施例的非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，实施时间、非洲菊脱毒苗前处理、植株再生及炼苗、组培苗移栽均与实施例1相同，培养基（液）配方、对比培养基（液）配方和操作步骤均与实施例1相同，本实施例与实施例1最大不同之处为非洲菊脱毒种苗品种更换为玲珑：

1）非洲菊脱毒苗前处理：

取材非洲菊品种玲珑的脱毒苗，先用自来水反复冲洗，用毛刷蘸取洗洁精洗一遍后接着用超纯水冲洗干净，用70%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗两次，0.1%升汞内加数滴吐温20溶液浸泡5min，用无菌水冲洗5次，滤纸吸干，将玲珑脱毒苗的叶柄和花托移入装有不定芽诱导培养基，同时选择了另3种不定芽诱导培养基（同实施例1）进行对比；

2）不定芽的诱导：

为防脱毒苗在生产过程中被病毒再浸染，培养室消毒后进行转入不定芽诱导培养瓶（培养室消毒、培养条件同实施例1），培养25天左右后，观察到各培养基中诱导出大量的不定芽，统计不定芽诱导率，统计结果如表4；

3）切割不定芽继代增殖：

在无菌条件下将诱导2-3cm的不定芽从外植体上完整的切下，转接到装有增殖培养基的广口瓶中，同时选择其它4种增殖培养基（同实施例1）作为对比。培养室温度用空调调节为24℃、光照强度调节为1800Lx、光周期控制为光12h/暗12h下培养，培养21天左右后得到大量非洲菊幼苗，将形成的丛生芽切成单芽，接种到增殖培养基上进行增殖培养，非洲菊快速大量地增殖，各培养基对阳光海岸增值倍数如表5所示；

4）炼苗方法同实施例1；

5）水培生根处理：

本发明生根处理方式如实施1，同时采用专利申请号为201410611434.5、201510110528.9、201510149499.7的3种非洲菊生根培养方式作为对比，统计本发明与其他生根培养对阳光海岸种苗质量的影响，如表6；

6）水培壮苗与移栽方法同实施例1，调查移栽成活率，移栽成活率为98.9%。

综合实施例1和实施例2，可见本发明效果显著：（1）在步骤2）中，统计不定芽诱导率，对非洲菊品种阳光海岸和玲珑的不定芽诱导率分别达到77.5%和81.1%，显著高于常规60.0%的不定芽诱导率；统计步骤3）中不定芽增殖效率，阳光海岸和玲珑的不定芽增殖倍数分别达到5.28和5.19，显著高于常规4.09的增殖倍数；最终扩繁效率提高了70%左右；（2）获得的种苗质量高、无病虫害，弱苗或死苗率在1%以下；（3）苗移栽成活率比现有技术大大提高，移栽成活率达到约99%。

本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内容作出替换或变型，但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的，这些替换或变型均在本发明要求保护的权利范围内。

Claims (9)

1.一种非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：该方法步骤如下：

1）非洲菊脱毒苗前处理：将非洲菊脱毒苗清洗干净并表面消毒，在无菌条件下切取叶柄和花托，移入装有配制好的不定芽诱导培养基广口瓶中；

2）不定芽的诱导：将接种有脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，诱导出不定芽；

3）切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将不定芽切下，移入装有增殖培养基的广口瓶中培养，得到大量非洲菊幼苗；

4）炼苗：逐步采用增强培养光照、降低培养温度的方法进行炼苗；

5）水培生根处理：将炼苗后的脱毒试管苗从广口瓶中取出，保留原有根系，再将组培苗栽于水培盘中的栽培板上，水培盘中加入生根营养液；

6）水培壮苗：生根培养7天后，倒掉生根营养液，加入壮苗营养液；

7）移栽：将脱毒苗移栽到消过毒的基质上，置于室外自然光下生长。

2.根据权利要求1所述的非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：该方法的详细步骤如下：

1）非洲菊脱毒苗前处理：

将非洲菊脱毒苗先用自来水反复冲洗，用毛刷蘸取洗洁精洗一遍后接着用超纯水冲洗干净，用70%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗两次，0.1%升汞内加数滴吐温20溶液浸泡5min，用无菌水冲洗4-5次，滤纸吸干，将非洲菊脱毒苗的叶柄和花托移入装有不定芽诱导培养基的广口瓶中；

2）不定芽的诱导：

为防非洲菊脱毒苗在生产过程中被病毒再浸染，培养室先经过消毒，消毒剂选用40%甲醛10ml/m³、高锰酸钾5g/m³，对整个培养室进行熏蒸2小时，熏蒸后，再采用75%乙醇擦拭培养架进行表面消毒，然后将接种有非洲菊脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，培养室温度控制为26±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1600-2000Lx，光周期控制为光14h/暗10h，25-30天诱导出不定芽；

3）切割不定芽继代增殖：

在无菌条件下将诱导2-3cm的不定芽从外植体上完整的切下，转接到装有增殖培养基的广口瓶中，培养室温度控制为24±1℃、光照强度控制为1600-2000Lx、光周期控制为光12h/暗12h下培养，培养15-25天后可得到大量非洲菊幼苗；

4）炼苗：

筛选5-8cm的非洲菊脱毒试管苗，转移到光照强度为2500-3500lx的条件下，3-5天后，将培养温度降低为20-22℃，再过3-5天，打开广口瓶封口，继续炼苗3-5天；

5）水培生根处理：

为减少转接对脱毒试管苗根系带来的伤害，转接前向广口瓶内加入少量水，并用镊子轻轻搅动培养基，以免把苗子倒出时损伤根，试管苗倒出后洗净根上的培养基，移栽到装有生根培养液的水培盘中的栽培板上，栽培密度1000-1200苗/m²，株距2-3cm，行距2-3cm，水培器皿用盆底长×宽=44×32cm，盆高=15cm的塑料盆作为栽培盆，每盆放2L营养液，并有定植孔间距为2cm-3cm的栽培板漂浮在营养液上，将脱毒苗上方搭上一层透明的塑料薄膜，使其处于温度22-25℃、湿度≥90%、光照强度为2000-3000lx的清洁的温室内环境生长；

6）水培壮苗：

生根培养7天后，脱毒苗根系基本发育完全，此时，撤掉塑料薄膜，倒掉生根营养液，给幼苗浇施壮苗营养液；

7）移栽：

当非洲菊脱毒苗长到12-15cm时，移栽到消过毒的基质上，移栽密度为行距15cm、株距10cm，塑料薄膜覆盖保湿，10-15天后逐步除去薄膜，置于室外自然光下生长。

3.根据权利要求1或2所述的非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：非洲菊品种选为阳光海岸或玲珑。

4.根据权利要求1或2所述的非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤1）和2）中的不定芽诱导培养基的配方为：MS+0.1mg/L2,4-D+0.2mg/LNAA+0.3mg/LIBA+0.3g/LCH+3%蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。

5.根据权利要求1或2所述的非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤3）中的增殖培养基配方为：MS+3.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+0.5mg/LGA+2.5mg/L氯化胆碱+4%蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。

6.根据权利要求1或2所述的非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤5）和6）中的生根培养液配方为：500mg/LKNO₃，500mg/LNH₄NO₃，92.5mg/LMgSO₄·7H₂O，173mg/LCa(NO₃)₂·4H₂O，150mg/LKH₂PO₄，32mg/LKCl，17mg/LMnSO₄·7H₂O，19mg/LNa₂-EDTA，14mg/LFeSO₄·7H₂O，2.2mg/LMnSO₄·4H₂O，0.8mg/LZnSO₄·7H₂O，0.8mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成生根营养液。

7.根据权利要求1或2所述的非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤5）和6）中的生根培养液的另一种可选配方为：950mg/LKNO₃，825mg/LNH₄NO₃，85mg/LKH₂PO₄，220mg/LCaCl₂·2H₂O，185mg/LMgSO₄·7H₂O，19mg/LNa₂-EDTA，14mg/LFeSO₄·7H₂O，11mg/LMnSO₄·4H₂O，0.4mg/LKI，3.1mg/LH₃BO₃，4.3mg/LZnSO₄·7H₂O，0.125mg/LNa₂MoO₄，0.0125mg/LCuSO₄，0.0125mg/LCoCl₂·6H₂O，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成生根营养液。

8.根据权利要求1或2所述的非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤6）中的壮苗营养液配方为：850mg/LKNO₃，750mg/LNH₄NO₃，165mg/LMgSO₄·7H₂O，75mg/LKH₂PO₄，200mg/LCaCl₂·2H₂O，20mg/LNa₂-EDTA，15mg/LFeSO₄·7H₂O，10.5mg/LMnSO₄·4H₂O，4.25mg/LZnSO₄·7H₂O，3.0mg/LH₃BO₃，0.4mg/LKI，0.12mg/LNa₂M_OO₄·2H₂0，0.012mg/LCoC1₂·6H₂O，0.012mg/LCuSO₄·5H₂O，0.4mg/LKI，30mg/L肌醇，0.5mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB₁，0.05mg/LVB₆，混合制成壮苗营养液。

9.根据权利要求1或2所述的非洲菊脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：步骤7）中的消过毒的基质成分为等体积比例的草炭、珍珠岩、蛭石。